1,721,230 research outputs found
An Exploration of Caregiver’s Stress Perception and Emotional Response with Brain Damaged Patients at Pre-discharge
No full text本研究為橫斷式描述性相關研究，研究目的在探討主要照顧者在腦部神經損傷病患出院前的壓力感受與情緒反應相關因素。以立意取樣方式，於北部某醫學中心神經內外科病房收集63位腦部神經損傷病患之主要照顧者，運用結構性問卷包含腦部損傷患者主要照顧者壓力感受問卷、流行病學憂鬱量表（CES-D）、情境焦慮量表（SAI）、病患與照顧者的基本資料表與照顧資源問卷，與照顧者面對面親自訪談進行收集資料。研究對象所照顧的腦部損傷病患疾病多以腦部梗塞為主，平均為65.38歲，男性，屬輕度腦部損傷，巴氏指數平均為13.33分；主要照顧者平均年齡為48.69歲，多數為女性、高中職學歷、已婚、為病人的配偶、與病患感情還不錯、自覺健康狀況普通、平均照顧時數為14.44小時。將所得資料進行描述性統計與推論性統計分析。研究結果如下：
一、照顧者於病患出院前自覺有輕度到中度的壓力感受、65.1%的人具有憂鬱傾向。
二、照顧者在病患出院前最擔心的前十項壓力事件順序為：「病況再次發生變化」、「害怕病人死亡」、「花費增加、支出增加」、「缺乏照顧人力」、「害怕病人跌倒」、「不會處理病人突發問題」、「不清楚病患未來狀況，無法做好後續照顧計畫的規劃」、「幫病人抽痰」、「就醫往返不方便或困難」、「害怕自己照顧能力不好」。再經文獻概念分析，將本研究照顧者壓力感受歸納為四個構面，依序為病況變化之醫療處置、經濟及資源不足、直接照顧困難及照顧病人對自己與家人的影響。
三、照顧者照顧時數越長、面對病人出院之準備度越差，以及護理人員提供出院前之護理指導完成率越低，則整體壓力感受越大。此三變項可解釋照顧者壓力感受10%的變異量。
四、病患意識狀況越差、出院時病患身上所具有的管路越多；照顧者教育程度越低者、對病患照顧技能純熟度越不熟練、無法找到照顧諮詢的人來解決照顧問題、護理人員提供出院前之護理指導完成率越低，與照顧者的整體壓力感受越大，照顧者越有憂鬱傾向。這些變項共可解釋照顧者憂鬱反應38.9%的變異量。其中，「照顧者的整體壓力感受」為最具預測力的變項。
五、病患發病前為家中主要經濟來源者；照顧者教育程度越低者、對病患照顧技能純熟度越不熟練、無法找到照顧諮詢的人來解決照顧問題、護理人員提供出院前之護理指導完成率越低，與照顧者的整體壓力感受越大，照顧者的焦慮反應越高。這些變項共可解釋照顧者焦慮反應42%的總變異量。而「照顧者的整體壓力感受」為最具預測力的變項。
故建議在未來臨床護理實務方面，瞭解此類病患出院前主要照顧者的壓力感受，規劃提供一系列完善的護理指導方案並提高護理指導完成率，使照顧者可以經由增強整體照顧能力，認識與瞭解相關社會資源的運用，降低其出院前的壓力感受，進而降低憂鬱與焦慮。This study uses a cross-sectional design with a descriptive correlation approach. The main purpose of this study is to investigate the primary caregiver’s stress perception and emotional response with brain damaged patients at pre-discharge. A purposive sample of 63 primary caregivers were face-to-face interviewed through structured questionnaires in a neurological and neurosurgical units at a medical center in northern Taiwan, including Questionnaire for Primary Caregiver’s Stress Perception, Center for Epidemiologic Studies Depression Scale (CES-D), State Anxiety Inventory (SAI), basic information about patient and caregiver, and Questionnaire for Caregiver’s Resource. Brain infarction is the most common disease among all brain damaged patients cared by these subjects. The mean age of patients is 65.38, male with mild brain damage, and the mean score of Barthel Index is 13.33. The mean age of primary caregivers is 48.69. Most of the caregivers were female, married, patient’s spouse, with high school background, having a good relationship with patients, ordinary health status on his/her own initiative, and the average care time is 14.44 hours. The results show:
1.The degree of primary caregiver’s stress perception before patient discharge was mild to moderate. 65.1% of them have tendency toward depression.
2.The top 10 stress events that the caregiver worried about are: “patient condition changes again”, “patient will dead after discharge”, “expenditure increase”, “short of caring manpower”, “fear of patient falling down”, “can’t handle the unexpected problems”, “unable to make a good plan because patient’s status is unclear in the future”, “suction for the patient”, “inconvenient or hard to go to hospital”, “inadequate care ability”. After that, we separate caregiver’s stress perception into 4 categories by using concept analysis, which are “medical treatment when patient’s status is changed”, “financial burden and short of resource”, “difficult to provide direct care”, and “the influence of caring patient upon caregiver and caregiver’s family members”.
3.The longer care time for caregiver, the less readiness for patient’s discharge, and the lower completion rate of nursing instruction from nursing staff before discharge, and the larger degree of stress perception would be. These 3 independent variables can explain 10% variance at the caregiver’s stress perception level.
4.The worse patient conscious level, the more tubes on patient at discharge; the lower level education for caregiver, the worse caregiver’s mastery in caring patient; fewer people can be found to counsel on solving caring problems, the lower completion rate of nursing instruction before discharge, the higher overall stress perception of caregiver, and the more tendency toward depression on caregiver. These independent variables can explain 38.9% variance in caregiver’s depression scale. Among them, the “caregiver’s stress perception level” is the strongest predictor.
5.These items will cause caregiver with higher degree of anxiety and can explain 42.0% variance of caregiver’s anxiety scale: “patient takes most responsibility for family income before being sick”, “lower education level of the caregiver”, “worse caregiver’s mastery”, “caregiver unable to find counselors to solve caring problems”, “low completion rate of receiving information and care training from nursing staff before discharge”, and “high caregiver’s stress perception level”. The “caregiver’s overall stress perception level” is the strongest predictor.
In clinical nursing practice, this study recommends understanding the primary caregiver’s stress perception before patient discharge, providing a complete and better nursing plan to increase the completion rate of nursing instruction. These can help the caregiver to lessen his/her stress perception and further decrease his/her depression and anxiety through strengthening overall care ability and understanding how to utilize social resources.致 謝 I
中文摘要 II
英文摘要 V
目錄 VII
圖表目錄 XII
第一章 緒論
第一節 研究背景與重要性 1
第二節 研究動機 4
第三節 研究目的 5
第二章 文獻查證
第一節 壓力理論
一、壓力定義 6
二、壓力理論 8
三、壓力源 10
第二節 腦部損傷病患照顧者出院前壓力感受與影響因素
一、照顧者出院前壓力感受 11
二、影響照顧者壓力感受之因素
（一）腦部損傷病患特性 14
（二）病患與主要照顧者之基本屬性 15
第三節 主要照顧者情緒反應與影響因素 16
第四節 主要照顧者照顧資源 18
第三章 研究方法
第一節 研究架構 21
第二節 名詞界定 23
第三節 研究假設 24
第四節 研究設計 25
第五節 研究對象 25
第六節 研究場所 26
第七節 研究工具 26
第八節 研究工具信效度檢定 31
第九節 資料收集過程 35
第十節 資料分析 36
第四章 研究結果
第一節 基本屬性
一、主要照顧者基本屬性 41
二、病患基本屬性 45
第二節 主要照顧者出院前壓力感受 49
第三節 主要照顧者情緒反應
一、主要照顧者憂鬱反應 52
二、主要照顧者焦慮反應 54
第四節 主要照顧者的照顧資源
一、照顧者照顧能力 56
二、家庭收入 58
三、出院後尋求照顧諮詢能力 58
四、護理人員提供照顧者出院前之護理指導 59
第五節 主要照顧者與病患基本屬性、照顧資源與壓力感受之關係 65
第六節 主要照顧者與病患基本屬性、照顧資源與情緒反應之關係
一、憂鬱反應 72
二、憂鬱反應之重要預測變項分析 76
三、焦慮反應 77
四、焦慮反應之重要預測變項分析 81
第五章 討論
第一節 主要照顧者出院前壓力感受 83
第二節 主要照顧者出院前壓力感受、病患及照顧者基本屬性與照顧者照顧資源之相關性
一、主要照顧者出院前壓力感受與病患及照顧者基本屬性之相關性 89
二、主要照顧者出院前壓力感受與照顧者照顧資源之相關性 91
第三節 主要照顧者情緒反應、病患及照顧者基本屬性、照顧者照顧資源和照顧者出院前壓力感受之相關性
一、主要照顧者情緒反應與病患及照顧者基本屬性之關係 92
二、主要照顧者情緒反應與照顧者照顧資源之關係 94
三、主要照顧者情緒反應與照顧者出院前壓力感受之關係 94
第四節 預測主要照顧者情緒反應的變項探討 95
第六章 結論與建議
第一節 結論 97
第二節 建議 99
第三節 研究限制 102
參考文獻
中文部分 104
英文部分 107
附錄
附錄一 內容效度之專家名單（依姓氏筆畫順序排列）113
附錄二 流行病學憂鬱量表（CES-D）使用同意書 114
附錄三 情境焦慮量表（Status Anxiety Inventory）使用同意書 115
附錄四 研究場所回函公文 116
附錄五 研究場所同意臨床試驗證明書 117
附錄六 研究同意書 118
附錄七 主要照顧者壓力感受問卷 119
附錄八 主要照顧者憂鬱量表 120
附錄九 主要照顧者焦慮量表 121
附錄十 病患基本資料 122
附錄十一 主要照顧者基本資料 123
附錄十二 照顧能力評估表 124
附錄十三 護理人員提供照顧者出院前之護理指導評估表 125
附錄十四 巴氏量表（Barthel Index）126
附錄十五 Glasgow Coma Scale（GCS）12
Single Molecule Detection by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy
No full text 單分子偵測因可呈現動態行為與動力參數的真實波動與分布、可進行蛋白質反應事件操縱與反應之定量分析、且反應毋須同步，故為生物分子研究之重要且實用的方法。而所謂單分子螢光顯微術，乃是利用適當波長的雷射，激發所選擇的螢光標識分子，透過對螢光標識分子的偵測與觀測，追蹤目標分子的動態行為。
本篇論文主要是關於建立一套稜鏡式全反射顯微螢光顯微術系統，以進行單分子研究。全反射顯微術成功的關鍵，在於有效地降低背景螢光值。全反射在界面所建立的漸逝場，其強度為入射光能量的數倍，並隨離界面的距離增加而呈指數性衰減，其滲透深度頗為狹窄，僅侷限於界面附近0.1微米的帶狀區域，故能選擇性激發臨近界面的螢光分子。漸逝場中的螢光標記分子經激發所放出的螢光訊號，經高數值孔徑的物鏡收集後，分別以電荷耦合元件（CCD）及雪崩式光二極體（APD）偵測。電荷耦合元件的優點在於空間的解析與多個單分子資訊的同時擷取，雪崩式光二極體的優點在於時間解析度，可用於單頻道或雙頻道的光子計數，以進行時間系列的解析。
針對ATP合成酶，本實驗選擇CyDye作為螢光標記分子，包括Cy3及Cy5，並採用532nm綠光雷射作為Cy3的激發光源。將濃度在10~100pM等級的CyDye洋菜溶液，旋鍍製成含水達99%的洋菜膠體薄膜以進行系統測試。測試的結果，無論是CCD影像分析，或是APD光子計數量測，均顯示本實驗所建立的稜鏡式全反射顯微螢光顯微術系統，確實具有進行單分子研究的能力，其中最主要的證據係Cy3單分子單一步驟光淬滅的行為。本實驗的背景螢光值僅每秒約20個單光子，訊號背景比值平均在13左右，最高達20，且咸信仍有提升空間。在本實驗系統的觀測下，Cy3螢光單分子在發生光淬滅之前，約可產生100,000∼1,000,000個光電子訊號。
單分子實驗系統確立後，未來將可以生物馬達為主角，進行單分子動態行為分析與動力學研究，包括以Cy3配合Cy3，進行螢光共振能量傳遞（Fluorescence Resonance Energy Transfer）之實驗，以期透過化學觀點，探討生物馬達的工作。 Single molecule detection is a powerful and practical approach to explore bio-molecules, because it provides information about actual fluctuation and distribution of dynamic and kinetic parameters, enables relationship between inputs and outputs of events of proteins reaction to be qualified, and removes the need for synchronization. We use a laser of suitable wavelength to excite the selected fluorescent-labeled molecules, and then address the dynamic behaviors of target molecules by analysis and observation of the labeled molecules. This is namely single molecule fluorescence microscopy.
This work is mainly about the construction of a Prism-type Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy system for the purpose of single molecule studies. The key of TIRFM is to reduce the background fluorescence effectively. When the light is totally reflected in the interface, the evanescent field is generated. The evanescent field is several times the intensity of the incident light, and diminishes exponentially with the distance form the interface. The penetration depth is quite narrow, around 100nm. Fluorescent-labeled molecules, which happen to be in this region, are excited selectively and emit fluorescence. The signal is collected by a high numerical aperture objective, and detected by CCD and APD. CCD is able to provide spatial information and extract statistics on numbers of individual molecules, while APD offers adequate temporal resolution. The signal pulses from one or double channels were counted and analyzed with time series.
The reporters that are chosen for ATP synthase are CyDye, including Cy3 and Cy5. We use a green laser (wavelength = 532nm) to pump the Cy3. The substrates are spin-coated with Cy3 in agarose solution of 99% water as a test specimen, with concentrations in the range of 10~100pM. Both the CCD visualization and the APD photon counting measurements demonstrate that the TIRFM does work and is capable of probing single molecules. The background fluorescence value in our experiments goes around 20 photo-electrons/sec and the SBR averages 13, 20 at most, and still could be enhanced. Before photo-bleaching, about 100,000∼1,000,000 photo-electrons were detected from each Cy3 molecule by APD.
Since the single molecule detection system has been built up successfully, we will carry on the investigation into the dynamic behaviors of bio-molecules and the study of the enzyme kinetic, such as fluorescence resonance energy transfer between Cy3 and Cy5, so as to elucidate the underlying mechanism of bio-motors from a chemist’s point of view.第一章 緒論————————————————————— 1
1.1 動機：ATP合成酶的觀測 —————————— 1
1.2 單分子偵測方法 —————————————— 2
1.2.1 單分子偵測方法的優點 ———————— 3
1.2.2 單分子偵測方法的基礎 ———————— 5
1.2.3 單分子螢光顯微術 —————————— 6
第二章 實驗儀器——————————————————— 11
2.1 全反射螢光顯微術 ————————————— 11
2.1.1 全反射理論 ————————————— 12
2.1.2 全反射激發光源的架設 ———————— 17
2.1.3 全反射激發光源建立流程 ——————— 22
2.2 螢光的偵測———————————————— 26
2.2.1 電荷耦合元件─CCD————————— 28
2.2.2 雪崩式光二極體─APD———————— 30
2.2.2.1 雪崩式光二極體的架設 ———— 31
2.2.2.2 Labview控制程式——————— 37
第三章 樣品的製備 ————————————————— 41
3.1 染料溶液的配製—————————————— 41
3.2 玻片清洗程序——————————————— 43
3.3 樣品的固定———————————————— 45
3.3.1 旋鍍理論 —————————————— 45
3.3.2 旋鍍條件 —————————————— 46
第四章 成果與討論—————————————————— 49
4.1 背景螢光值的解決 ————————————— 49
4.2 單分子的證據與確認 ———————————— 53
4.3 Cy3分子的單分子影像 ——————————— 56
4.4 Cy3單分子的光子計數測量 ————————— 65
4.4.1 Cy3單分子的光子計數測量結果 ———— 65
4.4.2 Cy3單分子的壽命與所放射光子總數 —— 73
第五章 後續計畫與未來展望—————————————— 75
5.1 稜鏡式全反射螢光顯微術的最佳化—————— 75
5.2 物鏡式全反射螢光顯微術的建立——————— 76
5.3 螢光共振能量傳遞的應用—————————— 77
5.4 結論——————————————————— 81
參考書目—————————————————————— 8
Characterization and Mechanism of Action of a GPVI-targeting Platelet Aggregation Inducer from Snake Venom of Trimeresurus mucrosquamatus
No full text台灣龜殼花(Trimeresurus mucrosquamatus) 原毒粉末經離子交換樹脂與膠體過濾法，再經由FPLC 膠體過濾層析法純化出一能引發血小板凝集之成分，並命其為TMF。經SDS-PAGE 分析，在還原狀態下，其分子量則為26 kDa 與23 kDa。並且在二維電泳還原狀態下，可得知在26 kDa 與23 kDa 位置分別有四個點等電點相近，在26 kDa 位置等電點為5.8~6.5;而在23 kDa 位置等電點為 6.7~~7.2。經LC/MS/MS 分析比對後，發現的TMF-b (26 kDa) 與β-fibrinogenase 約有42%相似性，而TMF-a (23 kDa)與metalloprotease (α-fibrinogenase) 約有25%相似性。
TMF 在人類血小板，包括富血小板血漿(PRP)與血小板懸浮液(PS)的功能分析
上，其所引起凝集的程度皆呈濃度相關性。其中在PRP 中引起血小板凝集的EC50
為0.3 μg/ml，而在PS 中的EC50 則為1.8±0.32 μg/ml。TMF 也會依濃度相關地誘發血小板表面分子P-selectin 表現，同時引發TxB2 釋放及細胞內的Ca2+增加。PGE1、EDTA 與BAPTA/AM 皆能有效抑制由TMF 所引起的血小板凝集，而heparin、hirudin 和aprotinin 則不影響。另外，apyrase 與MEK 抑制劑(PD98059) 不影響TMF引發的血小板凝集；indomethacin, CP/CPK、Tyrosine kinase 抑制劑 (genistein) 能稍抑制; Ro-31-7549 與PLC 抑制劑 (U73122) 分別抑制99% 與 45%; 而cytochalasin D 與 PI3K 抑制劑 (LY294002)分別有20% 與62% 的抑制作用外，使用Syk 抑制劑 (piceatannol) 抑制80%，並且 Src family kinase 抑制劑 (PP2) 全面性抑制TMF 所引發血小板的形變 (shape change)與凝集反應。GPIb 拮抗劑 (6D1)，GPIa/IIa 拮抗劑(6F1)，僅能些微抑制TMF 引起的血小板凝集反應; IIb/IIIa 拮抗劑 (7E3) 雖能抑制血小板凝集，卻無法壓制血小板凝活化過程的形變;低濃度GPVI 拮抗劑 (326E12) 能有效抑制血小板凝集反應，由此可知TMF 誘發血小板凝集是透過醣蛋白VI。以流式細胞儀來分析TMF 在血小板表面分子的結合性，TMF 稍微影響6D1、6F1 結合至GPIb 與GPIa/IIa，卻不影響7E3結合IIb/IIIa，而TMF 可以依濃度相關性抑制326E12 結合到GPVI。利用西方點墨法，我們也發現TMF 引起血小板凝集的訊息傳遞可引起血小板內tyrosine kinases(包含Syk、Src、LAT、PLCγ2 等)活化，並且使用piceatannol 與PP2 會全面性抑制TMF 所引發血小板凝集的訊息傳遞。
在酵素活性方面，以fibrinogen 當作受質與TMF 於37 ℃作用後，我們觀察
到 TMF 分解fibrinogen 的酵素活性，呈現濃度與作用時間相關性，因此推測TMF可能具有proteinase 活性。預先以EDTA 處理，不影響TMF 的血小板凝集活性和β-fibrinogenolytic activity，卻可抑制 α-fibrinogenolytic activity。另外，使用serineprotease 抑制劑PMSF 預先和TMF 作用，PMSF 可抑制其分解Bβ活性，但仍不影響其活化血小板活性。因此推測TMF 可能含有可分解Aα之金屬依賴性蛋白脢(metalloprotease) 和可分解Bβ的serine protease，而TMF 活化血小板活性與其酵素活性不相關。
總結上述，TMF 在等張溶液下，可能呈現TMF-b (β-fibrinogenase) 和TMF-a(α-fibrinogenase)的複合體。除了具有分解fibrinogen 活性，於PRP 中不會引起血液凝固，為非典型serine proteinase，於活體中更引發thrombocytopenia 現象。TMF藉由作用於血小板表面受體GPVI 引發許多訊息分子，包括Syk、Src、LAT、Fyn、PLCγ2、PI3K、Akt 之磷酸化; 經由細胞內游離鈣離子增加，誘發TxB2 的形成和P-selectin 的表現，最後引發IIb/IIIa 的活化進而使血小板凝集。藉由TMF 對於血小板表面醣蛋白VI 的專一性，相較於已知的結合蛋白(例如蛇毒蛋白convulxin 與trowagerix)之間差異，可用以探討TMF 與GPVI 之分子作用機制，有利於小分子GPVI 拮抗劑的研發，以做為新一代的抗血栓藥物。TMF, a platelet aggregation inducer, was purified from Trimeresurus
mucrosquamatus venom. By means of cationic exchange, gel filtration and FPLC
column chromatography, two bands were detected on SDS-PAGE with apparent
molecular weights of 26 kDa and 23 kDa, respectively, under reducing condition. On
2-D PAGE under reduction, there were four bands with different pI ranges 5.8~6.5 withsimilar mass of 26 kDa; pI 6.7~7.2 with similar mass of 23 kDa. Through LC/MS/MS
analysis, the 26 kDa bands exhibit high similarity to β-fibrinogenase and the 23 kDa
bands was similar to metalloprotease (α-fibrinogenase).
TMF concentration-dependently induced platelet aggregation both in platelet-rich
plasma (PRP) and platelet suspension (PS), with EC50 0.3 and 1.8±0.32 μg/ml,
respectively. TMF also concentration-dependently caused P-selectin expression,
increase of intracellular Ca2+ concentration, and release of TxB2. PGE1, EDTA and
BAPTA/AM effectively inhibited TMF induced platelet aggregation, but heparin,
hirudin, aprotinin did not. TMF specifically inhibited the binding of 326E12, mAbs of
GPVI to platelet measured by Flow cytometry. TMF activated the signaling molecules
involved in GPVI signal pathway, including Syk, Src, PLCγ2, LAT, which were
completely inhibited by PP2. Regarding enzymatic activity, TMF concentration-dependently degraded α- and β-chain of fibrinogen. After incubation with
serine protease inhibitors, PMSF or metalloprotease inhibitor, EDTA, its activities of
β-fibrinogenase and α-fibrinogenase were respectively inhibited while its aggregation
was not affected. These results suggest that its platelet aggregating activity is not related
to the intrinsic enzymatic activities.
Taken together, TMF might exist as a complex under isotonic condition, consisting
of two proteins, namely serine proteinase (i.e.β-fibrinogenase) and metalloprotease
(i.e.α-fibrinogenase). It activates platelets and the downstream signaling molecules
mainly through the specific biding of platelet GPVI. By phosphorylation of Syk, Src,
LAT, Fyn, PLCγ2, PI3K and Akt, TMF induced expression of P-selectin and TxB2
biosynthesis, and finally activated integrin IIb-IIIa, resulting in platelet aggregation.
However, its platelet aggregating activity is not related to the proteolytic activity. This
snake venom protein may provide a useful tool for studying how it interacts with
platelet GPVI at a molecular level. The information may provide insights for designing
the novel small-mass antagonist of platelet GPVI, a new class of antithrombotic agent
Proteomic study of gene regulation by Deira-PprI in Escherichia coli.
No full text耐輻射奇異球菌是目前最被廣泛研究的一株耐輻射細菌，以其特殊的耐輻射能力著稱。耐輻射奇異球菌能承受高達5kGy的輻射劑量，且不造成其存活率上的影響。因為地球上從來沒有一處環境擁有如此高的輻射劑量，因此很難以天擇說來解釋耐輻射奇異球菌之耐輻射能力的獲得。有人提出耐輻射能力可能是耐輻射奇異球菌為了適應其他環境逆境，例如:乾燥環境，所意外獲得的能力。因為根據研究，乾燥環境所引發的DNA損傷，包括:DNA 雙股斷裂ヽDNA單股斷裂ヽ及DNA交叉連結(crosslinks) ，與輻射線照射下產生的DNA損傷是相同的。
耐輻射奇異球菌在相同輻射劑量處理下產生DNA雙股斷裂的速率與大腸桿菌是相同的。所以耐輻射奇異球菌並非透過保護DNA免於輻射線傷害，有效的DNA修補機制才是其耐輻射的原因。
近年來文獻資料顯示，PprI被發現是耐輻射奇異球菌DNA修補及保護機置相關的一個蛋白質。將PprI蛋白質表現在大腸桿菌中可以增加大腸桿菌耐γ-輻射線的能力。
為了驗證PprI蛋白質是否真的能增加其他菌種的耐輻射能力。我們將PprI蛋白質大量表現於大腸桿菌BL21菌株體內，並施以1.3 kGy X光照射或五天的乾燥處理。實驗結果卻不同於以往的研究報告，我們發現在有PprI蛋白質表現的大腸桿菌在1.3kGyX光照射及五天的乾燥實驗中降低了存活率。另外，在一些清除自由基的酵素活性研究上，例如:SOD及catalse，我們也發現在PprI蛋白質表現下，大腸桿菌的SOD和catalase的酵素活性有減低的趨勢。二維電泳分析實驗及質譜分析結果顯示，PprI表現下的大腸桿菌體內，有18個蛋白質的表現量受到PprI的影響，其中有13個蛋白質表現量大於1.5倍以上; 5個蛋白質表現量下降至0.6倍以下，這些蛋白質的功能包括:轉錄ヽ轉譯ヽ訊息傳遞ヽ碳水化合物的代謝ヽ後修飾作用ヽ胺基酸的運送子…等等。
PprI表現下的大腸桿菌體內，有一些與胺基酸的運送和ATP生成相關的蛋白質表現量的下降，以及SOD與catalase活性的降低，可能是大腸桿菌抗輻射能力降低的原因。The polyextremophile bacterium Deinococcus radiodurans is most famous for its extraordinary resistance to ionizing radiation. Exponential-phase cultures of D. radiodurans can survive exposure to γ-irradiation at dose as high as 5 kGy without loss of viability or evidence of DNA damage. It is hard to rationalize the extreme radioresistance of D. radiodurans in terms of natural selection, because there has been no high radiation natural environment on earth that would exert selection pressures on microbes to evolve into such a high radioresistant strain. It has been proposed that the radioresistance may be a coincidence with the adaptation to desiccation. The process of desiccation may introduce a substantial number of DNA double-strand breaks, single-strand breaks, and DNA crosslinks that are also observed following exposure to ionizing radiation.
Recent evidences have shown that measurable double-strand breaks form at the same rate in E. coli and D .radiodurans if cultures are irradiated under identical conditions. So the radioresistance of D. radiodurans can not result from prevention of DNA damage but from efficient DNA damage repair system.
PprI, a newly identified gene switch, is responsible for DNA damage repair and protection pathways in response to radiation stress in D. radiodurans. Expression of D. radiodurans PprI (Deira-PprI) can also enhance the resistance of E. coli to radioresistance.
To evaluate whether PprI also induces radioresistance in other organisms, Deira- PprI was overexpressed in E. coli BL21 (DE3) followed by a high dose x-ray or desiccation treatment. The complemented E. coli strain decreased the radioresistance to 1.3 kGy x-ray treatment or 5-day desiccation. Overexpression of PprI also showed a decrease of SOD and catalase activity in E. coli. By using two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis followed by mass spectrometry, we found that 18 proteins’ expression levels were affected by the overexpression of PprI. The expression levels of 13 proteins showed >1.5- fold increase, other 5 proteins dropped to <60 % of the control. These proteins exhibited various cellular functions, including transcription, translation, signal transduction, carbohydrate metabolism, post-translational modification, amino acid transport etc.
Decrease of expression level of proteins which function as amino acid transporter or participate in carbohydrate metabolism and the decrease of enzyme activities of SOD and catalase could be the reason why PprI could not enhance the radioresistance of E. coli.目錄
目錄…………………………………………………………… Ⅰ
圖表目錄………………………………………………… Ⅲ
縮寫表…………………………………………………………… Ⅳ
中文摘要………………………………………………… Ⅴ
英文摘要 Abstract…………………………………………………………… Ⅵ
第一章 緒論........................................ 1
一ヽ耐輻射奇異球菌(Deinococcus radiodurans R1)的介紹………1
(一) 耐輻射奇異球菌的發現與命名由來……………… 1
(二) 耐輻射能力與天擇………………………………… 1
(三) Deinococcaceae的特徵…………………………… 2
(四) Deinococcus radiodurans R1……………………… 2
(五) 輻射線所造成的DNA損壞…………………………… 3
(六) DNA修補機制…………………………………………… 3
二ヽPprI的介紹…………………………………………………… 6
(一) PprI被視為是是耐輻射奇異球菌耐輻射的一個重要蛋白 6
(二) 耐輻射奇異球菌體內在輻射線照射下受影響的蛋白質 6
三ヽ研究動機及目標…………………………………………… 6
第二章 材料與方法…………………………………………… 7
一、 小量質體純化 (Minipreparation)……………… 7
二、 轉型反應 (Transformation)……………………… 7
三、 PprI重組蛋白的表現………………………………… 7
四、 菌體的保存………………………………………… 8
五、 超音波破菌法 (Sonication)…………………… 8
六、 鎳金屬親合管柱層析分析 (His-tag Affinity Chromatography)… 9
七、 DNA定序……………………………………………… 9
八、 高壓液相層析法(HPLC,High performance liquid chromatography)… 10
九、 蛋白質N端定序………………………………………… 10
十、 蛋白質電泳膠體分析法 (SDS electrophoresis) 10
十一、 蛋白質定量分析法-Bradford法…………………… 11
十二、 蛋白質定量分析法-吸光度法……………………… 12
十三、 蛋白質去鹽及濃縮方法…………………………… 12
十四、 二維蛋白質電泳膠體分析法……………………… 13
十五、 二維蛋白質電泳膠體結果分析…………………… 15
十六、 In-Gel Digestion ………………………………… 15
十七、 MALDI-TOF-MS服務申請與結果分析……………… 16
十八、 西方墨點分析 (Western blotting)………………… 16
十九、 SOD 活性測試……………………………… 18
二十、 Catalase活性測……………………………………… 19
二十一、 乾燥實驗…………………………………………… 20
二十二、 耐輻射實驗…………………………………………… 21
第三章 實驗結果……………………………………………………… 22
一ヽ確認載體中的PprI基因…………………………………… 22
二ヽPprI蛋白質的表現ヽ純化與確認………………………… 22
三ヽIPTG誘導對菌體生長速率的影響………………………… 22
四ヽPprI蛋白質對大腸桿菌抗輻射及耐乾燥能力的影響……… 23
五ヽPprI蛋白質對大腸桿菌體內SOD及catalase活性的影響… 23
六ヽ利用2-DE實驗及質譜分析研究PprI蛋白質表現下對大腸桿菌體內其他蛋白質表現量的影響……………………………
23
第四章 討論與未來展望……………………………………… 25
第五章 圖表…………………………………………………… 28
第六章 參考文獻……………………………………………… 49
第七章 附錄…………………………………………………… 51
一ヽ儀器設備一覽表……………………………………………… 5
De-/Reconstructing the Land Policies for Indigenous Peoples in Taiwan
No full text歷史上，台灣原住民族土地定位的變遷，也就是原住民族地位的變遷。當然，這個變遷是從國家的角度決定或宣稱的。國家將原住民族視為敵對者，且保持距離避免接觸時，原住民族土地就是「界外」。國家覬覦原住民族土地與自然資源的經濟利益時，就必須將隔離原住民族的「邊界」稱為國境內的「行政界」，將原住民族稱為臣民或叛亂中的臣民或非人，原住民族土地就是「國家領土」或「國有地」。國家決定了社會文明進步的方向時，原住民就必須脫離民族，學習私有財產、定住農耕、密集生產，原住民族土地就開始化整為零，以供有效開發，特別是供較有「能力」的非原住民進行開發。台灣原住民族土地、原住民族地位的整個變遷過程，可以概括為從國際法領域轉換為國內法領域的過程。原住民族從獨立的政治實體，轉變為國家之內特殊社群，特殊社群地位瓦解之後，則僅存原住民個人面對國家各種「扶助」政策。原住民族土地則從原住民族領土，轉變為國家之內特殊社群的集體用地，再轉變為私有財產權，「剩餘」的則成為國有地。而國家對原住民族地位、原住民族土地定位的宣稱，雖然亦援引國際法為論據，但其實端視爭奪原住民族土地的國家之間勢力消長而定，因此國際法更像是一種事後的合理化說詞。
原住民族土地是一種主權與財產權交錯之下的概念；原住民族土地制度也呈現出政治、經濟、法律、保險、福利、社會組織、生態保育等多重面向意義。個別原住民族社會中，都存在著多樣的土地利用形態，對應著多樣的土地權利類型與產權主體規模。如果說私有財產權不足以描述原住民族土地產權制度，那麼集體財產權同樣無法涵蓋原住民族土地產權制度。只要我們放棄「從集體到個人」的線性進步觀點，認知到財產制度的社會脈絡有其意義，承認文化差異不見得是文明差異，我們就可以將產生原住民族獨特土地制度的原住民族政治組織、法律制度與現代國家的政治組織、法律制度同等看待。也可以將原住民族之為政治實體與現代國家之為政治實體同等看待。如此一來，過去國家以「無主地先佔」、「征服」或「條約」等方式取得原住民族土地，要不是不合法地忽略原住民族主權，就是並未消滅原住民族主權，甚至是恰恰證明原住民族主權的存在。所以，今天國家要合法且正當的行使領土主權（或說補救國家領土主權瑕疵），就必須爭取原住民族同意、與原住民族進行主權分享。也因為原住民族對其土地管領權的重建，與原住民族政治地位、組織規範的重建有密切關係，台灣原住民族並沒有等待國家改變，而是自己一點一滴的從「行動」當中實踐自決、自治。
原住民族政治主權地位不被承認，連帶地原住民族土地自然資源被剝奪，是全世界原住民族的共同遭遇。國際社會對此的反省，已經逐漸體現在相關的國際規範、區域規範或國內法之中。而承認原住民族與其土地自然資源的獨特關係、檢討國家對原住民族土地自然資源的不當政策、於原住民族土地集體權利與國家主權之間尋求平衡，也成為國際原住民族人權的重要課題。回復原住民族對其土地的管領、利用、發展權能，也就等同於回復原住民族的自決、自治地位。在這個過程中，並沒有一種適用於所有原住民族的途徑。不僅各原住民族只能依自己的步驟、條件、程序、組織、時程進行重建，這其實也是各原住民族的權利。台灣原住民族在向國家主張其政治主權地位、主張其土地資源集體權利的往復對話之間，已經呈現了這樣的多元狀態。國家所能╱應該做的，是謹慎的在每一個政策環節，讓原住民族主體、原住民族傳統領域、原住民族規範制度得到強化與推展。憲法「原住民族條款」所保障的原住民族自治基本權或原住民族自治制度，確實為國家原住民族土地政策提供了新的方向，並且，成為理解〈原住民族基本法〉中原住民族土地自然資源權利、原住民族土地海域回復取得、原住民族充分資訊與自由意志下同意、與原住民族諮商、原住民族參與分享或共管等規定的前提。第一章 前言……………………………………………..9
第一節 問題意識…………………………………….9
第二節 名詞界定……………………………………17
第三節 論文架構……………………………………20
第二章 原住民族土地概念變遷史……………………..27
第一節 熟番地：從「領土」到「個人財產」的退化.28
第一項 荷治時期（一六二四年至一六六二年）….28
第二項 明鄭時期（一六六二年至一六八三年）….33
第三項 清治時期（一六八三年至一八九五年）….35
第四項 日治時期（一八九五年至一九四五年）…..41
第二節 生番地：從「界外」到「國有地」的宣稱..44
第一項 清國對生番、生番地的態度……………….44
第二項 清末外交關係中生蕃、生蕃地的國際法定位…….50
第三項 日本國內法中生蕃、生蕃地的法律地位….60
第三節 「蕃人所要地」的出現…………………….70
第三章 現行原住民保留地制度評析……………………77
第一節 原住民保留地的法制背景………………..78
第一項 日治時期到國治時期的轉換………………78
第二項 保留地開發管理辦法的更迭………………89
第二節 原住民保留地的實證挫敗…………………99
第一項 「保障原住民生計」的財產效益有限……99
第二項 保留地制度的侵蝕……………………….107
第三節 原住民保留地面臨的難題……………….115
第一項 法令適用的危機………………………….115
第二項 保留地無法承載的集體利益…………….126
第四章 重返原住民族土地…………………………….136
第一節 原住民族土地財產權的承認………………137
第一項 原住民族土地財產權的效率…………….137
第一款 土地財產權界定的經濟原則………..137
第二款 原住民族土地財產權制度…………..143
第二項 財產權制度的文化意涵………………….151
第一款 西方財產權理論的偏見……………..151
第二款 原住民族土地制度的多重面向……..158
第二節 原住民族主權的回歸…………………….162
第一項 原住民族主權的國際法反省…………….162
第一款 國家取得原住民族領土主權的爭議..162
第二款 原住民族主權的實存…………………168
第二項 原住民族主權與土地管理權能………….175
第一款 國家主權擴張對原住民族的衝擊…..175
第二款 原住民族主權的延續…………………181
第五章 原住民族土地與違憲審查…………………….186
第一節 印第安土地分配法的教訓……………….187
第一項 土地流失………………………………….187
第二項 主權淪喪………………………………….193
第二節 印第安土地法制違憲審查……………….201
第一項 平等原則與種族歧視、種族優惠……….201
第二項 印第安法制的政治特殊性……………….210
第三節 原住民族土地法制違憲審查…………….222
第一項 原住民族土地議題的重新定性…………222
第二項 憲政秩序變遷下的保留地………………229
第六章 原住民族土地政策展望………………………242
第一節 聯合國原住民族議題的發展………………243
第一項 原住民族土地與自然資源永久主權…….243
第二項 原住民族權利宣言……………………….249
第二節 原住民族土地政策新視野……………….253
第一項 自治的多元與動態觀點………………….253
第二項 憲法原住民族條款的功能……………….267
第七章 結論……………………………………………27
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Full text linkThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
Variations on the Author
Full text link“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
Appropriate Similarity Measures for Author Cocitation Analysis
Full text linkWe provide a number of new insights into the methodological discussion about author cocitation analysis. We first argue that the use of the Pearson correlation for measuring the similarity between authors’ cocitation profiles is not very satisfactory. We then discuss what kind of similarity measures may be used as an alternative to the Pearson correlation. We consider three similarity measures in particular. One is the well-known cosine. The other two similarity measures have not been used before in the bibliometric literature. Finally, we show by means of an example that our findings have a high practical relevance.information science;Pearson correlation;cosine;similarity measure;author cocitation analysis
The Practice of Cultural Defenses Theory in Criminal Cases in Taiwan－－Focusing on Indigenous People
No full text文化，是一種人類為了適應環境而在一個社會或團體之間所發展之生活活動或方式。我國原住民依附著山林生存時會發展出一些產生食物、經濟維繫或社會規範等生活方式，在此社會之一員會學習這些方式，維繫著個人與部落社會之關係。再透過世代之濡化傳遞，以形塑原住民之人格特質於民族性格。在各種文化接觸的過程中，不應有強制同化或歧視他種文化之態度。作為自由民主國家之臺灣，隨著憲法增修條文之訂定，更應以尊重多元文化多樣性為依歸。因此，對於原住民文化應抱持著包容與尊重，法律面上，亦不應漠視原住民族群之文化價值觀或帶有主觀偏見，不應一味地適用主流文化所制定之現行法，而罔顧少數族群的文化困境。 為了因應多元文化的社會中，少數族群能在訴訟上主張其文化證據與價值觀，引發美國對於「文化抗辯」議題的省思。所謂文化抗辯，是一種訴訟策略的稱呼，指被告通常會主張其犯罪時受到其本身特有的文化慣習影響，使其欠缺犯罪成立所需要之要件，而不應受國家制裁。實務上，目前美國尚未承認文化抗辯成為正式之抗辯事由。然而，學理上早已對是否應成立正式文化抗辯之議題，進行正反兩面之爭論。其中，支持文化抗辯成為正式抗辯事由之學者，對於文化抗辯於刑法理論之定位之議題，有主張應屬正當化事由(justification)，亦有主張應屬於罪責免除事由(excuse)，然目前尚無定論。 從本文提出六則有關原住民犯罪案例可知，我國原住民刑事案件早已有文化抗辯之存在，只是實務上對於原住民之主張應如何在刑法體系中定位，並無統一之見解。近年來學界亦開始討論原住民之文化抗辯應具有何種法律效果。本文亦依序從不法構成要件該當性、違法性與有責性探討文化主張存在之可能，並認為文化抗辯應定位於期待可能性。並借鏡美國學者Alison Dundes Renteln的判斷標準，具體化期待可能性之內涵，增加提出文化抗辯之實益性。可兼顧刑法保護法益與尊重多元文化之價值，並提升法官審查原住民文化主張之完整性。Culture is a life activity of human in order to adapt the environment among a society or group development. Indigenous people of Taiwan also developed some produce food, economic or social of regulate lifestyle when attached to the forest to survive, one member in this community will learn these ways, to maintain the relaationship of personal and tribal society. And then passed through generations of enculturation in shaping personality traits in the ethnic character of the Indigenous people . In various cultures of contact with the process, there should be no forced assimilation or discrimination other kind of cultural attitude. As a freedom and democratic countries in Taiwan, along with upgrading the provisions of the Constitution formulate, more respect for multicultural diversity should be emphasize. Therefore, to treat indigenous culture should hold the tolerance and respect. On the Legal surface, we should not ignore the cultural values of the indigenous ethnic groups or with a subjective prejudice, should not blindly apply the existing law established by the dominant culture, while ignoring Cultural dilemma in the minority ethnic groups. In response to Multicultural society, we have to make sure minorities can advocate the cultural evidences and values, there are some reflections of “cultural defenses” in US. The so-called cultural defenses is one kinds of litigation strategy, it means that defendants usually claim that their actions were affected by unique culture, therefore the actions were lacked of the essential elements, should not be subject to state sanctions. In practices, it has not yet become a formal recognition of the cultural defense of defenses in US. However ,scholars have long been discussed whether cultural defenses are formal defenses. The scholars that advocate formal cultural defense, ones of them thinks cultural defenses are justification, others thinks cultural defenses are excuses. There is no conclusive. According to six cases of Indigenous crimes, there were cultural defenses in Criminal Cases in Taiwan. However ,it is no consensus that how to positioned Indigenous people’ claims in the criminal law system. In recent years scholars also began to discuss the defense of Aboriginal culture should have any legal effect. There is sequentially review from elements of crimes, justification to excuses, to find out the possibility of exist of cultural defenses in the criminal law system. This thesis will put the cultural defenses into the “Zumutbarkeit”. Simultaneously the thesis will learn from the American scholar Alison Dundes Renteln, enrich the Connotation of “Zumutbarkei”, and make the cultural defense beneficial. This article can be both criminal law to protect legal interests and respect for the values of multiculturalism, and enhance the integrity of the judges review the Aboriginal Culture claims
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