1,724,451 research outputs found
Study of the pathogenesis of highly pathogenic influenza A virus (H7N1) infection in chickens, with special focus in the central nervous system
Full text linkDescripció del recurs: 01 setembre 2012Los virus de influenza aviar de alta patogenicidad (IAAP) causan una enfermedad muy severa en pollos, los cuales frecuentemente inducen lesiones en el sistema nervioso central (SNC). Esta tesis recoge los resultados de tres estudios que se llevaron a cabo para determinar el mecanismo de patogénesis y neurotropismo, así como establecer la ruta de entrada al SNC para un virus H7N1 IAAP. En el primer estudio se estableció un modelo animal de infección en pollos libres de patógenos específicos, que consistía en la inoculación intranasal con el virus H7N1 IAAP. Para establecer este modelo, se utilizaron tres diferentes dosis del virus, obteniendo que las dosis más altas producen una enfermedad similar a la reportada para otros virus de IAAP. Además, se observó que las dosis más bajas causan infección demostrada porque con las dosis más bajas, el virus es hallado en muestras de tejido, muestras de heces y secreciones respiratorias. Adicionalmente, se pudo comprobar el alto neurotropismo del virus, ya que aún en pollos inoculados con bajas dosis el RNA viral es hallado en el CNS. La viremia fue detectada a un día post infección (dpi), sugiriendo que está podría ser la vía de diseminación al SNC. En el segundo estudio, se determinó la distribución topográfica del antígeno viral en el SNC durante las primeras horas post infección, lo cual permitió determinar que el virus se disemina de forma simétrica y bilateral en núcleos neurales del diencéfalo, mesencéfalo y rombencéfalo. La distribución del antígeno viral indica que el bulbo olfatorio y los nervios periféricos están involucrados en el proceso de invasión del SNC. El hallazgo de receptores aviares y humanos en las células endoteliales explica porque estas células son tan sensibles a la infección. El RNA viral fue hallado en el líquido cerebro espinal el primer dpi, lo que indica que el virus atraviesa la barrera hemato-encefálica (BHE). En el tercer estudio, la alteración de la BHE inducido por el virus H7N1 IAAP fue demostrado usando tres diferentes métodos que incluye la perfusión intracardial de Azul de Evans, la detección de la extravasación de la proteína del suero IgY, y evaluación del patrón de tinción con el marcador de las uniones fuertes de la BHE, ZO-1 y claudin-1. El antígeno viral fue observado a las 24 hpi en las células endoteliales, mientras que el daño de la BHE fue observado a las 36 hpi y 48 hpi. En resumen, se puede afirmar que el virus H7N1 IAAP se disemina por la vía hematógena durante las primeras horas pi, posiblemente favorecido por la presencia de receptores en las células endoteliales del sistema nervioso central, y poco después daña la BHE durante las primeras horas de infección como se demuestra por la presencia de extravasación del azul de Evans and IgY del suero.Highly pathogenic avian influenza viruses (HPAIV) cause a very severe systemic disease in chickens, in which is also frequent to find central nervous system (CNS) lesions. In this thesis, three studies were undertaken in order to determine the mechanism of pathogenesis, the neurotropism and establish the route of entry into the CNS use for a H7N1 HPAI virus. In the first study, an animal model was set up that consisted of SPF chickens inoculated intranasally with the H7N1 HPAI virus. To do that, three different doses were used, obtaining that the highest dose induced a disease similar to the produce by other HPAI viruses, moreover, it was also observed that very low doses also cause infection demonstrated because viral RNA was found in tissues samples, faeces and respiratory secretions. Besides, the high neurotropism of this virus was demonstrated because still in chickens inoculated with low doses, viral RNA is found in the brain. Viremia was detected at one dpi, which indicated that the bloodstream is the pathway of viral spreading to the brain. In the second study, the topographical distribution study of the viral antigen during the first dpi was determined, which allow to determine that the virus disseminates showing a symmetrical and bilateral pattern in the diencephalon, mesencephalon and rhombencephalon, whereas in the telencephalon and cerebellum it was multifocal and random. Viral antigen distribution indicates that the olfactory bulb (OB) and peripheral nerves are not involved in the process of virus invasion into the brain. Avian and human influenza receptors were found in endothelial cells which explain why these cells are so sensitive to the infection. Viral RNA was found in cerebrospinal fluid (CSF) at one dpi, indicating that the virus was able to cross blood brain barrier (BBB). In the third study, the disruption of the BBB induce by the H7N1 HPAI was demonstrated using three different methods that include the intracardial perfusion of the tracer Evans blue (EB), detection of the extravasation serum IgY, and evaluation of the pattern of staining of the tight junction proteins ZO-1 and claudin-1. Viral antigen can be observed as early as 24 hpi in the endothelial cells, whereas disruption was detected at 36 and 48 hpi. In summary, it can be asserted that this H7N1 HPAIV disseminates via the haematogenous route early during the infection, favored by the presence of abundant receptors on the CNS endothelial cells, and soon after it disrupts the BBB during the first hours of infection as demonstrated by the presence of EB and serum IgY extravasation
Reglament del Departament de Medicina
Full text linkAcord del Consell de Govern de 8 de juliol de 2004 i modificat per acord de 3 de febrer de 201
Utilidad de la ecocardiografía de contraste en el diagnóstico y valoración funcional de la disección aórtica
Full text linkLa tesis doctoral "Utilidad de la ecocardiografía de contraste en el diagnóstico y valoración funcional de la disección de aorta" realizada por Gustavo Avegliano aporta información trascendente en la estrategia disgnóstica de la disección de aorta. En la fase I de la tesis el doctorando valora la utilidad de la ecocardiografía transtorácica con contraste en el diagnóstico de disección de aorta en una serie extensa de pacientes. El estudio publicado en el European Heart Journal ha condicionado un cambio en las recomendaciones de la European Association of Echocardiography en el diagnóstico del síndrome aórtico agudo por técnicas de imagen. Hasta la actualidad la ecocardiografía transesofágica ha sido utilizada como técnica de referencia junto con la TC en el diagnóstico de disección de aorta. La principal limitación de la técnica transesofágica es que es semiinvasiva y muy operador dependiente lo que la hace poco útil cuando no hay un ecocardiografista experto las 24 horas del dia en el hospital. Mediante la utilización de los ecopotenciadores con contraste la ecocardiografia transtorácica obtiene resultados de exactitud diagnóstica muy similares a la técnica transesofágica. La ecocardiografía transtorácica con contraste puede ser más facilmente utilizable en urgencias por residentes y cardiólogos con un nivel de experiencia en ecocardiografía intermedio y evita riesgos innecesarios de la técnica transesofágica. En la fase II del estudio el doctorando determina el beneficio del uso del contraste en la ecocardiografía transesofágica para valorar aspectos morfológicos y hemocinéticos de la disección con implicaciones pronósticas. El estudio define tres patrones de flujo en la falsa luz que concuerdan con los flujos obtenidos por resonancia magnética . Estos patrones predicen la tendencia a la dilatación progresiva de la aorta y la presencia de eventos durante la evolución. Las implicaciones clinicas son muy importantes ya que puede permitir definir el subgrupo de pacientes con alto riesgo de complicaciones e indicar un tratamiento más agresivo, endovascular o quirúrgico, antes de dar de alta el paciente durante la fase aguda. Esta estrategia podría mejorar la evolución de estos pacientes de forma muy significativa y facilitar un mejor remodelado de la aorta. La principal de la fase II de la tesis es que se ha realizado un estudio transversal con una gran heterogeneidad enel intervalo entre las pruebas y el tiempo de evolución desde el evento agudo de la disección. Los resultados de este estudio plantean diseñar un protocolo multicéntrico en pacientes dados de alta de una disección de aorta con falsa luz permeable en los que se valore en la fase subaguda las variables morfológicas por TC y las variables hemocinéticas por ecocardiografía transesofágica con contraste vs resonancia magnética. Definir el grupo con alto riesgo es costo-efectivo y puede modificar el alto riesgo de complicaciones de estos pacientes. La fase II del estudio tiene calidad e innovación suficiente para ser publicada en una revista de alto factor de impacto. Por otra parte, los hallazgos del estudio estimulan a comprobar el valor pronóstico de los patrones analizados por otras técnicas como la resonancia magnética. La bibliografía utilizada es actual y exhaustiva. En la tesis se incluyen imágenes de calidad y la redacción es adecuada. La presentación es cuidada y plasma el conocimiento del doctorando es esta patología. La innovación, impacto clínico y la extensa experiencia acumulada por el doctorando con la ecocardiografía de contraste en el diagnóstico y valoración de la disección de aorta justifica la presentación de esta tesis doctoral.The doctoral thesis entitled "Usefulness of contrast echocardiography for the diagnosis and functional assessment of aortic dissection" presented by Gustavo Avegliano provides significant information about the diagnostic strategy for aortic dissection. In phase I of the thesis, the author assessed the usefulness of transthoracic echocardiography with constrast for the diagnosis of aortic dissection in an large number of patients. The study, published in the European Heart Journal, has resulted in changes in the recommendations of the European Association of Echocardiography in the diagnosis of acute aortic syndrome by imaging techniques. Up to now, transoesophageal echocardiography has been used as a reference technique similar to with computed tomography in the aortic dissection diagnosis. The main limitation of the transoesophageal technique lies in its semi-invassiveness and in the fact that it is highly operator-dependent. This fact makes it of little use when in the hospital an expert echocardiographist is not available 24 hours a day. The use of contrast echopotentiators has enabled transthoracic echocardiography to offer a diagnostic accuracy similar to transoesophageal technique. Contrast transthoracic echocardiography may be more easily used in emergencies by resident physicians or cardiologists with an intermediate level of experience thus avoiding the unnecessary risks involved in the transoesophageal technique. In phase II of this study the author determines the benefits of the use of contrast in transoesophageal echocardiography for assessing morphologic and hemokinetic aspects of dissection with prognostic implications. The study defines three flow patterns in the false lumen which agree with the types of flow recorded by magnetic resonance imaging. These patterns predict the trend towards progressive aortic dilation and the presence of events during the evolution of the process. The clinical implications are very important as they enable a definition of the subgroup of patients with high risk of complications and may also point to the need for a more aggressive treatment, endovascular or surgical, before the patient discharge during the acute phase. This strategy could significantly improve the evolution of these patients and facilitate a better aortic remodeling. The main limitation of phase II of this thesis lies in that it is based on a transversal study with a high heterogeneity in the interval time between the tests and the acute dissection event. The results from this study point to the need to design a multi-centre protocol in patients discharged after an aortic dissection with patent false lumen in subacute phase. Identifying the high-risk group would be a cost-effective strategy and could modify the high risk of complications in these patients. Phase II of this study offers a new evidences on the predictive value of the imaging test with clinical impact. These results will be submitted for publication to a journal of high impact factor. Additionally, the findings of the study prompt the testing of the prognostic value of the patterns analyzed by other techniques such as magnetic resonance. The study is based on comprehensive and up-to-date bibliography and includes good quality images. The text, which is clearly written and carefully designed, proves the knowledge of the author in this pathology. The innovation, clinical impact and extensive expertise gained by the author in the field of echocardiography with contrast in the diagnosis and assessment of aortic dissection warrants the presentation of this doctoral thesis
Nuevas estrategias terapéuticas en la infección por Helicobacter pylori
Full text linkLos artículos presentados como cuerpos de esta tesis doctoral son una parte del trabajo realizado por el doctorando Jordi Sánchez Delgado en relación a la infección por Helicobacter pylori (H. pylori). Con el título "Nuevas estrategias terapéuticas en la infección por H. pylori" se muestra la aportación en el campo del tratamiento proponiendo nuevas alternativas terapéuticas a las comúnmente utilizadas. En la introducción de esta tesis se ha realizado una extensa revisión sobre la epidemiología, el diagnóstico y el tratamiento de la infección por H. pylori; está documentada sobre la evidencia científica reportada en los últimos estudios publicados sobre el tema. En un tema como la infección por H. pylori, los conocimientos crecen exponencialmente con el paso de los años. En el campo del tratamiento, se ha ampliado el arsenal terapéutico con la utilización de nuevos antibióticos, se ha demostrado la necesidad de extender la duración de la terapia así como el beneficio de aumentar la potencia de la inhibición ácida entre otros cambios. El objetivo de mi tesis fue aportar nuevas alternativas terapéuticas que pretenden mejorar las bajas tasas de erradicación con la pauta triple tradicional, manteniendo una aceptable posología y con los mínimos efectos secundarios. En el primer artículo "Ten-day sequential treatment for Helicobacter pylori eradication in clinical practice" se valora la eficacia de un nuevo esquema terapéutico. El tratamiento "secuencial" consiste en una fase de "inducción" de 5 días con una terapia doble (un IBP dos veces al día y amoxicilina 1 gr./12 horas), seguido inmediatamente por una terapia triple durante 5 días con IBP /12 horas; metronidazol 500 mg /12 horas y claritromicina 500 mg/12 horas. Las tasas de curación fueron del 88,2% por protocolo y del 82.4 % por intención de tratar, superiores a las descritas actualmente con tratamiento triple clásico. En el segundo artículo "High-dose, ten day esomeprazole, amoxicillin and metronidazole triple therapy achieves high H. pylori eradication rates" se apuesta por la utilización de antibióticos utilizados de forma habitual en el tratamiento de H. pylori pero con unas dosis y posología totalmente diferentes a las recomendadas y utilizando inhibición ácida potente. Se administran los antibióticos amoxicilina y metronidazol cada 8 horas en vez de cada 12 horas apoyándonos en la evidencia científica que nos ofrecen las vidas medias de los antibióticos y la correcta tolerancia demostrada en otros procesos infecciosos. Se demuestra también una mayor tasa de erradicación que con el tratamiento clásico. La importancia y la aplicabilidad de estos conocimientos son notables ya que ambos estudios evalúan pautas terapéuticas con una excelente capacidad de erradicar la infección; una infección que ha demostrado claramente su responsabilidad en múltiples enfermedades como la úlcera péptica, la dispepsia, el linfoma gástrico tipo MALT y el carcinoma gástrico entre otras.The articles included in this thesis are a part of the research of the applicant Jordi Sánchez Delgado in relation to the Helicobacter pylori (H. pylori) infection. Under the title "New therapeutic strategies for the H. pylori infection" the author show his contribution in the sphere of treatment by proposing new alternatives to the commonly used triple scheme. In the introduction of this thesis there is an extensive and, most of all, updated review of the epidemiology, diagnosis and treatment of the H. pylori infection. It is documented in the scientific evidence reported in recent studies published on this topic. The knowledge of the infection grows exponentially over the years. In the sphere of treatment, the therapeutic arsenal has expanded with the use of new antibiotics; it has been demonstrated the utility of extending the duration of therapy as well as the benefit of a strong acid inhibition among other changes. The aim of my thesis was to provide new therapies to improve the low eradication rates obtained with traditional triple scheme, with acceptable dosage and with minimal side effects. In the first article "Ten-day sequential treatment for Helicobacter pylori eradication in clinical practice " we assess the efficacy of a new therapeutic regimen. Sequential regime consisted of a 10-day treatment including a proton pump inhibitor (PPI) b.d. plus amoxicillin 1 g b.d. for the first 5 days, followed by a PPI b.d. clarithromycin 500 mg b.d. and metronidazole 500 mg b.d for the next 5 days. Cure rates were 88.2% per protocol and 82.4% by intention to treat. Higher eradication rates than with the triple classical scheme. In the second article "High-dose, ten day esomeprazole, amoxicillin and metronidazole triple therapy achieves high H. pylori eradication rates" we used antibiotics commonly used in H. pylori treatment but using a physiologically-correct schedule three times a day and strong acid inhibition. Ten-day treatment was prescribed comprising esomeprazole 40 mg twice a day plus amoxicillin 1 g and metronidazole 500 mg both three times a day with the scientific evidence that we administrate the antibiotics taking into account their half-lives and the correct tolerance demonstrated in other infectious diseases. This scheme also showed higher eradication rate than standard treatment. The importance and applicability of these new therapeutic approaches are remarkable since both studies evaluate therapeutic schemes with an excellent ability to eradicate H. pylori, an infection that has clearly demonstrate its responsibility in many diseases such as peptic ulcer, dyspepsia, gastric lymphoma (MALT), gastric carcinoma and other illnesses
Estudio de la enfermedad por reflujo gastroesofágico en pacientes roncadores o con síndrome de apnea del sueño
No full textLa enfermedad por reflujo gastro-esofágico (ERGE) y el síndrome de apnea del sueño (SAOS) coinciden con frecuencia en el mismo individuo, y comparten no sólo factores de riesgo, sino algunos mecanismos fisiopatológicos. Además, el tratamiento de la ERGE mejora el SAOS en pacientes con ambas patologías. El tratamiento con inhibidores de bomba de protones (IBP) se puede utilizar como tratamiento alternativo en pacientes con SAOS leve y moderada. Sin embargo, no conocemos a priori qué pacientes con síndrome de apnea del sueño pueden responder a tratamiento con IBP. Objetivos: Determinar la prevalencia del reflujo gastro-esofágico ácido en pacientes con SAOS; evaluar la respuesta de pacientes con SAOS leve o moderado al tratamiento con IBP en relación a su sintomatología digestiva y respiratoria, y su mejoría objetiva valorada mediante pHmetría y polisomnografía (PSG); e identificar factores predictivos de respuesta a dicho tratamiento. Métodos: Evaluamos de forma prospectiva pacientes con SAOS que consultaron por ronquido. Estudiamos los síntomas típicos y atípicos de ERGE y realizamos un estudio mediante pHmetría de 24 horas de doble canal y una polisomnografía (PSG) de forma simultánea. Se realizó tratamiento con inhibidores de bomba de protones (pantoprazol 80 mg al día las primeras 4 semanas, seguido de 40 mg al día durante al menos 8 semanas más) durante al menos 12 semanas y al finalizar éste repetimos la pHmetría y PSG, y evaluamos la respuesta clínica. La respuesta clínica en el SAS fue valorada en relación al grado de ronquido, apnea y somnolencia. La mejoría en la PSG se definió como un descenso en el 50% del índice de apnea-hipopnea (IAH), o un IAH menor a 20 (criterios de Stanford). Resultados: Aceptaron participar en el estudio 199 pacientes con apnea del sueño (157 hombres, 42 mujeres), con edad media 49 años (20-76), y un índice de masa corporal (IMC) de 28 (19-41). Encontramos síntomas de reflujo gastroesofágico típicos o atípicos en 75% pacientes, y sintomatología faríngea en 58%. Detectamos reflujo anormal en el esófago distal en 72% de pacientes, en los que 82% presentaban también un registro nocturno anormal. En el esófago proximal encontramos reflujo anormal en 46% de los pacientes. 116 pacientes completaron el tratamiento con IBP y el seguimiento. La sintomatología de ERGE mejoró en el 99% de los pacientes, mientras que el SAS mejoró clínicamente y/o polisomnográficamente en el 78%. En el análisis de factores predictivos de respuesta, no encontramos diferencias entre los pacientes que mejoraron y en los que no lo hicieron en: edad, sexo, IMC, consumo de alcohol o tabaco, presencia de sintomatología típica o atípica de reflujo gastroesofágico, gravedad de su patología del sueño o índice de apnea-hipopnea. Sin embargo, la pHmetría basal realizada previa al tratamiento sí fue un predictor de respuesta: 67% de los pacientes que respondieron tenían una phmetría proximal patológica (frente a 33% en los que no respondieron) (p 0.001), y 55% tenían también una pHmetría distal patológica (p 0.05). Conclusiones: El RGE ácido es muy prevalente en pacientes con SAOS, indistintamente de su clínica respiratoria o digestiva. La presencia de ERGE en estos pacientes es independiente de la gravedad de su patología respiratoria obstructiva, y de su peso. Una proporción superior al 70% de pacientes con SAOS leve o moderado responden a tratamiento con IBP. Un registro anormal de pHmetría de doble canal es un factor predictivo para el éxito terapéutico con IBP en estos pacientes.Gastro-oesophageal reflux disease (GERD) and sleep-related breathing disorders (SRBD) frequently coincide in the same individual, and share not only risk factors, but some pathophysiological mechanisms. Moreover, treatment of GERD improves SRBD in patients with both diseases. Treatment with proton-pump inhibitors (PPI) can be considered an alternative in patients with mild and moderate SRBD. We do not know, however, which SRBD patients may benefit from PPI treatment. Our Aims: were to evaluate the prevalence of gastro-oesophageal reflux in SRBD patients, to analyze the treatment response to PPI in patients with mild or moderate SRBD regarding GERD symptoms, SRBD improvement and esophageal pHmetry, and to find predictive response factors to this therapy. Patients and methods: we prospectively evaluated all consecutive patients with mild or moderate SRBD attending a Sleep Disturbances Clinic. Typical and atypical GERD symptoms were analyzed and simultaneous 24-hour double channel esophageal pH-monitoring and polysomnography (PSG) were performed. Treatment with PPI (pantoprazole 80 mg/day 4 weeks, and 40 mg/day at least 8 more weeks) was established for at least 12 weeks and clinical evaluation, esophageal pHmetry and PSG were repeated. Adequate SRBD clinical response was evaluated according to snore, apnea and somnolence grading. PSG improvement was defined as a 50% decrease in the apnea-hipoapnea index (AHI), or the archievement of an AHI below 20 (Stanford criteria). Results: 199 patients with SRBD participated in the study (157 men, 42 women), with mean age 49 years (20-76), and a body mass index (BMI) of 28 (19-41). 75% of patients also complained of typical and/or atypical GERD symptoms, and 58% of pharyngeal symptoms. Abnormal acid reflux at the distal oesophagus was detected in 72% of patients, of which 82% also had nocturnal reflux. In the proximal oesophagus we identified abnormal reflux in 46% of patients. 116 patients completed the treatment with PPI and the follow-up. GERD symptoms improved in 99% of patients, whereas SRBD improved clinically and/or polysomnographically in 78% of SRBD patients. We did not find age, sex, BMI, tobacco or alcohol abuse, typical or atypical GERD symptoms, severity of SRBD or AHI to be useful predictive response factors to PPI treatment in these patients. However, the initial pHmetry performed before treatment did predict treatment response: 67% of responding patients had a proximal pathological pHmetry (vs 33% in non-responding patients) (p 0.001), and 55% had also an abnormal pHmetry (p 0.05). Conclusions: Gastro-oesophageal acid reflux is highly prevalent in patients with SRBD. The development of GERD in these patients is not related to the severity of the underlying SRBD, or the patients' weight. Over 70% of mild or moderate SRBD patients improve on PPI treatment. An abnormal double channel pHmetry register is a predictive response factor for the success of PPI treatment in those patients
Efecto de la administración oral del agente estabilizador del mastocito, cromoglicato disódico, sobre la evolución clínica y biológica en pacientes con síndrome del intestino irritable con predominio de diarrea
Full text linkEl Síndrome del Intestino Irritable (SII) es un trastorno funcional con elevada prevalencia en la sociedad que se caracteriza por la presencia de dolor o molestia abdominal asociada a cambios en el hábito deposicional. Su diagnóstico es clínico al carecer de marcadores biológicos, sin embargo, las evidencias científicas aportadas en los últimos años sugieren una etiología multifactorial que origina, en la mucosa intestinal del SII con predominio de diarrea (SII-D), una condición de inflamación crónica de bajo grado y una alteración en la función de la barrera intestinal asociada a la hipersensibilidad visceral y la alteración motora en estos pacientes. El tejido linfoide asociado al intestino forma parte de la función barrera intestinal y es determinante en el mantenimiento de la homeostasis. El exceso de activación del sistema inmunológico se relaciona con alteraciones en las funciones intestinales y, en consecuencia, con el desarrollo de patologías intestinales. Concretamente, la activación del mastocito y su proximidad a terminaciones nerviosas en la mucosa se asocian a la sintomatología característica del SII, por lo que estrategias dirigidas a la modulación de su activación podrían ser beneficiosas para la recuperación de la homeostasis intestinal y la mejoría clínica de estos pacientes. Este trabajo analiza el efecto del tratamiento oral con cromoglicato disódico (CGDS), un agente estabilizador del mastocito, en la evolución de los síntomas propios del SII y los cambios moleculares asociados a la respuesta clínica que acontecen en la mucosa intestinal. Para ello, realizamos un primer estudio exploratorio durante 6 meses que comparó el efecto de la administración oral de CGDS oral (600mg/día) en pacientes de SII-D sobre las principales manifestaciones clínicas frente a otra cohorte que no recibió tratamiento alguno. El CGDS mostró un beneficio clínico al reducir en la mayoría de los pacientes la intensidad del dolor abdominal un 50% y normalizar la consistencia de las deposiciones en el 75%. Además de la eficacia clínica, la expresión de genes asociados a la activación del mastocito y la inmunidad innata en la mucosa yeyunal, disminuyó de forma significativa tras el tratamiento con CGDS, mostrando niveles similares a los presentes en los sujetos sanos. Para determinar la eficacia terapéutica del CGDS e identificar los mecanismos subyacentes a la mejoría clínica, realizamos un ensayo clínico durante 6 meses, randomizado, doble ciego y controlado con placebo en una cohorte de 42 pacientes de SII-D (razón de 1:1). Ambos grupos mostraron una disminución significativa en los valores de severidad del SII y dolor abdominal sin hallar diferencias entre ambos. Sin embargo, el efecto del CGDS fue mayor respecto al placebo en la mejoría de la consistencia de las deposiciones. Por otra parte, el grupo que recibió placebo, mostró una asociación entre la depresión y la intensidad del dolor abdominal, lo que sugiere la existencia de mecanismos subyacentes a la respuesta al placebo. El CGDS generó un impacto mayor sobre el transcriptoma de la mucosa intestinal en comparación al placebo, asociado a mecanismos de control del balance de la respuesta inmunológica, la homeostasis del epitelio y el estrés oxidativo. En resumen, hemos contribuido a ampliar el conocimiento actual sobre los efectos clínicos y biológicos derivados de la estabilización del mastocito de la mucosa intestinal. El CGDS mejora principalmente la diarrea y la consistencia de las deposiciones, entre los síntomas principales del SII-D. Este efecto se asocia al restablecimiento de la homeostasis intestinal por su acción antiinflamatoria y antioxidante.Irritable Bowel Syndrome (IBS) is a chronic functional bowel disorder characterized by abdominal pain or discomfort and altered bowel habit. Despite its high prevalence in western societies, there is no reliable biological marker and its diagnosis relies on symptom-based criteria. However, in diarrhea-prone IBS (IBS-D), a growing body of evidence suggests a multifactorial etiology including intestinal mucosal low-grade inflammation and intestinal barrier dysfunction. Importantly, these features are associated with visceral hypersensitivity and altered intestinal motility, accepted as features of IBS. The gut associated lymphoid tissue has a key role in maintaining the intestinal barrier and contributing to homeostasis. Over-activation of the intestinal immune system is linked to disturbances in the intestinal functions and to the development of intestinal disorders. Specifically, increased mucosal mast cell (MC) activation and their proximity to nerve endings are associated to IBS symptoms. Therefore, strategies addressed at modulating MC activation might have a clinical benefit in IBS-D patients. This work analyses the effect on clinical symptoms evolution after long-term administration of oral disodium cromoglycate (DSCG) and identifies the underlying molecular mechanisms associated to the clinical improvement. To confirm the hypothesis, we first carried out an exploratory study in which we evaluated the impact of oral administration of DSCG (600 mg/day) on specific symptoms in IBS-D and compared to a cohort of untreated IBS-D patients. DSCG-treated patients showed clinical benefit as the majority of patients reported at least a 50% of improvement on their abdominal pain and bowel movements, and over 75% normalized the consistency of stools. Besides the clinical improvement, our findings corroborate the effectiveness of oral DSCG to promote the stabilization of gut mucosal mast cells by down-regulation of tryptase, as well as innate immunity molecules to comparable levels in the healthy population. In order to confirm the clinical efficacy of DSCG and to address its underlying mechanisms, we carried out a 6-month randomized, double blind placebo-controlled clinical trial in a cohort of 42 IBS-D (ratio 1:1). Both groups reported a significant improvement in IBS severity score and pain intensity, although without significant differences between groups. However, the effect of CGDS was higher over placebo in the improvement of stool consistency. Moreover, the placebo group showed an association between depression and abdominal pain intensity, suggesting the existence of mechanisms underlying the placebo response. The DSCG produced a greater impact on the intestinal mucosal transcriptome as compared to placebo, and it was associated with balance control mechanisms of the immune response, epithelial homeostasis and oxidative stress. In summary, this study has contributed to the current knowledge of the clinical and biological effects resulting from mucosal mast cell stabilization. CGDS oral treatment improves diarrhea and stool consistency, among the main symptoms of IBS-D. This effect is associated with the restoration of intestinal homeostasis by its anti-inflammatory and antioxidant mechanisms of action
Nuevas reactividades antigénicas en neuropatías inmunomediadas
Full text linkLa descripción de correlaciones clínico-inmunológicas en las enfermedades autoinmunes es importante para caracterizar distintos fenotipos dentro de una enfermedad, establecer grupos diagnósticos y pronósticos y para escoger las terapias en función del perfil inmunológico de cada paciente. Las neuropatías inflamatorias constituyen un grupo de enfermedades raras del sistema nervioso periférico de probable etiología autoinmune. Este grupo incluye neuropatías agudas como el síndrome de Guillain-Barré (SGB) y neuropatías crónicas como la Poliradiculoneuropatía Inflamatoria Desmielinizante Crónica (CIDP). En todas ellas ha sido propuesto un papel prominente de los autoanticuerpos en su patogenia. Sin embargo, las reactividades antigénicas y los mecanismos patogénicos de estas enfermedades son desconocidos en su mayor parte. El SGB es una neuropatía aguda post-infecciosa en la que los anticuerpos antigangliósido juegan un papel importante. Existen diversos fenotipos dentro del SGB, incluyendo variantes sensitivo-motoras, atáxicas, sensitivas y variantes loco-regionales. Cada variante ha sido asociada a diferentes patrones de reactividad antigangliósido. El síndrome de Miller-Fisher (SMF) es una variante de SGB caracterizada por la presencia de ataxia, arreflexia y oftalmoparesia. Se asocia con la presencia de anticuerpos dirigidos contra gangliósidos que contienen el epítopo Neu NAcNeuNAcGal, como GQ1b y GT1a. En el SGB atáxico los pacientes presentan ataxia con signo de Romberg negativo y sin oftalmoparesia aparente. También se asocia a anticuerpos contra GQ1b. Por otro lado una forma sensitiva pura de SGB asociada a anticuerpos contra GD1b y conocida como neuropatía aguda sensitivo-atáxica (ASAN) puede presentarse también con ataxia de origen periférico. Distinguir el ASAN del SMF o el SGB atáxico puede ser difícil desde el punto de vista clínico. Además, la presencia de desmielinización, un criterio diagnóstico en el SGB sensitivo, es rara en ASAN y , por tanto, es controvertida su inclusión como variante de SGB. Considerando lo anterior, diseñamos un estudio para describir las características clínica e inmunológicas del ASAN. Todos los pacientes incluidos en una base de datos conteniendo los resultados de test rutinarios de anticuerpos antigangliósido y que cumplían criterios de ASAN fueron analizados en cuanto a sus características epidemiológicas, clínicas, electrofisiológicas y de reactividad anti-gangliósido. De los 12 pacientes que cumplían criterios en primer lugar, siete presentaban anticuerpos contra gangliósidos con epítopo disialosil (GQ1b, GD1b, GD2, GD3). Todos los pacientes con anticuerpos contra disialosil comenzaron con síntomas sensitivos e inestabilidad de la marcha y manifestaban haber presentado una infección de vías respiratorias altas en los días previos. Cinco de los 7 pacientes presentaron ptosis palpebral. Todos ellos tuvieron un buen pronóstico, bien tras tratamiento con IVIg o bien espontáneamente. Teniendo en cuenta lo anterior concluimos que el ASAN es, de hecho, una variante del SGB y que constituye un síndrome diferente al SMF o el SGB atáxico. La CIDP es una neuropatía crónica autoinmune en la que se ha propuesto un papel importante en su patogenia de los autoanticuerpos. En estudios previos habían sido descritos anticuerpos contra proteínas de la mielina mediante ELISA o western-blot, pero los resultados no se reprodujeron usando ensayos basados en células que mantuvieran la conformación de la proteína sin desnaturalizar y ninguno de esos autoanticuerpos se demostró útil como biomarcador. Más recientemente el descubrimiento en biopsias del nervio sural de pacientes con CIDP de que la estructura del nodo de Ranvier está desorganizada ha llevado a buscar antígenos candidatos en el nodo de Ranvier y estructuras relacionadas. Nosotros, usando una aproximación no sesgada, diseñamos un estudio que utilizaba técnicas de inmunocitoquímica en neuronas, inmunoprecipitación y confirmación de antígenos en células transfectadas para tratar de encontrar autoanticuerpos que pudieran servir de biomarcadores en la práctica clínica diaria. De 46 pacientes con una CIDP bien caracterizada, encontramos 7 que reaccionaban contra neuronas. Dos de estos pacientes precipitaron la proteína contactin-1 (CNTN1) y otro precipitó CNTN1 y contactin-associated protein-1 (CASPR1). La reactividad contra dichas proteínas fue confirmada con inmunocitoquímica, inmunohistoquímica y experimentos de absorción. Ninguno de los 104 controles fue positivo. Los tres pacientes que reaccionaban contra CNTN1 compartían un fenotipo específico que incluía avanzada edad, inicio agresivo, predominio motor, degeneración axonal marcada de inicio y respuesta pobre a las IVIg. Estas características clínicas definen un subgrupo de CIDP con fenotipo homogéneo. Por tanto, los anticuerpos contra CNTN1 son el primer biomarcador con utilidad clínica identificado en CIDP. En resumen, estos resultados refuerzan la noción de que las neuropatías autoinmunes constituyen un grupo muy heterogéneo de enfermedades en las que la descripción de autoanticuerpos y sus correlatos clínicos puede tener importantes implicaciones diagnósticas, pronósticas y terapéuticas.The description of clinical-immunological correlations in autoimmune diseases is of paramount importance to characterize disease phenotypes, diagnostic and prognostic subgroups and to choose therapies depending on the immunological profile of patients. Inflammatory neuropathies constitute a group of infrequent diseases of the peripheral nerves of presumed autoimmune pathogenesis. It includes acute neuropathies such as Guillain-Barré syndrome (GBS) and chronic neuropathies such as chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathy (CIDP). In all of them it has been postulated a prominent role of autoantibodies in their pathogenesis. However, the antigenic reactivities and the pathogenic mechanisms of these diseases remain largely unknown. GBS is a post-infectious acute neuropathy in which antibodies against gangliosides play an important role. There are various phenotypes of GBS, including sensory-motor, ataxic, sensory-ataxic and loco-regional variants. Each variant has been associated to different antiganglioside antibody patterns. Miller-Fisher syndrome (MFS) is a GBS variant characterized by ataxia, arreflexia and ophtalmoparesis. It associates with antiganglioside antibodies bearing the NeuNAcNeuNAcGal epitope, such as GQ1b and GT1a. In ataxic GBS patients present with ataxia and negative Romberg sign and there is no apparent ophtalmoparesis. It is also associated to GQ1b antibodies. On the other hand, a pure sensory form of GBS associated to GD1b antibodies known as acute sensory-ataxic neuropathy (ASAN) can also present with ataxia of peripheral origin. Distinguishing ASAN, MFS and ataxic GBS can be difficult from a clinical perspective. Moreover, demyelinating features, a diagnostic criteria in sensory GBS, are usually absent in ASAN and the inclusion of this form in the GBS spectrum is controversial. We designed a study to describe the clinical and immunological features of ASAN. All patients from a database including sera sent for routine antiganglioside-antibody testing and fulfilling ASAN criteria were collected and their epidemiological, clinical and electrophysiological features analyzed. Of 12 patients fulfilling criteria for ASAN, 7 had antibodies against gangliosides bearing disialosyl epitopes (GQ1b, GD2, GD3, GD1b). All ASAN patients with positive disialosyl antibodies presented with gait unsteadiness and sensory symptoms and reported an upper respiratory tract infection before disease onset. Five of the 7 patients presented eyelid ptosis. All patients had a good recovery with IVIg treatment or spontaneously. Considering these features we concluded that ASAN is, in fact, a GBS variant, and constitutes a specific phenotype different from ataxic GBS or MFS. CIDP is a chronic inflammatory neuropathy in which antibodies are thought to play an important role. Antibodies against myelin proteins had been described using ELISA and western-blot assays, but results were not reproduced in cell-based assays preserving protein conformation and none proved useful as biomarker. Recently, studies on sural nerve biopsies of CIDP patients have shown disorganization of node of Ranvier and the search of autoantibodies focused on proteins of the node of Ranvier. We used an unbiased approach with neuron immunocytochemistry, immunoprecipitation and confirmation of relevant antigens with transfected cells to find autoantibodies that could be useful in everyday practice. Starting with 46 well-characterized CIDP patients we found 7 patients reacting against neurons. Two patients precipitated contactin-1 (CNTN1) and one CNTN1 and contactin-associated protein-1 (CASPR1). Reactivity was confirmed with immunocytochemistry, inmmunohistochemistry and absorption studies. None of the 104 controls tested positive. All three patients shared old age, aggressive onset, motor predominance, prominent axonal degeneration at onset and poor response to IVIg. These features identify a subgroup of CIDP with homogeneous phenotype. Anti-CNTN1 antibodies are the first biomarker identified in CIDP with diagnostic, prognostic and therapeutic implications. These results strengthen the idea that autoimmune neuropathies are a very heterogeneous group of diseases in which autoantibody discovery and the definition of clinical-immunological correlations can have diagnostic, prognostic and therapeutic implication
Utilidad clinica de biomarcadores en el diagnóstico y tratamiento de la enfermedad glomerular del adulto
Full text linkCon el presente proyecto de tesis, mediante el desarrollo de estudios observacionales con inclusión de grupos de pacientes afectos de formas primarias y secundarias de glomerulopatías causantes de síndrome nefrótico, específicamente gloméruloesclerósis focal y segmentaria,(GFS), y la nefropatía membranosa (NM), donde se practican mediciones séricas y urinarias de determinadas moléculas (receptor soluble de la urokinasa y anticuerpos contra el receptor tipo M de la fosfolipasa A2), para determinar y validar la utilidad de dichos biomarcadores en el diagnóstico, pronóstico y tratamiento de estas enfermedades glomerulares. Como producto de dichas investigaciones se han realizado cinco publicaciones. Dos en relación a los títulos del receptor soluble de la urokinasa y la gloméruloesclerósis segmentaria y focal, y tres donde se evalúa la relación entre la presencia de anticuerpos contra el receptor de la fosfolipasa A2 y la nefropatía membranosa. Los estudios previamente mencionados, han permitido validar así como demostrar la importancia que tiene la medición de biomarcadores no sólo desde el punto de vista diagnóstico, sino también en los aspectos pronósticos y terapéuticos, en pacientes afectos por estas glomerulopatías. En forma sumarial, estas son las conclusiones finales de los estudios mencionados anteriormente: A) Las concentraciones séricas del receptor soluble de la urokinasa (suPAR) parecen guardar relación con el patrón de lesión glomerular correspondiente a glomeruloesclerósis focal y segmentaria, específicamente en sus formas primarias. Sin embargo, la fuerza de dicha relación, no es lo suficientemente fuerte. En nuestro caso, se encontró un marcado solapamiento en los valores de séricos de dicha molécula entre pacientes con GFS y NM idiopáticas, así como aquellos con GFS idiopática y secundaria. El rendimiento diagnóstico de esta prueba para diagnósticar GFS primaria, es insuficiente, careciendo de adecuada sensibilidad y especificidad. Otros estudios publicados al respecto, ponen en duda de que el suPAR, se asocie etiológicamente con la GFS idiopática. B) La presencia de anticuerpos contra el receptor tipo M de la fosfolipasa A2, bien sea como anticuerpos circulantes o depósitos inmunes en la membrana basal glomerular, se asocia con elevada especificidad con la presencia de nefropatía membranosa idiopática. Nuestros resultados, en concordancia con estudios realizados en poblaciones europeas y norteamericanas, muestran que en el 70 % de los pacientes con nefropatía membranosa idiopática existen dichos anticuerpos. De entre las pruebas disponibles para determinar la presencia de dichos anticuerpos circulantes en suero, los resultados son comparables, sin embargo, el método por ELISA es relativamente simple, barato y permite cuantificar con precisión el nivel de anticuerpos circulantes, lo que a su vez posibilita su monitorización. En nuestra experiencia, la presencia de estos anticuerpos y su magnitud en el momento del diagnóstico, no guarda relación con la severidad de la proteinuria, el filtrado glomerular inicial ni la respuesta al tratamiento. No obstante, la dinámica de sus títulos es influenciada por el tratamiento inmunosupresor y se correlaciona con el status clínico de la enfermedad y la respuesta terapéutica. Las fluctuaciones relativas de dichos títulos a los 3 y 6 meses de iniciado tratamiento, y en función de la naturaleza del mismo, pueden predecir respuesta con aceptable sensibilidad y especificidad a los 9 y 12 meses de iniciado el tratamiento. La información que proveen estas mediciones facilita la toma de decisión respecto a la duración, continuación o cambio de la terapia inmunosupresora, al tiempo que podría evitar exposiciones innecesarias y relativamente prolongadas a agentes potencialmente tóxicos, como es el caso de los agentes alquilantes. Un elemento importante a estudiar, pero que metodológicamente no fue posible cubrir, es determinar si existe un título de anticuerpos anti-PLA2R que se asocie con la probabilidad de presentar remisión espontánea, o recidivas una vez finalizado el tratamiento.In this thesis project, by developing observational studies including groups of patients with primary and secondary forms of glomerulopathies causing nephrotic syndrome, specifically focal segmental glomerulosclerosis (FSG), and membranous nephropathy (MN), where serum and urinary measurements of specific molecules (soluble urokinase receptor and antibodies against M-type phospholipase A2 receptor) are practice to determine and validate the usefulness of these biomarkers in the diagnosis, prognosis and treatment of these glomerular diseases. As a result of these investigations, five publications have been produced. Two related to the titles of soluble urokinase receptor and focal segmental glomerulosclerosis, and three regarding the relationship between the presence of antibodies against phospholipase A2 receptor and membranous nephropathy. The aforementioned studies have allowed to validate and demonstrate the importance of measuring biomarkers not only from a diagnostic point of view, but also in the prognostic and therapeutic aspects, in patients affected by these glomerulopathies. These are the final conclusions of the studies mentioned above: A) The serum levels of soluble urokinase receptor (suPAR) appear to be related to the glomerular injury pattern corresponding to focal segmental glomerulosclerosis, specifically its primary forms. However, the strength of this relationship is not strong enough. In our case, a marked overlap in the serum values was found, between patients with idiopathic FSG and MN, as well as those with idiopathic and secondary FSG. The diagnostic performance of this test to diagnose primary FSG is insufficient, lacking adequate sensitivity and specificity. Other published studies, question the etiologically association of suPAR with idiopathic FSG. B) The presence of antibodies against the receptor type M of phospholipase A2, either as circulating antibodies or immune deposits in the GBM, are associated with a high specifity with idiopathic membranous nephropathy. Our results, in agreement with studies carried out in European and North American populations show that there are such antibodies in 70% of patients with idiopathic MN. Among the tests available to determine the presence of such circulating antibodies in serum, the results are comparable, however, the ELISA method is relatively simple, inexpensive and allows to accurately quantify the level of circulating antibodies, which in turn enables its monitoring. In our experience, the presence of these antibodies and their magnitude at the time of diagnosis, is unrelated to the severity of proteinuria, glomerular filtration or initial treatment response. However, the dynamics of their titles is influenced by immunosuppressive therapy and is correlated with the clinical status of the disease and therapeutic response. The relative fluctuations of the securities at 3 and 6 months after starting treatment, and depending on its nature, can predict response with acceptable sensitivity and specificity at 9 and 12 months after initiating treatment. The information provided by these measurements facilitates decision making regarding the duration, continuation or change in immunosuppressive therapy, while it could avoid unnecessary and relatively prolonged exposures to potentially toxic agents, such as alkylating agents. An important element to consider, that was not possible to cover methodologically, is whether there is a degree of anti-PLA2R antibodies to be associated with the probability of spontaneous remission or relapse once treatment ends
Factores de riesgo para la adquisición de Bacteriemia por Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium
Full text linkLas infecciones nosocomiales son una causa frecuente de incremento de estancia hospitalaria, costos sanitarios y mortalidad. En la actualidad, el enterococo es uno de los microorganismos implicados con mayor frecuencia en infecciones nosocomiales. Con frecuencia estas infecciones son difíciles de tratar debido la resistencia múltiple de estos microorganismos frente a los antibióticos convencionales. La literatura disponible sobre las infecciones producidas por este microorganismo es limitada. Este problema está más acentuado cuando se trata de conocer las características de infecciones producidas en localizaciones concretas, como es el caso de las bacteriemias.Los resultados de ambos estudios son de vital importancia a la hora de elegir que antibiótico utilizar en primera línea y de manera empírica en pacientes ingresados en nuestro hospital y han dado lugar a la modificación de los protocolos actuales de tratamiento empírico de pacientes con infección nosocomial en nuestro hospital. Además, se trata de una línea de investigación que está abierta a la inclusión de futuros estudios que se complementen con los efectuados en este proyecto de tesis doctoral. 30 at admission (OR = 3.530, p = 0.001) and liver disease at baseline(OR: 3.754, p 34 (OR: 6.896, p = 0.009). The results of both studies are of upmost importance to decide empirical antibiotic treatment in patients admitted to our hospital. In addition, these conclusions led to the modification of current protocols for empirical treatment of patients with nosocomial infections in our hospital. Furthermore, this line of research is open to the inclusion of future studies that complement those performed in this PhD project
Influencia de la exposición ocupacional en la enfermedad pulmonar obstructiva crónica
Full text linkLa enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) es una enfermedad que se caracteriza por una obstrucción no reversible al flujo aéreo, progresiva y asociada a una reacción inflamatoria anómala secundaria a la inhalación de gases o partículas nocivas, y producida sobre todo por el humo del tabaco. Otros factores como la exposición ocupacional pueden jugar un papel en su etiología. Nuestra hipótesis de trabajo ha sido que la exposición ocupacional, clasificada en sus agentes minerales, biológicos, gases y humos, aumenta la gravedad de la EPOC, definida en términos clínicos y de función respiratoria. Para ello estudiamos el impacto de la exposición ocupacional en una cohorte hospitalaria de pacientes con EPOC, definida en términos clínicos y espirométricos y ampliamos el estudio a una cohorte multicéntrica de pacientes con EPOC reclutada en un primer ingreso por agudización de la enfermedad (Estudio PAC-EPOC) mediante un análisis exhaustivo de variables implicadas: disnea, tos, expectoración, calidad de vida, difusión de monóxido de carbono así como imagen por HRCT en un subgrupo de pacientes. Se trata de un estudio transversal que incluye una cohorte hospitalaria y una cohorte multicéntrica en 2 momentos diferentes de la evolución de la enfermedad, en fase de estabilidad y tras el primer ingreso hospitalario. La exposición ocupacional se ha valorado mediante cuestionarios específicos y después se ha elaborado una matriz de exposición que ha permitido precisar la exposición por agentes específicos así como el grado de intensidad de la exposición y la duración. Los resultados obtenidos refuerzan la hipótesis de que, en pacientes con EPOC establecida, la exposición ocupacional se asocia a más síntomas respiratorios y mayor incapacidad laboral. Por otro lado, la asociación de la alta exposición ocupacional a una mejor DLco, junto con el aumento de la expectoración, sugiere un efecto predominante sobre la vía aérea respiratoria. Estos resultados apoyan la idea de que es necesario reforzar las medidas de prevención en los lugares de trabajo para tratar de minimizar la exposición ocupacional.Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) is a lung disease characterized by a not reversible and progressive airflow limitation associated with an anomalous inflammatory reaction produced by inhalation of gases (and fumes) or toxic particles, and mostly caused by tobacco smoke. Other factors such as occupational exposure may play a significant role regarding its etiology. Our working hypothesis is that occupational exposure to mineral and biologic agents, and gases and fumes, increases the severity of COPD, defined in clinical terms and respiratory function. Thus, we studied the impact of occupational exposure in a hospital cohort of patients with COPD, based on clinical and spirometric values, and we expanded our research to a multicentric cohort of patients with COPD recruited for a first hospitalization due to exacerbation of the disease (PAC-COPD Study). We conducted a comprehensive analysis of the different variables involved: dyspnea, cough, expectoration, quality of life, carbon monoxide diffusing capacity, as well as HRCT scanning in a subgroup of patients. This is a cross-sectional study including a hospital and a multicentric cohort of patients conducted at two different times during the progress of the disease, in stability and after first hospitalization. Occupational exposure was evaluated based on specific questionnaires and a job exposure matrix was constructed allowing us to define the specific agents, as well as the intensity and duration exposure. Our results reinforce the hypothesis that in COPD patients, occupational exposure is closely associated with more respiratory symptoms and greater work disability. On the other hand, the association of a higher occupational exposure to a better DLco, together with an expectoration increase, suggest a predominant/significant effect on the airway respiratory tract. These results support the idea that there is a need to further reinforce preventive measures in the workplace in order to try to reduce occupational exposure
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