University of Beira Interior
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Adverse vascular effects of phthalates: Possible contribution to hypertension in pregnancy
No full textPhthalates are chemical compounds used as plasticizers to increase flexibility and elasticity of rigid polymers and as non-plasticizers as solvents and additives in cosmetics and personal care products. These compounds have low water solubility and since they are not covalently bound to the polymer they are easily released into the environment and absorbed by the human body. Afterwards, phthalates are rapidly metabolized into their respective monoesters being already detected in different biological samples, including blood, urine, saliva, amniotic fluid, umbilical cord blood and breast milk. In addition, phthalates can disrupt the endocrine system by binding to molecular targets and interfering with hormonal homeostasis, thus being classified as endocrine-disrupting compounds (EDCs). Due to these properties and their adverse effects, phthalates were classified as priority environmental pollutants by the United States Environmental Protection Agency (US EPA).
Alongside this increase in exposure to phthalates, the incidence of cardiovascular diseases (CVD) has also increased over the years, with the occurrence of hypertensive disorders in pregnancy (HDP) being one of the main causes of maternal and foetal morbidity and mortality. There are several risk factors that influence the development of HDP, including exposure to EDCs, but the mechanisms involved are not yet known. Several studies have also suggested an association with phthalates, in rats they seem to promote changes in the vascular function, to affect the expression of proteins involved in cardiac function, to contribute to increased blood pressure, changes in lipid metabolism, and atherosclerosis.
Thus, the aim of this thesis was to investigate how phthalates’ exposure affects the cardiovascular health, focusing on HDP. For that, studies were carried out on rat aorta and the human umbilical artery to evaluate the effects of di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) and diethyl phthalate (DEP) in the vascular function.
In the first study, rat aorta devoid of endothelium was contracted with noradrenaline and potassium chloride (KCl) and then subjected to different concentrations of DEHP (0.001-100 μM) to assess the vascular reactivity. Besides, since Ca2+ levels are the main determinant of contraction and relaxation, DEHP effects on Ca2+ currents were also analysed using the A7r5 cells. The data obtained showed that DEHP caused a concentration-dependent vasorelaxation after contraction with KCl, and, at the highest concentrations, it inhibited both the basal and the BAY K8644-stimulated calcium currents. These results suggest that DEHP induces vasorelaxation of the rat aorta by inhibiting the L-type Ca2+ channels (LTCC).
Then, the genomic and non-genomic effects of DEP on the rat aorta were analysed. Using the organ bath technique, DEP (0.001-1000 μM) was analysed after contraction of the arteries with noradrenaline and KCl. Similarly, to understand the possible mechanisms involved, the effects of DEP were analysed on the relaxing effect of nifedipine (NIF - specific calcium channel blocker) and sodium nitroprusside (SNP - soluble guanylate cyclase activator). Besides, through electrophysiology studies the non-genomic (occurring within a few minutes) and genomic (occurring after 24h of exposure) effects of DEP on the Ca2+ currents of the A7r5 cells were investigated. These showed that both the rapid and 24h effects of DEP exposure led to a decrease in LTCC currents, being in agreement with the vasorelaxation obtained through the organ bath experiments. For the first time, the vascular electrophysiological properties of an EDC were analysed after long-term exposure, concluding that DEP promotes an inhibition of the calcium current in the rat aorta, which may be responsible for electrical disturbances such as arrhythmias.
To evaluate the effect of phthalates on maternal health, the last experimental work of this thesis analysed the contribution of DEP (0.001-1000 μM) in the development of gestational hypertension. Therefore, human umbilical arteries (HUA) were collected from normotensive and hypertensive pregnant women. To assess the non-genomic vascular effects, the HUA were pre-contracted with serotonin, histamine and KCl and then subjected to DEP, resulting in a vasorelaxation by interfering with Ca2+ channels and serotonin and histamine receptors. On the other hand, to assess the genomic effects, the arteries were incubated with DEP for 24h, and then the effects of NIF and SNP were analysed. The results showed that DEP seemed to act through the NO/sGC/cGMP/PKG signalling pathway, and to interfere with LTCC. In addition, primary culture of HUA smooth muscle cells was also performed for cell viability essays, showing that DEP has no toxic effect on these cells. Overall, this experimental work showed that DEP affects the HUA vascular resistance through disturbances in hormone and calcium homeostasis, suggesting that the development of hypertension in pregnancy may be a consequence of exposure to phthalates.
In general, the results obtained show that phthalates modify the vascular homeostasis in both animals and humans, promoting vasorelaxation mainly through the inhibition of Ca2+ channels. This is the first time that an experimental study has been able to establish the link between exposure to DEP and gestational hypertension. We are beginning to unravel the mechanistic pathways involved in the vascular effects of phthalates that explain the pathological functional alterations of hypertension in pregnancy. However, more experimental studies are needed to understand how different classes and mixtures of phthalates affect the cardiovascular health during pregnancy and in future generations.Os diésteres do ácido ftálico, habitualmente designados de ftalatos, são compostos químicos usados como plastificantes para aumentar a flexibilidade, a maleabilidade e a elasticidade de polímeros rígidos (ex. cloreto de polivinilo - PVC). Além disso, podem também ser utilizados como solventes e aditivos em cosméticos e produtos de higiene pessoal. Existem vários tipos de ftalatos, classificados de acordo com o peso molecular. Os de elevado peso molecular caracterizam-se por terem fatores de bioacumulação menores e são na sua maioria utilizados na indústria do plástico, em produtos domésticos e industriais, dispositivos médicos, embalagens de alimentos e brinquedos. Por outro lado, os ftalatos de baixo peso molecular, que possuem fatores de bioacumulação mais elevados, são utilizados principalmente em produtos de higiene pessoal e como solventes ou aditivos em fármacos e cosméticos.
Os ftalatos caracterizam-se por terem baixa solubilidade em água e por não formarem ligações covalentes com os polímeros de que fazem parte. Desta forma, são facilmente libertados para o ambiente durante a sua produção, utilização ou eliminação e quando entram em contacto com fluídos lipofílicos, como o sangue e o plasma. Assim, podem ser facilmente absorvidos pelo corpo humano através de diferentes vias de exposição (ingestão, contacto dérmico, e exposição parenteral). Após absorção, os ftalatos são rapidamente metabolizados nos seus respetivos monoésteres, tendo sido detetados em diferentes amostras biológicas, incluindo sangue, urina, saliva, líquido amniótico, sangue do cordão umbilical e leite materno.
Para além disso, os ftalatos têm a capacidade de interferir com o sistema endócrino, ligando-se a alvos moleculares e desregulando a homeostase hormonal, sendo assim classificados como disruptores endócrinos. Uma caraterística comum deste tipo de compostos é o facto de apresentarem uma curva dose-resposta não monotónica, ou seja, o seu efeito não é proporcional ao aumento da concentração. Este é um facto preocupante, uma vez que concentrações mais baixas de exposição podem causar efeitos adversos na saúde humana e no ambiente. Estas propriedades dos ftalatos, assim como os efeitos adversos, levaram a que a Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos da América (US EPA) classificasse os ftalatos como poluentes ambientais prioritários, incluindo o ftalato de di(2-etilhexilo) (DEHP) e o ftalato de dietilo (DEP). Paralelamente ao aumento na exposição a ftalatos, também a incidência das doenças cardiovasculares (CVD) tem aumentado ao longo dos anos. Em ambos os casos, o atual estilo de vida é um fator importante, quer pelo consumo de produtos que contêm ftalatos na sua composição como pela alimentação estilo fast food e tendência para sedentarismo. As CVD são uma das principais causas de morte em todo o mundo, com um aumento de 25% de morte entre 2000 e 2019. Outra preocupação é quando estas doenças se desenvolvem ou se agravam durante a gravidez. Sabe-se que este é um período sensível e vulnerável, e a ocorrência das doenças hipertensivas na gravidez (HDP) torna-se uma das principais causas de morte e morbilidade materna e fetal. As HDP são classificadas em quatro categorias: hipertensão crónica, hipertensão gestacional, pré-eclâmpsia e pré-eclâmpsia sobreposta a hipertensão crónica, sendo esta última uma das formas mais graves. Existem vários fatores de risco que influenciam o desenvolvimento destas doenças, no entanto os mecanismos envolvidos ainda não são conhecidos. Vários estudos têm demonstrado uma associação entre o desenvolvimento das CVD, incluindo as HDP, e a exposição a EDCs, nomeadamente ftalatos. Sendo um dos ftalatos mais investigados ao longo dos anos, foi sugerido que o DEHP promove alterações da função vascular, afeta a expressão de proteínas envolvidas na função cardíaca e contribui para o aumento da pressão sanguínea em ratos. No caso do DEP, estudos em animais demonstraram que induz alterações do metabolismo lipídico, aterosclerose e síndrome metabólica. Por outro lado, estudos epidemiológicos sugerem uma associação entre a exposição a estes ftalatos e o desenvolvimento de CVD. No entanto, quer em estudos em animais como em humanos, as vias mecanísticas envolvidas ainda não são compreendidas.
Tendo estes dados em consideração, o objetivo desta tese foi investigar qual o papel da exposição a ftalatos na saúde cardiovascular, incidindo nas HDP. Para isso, estudos vasculares em animais e em amostras humanas foram realizados. Nos primeiros, a artéria aorta de rato foi utilizada e o efeito de dois ftalatos de diferente peso molecular foi analisado, já o cordão umbilical foi utilizado para avaliar esse efeito em casos com e sem hipertensão gestacional.
A fim de compreender as vias mecanísticas do DEHP, avaliou-se o seu efeito a curto prazo no músculo liso da aorta do rato. Para isso, estudos de contractilidade foram realizados recorrendo à técnica de banho de órgãos. Neste caso, anéis arteriais desprovidos de endotélio foram contraídos com noradrenalina e cloreto de potássio (KCl) e posteriormente sujeitos a diferentes concentrações de DEHP (0.001-100 μM) para avaliar a reatividade vascular. Para além disso, uma vez que a concentração de Ca2+ é o principal determinante nos mecanismos de contração e relaxamento, após cultura celular de células A7r5, ensaios de eletrofisiologia também foram realizados. Recorrendo à técnica de patch clamp na configuração whole-cell o efeito do DEHP nas mesmas concentrações foi avaliado sobre as correntes de Ca2+ do tipo L, quer nas correntes basais como após estimulação com BAY K8644. Os dados obtidos mostraram que o DEHP provocou um relaxamento das artérias após contração com KCl, sendo este relaxamento proporcional às concentrações testadas. Relativamente às correntes iónicas, o DEHP inibiu os canais de Ca2+, sendo este efeito mais proeminente nas concentrações mais elevadas. Estes resultados sugerem que o DEHP induz vasorelaxamento da aorta do rato através da inibição dos canais de Ca2+ do tipo L, o que está de acordo com a atividade estrogénica do DEHP, uma vez que já foi demonstrado que o 17β-estradiol inibe os canais de Ca2+ promovendo vasorelaxamento.
O segundo trabalho experimental apresentado teve como principal objetivo analisar os efeitos genómicos e não genómicos dos ftalatos na aorta do rato, tanto ex vivo como in vitro. Através do banho de órgãos, o efeito vascular de diferentes concentrações de DEP (0.001-1000 μM) - ftalato de baixo peso molecular - foi analisado após contração das artérias com noradrenalina e KCl. Para além disso, para entender o possível mecanismo, o efeito do DEP foi também avaliado após adição dos agentes vasorelaxantes nifedipina (NIF – bloqueador específico dos canais de cálcio) e nitroprussiato de sódio (SNP – ativador da guanilato ciclase solúvel). Os resultados mostraram que o DEP promove um relaxamento mais proeminente nas artérias contraídas com KCl, e que, tendo em conta que o efeito induzido pela combinação de NIF com DEP é semelhante ao efeito da NIF, o vasorelaxamento das artérias parece ocorrer por inibição dos canais de Ca2+. Com recurso às células A7r5, foram realizados ensaios de viabilidade celular e da expressão de genes relacionados com a função vascular, os quais não apresentaram resultados significativos quando comparados com os respetivos controlos. Foram ainda realizados estudos de eletrofisiologia, avaliando os efeitos não genómicos (que ocorrem em poucos minutos) e genómicos (que ocorrem após 24h de exposição) do DEP sobre as correntes de Ca2+. Estes mostraram que, tanto os efeitos rápidos como os de 24h de exposição ao DEP levaram à diminuição das correntes de Ca2+ do tipo L, confirmando assim a hipótese de mecanismo sugerida pelos ensaios de contractilidade. Pela primeira vez, foram analisadas as propriedades eletrofisiológicas vasculares de um EDC após uma exposição de longo prazo, e os resultados permitiram concluir que o DEP promove uma inibição da corrente de cálcio da aorta do rato, que pode ser responsável por distúrbios elétricos, como arritmias.
O último trabalho experimental apresentado foi ao encontro do principal objetivo desta tese, avaliar o efeito dos ftalatos na saúde materna. Para isso, a contribuição dos ftalatos no desenvolvimento da hipertensão gestacional e os mecanismos envolvidos foram analisados. Tendo em conta a elevada utilização de produtos cosméticos e cuidado pessoal pelas mulheres, o DEP foi o ftalato analisado neste trabalho. Para além disso, a gravidez apresenta um risco adicional dada a sua vulnerabilidade e sensibilidade. Assim, os efeitos do DEP (0.001-1000 μM) foram analisados na contractilidade de artérias umbilicais humanas (HUA) provenientes de dois grupos: mulheres grávidas normotensas e hipertensas. Recorrendo à técnica de banho de órgãos, as artérias sem endotélio foram contraídas com serotonina, histamina e KCl e posteriormente sujeitas às diferentes concentrações de DEP para avaliar os efeitos vasculares a curto prazo (não genómicos). Para avaliar os efeitos a longo prazo (genómicos), as artérias foram incubadas com DEP (0, 0.01, 1, 100 e 1000 μM) durante 24h, e o efeito da NIF e do SNP foi analisado para entender a possível contribuição dos canais de Ca2+ e da via do cGMP. Relativamente aos efeitos não genómicos, o DEP induz vasorelaxamento por interferir com os canais de Ca2+ e com os recetores de serotonina e histamina. Após uma exposição prolongada, o DEP parece atuar através da via de sinalização NO/sGC/cGMP/PKG, e interferir com os canais de Ca2+ do tipo L, diminuindo os efeitos vasorelaxantes. Além disso, cultura primária de células do músculo liso da HUA foi também realizada para estudos de viabilidade celular. Estes mostraram não haver diferenças significativas em relação ao controlo em ambos os grupos, concluindo assim que o DEP não apresenta efeito tóxico nestas células. De forma geral, este trabalho experimental mostrou que o DEP parece modular a resistência vascular da HUA através de mecanismos hormonais e de perturbações na homeostase do cálcio, concluindo que o desenvolvimento de hipertensão na gravidez pode ser uma consequência da exposição a ftalatos.
Em suma, os resultados obtidos mostram que os ftalatos em estudo alteram a homeostase vascular, quer em animais quer em humanos, promovendo o vasorelaxamento principalmente através da inibição dos canais de Ca2+. Esta é a primeira vez que um trabalho experimental faz a ligação entre a exposição ao DEP e o desenvolvimento de hipertensão gestacional. Estamos assim a começar a desvendar as vias mecanísticas envolvidas nos efeitos vasculares dos ftalatos que explicam as alterações funcionais patológicas da hipertensão na gravidez. No entanto, mais estudos experimentais devem ser desenvolvidos para compreender como diferentes classes e misturas de ftalatos afetam a saúde cardiovascular durante a gravidez e nas gerações futuras
Otimização de uma linha de extrusão através da aplicação do Single Minute Exchange of Die (SMED)
No full textA instabilidade dos mercados atuais, exige que cada vez mais, as empresas, encontrem
estratégias que permitam uma maior flexibilidade e eficiência dos seus processos sem que
a qualidade do produto, seja afetada.
Este estudo aborda a aplicação da metodologia Single Minute Exchange of Die (SMED)
numa linha de extrusão da empresa COFICAB, sendo o principal objetivo a redução dos
tempos de setup e consequentemente aumentar a flexibilidade produtiva dessa linha. O
trabalho insere-se no contexto da filosofia Lean Manufacturing, centrada na eliminação
de desperdícios e na melhoria contínua. Sendo a COFICAB um grupo que trabalha
maioritariamente com o setor automóvel, muitas das ferramentas associadas à filosofia
Lean, já se encontravam implementadas, o que facilitou todo o processo de
implementação do SMED.
A investigação foi conduzida através da observação direta no chão de fábrica, análise de
dados quantitativos e qualitativos obtidos através de vídeos, fotos e conversas informais
com operadores da linha, chefes de equipa e verificadores de qualidade. Após o
diagnóstico inicial, foram implementadas medidas de reorganização do posto de trabalho
segundo os princípios do 5S, reavaliação e simplificação das tarefas de setup. Os
resultados mostram uma redução de tempo a rondar os 26 minutos, o que se traduz numa
redução de 18,95% do valor inicial do setup mais demorado da empresa. Além disso é
possível notar melhorias significativas na organização da linha, comprovando o impacto
positivo da abordagem Lean no aumento da eficiência e flexibilidade da linha. Apesar de
terem aparecido algumas limitações ao longo do estudo, este demonstra a viabilidade da
aplicação do SMED em ambientes industriais.The instability of today’s markets increasingly requires companies to develop strategies
that enable greater flexibility and efficiency in their processes without compromising
product quality.
This study addresses the application of the Single Minute Exchange of Die (SMED)
methodology on an extrusion line at the company COFICAB, with the main objective of
reducing setup times and consequently increasing production flexibility. The work is
framed within the context of Lean Manufacturing philosophy, focused on waste
elimination and continuous improvement. Given that COFICAB operates predominantly
within the automotive sector, many of the tools associated with the Lean philosophy had
already been implemented, which eased the overall process of SMED implementation.
The research was conducted through direct observation on the shop floor, analysis of
quantitative and qualitative data obtained from videos and photographs, and interviews
with line operators, team leaders, and quality inspectors. After the initial diagnosis,
workplace reorganization measures were implemented based on the 5S principles, along
with the reassessment and simplification of setup tasks. The results indicate a time
reduction of approximately 26 minutes, corresponding to an 18.95% decrease relative to
the initial value of the company’s longest setup time. Furthermore, significant
improvements in line organization can be observed, demonstrating the positive impact of
the Lean approach on enhancing the efficiency and flexibility of the production line.
Despite some limitations encountered during the study, it demonstrates the feasibility of
applying SMED in industrial environments
An Examination of the Fit between Demand and Supply of the Accounting Professional's Competencies: Evidence from the Portuguese Context
No full textRecognizing the central importance of aligning competencies with the needs of the labor market, this study proposes a comprehensive investigation into the alignment of demand and supply of competencies within the accounting profession. The analysis aims to provide insights for students, educational institutions, professional bodies, and the accounting profession as they navigate the dynamic landscape of accounting competencies.
A primarily abductive methodology is utilized, starting with an in-depth examination of literature and existing theories. This facilitates the exploration of the phenomenon and the identification and explanation of themes and patterns related to the supply and demand of competencies.
The first study (Chapter 2) undertakes a systematic literature review, revealing a consistent and uniform landscape in research methodology and approach over a 15-year period. Notably, the lack of theoretical consensus led to the creation of a conceptual framework identifying seven gaps in competencies' supply and demand. The following study (Chapter 3) extends the analysis to competency assessment, classification, and alignment. It identifies key competencies, such as 'teamwork skills' and 'information technology,' exhibiting alignment, while others, including 'communication skills' and 'knowledge of business laws,' demonstrate significant misalignments. The chapter introduces a competency dictionary and concludes with insights into specific problem areas. Together, chapters 2 and 3 lay the groundwork for the subsequent empirical studies.
These empirical studies center on the Portuguese context, with Chapter 4 incorporating two studies, juxtaposed to obtain alignment information. The first study identifies competency demand by applying content analysis techniques to 306 job advertisements for accounting professionals, revealing the most demanded competencies and clustering them according to specialization areas. The second study uses similar methods to analyze the contents of 32 accounting course programs in Higher Education Institutions (HEIs) to identify the most specified competencies. Upon analyzing the fit of the data obtained, the results highlight a near-perfect alignment in the main technical competencies but reveal discrepancies in others, notably 'foreign languages.' The refined alignment analysis across areas of expertise and accounting courses reveals weak alignment overall, emphasizing areas requiring correction in educational supply. Chapter 5 examines the influence of Portuguese Professional Accounting Organizations (PAOs) on competency alignment. An embedded case study reveals the wide-ranging impacts of PAOs on competencies, emphasizing shifts in professional roles and priorities. The study identifies seven categories of PAO activities and demonstrates their potential to enhance alignment between competency supply and demand.
The contributions of this thesis are significant to the understanding of competency alignment in the accounting profession. In Chapter 2, a demand-side perspective is introduced, bridging gaps in existing literature and presenting a novel conceptual framework based on the SERVQUAL model. This framework offers a structured foundation for theoretical and practical developments and provides valuable insights for HEIs to enhance the planning and development of accounting courses. Chapter 3 systematically maps literature on the convergence of competencies, identifying actors and categorizing competencies, emphasizing the need for ongoing research to address misalignments and advocating for increased collaboration among stakeholders. Chapter 4 further contributes by undertaking one of the first comparative studies between job advertisements (demand) and accounting course programs (supply), expanding knowledge and emphasizing the dynamic nature of the accounting profession. Chapter 5 clarifies the extent of the influence of PAOs on competencies, providing a valuable framework for future research and practical insights for PAOs to identify strengths and weaknesses.
The study's practical implications encompass empowering students with insights into sought-after competencies, guiding informed decisions on investment in high-demand competencies. HEIs benefit by gaining valuable insights to align curricula with job market expectations, aiding in better preparation of students for professional life. PAOs benefit by understanding and addressing evolving market demands to fulfill their pivotal role effectively.expectativas do mercado de trabalho é fundamental para garantir a formação de recursos humanos qualificados, motivados e capazes de promover um crescimento económico sustentável. A área da contabilidade, que está em constante mudança devido aos rápidos avanços tecnológicos e às frequentes alterações legislativas e regulamentares, exemplifica claramente a necessidade de um maior conhecimento sobre o alinhamento de competências.
Apesar da extensa investigação sobre competências do profissional de contabilidade, uma teoria global coesa continua notavelmente ausente. Reconhecendo a importância de alinhar competências com as necessidades do mercado de trabalho, esta tese oferece uma investigação abrangente sobre o alinhamento da procura e oferta de competências no seio da profissão contabilística. Para atingir este objetivo global foram desenvolvidos estudos conceptuais e empíricos, que se apresentam nos capítulos 2 a 5, que pretendem atingir quatro objetivos específicos:
I.
Fornecer uma visão geral do estado atual da investigação sobre o alinhamento entre a oferta e a procura de competências do profissional de contabilidade;
II.
Identificar na literatura, analisar e categorizar as lacunas entre a oferta e a procura de competências do profissional de contabilidade.
III.
Avaliar o alinhamento entre a oferta e a procura de competências do profissional de contabilidade no contexto português.
IV.
Examinar como as organizações profissionais de contabilidade (OPCs) portuguesas influenciam o alinhamento entre a oferta e a procura de competências do profissional de contabilidade.
Face à problemática em estudo e aos objetivos propostos, foram elaboradas 11 questões de investigação:
QI 2.1 Que lacunas são evidenciadas na literatura entre a procura e a oferta das competências do profissional de contabilidade?
QI 2.2 Como se enquadram essas lacunas num quadro conceptual de oferta e procura de competências do profissional de contabilidade?
QI 3.1 Quais são os intervenientes na relação entre a oferta e a procura de competências identificados na literatura? QI 3.2 Que estratégias são utilizadas na literatura para avaliar a oferta e a procura de competências?
QI 3.3 Que competências têm sido estudadas ao longo dos últimos 15 anos?
QI 3.4 Qual é a convergência atual entre a oferta e a procura de competências?
QI 4.1 Que competências procuram os empregadores nos profissionais de contabilidade iniciantes?
QI 4.2 Que competências possuem os diplomados dos cursos de contabilidade do ensino superior?
QI 4.3 Existe alinhamento entre a oferta e a procura de competências do profissional de contabilidade no contexto português?
QI 5.1 Como entendem as OPCs em Portugal a oferta e a procura das competências do profissional de contabilidade?
QI 5.2 Como influenciam as OPCs em Portugal o alinhamento entre a oferta e a procura das competências do profissional de contabilidade?
Depois de uma breve introdução e para responder aos dois primeiros objetivos específicos desta tese, foram desenvolvidos dois estudos conceptuais apresentados respetivamente nos capítulos 2 e 3.
O capítulo 2 explora o alinhamento teórico entre a oferta e a procura. Utilizando a metodologia Preferred Reporting Items for Systematic Review and Meta-Analysis (PRISMA), são analisados e discutidos 122 artigos das bases de dados Web of Science e SciVerse Scopus. O estudo investiga as lacunas entre as competências esperadas e as competências oferecidas no seio da profissão contabilística, respondendo às questões de investigação QI2.1 e QI2.2. Essas lacunas são meticulosamente identificadas, analisadas e categorizadas, permitindo a criação de um quadro conceptual preparado para uma exploração mais aprofundada. Esta estrutura conceptual irá enquadrar os estudos empíricos seguintes, realizados no contexto português. Assim, este capítulo contribui significativamente para a literatura, através da criação de um quadro conceptual, da identificação das lacunas e da sugestão de novas pistas de investigação.
O Capítulo 3 surge no seguimento do capítulo anterior e resulta da identificação da necessidade de se estudarem as competências e o seu ajustamento efetivo ao mercado de trabalho. O foco está aqui centrado não na identificação de lacunas, mas sim nos intervenientes (RQ3.1), na avaliação de competências (QI3.2), nos tipos de competências (QI3.3) e no alinhamento efetivo entre oferta e procura (QI3.4). A partir das normas internacionais de educação 2, 3 e 4 e do dicionário prático de Da Camara (2017) foi construído um dicionário de competências que permite estudar e verificar o alinhamento entre a oferta e a procura. A análise efetuada permite identificar um alinhamento genérico em competências como o ‘trabalho em equipa’ e ‘tecnologias de informação’, mas ao mesmo tempo revela desalinhamentos nas ‘habilidades de comunicação’, ‘habilidades analíticas’ e ‘conhecimento de leis e regulamentos comerciais’. Este capítulo oferece uma contribuição teórica ao categorizar as competências para estudos futuros, criando um dicionário de competências, e proporciona insights sobre o alinhamento entre a oferta e a procura. As implicações práticas abrangem stakeholders como as IES, empregadores e OPCs, com uma recomendação universal para intensificar a sua colaboração e, assim, aprimorar o alinhamento entre a oferta e a procura.
No Capítulo 4, são desenvolvidos dois estudos empíricos que procuram explorar a lacuna entre a especificação de competências (por parte das IES) e as expectativas do mercado, identificada como lacuna CDE no Capítulo 2. A escolha desta lacuna para investigação resulta do facto de esta ainda não ter sido estudada no contexto português e da oportunidade que oferece para uma estratégia de investigação única. Assim, e recorrendo a dados publicamente disponíveis, especificamente anúncios de emprego e programas de cursos de contabilidade, este estudo adota uma estratégia de investigação qualitativa com análise quantitativa de dados, abordando o terceiro objetivo específico da tese.
No primeiro estudo empírico, que responde à questão de investigação QI4.1, foram recolhidos 306 anúncios de emprego que foram posteriormente submetidos a uma análise de conteúdo, com utilização do NVivo. A categorização das competências baseia-se no dicionário de competências desenvolvido no Capítulo 3. Estatísticas descritivas e rankings são utilizados para demonstrar as competências mais procuradas pelos empregadores portugueses. São ainda apresentados dados agregados por áreas de especialização da contabilidade, ou seja, são identificadas as competências mais esperadas dentro de cada área específica da contabilidade.
No segundo estudo, que responde à questão de investigação QI4.2, o lado da oferta é analisado com base em 32 programas de cursos de contabilidade. Estes são sujeitos a uma análise de conteúdo, utilizando o mesmo esquema de codificação construído no Capítulo 3. Também aqui são empregues estatísticas descritivas e rankings para apresentar as competências mais especificadas pelas instituições de ensino.
Depois de analisados separadamente os lados da procura e da oferta de competências do profissional de contabilidade, foi efetuada uma análise comparativa para avaliar o alinhamento das competências no contexto português, respondendo à questão de investigação QI4.3. Esta análise foi efetuada de forma individual (competência a competência) e ainda comparando os dados agregados por áreas de especialização com os cursos de contabilidade em funcionamento em Portugal.
Os resultados apontam para alguns desalinhamentos em competências como ‘línguas estrangeiras’, sugerindo áreas a melhorar nos currículos das instituições de ensino. Uma análise mais refinada do alinhamento entre áreas de especialização e cursos de contabilidade revela um alinhamento global fraco, enfatizando áreas onde são necessárias melhorias na oferta educativa. Os contributos práticos deste capítulo situam-se a vários níveis e abrangem estudantes, IES e OPCs, uma vez que este estudo proporciona conhecimentos sobre as competências mais valorizadas pelos empregadores e sobre o necessário alinhamento dos programas curriculares com as expectativas do mercado.
A última etapa desta tese foca-se nos intervenientes menos explorados na literatura no domínio das competências do profissional de contabilidade — as organizações profissionais de contabilidade. Procura-se assim responder ao quarto objetivo específico da tese, através de um estudo de caso que responde às questões de investigação QI5.1 e QI5.2. Os dados foram recolhidos a partir de entrevistas realizadas com representantes de três OPCs portuguesas e de uma extensa análise documental. O estudo utiliza um enquadramento teórico construído com base numa revisão da literatura, que categoriza as atividades das OPCs em sete categorias distintas: 1) acreditação, 2) filiação e estatuto profissional, 3) desenvolvimento profissional, 4) padronização e garantia de qualidade, 5) ações disciplinares, 6) informações de mercado e tendências de emprego, e 7) defesa e influência regulamentar.
As conclusões revelam impactos abrangentes das OPCs nas competências, influenciando tanto o lado da oferta como o da procura. O estudo destaca as prioridades em evolução nas OPCs, refletindo mudanças nos papéis profissionais e desafios emergentes na profissão contabilística, como os avanços digitais, serviços de apoio e análise, e os relatórios de sustentabilidade. Os contributos deste trabalho situam-se a vários níveis. Os resultados permitem às OPCs identificar pontos fortes e fracos nas suas funções e permitem à academia aproveitar as interações com as OPCs, para conseguir um melhor alinhamento entre as competências do profissional de contabilidade e as exigências do mercado. Esta colaboração entre academia e OPCs revela-se fundamental para ultrapassar os desafios de um setor em constante mudança
Efeitos do Hexabromociclododecano no sistema cardiovascular humano
No full textO hexabromociclododecano (HBCD) é um composto não aromático pertencente à família
dos retardantes de chama bromados e é conhecido como um poluente orgânico
persistente (POP). Este composto acumula-se facilmente no ambiente e tem uma meiavida elevada na água. Com uma variedade de usos, o HBCD é encontrado no pó
doméstico, eletrónica, isolamento e construção. Existem vários isómeros e os mais
estudados são a-, ß-, e ?-HBCD. Inicialmente utilizado como substituto de outros
retardadores de chama, os éteres difenílicos polibromados (PBDEs), a descoberta do seu
papel como POP fez com que a fabricação e uso do HBCD fosse restrita na Europa e em
outros países. Os efeitos adversos no ambiente e na saúde humana tem vindo a
acumular-se, quer em resultado da sua acumulação, quer considerando o seu poder como
disruptor endócrino (ED). Além disso, também está provado que tem efeitos prejudiciais
sobre o sistema neuronal, o sistema endócrino, o sistema cardiovascular, o fígado e o
sistema reprodutivo. A toxicidade do HBCD também tem sido associada à produção de
citocinas, danos no ADN, aumento da apoptose celular, aumento do stress oxidativo e
produção de espécies reativas de oxigénio (ROS).Hexabromocyclododecane (HBCD) is a non-aromatic compound belonging to the
bromine flame retardant family and is a known persistent organic pollutant (POP). This
compound accumulates easily in the environment and has a high half-life in water. With
a variety of uses, the HBCD is found in house dust, electronics, insulation, and
construction. There are several isomers and the most studied are a-, ß-, and ?-HBCD.
Initially used as a substitute for other flame retardants, the polybrominated diphenyl
ethers (PBDEs), the discovery of its role as a POP made HBCD use and manufacturing
restricted in Europe and other countries. The adverse effects on the environment and
human health have been piling, either as a result from its accumulation or considering its
power as an endocrine disruptor (ED). Furthermore, it has also been proven that it has
detrimental effects on the neuronal system, endocrine system, cardiovascular system,
liver, and the reproductive system. The toxicity of HBCD has also been linked to cytokine
production, DNA damage, increased cell apoptosis, increased oxidative stress, and
reactive oxygen species (ROS) production
Experiência Profissionalizante na vertente de Investigação, Farmácia Hospitalar e Farmácia Comunitária
No full textEsta dissertação foi elaborada com vista à obtenção de grau de Mestre em Ciências
Farmacêuticas, integrando-se na Unidade Curricular de Estágio. Está dividida em três
capítulos: o Capítulo I diz respeito à componente de Investigação, o Capítulo II, relativo
ao relatório estágio em Farmácia Hospitalar; e o Capítulo III, referente ao relatório de
estágio em Farmácia Comunitária.
O capítulo I corresponde à componente de Investigação e centrou-se na identificação e
caracterização das intervenções e serviços farmacêuticos disponíveis nas farmácias
comunitárias portuguesas, no âmbito das Doenças Respiratórias Crónicas (DRC),
nomeadamente asma e DPOC. Com a crescente prevalência dessas doenças e o papel
cada vez mais relevante das farmácias comunitárias na prestação de cuidados de saúde,
torna-se essencial analisar as práticas atuais e as barreiras à sua implementação.
O estudo foi conduzido através de um questionário online dirigido a farmácias
comunitárias recolhendo dados sociodemográficos, informações sobre as intervenções
farmacêuticas disponibilizadas e os principais desafios à sua implementação.
Antes de dar início ao estudo, foi elaborado o respetivo projeto e desenvolvido o
questionário a aplicar, ambos submetidos à Comissão de Ética da UBI, tendo obtido
parecer favorável (processo n.º CE-UBI-Pj-2023-065-ID1996).
A amostra foi constituída por 367 farmácias, distribuídas por todo o território nacional,
das quais apenas 26 ofereciam consultas farmacêuticas específicas para a asma e/ou
DPOC. A maioria destas farmácias localizava-se em áreas predominantemente urbanas.
As principais intervenções farmacêuticas identificadas foram a verificação da técnica
inalatória (95,6%) e o encaminhamento a outros profissionais de saúde (95,1%). Por
outro lado, intervenções mais complexas, como a triagem de exacerbações (5,2%) e o
controlo de sintomas através de questionários validados (7,9%), foram pouco frequentes.
Entre as principais barreiras à implementação de consultas farmacêuticas, destacaramse as restrições de tempo e o financiamento inadequado.
Os resultados mostram que, embora as farmácias comunitárias desempenhem um papel
fundamental na gestão das DRC, há ainda margem para melhorar a prestação de
cuidados. A superação das barreiras identificadas e a expansão das intervenções farmacêuticas podem contribuir significativamente para a otimização do tratamento da
asma e da DPOC, com impacto positivo na qualidade de vida dos doentes. Assim, é
essencial promover a capacitação contínua dos farmacêuticos, a criação de protocolos de
colaboração com outros profissionais de saúde e a implementação de incentivos
financeiros para apoiar a evolução dos serviços prestados.
O capítulo II descreve a minha experiência em Farmácia Hospitalar, decorrente do
estágio curricular efetuado no Hospital Amato Lusitano, em Castelo Branco, entre os dias
5 de fevereiro e 29 de março de 2024, sob a orientação da Drª Sandra Queimado. Ao
longo do estágio tive a oportunidade de participar e conhecer diversas áreas dos Serviços
Farmacêuticos Hospitalares (SFH), assim como a atuação do farmacêutico em cada uma
delas.
O capítulo III consiste no relatório de estágio na vertente de Farmácia Comunitária,
realizado na Farmácia Silva Domingos, em Vila de Rei, Castelo Branco, entre 1 de abril e
21 de junho de 2024, sob a supervisão da Drª Maria Lourdes Silva, Diretora Técnica. Este
capítulo aborda, sobretudo, o funcionamento da farmácia e as atividades nas quais o
farmacêutico está envolvido no contexto da Farmácia Comunitária.This dissertation was prepared as part of the requirements for the Master’s degree in
Pharmaceutical Sciences, integrated into the Internship Curricular Unit. It is divided into
three chapters: Chapter I concerns the Research component; Chapter II relates to the
Hospital Pharmacy internship report; and Chapter III refers to the Community
Pharmacy internship report.
Chapter I corresponds to the Research component and focused on the identification and
characterisation of pharmaceutical interventions and services available in Portuguese
community pharmacies, specifically in the context of Chronic Respiratory Diseases
(CRD), namely asthma and COPD. Given the growing prevalence of these diseases and
the increasingly important role of community pharmacies in providing healthcare, it is
essential to analyse current practices and the barriers to their implementation.
The study was conducted through an online questionnaire directed to community
pharmacies, collecting sociodemographic data, information on the pharmaceutical
interventions provided, and the main challenges to their implementation.
Prior to starting the study, the project was drafted, and the questionnaire was developed,
both of which were submitted to the Ethics Committee of UBI, receiving approval
(process no. CE-UBI-Pj-2023-065-ID1996).
The sample consisted of 367 pharmacies across the country, of which only 26 offered
specific pharmaceutical consultations for asthma and/or COPD. Most of these
pharmacies were in predominantly urban areas.
The main pharmaceutical interventions identified were the verification of the inhalation
technique (95.6%) and referrals to other healthcare professionals (95.1%). On the other
hand, more complex interventions, such as the screening of exacerbations (5.2%) and
symptom monitoring through validated questionnaires (7.9%), were less frequent. The
main barriers to implementing pharmaceutical consultations were time constraints and
inadequate funding.
The results show that, although community pharmacies play a crucial role in the
management of CRDs, there is still room for improving the delivery of care. Overcoming
the identified barriers and expanding pharmaceutical interventions could significantly contribute to optimising the treatment of asthma and COPD, with a positive impact on
patients' quality of life. Therefore, it is essential to promote the continuous training of
pharmacists, create protocols for collaboration with other healthcare professionals, and
implement financial incentives to support the development of the services provided.
Chapter II describes my experience in Hospital Pharmacy, resulting from the internship
carried out at Hospital Amato Lusitano, in Castelo Branco, from February 5th to March
29th, 2024, under the supervision of Dr. Sandra Queimado. Throughout the internship,
I had the opportunity to participate in and learn about various areas of the Hospital
Pharmaceutical Services (HPS), as well as the pharmacist’s role in each of them.
Chapter III consists of the report on the Community Pharmacy internship, conducted at
Farmácia Silva Domingos, in Vila de Rei, Castelo Branco, from April 1st to June 21st,
2024, under the supervision of Dr. Maria Lourdes Silva, Technical Director. This chapter
focuses mainly on the operation of the pharmacy and the activities in which the
pharmacist is involved within the context of Community Pharmacy
Modernidade e espaço urbano: vazios urbanos - o caso da Covilhã
Get PDFA atual modernidade conduz a população global da ruralidade para a urbanidade. O espaço urbano tem na cidade o expoente máximo. Analisada a cidade que temos, verifica-se que o tecido urbano mais antigo abandonou a resposta efetiva aos anseios humanos. Os centros das cidades têm vindo a assistir ao abandono e ao crescimento dos vazios urbanos. Os vazios urbanos são fenómenos urbanos comuns a qualquer cidade, e podem ser considerados como um dos seus principais elementos morfológicos estruturais, ou ainda, como uma categoria estrutural de análise da cidade, apresentando-se como uma das formas essenciais para entendê-la, face à sua nova condição urbana e à sua complexidade. São locais onde a cidade pode redefinir-se, aproveitando-se dessas áreas para crescer de forma mais ordenada, arejada e sustentável. Partindo da análise da situação das cidades portuguesas e em particular do caso da cidade da Covilhã, entre 1991 e 2011, defende-se que a identificação dos vazios urbanos deve constituir uma prioridade das autarquias para uma avaliação dos impactos e consequentes ações de reabilitação e revitalização. O objetivo principal deste estudo é a definição de uma metodologia que conduza à elaboração da carta dos vazios urbanos com utilidade e aplicação prévia nos instrumentos de planeamento urbanístico para uma melhor clarificação dos atos próprios da arquitetura.The current modernity leads the global population of rurality to urbanity. The urban space in the city is the pinnacle. Analyzed the city we have, it appears that the older urban space abandoned effective response to human desires. The city centers have been witnessing the abandonment and growth of urban voids. Urban voids are common to any city urban phenomena, and can be considered as one of their main structural morphological elements, or as a structural category of analysis of the city, presenting itself as one of the essential ways to understand it, face to their new urban condition and its complexity. Are places where the city can redefine itself, taking advantage of these areas to grow in a more orderly, airy and sustainable manner. Based on the analysis of the situation of Portuguese cities and in particular the case of the city of Covilhã, between 1991 and 2011, it is argued that the identification of urban voids should be a priority of authorities for an assessment of impacts and consequent actions of rehabilitation and revitalization. The main objective of this study is to define a methodology that leads to the preparation of the map of urban voids with usefulness and application in prior instruments of urban planning for better clarification of their own acts of architecture
Perturbação de Personalidade Antissocial: Abordagem Terapêutica à luz da evidência atual
No full textA Perturbação de Personalidade Antissocial (PPA) é uma perturbação de personalidade do Cluster
B que se caracteriza pelo seu padrão de comportamento socialmente irresponsável e
problemático, crónico e repetitivo. Esta doença está associada a comorbilidades físicas,
psiquiátricas e perturbações aditivas. É uma doença de extrema importância no âmbito da saúde
pública uma vez que tem um impacto considerável nos indivíduos, famílias e na sociedade em
geral. Assim, verifica-se uma patologia dispendiosa, associada a custos decorrentes de danos
emocionais, físicos e materiais, bem como à utilização dos serviços de saúde e serviços sociais.
Atualmente, não existe um algoritmo de tratamento farmacológico direcionado especificamente
à abordagem da PPA, pelo que é vital realizar uma revisão que compile os dados obtidos até então.
A psicoterapia é, tradicionalmente, o pilar do tratamento da PPA, sendo que programas cognitivocomportamentais têm sido considerados as formas mais eficazes de tratamento para
comportamentos antissociais. Nesta dissertação, conclui-se que não existe, ainda, uma prescrição
rotineira eficaz cujo alvo seja a PPA. A medicação antipsicótica de segunda geração seria o
tratamento medicamentoso preferido para sintomas cognitivo-perceptivos, e estabilizadores de
humor e ISRS seriam indicados no controlo impulsivo-comportamental. Os fármacos
antiepilépticos, como o valproato de sódio ou a carbamazepina, parecem ter uma eficácia
significativa e devem ser futuramente considerados na abordagem terapêutica.The Antisocial Personality Disorder (APD) is a Cluster B personality disorder characterized by a
pattern of socially irresponsible and problematic behavior, which is chronic and repetitive. This
disorder is associated with physical, psychiatric comorbidities, and addictive disorders. It is a
disease of extreme importance in the field of public health as it has a considerable impact on
individuals, families, and society as a whole. Thus, there is an expensive pathology associated with
costs resulting from emotional, physical, and material damage, as well as the use of health and
social services. Currently, there is no pharmacological treatment algorithm specifically targeted
at addressing APD, so it is vital to conduct a review compiling the data obtained so far.
Psychotherapy is traditionally the cornerstone of APD treatment, with cognitive-behavioral
programs being considered the most effective forms of treatment for antisocial behaviors. In this
dissertation, it is concluded that there is still no effective routine prescription targeting APD.
Second-generation antipsychotic medication would be the preferred pharmacological treatment
for cognitive-perceptual symptoms, and mood stabilizers and SSRIs would be indicated for
impulsive-behavioral control. Antiepileptic drugs, such as sodium valproate or carbamazepine,
appear to have significant efficacy and should be considered in future therapeutic approaches
Memória Curta: A Lã e a Neve como Espelho da Revolução Silenciada
No full textNo atual contexto de polarizações políticas e ressurgimento de extremismos, A Lã e a Neve
de Ferreira de Castro emerge como um recurso literário essencial para entender as
dinâmicas sociopolíticas de Portugal na década de 1940. Este estudo pretende a
recontextualização da obra na contemporaneidade, beneficiando-se das recentes inovações
no campo das humanidades digitais e das artes visuais.
O nosso trabalho investigativo revisita A Lã e a Neve sob uma perspetiva crítica
contemporânea, procurando desvendar as complexidades da sociedade portuguesa
da época, tanto através de uma análise literária quanto sociológica que sublinha os desafios,
tensões e esperanças retratados.
Além de ser uma homenagem ao universo criado, este projeto ambiciona recriar a trajetória
do protagonista Horácio, proporcionando uma experiência imersiva que transita entre a
ficção e a realidade tangível da história portuguesa.
O Memória Curta surge como uma ponte entre a literatura e a tecnologia, um espaço de
intersecção onde a teia narrativa cruza-se com a inovação digital, possibilitando não apenas
uma revitalização da obra. mas também um diálogo enriquecido com o contexto atual,
evidenciando a relevância e contemporaneidade da mensagem de Castro.
Neste sentido, almejamos criar uma experiência rica e multidimensional que convida cada
indivíduo a explorar mais profundamente o universo literário e histórico, transcendendo as
barreiras temporais e espaciais e promovendo uma compreensão mais abrangente e
integrada da obra e do seu contexto histórico
Efeitos genómicos do triclosano a nível cardiovascular humano
No full textO triclosano (TCS) é um agente antimicrobiano sintético amplamente utilizado em
produtos de uso diário, sendo encontrado em diversos itens de higiene pessoal e
doméstica. Durante a pandemia de COVID-19, o uso de desinfetantes tornou-se
indispensável para o acesso a muitos espaços públicos, sendo o TCS um componente
comum nestes produtos, o que reforça a relevância de investigar os seus efeitos.
Estudos recentes indicam que o TCS atua como um disruptor endócrino, interferindo
nas atividades estrogénicas e androgénicas, com potencial para contribuir para o
desenvolvimento de patologias a nível reprodutor, endócrino, neurológico e
cardiovascular. No entanto, os seus impactos a nível humano ainda carecem de maior
compreensão e investigação.
Com isto, o objetivo deste trabalho consistiu no estudo dos potenciais efeitos do
triclosano no sistema cardiovascular. Para atingir este objetivo foram delineados os
seguintes objetivos específicos: 1) Análise do efeito direto do TCS na artéria umbilical
humana (HUA) sem endotélio; 2) Análise dos possíveis mecanismos envolvidos no
efeito do TCS na HUA, principalmente o envolvimento dos nucleótidos cíclicos e dos
canais de Ca2+; 3) Realização com sucesso do isolamento e cultura HUASMCs; 4)
Análise dos efeitos do TCS na viabilidade das HUASMCs por ensaio de MTT; 5) Análise
da expressão de genes envolvidos nas propriedades contráteis das HUASMCs, usando o
Real-Time PCR.
Os resultados indicaram que o TCS promove relaxamentos de curto prazo de maneira
dependente da concentração em HUAs desprovidas de endotélio, após contração com
diferentes agentes vasoativos (não genómico). Quanto aos ensaios genómicos,
verificou-se que o TCS pode estar associado à redução da síntese de óxido nítrico. Nos
testes de viabilidade celular, apenas as concentrações mais altas de TCS 50 e 100 µM
resultaram em uma diminuição significativa da viabilidade, apontando para um efeito
tóxico do TCS nas Células Musculares Lisas da Artéria Umbilical Humana (HUASMCs).
Em síntese, o TCS parece exercer um impacto negativo sobre o sistema cardiovascular.
No entanto, os seus efeitos genómicos ainda não estão completamente esclarecidos,
sobretudo no que diz respeito à incubação com TCS 1 µM, onde foi observada uma
resposta bifásica. Dessa forma, são necessários estudos complementares para
aprofundar o entendimento do mecanismo de ação do TCS no contexto vascular.Triclosan (TCS) is a synthetic antimicrobial agent that is widely used in everyday
products and is found in many personal and household hygiene items. During the
COVID-19 pandemic, the use of disinfectants has become indispensable for access to
many public spaces, and TCS is a common component in these products, which
reinforces the relevance of investigating its effects. Recent studies indicate that TCS
acts as an endocrine disruptor, interfering with estrogenic and androgenic activities,
with the potential to contribute to the development of reproductive, endocrine,
neurological and cardiovascular pathologies. However, its impact on humans still needs
to be better understood and researched.
With this in mind, the aim of this work was to study the potential effects of triclosan on
the cardiovascular system. To achieve this goal, the following specific objectives were
outlined: 1) Analysing the direct effect of TCS on the human umbilical artery (HUA)
without endothelium; 2) Analysing the possible mechanisms involved in the effect of
TCS on the HUA, mainly the involvement of cyclic nucleotides and Ca2+ channels; 3)
Successfully carrying out the isolation and culture of HUASMCs; 4) Analysing the
effects of TCS on the viability of HUASMCs by MTT assay; 5) Analysing the expression
of genes involved in the contractile properties of HUASMCs using Real-Time PCR.
The results indicated that TCS promotes short-term relaxation in a concentrationdependent manner in HUAs devoid of endothelium, after contraction with different
vasoactive agents (non-genomic). As for the genomic tests, it was found that TCS may
be associated with a reduction in nitric oxide synthesis. In the cell viability tests, only
the highest concentrations of TCS 50 and 100 µM resulted in a significant decrease in
viability, pointing to a toxic effect of TCS on Human Umbilical Artery Smooth Muscle
Cells (HUASMCs).
In summary, TCS appears to have a negative impact on the cardiovascular system.
However, its genomic effects are not yet fully understood, especially with regard to
incubation with 1 µM TCS, where a biphasic response was observed. Thus, further
studies are needed to deepen our understanding of the mechanism of action of TCS in
the vascular context
Development of ceramic nanoconjugates with plasmid DNA for the treatment of cervical cancer
No full textO cancro do colo do útero afeta muitas mulheres em todo o mundo. Esta doença é
principalmente transmitida por via sexual e é causada por uma infeção persistente de
papilomavírus humano. O genoma do HPV codifica para várias oncoproteínas,
nomeadamente para a E6. Após a infeção por este vírus a E6 liga-se à proteína supressora
de tumores p53 e desregula o seu normal funcionamento levando à proliferação
descontrolada e formação do tumor. O aumento da prevalência desta doença nos países
em desenvolvimento é preocupante. As vacinas de DNA e a terapia génica têm sido
estudadas para o tratamento do cancro induzido por este vírus. A terapia génica tem
gerado particular interesse, tendo como objetivo transferir genes terapêuticos para
células-alvo utilizando um vetor de DNA seguro, estável e eficaz. Os principais desafios
associados a estas terapêuticas incluem a suscetibilidade do vetor de DNA à degradação
durante a circulação no organismo do paciente, a necessidade de uma entrega direcionada,
o processamento eficiente do sistema de entrega no interior da célula e a existência de
barreiras intracelulares tais como a membrana celular. Para a tradução clínica da terapia
génica, a formulação e a produção em larga escala de vetores de DNA, bem como a sua
estabilidade e armazenamento, são importantes.
As nanopartículas de fosfato de cálcio (CaP NPs) podem ser uma nova abordagem para a
entrega de vetores de DNA na terapia génica, devido à sua elevada biocompatibilidade e
biodegradabilidade, tendo sido utilizadas para a regeneração de tecidos, como os ossos e
os dentes. Estes sistemas podem encapsular diversas biomoléculas, tais como ácidos
nucleicos, proteínas, péptidos, anticorpos ou fármacos. Além disso, as CaP NPs podem
oferecer proteção contra a difusão imediata ou a degradação no ambiente circundante,
permitindo a libertação controlada de fármacos e a terapia sustentada. Devido às suas
características, CaP NPs constituem um vetor não viral promissor para a terapia génica
direcionada ao cancro do colo do útero.
Assim, este estudo teve como objetivo desenvolver e caraterizar CaP NPs para a libertação
de DNA plasmídico (pDNA) que codifica para a p53 em células de cancro do colo do útero.
As CaP NPs foram sintetizadas utilizando um protocolo de biomineralização com citrato
como agente estabilizador e regulador do crescimento de cristais de hidroxiapatite. Os
sistemas foram totalmente caracterizados para determinar o seu tamanho, carga,
composição química, eficiência de encapsulação e libertação de pDNA. Foram efetuados
ensaios in vitro de internalização celular e de citotoxicidade, utilizando linhas celulares de adenocarcinoma cervical (HeLa) e de fibroblastos. Também foi desenvolvido um breve
estudo preliminar sobre a funcionalização de CaP NPs com o ligando de biotina.
Através de testes de caraterização, as CaP NPs obtiveram um tamanho de 76.34 ± 34.08
nm, com um índice de polidispersidade (PdI) de 0.40 ± 0.09 e uma carga superficial de –
20.90 ± 0.90 mV. Inicialmente, a inclusão do pDNA foi efetuada através de uma
abordagem de adsorção, obtendo-se um tamanho de 133.13 ± 58.12 nm, um PdI de 0.65 ±
0.17 e uma carga superficial de – 23.70 ± 1.10 mV. Através da análise FTIR, é colocada a
hipótese da presença de pDNA nas NPs de CaP/pDNA, devido à elevada intensidade e ao
modo de vibração mais amplo em torno da zona de 1000 cm-1
, em comparação com o
espetro das CaP NPs. Obteve-se também uma eficiência de encapsulação de
aproximadamente 100%. Foram executados estudos de transfecção, in vitro, em células
HeLa e fibroblastos. Os estudos de viabilidade demonstraram a ausência de citotoxicidade
das CaP NPs. No entanto, NPs com pDNA encapsulado em contacto com células têm um
pouco efeito na sua citotoxicidade. Com base nestes resultados, foi necessário otimizar a
quantidade de pDNA encapsulado. Neste sentido, foram desenvolvidos novos testes de
caraterização e obteve-se valores de tamanho de 122.65 ± 8.41 nm, um PdI de 0.26 ± 0.01
e carga superficial de - 19.26 ± 0.80 mV com uma eficiência de encapsulação de
aproximadamente 88%. Foram efetuados novos testes in vitro, que mostraram um ligeiro
aumento da citotoxicidade das CaP NPs carregadas com pDNA. A sua internalização foi
verificada por microscopia confocal.
Posteriormente, para funcionalizar estas nanopartículas, foi incluído na formulação um
ligando, a biotina. A formulação obtida com biotina introduzida na solução de fosfato,
resultou num tamanho de 221 ± 11.31 nm, um PdI de 0.23 ± 0.01 e uma carga superficial
de - 13.79 ± 2.34 mV. Enquanto a formulação em que a biotina foi adsorvida, obteve um
tamanho de 120.9 ± 10.75 nm, um PdI de 0.31 ± 0.05 e - 20.42 ± 1.59 mV de carga
superficial. Análises FITR também foram realizadas, contudo não foram conclusivas para
decidir qual a melhor formulação para a funcionalização de CaP NPs/pDNA com Biotina.
Posteriormente, alguns estudos in vitro foram realizados para avaliar que método de
funcionalização de NPs com biotina é mais adequado. A citotoxicidade em células
cancerígenas aumentou significativamente quando a formulação obtida com biotina
introduzida na solução de fosfato entregou o pDNA a células HeLa. A sua internalização
foi também verificada através de microscopia confocal. Com base neste estudo, podemos
concluir que as CaP NPs são veículos promissores para a entrega de pDNA que expressa o
gene p53. No entanto, são ainda necessários mais estudos sobre a funcionalização com a
biotina.Cervical cancer affects many women around the world. This disease is mainly sexually
transmitted and is caused by a persistent human papillomavirus infection. The HPV
genome codes for several oncoproteins, including E6. After infection with this virus, E6
binds to the tumor suppressor protein p53 and disrupts its normal functioning, leading to
uncontrolled proliferation and tumor formation. The increase in the prevalence of this
disease in developing countries is worrying. DNA vaccines and gene therapy have been
studied for the treatment of cancer induced by this virus. Gene therapy has generated
particular interest, with the aim of transferring therapeutic genes to target cells using a
safe, stable and effective DNA vector. The main challenges associated with these therapies
include the susceptibility of the DNA vector to degradation during circulation in the
patient's body, the need for targeted delivery, efficient processing of the delivery system
inside the cell and the existence of intracellular barriers such as the cell membrane. For
the clinical translation of gene therapy, the formulation and large-scale production of DNA
vectors, as well as their stability and storage, are important.
Calcium phosphate nanoparticles (CaP NPs) could be a new approach for delivering DNA
vectors in gene therapy, due to their high biocompatibility and biodegradability, and have
been used for regenerating tissues such as bones and teeth. These systems can encapsulate
various biomolecules, such as nucleic acids, proteins, peptides, antibodies or drugs. In
addition, CaP NPs can offer protection against immediate diffusion or degradation in the
surrounding environment, allowing for controlled drug release and sustained therapy. Due
to their characteristics, CaP NPs constitute a promising non-viral vector for gene therapy
targeting cervical cancer.
Therefore, this study aimed to develop and characterize CaP NPs for the delivery of
plasmid DNA (pDNA) coding for p53 into cervical cancer cells. The CaP NPs were
synthesized using a biomineralization protocol with citrate as a stabilizing agent and
regulator of hydroxyapatite crystal growth. The systems were fully characterized to
determine their size, charge, chemical composition, encapsulation efficiency and pDNA
release. In vitro cell internalization and cytotoxicity tests were carried out using cervical
adenocarcinoma (HeLa) and fibroblast cell lines. A brief preliminary study was also
carried out on the functionalization of CaP NPs with the biotin ligand.
Through characterization tests, the CaP NPs obtained a size of 76.34 ± 34.08 nm, with a
polydispersity index (PdI) of 0.40 ± 0.09 and a surface charge of - 20.90 ± 0.90 mV. Initially, pDNA inclusion was carried out using an adsorption approach, obtaining a size of
133.13 ± 58.12 nm, a PdI of 0.65 ± 0.17 and a surface charge of - 23.70 ± 1.10 mV. By FTIR
analyses it is hypothesized the presence of pDNA in CaP NPs/pDNA, due to the high
intensity and broader vibration mode around 1000 cm-1 zone, compared to the spectrum
of CaP NPs. An encapsulation efficiency of approximately 100% was also obtained. In vitro
transfection studies were carried out on HeLa cells and fibroblasts. Viability studies
showed that CaP NPs were not cytotoxic. However, NPs with encapsulated pDNA in
contact with cells have little effect on their cytotoxicity. Based on these results, it was
necessary to optimize the amount of encapsulated pDNA. To this end, new
characterization tests were carried out and obtained size values of 122.65 ± 8.41 nm, a PdI
of 0.26 ± 0.01 and a surface charge of - 19.26 ± 0.80 mV with an encapsulation efficiency
of approximately 88%. New in vitro tests were carried out which showed a slight increase
in the cytotoxicity of CaP NPs loaded with pDNA. Their internalization was verified by
confocal microscopy.
Subsequently, to functionalize these nanoparticles, biotin, was included in the
formulation. The formulation obtained with biotin introduced into the phosphate solution
resulted in a size of 221 ± 11.31 nm, a PdI of 0.23 ± 0.01 and a surface charge of - 13.79 ±
2.34 mV. The formulation in which biotin was adsorbed had a size of 120.9 ± 10.75 nm, a
PdI of 0.31 ± 0.05 and a surface charge of - 20.42 ± 1.59 mV. FITR analyses were also
carried out, but they were not conclusive in deciding on the best formulation for
functionalizing CaP NPs/pDNA with Biotin. Subsequently, some in vitro studies were
carried out to assess which method of functionalizing NPs with biotin is most suitable.
Cytotoxicity in cancer cells increased significantly when the formulation obtained with
biotin introduced into the phosphate solution delivered the pDNA to HeLa cells. Its
internalization was also verified using confocal microscopy. Based on this study, we can
conclude that CaP NPs are promising vehicles for the delivery of pDNA expressing the p53
gene. However, further studies on functionalization with biotin are still needed