53 research outputs found
Klonierung der Gene der Ribonucleotid-Reduktasen von Corynebacterium ammoniagenes und Corynebacterium glutamicum
No full text[no abstract
The Sustainable Footprint Methodology: Including sustainability in the project management of the Bergermeer Gas Storage project
No full textManagement of TechnologyTechnology, Strategy and EntrepreneurshipTechnology, Policy and Managemen
Structural insights into catalysis and inhibition of O-acetylserine sulfhydrylase from Mycobacterium tuberculosis. Crystal structures of the enzyme alpha-aminoacrylate intermediate and an enzyme-inhibitor complex.
No full textCysteine biosynthetic genes are up-regulated in the persistent phase of Mycobacterium tuberculosis, and the corresponding enzymes are therefore of interest as potential targets for novel antibacterial agents. cysK1 is one of these genes and has been annotated as coding for an O-acetylserine sulfhydrylase. Recombinant CysK1 is a pyridoxal phosphate (PLP)-dependent enzyme that catalyzes the conversion of O-acetylserine to cysteine. The crystal structure of the enzyme was determined to 1.8A resolution. CysK1 belongs to the family of fold type II PLP enzymes and is similar in structure to other O-acetylserine sulfhydrylases. We were able to trap the alpha-aminoacrylate reaction intermediate and determine its structure by cryocrystallography. Formation of the aminoacrylate complex is accompanied by a domain rotation resulting in active site closure. The aminoacrylate moiety is bound in the active site via the covalent linkage to the PLP cofactor and by hydrogen bonds of its carboxyl group to several enzyme residues. The catalytic lysine residue is positioned such that it can protonate the Calpha-carbon atom of the aminoacrylate only from the si-face, resulting in the formation of L-cysteine. CysK1 is competitively inhibited by a four-residue peptide derived from the C-terminal of serine acetyl transferase. The crystallographic analysis reveals that the peptide binds to the enzyme active site, suggesting that CysK1 forms an bi-enzyme complex with serine acetyl transferase, in a similar manner to other bacterial and plant O-acetylserine sulfhydrylases. The structure of the enzyme-peptide complex provides a framework for the design of strong binding inhibitors
The mycolyltransferase 85A, a putative drug target of Mycobacterium tuberculosis: development of a novel assay and quantification of glycolipid-status of the mycobacterial cell wall.
No full textThe enzymes of the antigen 85 complex (Ag85A, B, and C) possess mycolyltransferase activity and catalyze the synthesis of the most abundant glycolipid of the mycobacterial cell wall, the cord factor. The cord factor (trehalose 6,6'-dimycolate, TDM) is essential for the integrity of the mycobacterial cell wall and pathogenesis of the bacillus. Thus, TDM biosynthesis is regarded as a potential drug target for control of Mycobacterium tuberculosis infections. Trehalose 6,6'-dimycolate (TDM) is synthesized from two molecules of trehalose-6'-monomycolate (TMM) by antigen 85A. We report here a novel enzyme assay using the natural substrate TMM. The novel colorimetric assay is based on the quantification of glucose from the degradation of trehalose, which is the product from catalytic activity of antigen 85A. Using the new assay, K(m) and K(cat) were determined with values of 129.6+/-8.1 microM and 65.4+/-4.1 min(-1), respectively. This novel assay is also suitable for robust high-throughput screening (HTS) for compound library screening against mycolyltransferase (antigen 85A). The assay is significantly faster and more convenient to use than all assays currently in use. The assay has a very low coefficient of variance (0.04) in 96-well plates and shows a Z' factor of 0.67-0.73, indicating the robustness of the assay. In addition, this new assay is highly suitable for the quantification of total TMM of the mycobacterial cell envelope
Veldstudie naar TBT verontreiniging in de Noordzee en risico's voor het mariene milieu
No full textIn dit rapport worden de resultaten gerapporteerd van drie jaar monitoring van intersex bij alikruiken in Nederlandse kustwateren en havens in relatie tot TBTgehalten in de milieucompartimenten water, zwevend stof, sediment en baggerspecie en in biota. De alikruik is een alternatief voor bekende tributyltin(TBT)-gevoelige soorten als purperslak en wulk. De wulk is vooral karakteristiek voor dieper water en daarmee moeilijk te verzamelen. De purperslak komt maar heel beperkt voor in de Nederlandse kustwater en is daarom niet geschikt voor een brede monitoring. Wel zijn deze soorten aanzienlijk gevoeliger voor TBT dan de alikruik, zodat ze wel in beeld (moeten) komen als de TBTbelasting zo laag is dat alikruiken er niet meer op reageren. De resultaten laten zien dat langs open water nauwelijks verhoogde ISI-waarden worden gevonden en dat effecten zich vooral voordoen bij alikruiken in havengebieden, waar de belasting met TBT ook het hoogst is. Aanvullend onderzoek is nodig om na te gaan in welke mate de belasting met TBT ook buiten de haven merkbaar is. Er zijn geen duidelijke dosis-effect relaties gevonden tussen TBT-gehalten in verschillende milieu compartimenten en de mate van intersex op de verschillende locaties, ook niet als gegevens uit andere monitoring programma\u92s (MWTL, SPECIE) erbij betrokken werden. Alikruiken worden vooral via het water blootgesteld aan TBT. Water concentraties zijn niet direct te voorspellen vanuit TBT-gehalten in verschillende compartimenten, hoewel met behulp van verdelingscoëfficiënten wel een schatting gemaakt kan worden. Er is wel een goede relatie tussen ISI en blootstellingsconcentratie in water, geformuleerd door Oehlmann (2002). Door deze te relateren aan een gevoeligheidscurve van soorten (SSD) kan berekend worden welk percentage van de soorten in een ecosysteem niet meer beschermd wordt bij een bepaalde ISI. Op dezelfde manier zouden waterconcentraties, berekend met behulp van verdelingscoëfficiënten, omgerekend kunnen worden naar een risico voor het ecosysteem. Ook zou experimenteel onderzoek uitgevoerd moeten worden om het effect van de huidige TBT-belasting in het marien milieu te bepalen, aangezien de TBT-gehalten in de verschillende milieu compartimenten vele malen hoger zijn dan de kwaliteitsnormen (MTR, SQC). De auteurs bevelen aan nader onderzoek te verrichten naar de reden voor het afwezig zijn van alikruiken langs de Zuid-Hollandse kust tussen Hoek van Holland en Scheveningen. De beschikbare gegevens wijzen erop dat dit te maken zou kunnen hebben met de aanwezigheid van de loswallen voor de kust. Als dit het geval is, zouden ook effecten gevonden moeten worden bij alikruiken ten noorden van Scheveningen
The M. tuberculosis Phosphate-Binding Lipoproteins PstS1 and PstS3 Induce Th1 and Th17 Responses That Are Not Associated with Protection against M. tuberculosis Infection
No full textThe M. tuberculosis phosphate-binding transporter lipoproteins PstS1 and PstS3 were good immunogens inducing CD8+ T-cell activation and both Th1 and Th17 immunity in mice. However, this antigen-specific immunity, even when amplified by administration of the protein with the adjuvant LTK63 or by the DNA priming/protein boosting regimen, was not able to contain M. tuberculosis replication in the lungs of infected mice. The lack of protection might be ascribed with the scarce/absent capacity of PstS1/PstS3 antigens to modulate the IFN-γ response elicited by M. tuberculosis infection during which, however, PstS1-specific IL-17 secreting cells were generated in both unvaccinated and BCG-vaccinated mice. In spite of a lack of protection by PstS1/PstS3 immunizations, our results do show that PstS1 is able to induce IL-17 response upon M. tuberculosis infection which is of interest in the study of anti-M. tuberculosis immunity and as potential immunomodulator in combined vaccines
- …
