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Efecto positivo de las partículas de CSi en el ZnNi. Propiedades de los recubrimientos: Mayor dureza, contenido de niquel, intensidad de texturas y resistencia a la corrosión
No full textSe realizaron los diagramas de difracción de rayos X en muestras con recubrimiento de la aleación de Zn-Ni con y sin partículas sobre acero. Los depósitos se realizaron a partir de soluciones concentradas en ambos componentes, Zn y Ni a corriente constante, y a tiempos de deposición en aumento de 5 a 30 minutos, con el agregado de partículas a la solución. Se encontró que la microestructura cambia notablemente con el agregado de CSi o de Al2O3 a la aleación de Zn-Ni. Además que el agregado de partículas al recubrimiento, aumenta el porcentaje de Ni en el Zn-Ni, lo cual está relacionado con una mayor resistencia contra la corrosión. Los diagramas de difracción muestran que con el agregado de partículas de CSi se destaca una presencia importante de orientaciones preferenciales (330) en la fase γ, los cuales se incrementan con el tiempo de deposición. Asociado al incremento de textura en orientaciones (330), se incrementan además las tensiones residuales compresivas en los depósitos de Zn-Ni. Con el agregado de partículas de alúmina predomina el desarrollo de una fuerte textura asociada con las orientaciones (110) de la fase η, las cuales son predominantes a tiempos de deposición intermedios (t=10 minutos) y disminuyen notablemente a tiempos superiores. Sin el agregado de partículas y con el agregado de partículas de CSi o de Al2O3, las orientaciones (101) asociadas a la fase Zn no muestran un desarrollo de textura u orientación preferencial. El principal aporte del trabajo está relacionado con el cambio de texturas en el material y del cambio de la microestructura para el caso del agregado de CSi o de alúmina, además del cambio del porcentaje de níquel en la aleación y la dureza. Se ha investigado la dependencia del porcentaje de Ní con el agregado de ambos tipos de partículas, la densidad de corriente aplicada, y la composición de partículas en solución (20 a 60 g/l). Se ha encontrado que el Ni varía entre 11 y 17 %, para densidades de corriente aplicadas entre 8 y 30 Adm-2 (figuras que se presentan en el trabajo completo). En cuanto a la modificación de otra de las propiedades del material, los valores de microdureza del Zn-Ni sólo son de 200 Hv, y aumentan a 400 Hv con el agregado de partículas de CSi al baño, y a 500 Hv en el caso del agregado de partículas de Al2O3 (los resultados se presentan en el trabajo completo). Por otra parte, en las muestras en las que se midió textura (orientación preferencial) a corriente constante de 8 Adm-2, sin agregado de partículas al baño, variando el tiempo de deposición de 5 minutos a 30 minutos, los contenidos de Ni promedio disminuyen de 11 % a 8,5 % (±1%) y los espesores que se depositan a cada tiempo, son proporcionales a 1 μm min-1.Fil:Mahmud, Z. Instituto Nacional de Tecnología Industrial (INTI). Procesos SuperficialesFil:Túlio, P. Universidade Tecnológica Federal do Paraná (UTFPR)Fil:Míngolo, N. Comisión Nacional de Energía Atómica (CNEA)Fil:Gordillo, G. Universidad de Buenos Aires (UBA). Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Inorgánica, Analítica y Química Físic
Role of nitric oxide in the progression of bladder cancer
No full textEl óxido nítrico (NO) es un radical libre altamente reactivo, que puede actuar como mensajero intracelular e influir en el desarrollo tumoral. Resultados de nuestro grupo de investigación indican que la expresión de la enzima óxido nítrico (NO) sintasa inducible (iNOS) en tumores vesicales humanos es un factor de mal pronóstico que se asocia con recurrencias más tempranas y con un mayor grado histológico. Teniendo en cuenta que iNOS no se expresa en el urotelio vesical de individuos sanos, y que es una entidad clave del proceso inflamatorio, característico del cáncer de vejiga (CaV), surgió la hipótesis de que la inhibición de esta enzima puede ser un blanco terapéutico para pacientes cuyos tumores expresen iNOS. Para analizar esta hipótesis comenzamos estudiando el rol del NO como consecuencia de la expresión de iNOS, en la progresión del CaV. Para ello utilizamos un modelo murino de CaV que imita muy bien la patología en humanos. Cuando las líneas celulares MB49 y MB49-I son inoculadas en la vejiga de ratones singeneicos generan tumores no invasores del musculo (NMI) y tumores invasores del músculo detrusor (MI), respectivamente. La línea invasora MB49-I, expresa altos niveles de iNOS, y en consecuencia mayores niveles de NO, comparado con la línea MB49. Asimismo, posee incrementados varios pasos del proceso de invasión y metástasis como es su capacidad de migración e invasión, la actividad de enzimas proteolíticas, y la capacidad de generar metástasis pulmonares. Detectamos que el NO es un factor de sobrevida para células de CaV, que expresan iNOS y que al inhibirlo, se reduce la activación de vías de proliferación como la vía de las MAPK, y parámetros de progresión tumoral como la producción de enzimas proteolíticas, migración, angiogénesis y el crecimiento metástatico en pulmón. Analizamos, por otra parte las consecuencias de la inhibición de iNOS en el crecimiento tumoral empleando tres estrategias. La primera fue evaluar la actividad de L-NAME (inhibidor farmacológico pan NOS) de manera sistémica en ratones portadores de tumores de vejiga creciendo en el subcutáneo o en la vejiga de ratones singeneicos. La segunda, fue también una inhibición farmacológica, utilizando el inhibidor específico de iNOS 1400w, en forma local, y la tercera aproximación involucró el silenciamiento genético de la enzima iNOS en la línea invasora. Las tres estrategias mostraron resultados similares demostrando que tanto L-NAME sistémico, como 1400w local y la ablación genética reducen significativamente el crecimiento tumoral de células que expresan iNOS. Asimismo, hemos demostrado que los niveles urinarios de NO, determinados como nitrito, son un marcador de seguimiento en tumores de vejiga, y que la disminución de dichos niveles está asociado a una respuesta a tratamiento. Es así que proponemos que la inhibición de la actividad iNOS sería una terapia promisoria para pacientes cuyos tumores expresen la enzima.Nitric oxide (NO) is a highly reactive free radical, which may act as an intracellular messenger and influence tumor development. Results of our research group indicate that the nitric oxide (NO) production through inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression is a poor prognostic factor associated to earlier recurrences and progression in patients with bladder cancer (Bca). Since iNOS it is not express in bladder urothelium of healthy individuals, and it is a key on inflammatory processes, -characteristic of Bca-, we hypothesize that the inhibition of this enzyme may be a therapeutic target for Bca patients whose tumors express iNOS. To test this hypothesis we began studying the role of NO produced by iNOS, in Bca progression. We used a murine Bca model that mimics well the pathology in humans. When Bca cell lines MB49 and MB49-I were inoculated in bladders of syngeneic mice, non-muscle invasive tumors (NMI) and invasive muscle tumors (MI), respectively, were generated. Invasive MB49-I cell line expressed high levels of iNOS and therefore higher levels of NO, compared with MB49. Several properties involved in metastases and invasion such as the activity of proteolytic enzymes, migration ability and angiogénesis were higher in the invasive line. We detected that NO is a survival factor for Bca cells that express iNOS, and that inhibition of NO, reduced proliferation pathways, such as MAPK and parameters involved in tumor progression, like the activity of metalloproteinase, migration, angiogénesis and metastases development. We also analyze the consequences of iNOS inhibition in tumor growth, using three different strategies. The first one was administered systemically, L-NAME (pan NOS pharmacological inhibitor). The second one consisted on using 1400w (specific pharmacological iNOS inhibitor) directly on the bladder, and the third approach involved iNOS gene silencing in the invasive line. The three strategies showed similar results, demonstrating that systemically L-NAME, intravesical 1400w and iNOS genetic ablation, significantly reduced tumor growth of Bca cells. Several substances have been described as markers to monitor or predict patients with Bca, but none of them has proved to be useful enough. We have shown urinary levels of NO determined as nitrite, are a marker for monitoring bladder tumors and their reduction is associated with response to treatment. In conclusion, we propose iNOS inhibition as a promising therapy for Bca patients whose tumors express the enzyme.Fil:Belgorosky, Denise. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Role of the Eph/ephrin system in the development of the central nervous system and its possible utility in strategies to regenerate the topographic orderer connections
No full textEl objetivo central de este trabajo es estudiar los mecanismos moleculares que regulan la potencialidad evolutiva de las células madre/progenitoras de la retina, haciendo hincapié en el rol del sistema Eph/ephrinas. Se pretende que los hallazgos de este trabajo aporten: a) conocimientos básicos sobre los mecanismos celulares y moleculares del desarrollo del SNC y del sistema visual y b) conocimientos que sirvan de base para el diseño de estrategias de terapias regenerativas en la retina. Para tal efecto se emplea el sistema retinotectal del embrión de pollo como modelo experimental. El principal nicho de células madre/progenitoras de la retina reside en un anillo tisular que rodea a la retina llamado margen ciliar (MC). Éste contiene a las células madre/progenitoras del cuerpo ciliar (CC) y las células madre/progenitoras localizadas en la zona marginal ciliar (ZMC). Esta zona provee células retinianas durante la vida postnatal en peces y anfibios, permitiendo el crecimiento de la retina y su regeneración. Las aves y los mamíferos en cambio, pierden esta capacidad regenerativa. En aves, donde el crecimiento retiniano se produce durante el desarrollo, un pequeño MC persiste postnatalmente pero carece de la potencialidad evolutiva para aportar todos los tipos celulares de la retina. Las células madre/progenitoras del MC son capaces de 1) proliferar in vitro formando neuroesferas ó 2) de proliferar in vivo al ser estimuladas formando nueva retina neural. Sin embargo, se ha mostrado que no todas las células madre “son iguales” y que varían en su potencialidad evolutiva. En el presente trabajo: 1. Se evalúa si las células madre del MC se diferencian in vitro en células ganglionares de la retina (CGR) que posean información posicional y que sean competentes para responder a las moléculas del sistema Eph/ephrinas que guían el crecimiento axonal durante la formación del mapa retinotectal. 2. Se investiga si las retinas regeneradas a partir del MC y de la transdiferenciación expresan las moléculas del sistema Eph/ephrinas y presentan información posicional. 3. Se determina si la estimulación de la vía de señalización de Shh con su análogo activador SAG permite obtener retinas con regeneración completa a partir de las células madre/progenitoras del MC. En este trabajo se han establecido las condiciones in vitro que permiten obtener un alto grado de diferenciación de CGR a partir de células madre provenientes del MC. Estas CGR expresan moléculas del sistema Eph/ephrinas en forma topográficamente específica y son competentes para responder a moléculas del sistema Eph/ephrinas que guían a los axones durante la formación del mapa retinotectal. Se ha demostrado que la activación de la vía canónica de Shh con SAG induce la regeneración completa de la retina a partir de las células madre/progenitoras del MC in vivo y que las CGR de la misma tienen información posicional expresando el sistema Eph/ephrinas en forma de gradiente como las retinas en desarrollo. Nuestros resultados aumentan las probabilidades de obtener una eferencia que establezca conexiones topográficamente ordenadas en el tectum.The central aim of this work is to study the molecular mechanisms that regulate the evolutionary potential of the stem/progenitor cells of the retina, focusing on the role of the Eph/ephrin system. It is intended for the findings on this work to provide: a) basic knowledge on the cellular and molecular mechanisms of the CNS and visual system development, and b) knowledge to be used to design of regenerative therapy strategies for the retina. For this work we used the chick embryo retinotectal system is used as experimental model. The retina stem/progenitor cell niche resides in a ring around the retina called the ciliary margin (CM), which holds the stem/progenitor cells of the ciliary body (CB) and of the ciliary margin zone (CMZ). This zone provides retinal cells during the postnatal life in fish and amphibians, allowing for retinal growth and regeneration. However, avian and mammals have lost this regenerative capability. In avian, where retina growing takes place during development, a small CM persists postnatally, but it lacks of potenctial to generate all the cellular types of retina. The stem/progenitor cells of the CM are capable of 1) proliferating in vitro forming neurospheres, or 2) proliferating in vivo when stimulated forming new neural retina. However, it has been shown that not all the stem cells are ‘equal’ and that they vary in their evolutionary potentiality. In the present work: 1. Stem/progenitor cells of the CM are evaluated for their differentiation potential in vitro into retinal ganglion cells (RGC) which have positional information and are competent to respond to molecules of the Eph/ephrin system which guies axonal growth during the retinotectal map formation. 2. The expression patterns of Eph/ephrin and their positional information are studied during retina regeneration initiated from the CM and from retinal pigmented epithelium (RPE) transdifferentiation. 3. The sonic hedgehog (Shh) pathway and its analog activator SAG are evaluated for their potential to induce complete retina regeneration from the stem/progenitor cells of the CM. In this work we defined in vitro conditions that optimized for a high degree of RGC differentiation from the stem/progenitor cells present in the CM. These RGCs express molecules of the Eph/ephrin system in a topographic specific way and respond to the cues that guide the axons during the formation of the retinotectal map. We also show that activating the Shh canonical with SAG induces the complete retina regeneration from the CM stem/progenitor cells in vivo and that the RGCs from this regenerated retina have the same positional information expressing the Eph/ephrin system in a gradient form just as the retinas during development. Our results increase the probability of obtaining an efference that establishes a topographic order of connections in the tectum.Fil:Di Napoli, Jennifer. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Efecto del aditivo l-cisteína en la lectrodeposición
No full textSe ha encontrado que en la literatura se le da poca importancia al Estado Inicial antes del inicio de la electrodeposición. Es decir, al estado del electrodo por el pulido y el acondicionamiento previo, de modo de iniciar la deposición siempre en iguales condiciones. En el caso de este aditivo, la l-cisteína, se han realizado cronoamperometrías en las que la j estacionaria, es siempre negativa antes del inicio de la deposición mientras que j estacionaria es siempre positiva para la tiourea. En este trabajo se utiliza la voltametría cíclica para el sistema de electrodeposición de cinc sobre acero en presencia de l-cisteína. Esta técnica permite diferenciar los procesos a diferentes potenciales. Aunque tiene limitaciones en cuanto a que la disolución en la inversión de potencial, se hace en la misma solución de electrodeposición. En la voltametría de disolución lenta es mayor el área de disolución que para el caso de la voltametría cíclica. Por lo tanto, es mayor la eficiencia de la reacción, porque queda determinado con más exactitud cuánto se deposita, en relación a lo que realmente debería haberse depositado. Es importante remarcar que la disolución voltamétrica es lenta y se hace en solución de NaOH 1 N y no se hace en la solución de deposición (ZnCl 2 +NH 4 Cl con l-cisteína).Fil: Mahmud, Z. Instituto Nacional de Tecnología Industrial (INTI). Procesos SuperficialesFil: Gordillo, G. Universidad de Buenos Aires (UBA). Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Inorgánica, Analítica y Química FísicaFil: Ventura D'Alkaine, C. Universidade Federal de São Carlos (UFSCar
Molecular and functional characterization of Epstein Barr Virus Latent Membrane Protein 1 variants
No full textEl Virus de Epstein Barr (EBV), agente etiológico de la mononucleosis infecciosa (MNI), se asocia también a neoplasias. Si bien las causas por las cuales contribuye a la linfomagénesis están aún en estudio, la identificación de variantes virales asociadas a tumores podrían responder en parte este interrogante. Dado que LMP1 es la principal proteína oncogénica de EBV, el objetivo fue identificar y caracterizar las variantes moleculares en sus regiones promotora y codificante, y determinar su participación en la patogenia de las enfermedades asociadas. Se incluyeron 29 pacientes pediátricos con linfomas asociados a EBV, 30 con MNI y 14 controles con hiperplasia reactiva. Se amplificaron mediante PCR las regiones promotora ED-L1 y codificante, se secuenciaron y se realizó análisis filogenético. Se analizó además in vitro la actividad del promotor. Región ED-L1: se definieron 4 clados denominados según las líneas celulares B95.8, Cao, Raji and P3HR1. B95.8 fue el más frecuente (47%), pero no se asoció a a ninguna patología en particular. Se observaron mutaciones en sitios de unión a factores de transcripción, la pérdida del C/EBP disminuye 3 veces la actividad de ED-L1. Región codificante: se identificaron 6 clados (China1, China2, Med-, Alaskan, B95.8 and Argentina [Arg]) de los cuales prevaleció la variante de circulación local, Arg, (46%) potencialmente originada por recombinación Raji/China1 y que podría tener un origen africano. No se observó una asociación entre variantes específicas y linfomagénesis, aunque algunos polimorfismos tuvieron mayor frecuencia en linfomas. Se estimó una tasa de evolución acelerada en comparación a lo esperado para un herpesvirus, quizás influenciado por la presión de selección positiva sobre codones específicos. Este análisis muestra una evolución compleja de este gen y revela la importancia de su potencial utilización como marcador de variantes virales geográficas.Epstein Barr virus (EBV), the etiological agent of infectious mononucleosis, is also associated with neoplasia. Little is known about variants prevalence and their influence in EBV diseases. Our aim was to study viral LMP1 variant distribution among children with EBV+ malignant and benign conditions as well as healthy carriers. Oral secretions (OS) and blood cells (PBMC) from 30 children with IM, and biopsies from 14 EBV+ reactive hyperplasia (RH) and 29 EBV+ lymphomas (L) were included. LMP1 sequences were amplified by nested PCR. Sequencing and phylogenetic analysis was performed. Promoter activity was assayed in EDL1 variants. ED-L1: Phylogenetic reconstruction defined 4 clades termed after B95.8, Cao, Raji and P3HR1. B95.8 clade was the most frequent (47%), but it was not associated with any particular condition. Mutations were found in transcription factor binding sites; the abolition of C/EBP caused a 3-fold diminish in EDL1 activity. Coding region: 6 clades were defined (China1, China2, Med-, Alaskan, B95.8 and Argentine (Arg)). Arg clade, the most prevalent (46%), proved to be a Raji and China1 recombinant. No pathology or compartment associations were observed for LMP1 variants, however some polymorphisms presented a higher prevalence in lymphoma patients. Viral evolutionary rate estimated from LMP1 was faster than the expected for a herpesvirus, perhaps due to positive selection influence. These results contribute to the knowledge of EBV genetic diversity and evolution. LMP1 appears to have a complex evolution pattern and reveals the importance of its potential use as a marker of geographical viral variants.Fil:Gantuz, Magdalena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Effect of overexpression of different isoforms of Protein Kinase C (PKC) in modulation of malignant phenotype of mammary ephitelial cells. Alteration in sensitivity to treatment with retinoids
No full textEl cáncer de mama representa actualmente el tipo de cáncer más frecuente en mujeres y se calcula que más de un millón de nuevos casos son diagnosticados por año en todo el mundo. Se trata de una enfermedad compleja, que presenta una variedad de subgrupos con características histopatológicas y genéticas diferentes y por lo tanto con diversas respuestas a los tratamientos. De las múltiples vías de señalización comprometidas en la progresión maligna, algunas constituyen prometedores blancos de intervención terapéutica, entre ellas la vía de la proteína quinasa C (PKC), implicada en eventos celulares como proliferación, diferenciación y apoptosis y el sistema retinoideo ampliamente involucrado en diferenciación celular. Dado que los distintos carcinomas mamarios presentan una expresión diferencial de las isoformas de PKC, desarrollamos modelos celulares mamarios (humanos y murinos) que sobreexpresan las isoformas α o δ de PKC. Utilizando estos modelos estudiamos de qué manera la sobreexpresión de PKCα o PKCδ afecta parámetros celulares implicados en la progresión tumoral y diseminación metastásica evaluando al mismo tiempo la respuesta al tratamiento con retinoides (ATRA). Nuestros resultados sugieren que la sobreexpresión de PKCα torna a las células más sensibles a la acción del ácido retinoico, en líneas respondedoras, mediante un arresto en la fase G0/G1 del ciclo celular. La sobreexpresión de PKCδ, en las células MDA-MB231, confirió un fenotipo menos agresivo, disminuyendo significativamente su capacidad invasiva. Por último la falta de respuesta de esta línea celular al ATRA, se debería a la incapacidad de trans-reprimir los sitios AP-1.Breast cancer represents the most common kind of cancer in women and it is estimated that more than one million new cases are diagnosed each year worldwide. It is a complex disease, which presents a variety of subgroups with different genetic and histopathologic features and therefore with different responses to treatments. Multiple signaling pathways are involved in malignant progression. Some of them are promising targets for therapeutic intervention, including protein kinase C (PKC), involved in cellular events such as proliferation, differentiation and apoptosis and the retinoid system, widely implicated in cell differentiation. Since different mammary malignancies exhibit differential expression of PKC isoforms, we have developed (human and murine) mammary cell models overexpressing α or δ PKC isoforms. Using these models we studied how PKCα or PKCδ alters cell parameters associated with tumor progression and metastatic dissemination while we assessed the response to treatment with retinoids (ATRA). Our results suggest that PKCα overexpression confers to the cells a retinoic acid-sensitive phenotype, through an arrest in the G0 / G1 phase of the cell cycle. Overexpression of PKCδ, in MDA-MB231 cells, induced a less aggressive phenotype, significantly reducing its invasive capability. Finally the lack of response of this cell line to ATRA treatment could be due to the inability to trans-repress AP-1 sites.Fil:Díaz Bessone, María Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Robust inference in nonlinear models with missing responses
No full textEl modelo lineal es uno de los más populares en Estadística. Sin embargo, en muchas situaciones la naturaleza del fenómeno en estudio es intrínsicamente no lineal y por lo tanto, no se pueden utilizar aproximaciones lineales teniéndose que ajustar a los datos un modelo no lineal. Es bien sabido que, en este contexto, el estimador clásico del parámetro de regresión basado en mínimos cuadrados es muy sensible a los datos atípicos y por esta razón, se necesitan métodos robustos de inferencia. Asimismo, en algunas ocasiones, los datos están incompletos por haberse perdido algunas respuestas al azar. En esta tesis, proponemos una familia de estimadores robustos para estimar al parámetro de regresión en un modelo no lineal con posibles respuestas faltantes al azar. Bajo condiciones de regularidad, estudiamos la consistencia y la distribución asintótica de los estimadores propuestos, dando un tratamiento unificado a muestras completas y a muestras con respuestas faltantes. Para estudiar la robustez local, deducimos su función de influencia y para comparar su comportamiento con el del estimador clásico y con otras alternativas robustas, consideramos dos ejemplos numéricos. Llevamos a cabo simulaciones de Monte Carlo para estudiar el comportamiento en muestras finitas de los estimadores propuestos bajo distintos esquemas de pérdida de respuestas y en diferentes escenarios de contaminación. Por otro lado, introducimos una familia de tests robustos utilizando un estadístico de tipo Wald basado en el estimador propuesto con el objetivo de testear hipótesis que involucren al parámetro de regresión. Deducimos su distribución asintótica bajo la hipótesis nula, como también bajo alternativas contiguas. Asimismo, deducimos su función de influencia. Realizamos un estudio de simulación para evaluar el comportamiento de los tests propuestos. Finalmente, el procedimiento propuesto también se ilustra a través del análisis de un conjunto de datos reales.The linear model is one of the most popular models in Statistics. However, in many situations the nature of the phenomenon is intrinsically nonlinear and so, linear approximations are not valid and the data must be fitted using a nonlinear model. It is well known that, in this setting, the classical estimator of the regression parameter, based on least squares, is very sensitive to outliers and for this reason, robust methods are needed. Besides, in some occasions the data are incomplete since some responses are missing at random. In this thesis, we propose a family of robust estimators to estimate the regression parameter in a nonlinear model with responses missing at random. Under mild conditions, we study the consistency and asymptotic distribution of the proposal, giving a unified treatment to incomplete and complete samples. To study local robustness, we derive their influence function and, to compare its behaviour with that of the classical estimator and other robust alternatives, we consider two numerical examples. We perform Monte Carlo simulations to study the finite sample behavior of the proposed estimators under different schemes of missing responses and different scenarios of contaminations. On the other hand, we introduce a family of robust tests using a Wald–type statistic based on the proposed estimators in order to check hypotheses that involve the regression parameter. We derive their asymptotic distribution under the null hypothesis as well as under contiguous alternatives. Besides, we derive their influence function. We perform a simulation study to evaluate the behaviour of the proposed test. Finally, the proposed procedure is also illustrated analysing a real data set.Fil:Spano, Paula Mercedes. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Viral intrinsically disordered proteins: structural dissection of the human papilomavirus E7 oncoprotein and the respiratory syncytial virus P phosphoprotein
No full textLas proteínas intrínsecamente desordenadas (IDPs) son proteínas funcionales que carecen de estructura secundaria y terciaria definidas en solución. Este tipo de categoría estructural se encuentra sobrerepresentada en proteínas virales, otorgándole multifuncionalidad y versatilidad en las interacciones que establecen. Debido a flexibilidad asociada a las distintas transiciones conformacionales que presentan, las IDPs son muy difíciles de caracterizar estructuralmente, debiéndose recurrir principalmente a técnicas de estudio en solución. En este trabajo se estudiaron dos modelos de IDPs virales: el dominio amino-terminal de la oncoproteína E7 (E7N) del virus del papiloma humano (HPV-16) y la fosfoproteína P del virus sincicial respiratorio humano (RSV). En primer lugar, utilizando un abordaje de fragmentación en conjunto con medidas de dicroismo circular y resonancia magnética nuclear, se estudiaron las tendencias conformacionales del dominio E7N. Identificamos tres regiones con estructura secundaria local y transitoria: dos α- hélices dentro de las regiones conservadas CR1 y CR2, y una región que adopta hélice de poliprolinas tipo II (PII) dentro del CR2. Las dos α-hélices se encuentran pobladas en forma parcial, representando solo al 20% de la población de moléculas de E7N. Por otro lado, demostramos que la hélice-II presenta transiciones conformacionales entre PII y α-hélice moduladas por cambios de pH. Estas regiones de estructura local coinciden con los motivos lineales de interacción descriptos para este dominio, así como con sitios que experimentan modificaciones post-traduccionales. Estas características sugieren que dichas transiciones estructurales podrían modular la accesibilidad a estos motivos, regulando la interacción con sus proteínas blanco. En segundo lugar, utilizando distintas proteínas recombinantes, demostramos por primera vez la naturaleza IDP de la proteína P de RSV. La misma contiene dos módulos intrínsecamente desordenados, los cuales presentan distinto contenido de desorden. Definimos al dominio Cterminal de P como un dominio con características en solución de tipo pre-molten globule like IDP, y al dominio N-terminal como un dominio con características de tipo random-coil like IDP. Describimos que P presenta un comportamiento térmico anómalo, conteniendo en el dominio C-terminal un elemento marginalmente estable modulable por variaciones de temperatura dentro del rango de temperaturas fisiológico. En conclusión, estos ejemplos resaltan la flexibilidad funcional inherente de las IDPs, la cual les permite ser moduladas por cambios en el entorno. Esta capacidad permite a su vez explicar la plétora de procesos biológicos en los cuales se encuentran involucradas.The intrinsically disordered proteins (IDPs) are functional proteins that lack defined secondary or tertiary structure in solution. This type of structural category is overrepresented in viral proteins, giving multi-functionality and versatility in interactions. Because of the flexibility generated by the different structural transitions, the structural characterization of IDPs represents a challenging task, being necessary to use in solution techniques for their characterization. In this work we studied the structural and functional determinants of two IDP models: the human papilloma virus E7 aminoterminal IDP domain (E7N HPV-16) and the respiratory syncytial virus P phosphoprotein. First, using a fragmentation approach in combination with circular dichroism and nuclear magnetic resonance experiments we studied the conformational tendencies within the E7N domain. We identified three regions with local secondary structure: two α-helixes within the CR1 and CR2 conserved regions, and a polyproline type II helix (PII) within the CR2. The two α- helixes were partially populated, representing only the 20% of the conformational ensemble within E7N. On the other hand, we demonstrated that the Helix-II presents a conformational transition between PII and α-helix triggered by pH changes. The small linear motifs as well as the post-translational modification sites are located within the mapped local secondary structural elements within E7N, suggesting that the structural transitions within these regions modulated the accessibility of the motives and in consequence regulates the interactions with target proteins. In the second part of this thesis, we experimentally demonstrate for the first time the IDP nature of the P phosphoprotein, reveling the existence of two IDPs modules with different degree of disorder. The C-terminal domain behaves as a pre molten globule like IDP, whereas the N- terminal domain presents random coil-like IDP features. P presents a pronounced reversible secondary structure transition. We identified a marginal stable element within the C-terminal domain which could be tuned by temperature changes in the physiological range. To conclude, these examples highlights the capability of the IDPs to be modulated by changes in their environment, bringing functional flexibility that may explain the plethora of biological processes where their are involved.Fil:Noval, María Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Distribución de Corriente para determinar la Temperatura Óptima del proceso de Zinc Níquel + micropartículas de CSi ó de Al2O3
No full textEn éste trabajo, se estudian como se modifican con la temperatura, las características del material de recubrimiento (espesor y el contenido de níquel). Las mediciones se hacen en el recubrimiento obtenido por electrólisis, a lo largo del diámetro del electrodo por Fluorescencia de rayos x. Normalmente, se obtiene una Distribución de Corriente, que es una función parabólica, con valores constantes en el centro del electrodo y valores altos del espesor en los bordes, porque se deposita más. Se supone que según sean las condiciones experimentales de temperatura y de presencia o ausencia de partículas, es el efecto en la distribución de % de Niquel o de espesor en el material en la zona central del cátodo. Se encontró que efectivamente, a cada temperatura y densidad de corriente, varían la concentración de Ni y el espesor en la aleación, modificando la resistencia del material contra la corrosión.Fil: Mahmud, Z. Instituto Nacional de Tecnología Industrial (INTI). Procesos SuperficialesFil: Gordillo, G. Universidad de Buenos Aires (UBA). Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Inorgánica, Analítica y Química Físic
Electrodeposición de cinc en soluciones de cloruros y sulfatos
No full textEl objetivo de este capítulo es analizar la influencia de estos aniones en la electrodeposición voltamétrica de cinc a partir de soluciones de cloruros y de sulfatos. Las soluciones de estudio de (NH4Cl 1.6 M + ZnCl2 0,3M) y de (NH4)2SO4 1,3 M + ZnSO 4 0,3M) se prepararon a fuerza iónica I = 2,5 M y pH = 4 ajustado con soluciones de sulfato de amonio diluído. Por otra parte, se analizan las posibles reacciones de superficie que ocurren durante la deposición de cinc en éstas soluciones, mediante la técnica de XPS “X ray Photoelectron Spectroscopy”, que permite reconocer elementos y su entorno en pocas monocapas en una profundidad de 20 - 30 ÅFil: Mahmud, Z. Instituto Nacional de Tecnología Industrial (INTI). Procesos SuperficialesFil: Gordillo, G. Universidad de Buenos Aires (UBA). Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Inorgánica, Analítica y Química Físic