1,721,008 research outputs found
Paper determinant de l'activitat LRRK2 en la malaltia de Parkinson
Get PDFTreballs Finals de Grau de Farmàcia, Facultat de Farmàcia i Ciències de l'Alimentació, Universitat de Barcelona, 2024. Tutor/a: Francesc Tebar RamonLa malaltia de Parkinson (MP) és una malaltia neurodegenerativa que afecta a milions
de persones i per la que, de moment, no existeix cap tractament que freni l’avanç.
Aquesta malaltia es caracteritza per la mort de les neurones dopaminèrgiques de la
substantia nigra, cosa que comporta l’aparició de tremolors, rigidesa i bradicinèsia, entre
altres símptomes.
La cinasa LRRK2 sol ser una de les principals causes genètiques d’aquesta malaltia
degut a que pot contenir certes mutacions que donen lloc a una forma de MP hereditària.
Tot i així, s’ha pogut observar com en absència d’aquestes mutacions que incrementen
el risc de patir MP, aquesta cinasa podria estar implicada en l’avanç i la propagació de
la malaltia. Aquest descobriment obre les portes a nous tractaments de la malaltia amb
LRRK2 com a diana. Tant els tractaments farmacològics proposats, com les teràpies
gèniques son molt prometedors, però encara és molt aviat per assegurar que son
tractaments efectius i segurs. A més, cada tipus de tractament te les seves fortaleses i
els seus defectes, i ara per ara no es pot assegurar un benefici diferencial entre ells.
Finalment, cal entendre que en tractar-se d’un camp d’estudi molt innovador, la
informació obtinguda que prové d’estudis in vitro amb cultius cel·lulars i in vivo en models
animals, com el ratolí, s’haurà de validar en humans
Rac1 y Calmodulina regulan la dinámica de membrana durante la endocitosis independiente de Clatrina
Get PDFEl fosfolípido PI(4,5)P2 ha sido descrito ampliamente como un factor clave en la endocitosis. De hecho, numerosas proteínas endocíticas contienen dominios de unión específicos para PI(4,5)P2. La dinámica de su metabolismo está finamente regulada por diversos enzimas que pueden fosforilarlo, defosforilarlo, hidrolizarlo o sintetizarlo a partir de precursores, cambiando su concentración en dominios específicos de la membrana. En los primeros pasos de la endocitosis, la concentración de PI(4,5)P2 aumenta y recluta clatrina u otros tipos de proteínas de cubierta o asociadas a procesos de remodelación de membrana, dando lugar a una invaginación. Más tarde, los niveles de PI(4,5)P2 deben reducirse para completar el proceso de formación de vesículas.
En los últimos años, nuestro grupo ha descrito como la calmodulina (CaM) está regulando la interacción entre Rac1 y PIP5K, el principal enzima productor de PI(4,5)P2. La inhibición de la CaM, que es el sensor de calcio (Ca2+) más importante en células no musculares, induce la formación de invaginaciones tubulares ricas en PI(4,5)P2 provenientes de la membrana plasmática, que parecen formar parte de un proceso endocítico independiente de clatrina. Sin embargo, también se observó que la sobreexpresión del Rac1 constitutivamente activo (Rac1G12V) inhibe las tubulaciones inducidas por la inhibición de CaM, lo que podría deberse a la acción de efectores de Rac1 relacionados con el metabolismo de PI(4,5)P2, como la fosfolipasa C (PLC), o relacionados con la dinámica del citoesqueleto. Durante esta tesis, hemos demostrado el requerimiento de PI(4,5)P2 en la formación de los túbulos endocíticos, y hemos descrito como la CaM puede estar regulando sus niveles a través de la regulación de Rac1 y posiblemente de PKC, específicamente en las balsas lipídicas, donde se producen la mayoría de procesos endocíticos independientes de clatrina.
La dinámica de las adhesiones focales, que vinculan el citoesqueleto con la matriz extracelular a través de la integrina, está también regulada por la endocitosis durante la migración celular. Existe además una estrecha regulación recíproca entre las RhoGTPasas y el tráfico de integrinas, que se extiende a lo largo del eje anteroposterior de la célula en migración, en el que generalmente Rac1 está activado en la parte anterior, y RhoA en la parte posterior. Los análisis de internalización realizados nos han permitido descubrir que las tubulaciones inducidas por PI(4,5)P2 son una vía de entrada de beta1-integrina, que aceleran su internalización y la excluyen de los compartimentos endosomales tempranos, impidiendo posiblemente un reciclaje rápido hacia la membrana plasmática. La activación constitutiva de Rac1 impide esta entrada rápida a través de los túbulos.
Los sitios de endocitosis están estrechamente ligados al citoesqueleto de actina, ya que éste puede contribuir a la deformación, invaginación o rotura de la membrana. La cortactina modula la dinámica del citoesqueleto de actina durante la CDE y la CIE, en asociación con diversas proteínas como WASP, dinamina o Arp2/3. Se sabe que la cortactina requiere de Rac1 para ser translocada a la membrana plasmática pero no se conoce bien el mecanismo. Asimismo, la tensión de la membrana plasmática es también un elemento clave en la regulación de la internalización, estimulándose la endocitosis en regiones con una baja tensión de membrana. La miosina, en especial la miosina II de células no musculares, es, junto con la actina, uno de los principales reguladores de la tensión de membrana, especialmente durante la migración celular. El estudio de la función de cortactina y miosina permitió demostrar que la actividad de Rac1 regula negativamente la formación de las invaginaciones tubulares inducidas por PI(4,5)P2. Hemos demostrado que la acción de POR1, un efector conocido de Rac1, media la translocación de cortactina a la membrana plasmática. Además, se ha descrito por vez primera una activación
directa de ROCK1 por parte de Rac1, que pemite la activación de la miosina y su asociación con el citoesqueleto de actina, lo cual es necesario para la inhibición de las tubulaciones por Rac1 activo.It has been described that specific calmodulin inhibition, W13-treatment, increased the percentage of cells with tubular plasma membrane structures, which corresponds to the Arf6-dependent and clathrin-independent endocytosis pathway. The present thesis shows that these tubular transport membranes by which β1-integrin is endocytosed, depends on the increased PI(4,5)P2 levels in lipid rafts, dynamin and dynein motor proteins. As for W13, exogenous PI(4,5)P2 or PIP5K expression generated-tubules are inhibited by expression of the active Rac1 mutant (Rac1-G12V). Therefore, the molecular mechanisms downstream of Rac1 that controls such tubules formation have been analyzed biochemically and by the expression of different Rac1 mutants. The results indicate that PLC and ROCK1, possibly in combination with POR1, are the main Rac1 effectors to impede plasma membrane invagination, by decreasing the PI(4,5)P2 levels and promoting cortical actomyosin, respectively. Importantly, among the interplay of proteins that participates in membrane remodeling, this study reveals for the first time that the well-known downstream RhoA effector ROCK1 acts as an important effector of Rac1 to regulate actin-myosin at the cell cortex. This study provides new insights in the mode of Rac1 action on plasma membrane dynamics regulation
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Get PDFThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
Variations on the Author
Get PDF“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
Appropriate Similarity Measures for Author Cocitation Analysis
Get PDFWe provide a number of new insights into the methodological discussion about author cocitation analysis. We first argue that the use of the Pearson correlation for measuring the similarity between authors’ cocitation profiles is not very satisfactory. We then discuss what kind of similarity measures may be used as an alternative to the Pearson correlation. We consider three similarity measures in particular. One is the well-known cosine. The other two similarity measures have not been used before in the bibliometric literature. Finally, we show by means of an example that our findings have a high practical relevance.information science;Pearson correlation;cosine;similarity measure;author cocitation analysis
Dispelling the Myths Behind First-author Citation Counts
Get PDFWe conducted a full-scale evaluative citation analysis study of scholars in the XML research field to explore just how different from each other author rankings resulting from different citation counting methods actually are, and to demonstrate the capability of emerging data and tools on the Web in supporting more realistic citation counting methods. Our results contest some common arguments for the continued
use of first-author citation counts in the evaluation of scholars, such as high correlations between author rankings by first-author citation counts and other citation
counting methods, and high costs of using more realistic citation counting methods that are not well-supported by the ISI databases. It is argued that increasingly available digital full text research papers make it possible for citation analysis studies to go beyond what the ISI databases have directly supported and to employ more
sophisticated methods
koamabayili/VECTRON-author-checklist: VECTRON author checklist
No full textWe have done our best to complete the author checklist relating to the use of animals in the hut study. Note that the objective for the hut study was to evaluate the IRS treatment applications for residual efficacy against Anopheles mosquitoes, including the local An. coluzzii mosquito population. Cows were only used to attract mosquitoes into the huts and no tests were carried out directly on the cows. The author checklist is intended for use with studies where experiments are carried out on animals, which is why we have had such difficulty in completing this for the hut study, as many of the questions do not relate to how the cows were used
Dinàmica i funcionalitat de KRas en els endosomes
Get PDFEn els últims anys les endomembranes cel•lulars, especialment les del compariment endocític (endosomes primerencs, EE; tardans LI / MVBs) estan adquirint rellevància com a plataformes de senyalització que poden tenir un paper important en el control de diferents processos cel•lulars com la proliferació o la mobilitat cel•lular. S'ha descrit la presència de diverses GTPasas, entre elles KRas, en els endosomes, les quals són importants per a la senyalització cel•lular. En aquesta tesi s'ha analitzat la dinàmica i la funcionalitat de la GTPasa KRas en els endosomes.
Per poder determinar la quantitat de KRas present en els endosomes i determinar si la seva activació modifica la seva proporció en aquests orgànuls, es va quantificar la presència de GFP-KRas (actiu i inactiu) en els EE. Independentment de l'estat d'activació de KRas, un 10-15% del KRas expressat es troba en els endosomes. Posteriorment, es va analitzar la dinàmica d'associació a la membrana endosomal de KRas. Es conclou que, segons l'estat d'activació que presenti la GTPasa KRas, aquesta s'uneix amb més o menys rapidesa a la membrana dels endosomes, sent més ràpida i més gran la seva recuperació a la membrana quan es troba en la seva forma activa (KRas- GTP).
En aquesta tesi s'analitzen diverses proteïnes d'unió a KRas que podrien potencialment modificar la seva recuperació en la membrana dels endosomes, com la calmodulina (CaM) o la subunitat delta de la fosfodiesterasa 6 (PDEδ). Com a resultat es conclou que la CaM pot modificar la dinàmica de KRas en aquests orgànuls, segurament mitjançant la seva unió a la regió polibàsica quan la serina 181 no es troba fosforilada. Així mateix es demostra que, almenys en les nostres condicions experimentals, la PDEδ no està involucrada en la dinàmica de KRas en els endosomes.
S'ha analitzat el paper de dues fosfolípids principals de la membrana dels endosomes primerencs, el PI3P i el PS (fosfatidilserina), en el reclutament de KRas a la membrana dels endosomes. Els resultats obtinguts demostren una major tendència de KRas per la unió a la PS que als PI3P, però no es descarta que, en absència de PS, KRas pugui unir-se als PI3P.
En l'últim apartat d'aquesta tesi s'estudien diferents funcions de KRas en els endosomes com la seva influència en la mobilitat d'aquests orgànuls oa la mobilitat cel • lular. Es conclou que KRas és important per a la mobilitat dels endosomes i per a la mobilitat cel • lular. També s'analitza el paper de KRas en la localització de la metal•loproteasa MT1-MMP. Mitjançant tècniques bioquímiques i de microscòpia, es demostra que KRas és important, i necessari, perquè la metal•loproteasa es localitzi a la membrana plasmàtica i pugui així exercir la seva missió proteolítica per la degradació de la matriu extracel•lularIn recent years cellular endomembranes, particularly the endocytic compariment (early endosomes, EE; late LE / MVBs) are gaining importance as signaling platforms that can have an important role in the control of various cellular processes such as proliferation or cell mobility. It has been described the presence of several GTPases, including KRas at the endosomes, which are important for cell signaling. This thesis has analyzed the dynamics and functionality of the GTPase KRas in endosomes.
To determine the amount of KRas present at the endosomes andto determine if its activation State changes its proportion in these organelles, the presence of GFP-KRas (active and inactive) was quantified in the EE. Regardless of the state of KRas, 10-15% of KRas expressed in endosomes. Subsequently, the dynamics of endosomal membrane association was analyzed KRas. We conclude that, according to the activation state this GTPase KRas, it recovers more or less rapidly at the membrane of endosomes, being faster and higher its recovery in the membrane when it is in its active form (KRas- GTP).
It has been proposed several binding proteins are discussed KRas recovery could potentially modify KRas recovery at the membrane of endosomes, as calmodulin (CaM) or phosphodiesterase delta 6 (PDEδ) subunit. As a result we conclude that CaM can change the dynamic of KRas at these organelles, probably by binding to the polybasic region when serine 181 is not phosphorylated. It is also shown that, at least in our experimental conditions, the PDEδ is not involved in the dynamics of KRas in endosomes.
We analyzed the role of two major membrane phospholipid of the early endosomes, the PI3P and PS (phosphatidylserine), in the recruitment of KRas on its membrane. The results show a greater tendency of KRas for binding to PS rather than the PI3P, but it is possible that in the absence of PS, KRas could bind to PI3P.
The final section of this thesis KRas different functions are studied in endosomes as their influence on the mobility of these organelles or cell motility. We conclude that KRas is important for the mobility of endosomes and for cel •lular mobility. The role of KRas in locating metalloprotease MT1-MMP has been also analysed. By biochemical and microscopic techniques, we demonstrate that KRas is important and necessary for the metalloprotease to localize at the plasma membrane where it can exert its proteolytic task for the degradation of extracellular matrix
- …
