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Gaucher Disease: a Hyper-Hippo Syndrome?
No full textThe Gaucher Disease (GD) is a lysosomal disorder associated with mutations in the GBA1 gene, encoding the acidic β-glucocerebrosidase. GD is characterized by a wide spectrum of phenotypic manifestations, the most severe of which involve the nervous system, with massive neuronal loss and microglial proliferation. Different symptoms are also observed in individuals bearing identical GBA1 mutations, suggesting that additional players are involved in the disease.
Our hypothesis is that hyper-activation of the Hippo pathway, recently found involved in some neurodegenerative syndromes, may contribute to the dramatic outcome of the neuronopathic GD. We thus started an expression analysis of upstream and downstream Hippo pathway components in Drosophila GBA1-deficient larval and adult organs.
While some Hippo downstream targets resulted down-regulated in GBA1-deficient tissues, both in terms of transcript and protein content, Fat, an atypical cadherin upstream of the kinase complex involved in the regulation of glial and synapse development, was found up-regulated. In the light of this latter result, we are currently performing behavioural assays in flies where GBA1 expression has been silenced in glial or neuronal cells, to find out possible cross-effects. Preliminary data will be presented about the implication of the Hippo pathway in the pathogenesis of the neuronopathic GD
Eloge
No full textOverview of the typology of the encomiastic epigram, from the archaic to the Byzantine period. Silvia Barbantani is author of the section on Greek epigram Rosario Moreno Soldevila is author of the section on the latin epigram
The National Labour Policies in the context of the Europe 2020 strategy and of the European Economic Governance
No full textThe National Labour Policies in the context of the Europe 2020 strategy and of the European Economic Governance, by Silvia Borelli
The author presents the main priorities of the Europe 2020 strategy and the different steps of the European Semester of the European Economic Governance. The system of the European measures to solve the economic crisis is completed by the analysis of the “Six Pack”, the EuroPlus Pact and the Treaty on Stability, Coordination and Governance. The author clarifies how the European Employment Strategy has been fully absorbed by the European Economic Governance. After considering some of the new European economic framework’s consequences on Member States’ labour policies and on social dialogue, the author focuses on the recent review of Italian labour policies, performed by European Commission as part of the European Semester
Ionic Diffusion in Spherified Calcium Alginate Gels: A Laboratory Experiment
No full textDilute water solutions of sodium alginate are used in molecular cooking and the dairy industry as thickening and gelling agents and also as edible films. Typically, they are obtained from brown algae or seaweeds and form stable gels in the presence of calcium ions. Calcium alginate gels can be easily prepared in the form of small solid spheres by dropping, with a syringe or a pipette, the sodium alginate solution into a water bath of calcium ions (“direct method”). After rinsing the calcium alginate spheres, fully or just partially jellified, their external pH can be easily regulated using ordinary acid and/or basic solutions. The chapter describes in detail the various steps of the procedure adopted for the preparation of calcium alginate spheres and for detecting the diffusion of protonated water inside them by observing the colour change of a suitable pH indicator contained in the spheres
Studio del pathway della necroptosi in modelli cellulari umani della malattia di Gaucher
No full textINTRODUZIONE/BACKGROUND: La malattia di Gaucher (GD) è un disordine monogenico caratterizzato da un ampio spettro di manifestazioni fenotipiche. Le mutazioni causative interessano il gene GBA1, codificante per l’enzima β-glucocerebrosidasi. Vitner e colleghi hanno mostrato come la modulazione del pathway della necroptosi migliori la sintomatologia sistemica e neuronale in un modello murino della malattia ipotizzandone un ruolo chiave nell’attivazione della risposta infiammatoria macrofagica e microgliale.
METODI: Il modello di studio sfrutta due linee cellulari umane: MOLM-13 (leucemia mieloide acuta) e U87-MG (glioblastoma). Il deficit metabolico è stato indotto attraverso il conduritol B epoxide (CBE), un inibitore irreversibile della β-glucocerebrosidasi. Le linee sono state trattate con CBE ad una concentrazione di 250μM per 3 o 6 giorni. La valutazione dell’espressione dei fattori chiave del pathway della necroptosi è stata condotta attraverso RealTimePCR. L’analisi dei livelli di espressione è stata eseguita tramite unpairedt test.
RISULTATI: Il livello di espressione di RIP1, chinasi che media l’innesco della necroptosi, risulta aumentato in maniera statisticamente significativa nelle cellule trattate con CBE rispetto ai controlli. L’aumento è evidente già dopo 3 giorni nelle MOLM-13 (p-value=0.05), con un incremento dell’effetto a 6 giorni (p-value=0.02). Nelle U87-MG la differenza diventa rilevante e significativa dopo 6 giorni di trattamento (p-value=0.03).
DISCUSSIONE: Il ruolo della necroptosi nella patogenesi e nel decorso della GD è stato recentemente proposto in uno studio condotto su modello murino. Nel presente lavoro abbiamo evidenziato come anche su linee cellulari umane Gaucher-like si osserva un’iperattivazione di questa via rispetto ai controlli. Modelli più accurati, tra cui quello delle cellule staminali pluripotenti indotte saranno utilizzati per validare queste evidenze e studiare con tecniche di gene editing applicazioni traslazionali
Growth and Tracheogenesis are Separable Traits in Drosophila Cancers
No full textDrosophila clonal cancer models provide an excellent contribution to the study of the molecular basis of tumourigenesis. A number of human cancer hallmarks are indeed functionally conserved; among them, overgrowth and vessel remodelling are particularly relevant to primary mass formation and cell dissemination throughout the organism.
We have previously identified MYC as a Hippo downstream target in Drosophila and demonstrated that cells with defects in polarity genes require MYC expression to overwhelm wild-type neighbours and develop into malignant masses. Recent data from our lab also showed that neo-tracheogenesis does occur in Drosophila cancers, and it is either functionally or molecularly analogous to mammalian tumour neo-angiogenesis.
Here I extended on previous work showing that, in Drosophila epithelial tumours, mass expansion and tracheogenesis are separable traits, dependent on MYC and FOS activity respectively. These two transcription factors are found at the intersection of the Hippo, JNK and Ras/MAPK signalling cascades, which are recognised as central actors in cancer progression
Lavorare per la rivoluzione. Un'impresa commerciale tra Italia e Cina
No full textThe volume collects the biographical testimony of Fabio Matteini who, starting from the ’60s, undertook an import activity of Chinese handcra products with the aim of supporting the political and cultural initiative of the Edizioni Oriente of Milan, the main center for the spread of Maoism in Italy. The testimony is accompanied by a prefatory essay by Gilda Zazzara on Matteini work culture and by a selection of photographs taken by the author during the years of the Cultural Revolution, chosen and introduced by Silvia Calamandrei
Messa a punto di modelli cellulari umani per lo studio della malattia di Gaucher
No full textLa malattia di Gaucher è un disordine monogenico caratterizzato dal deficit dell’enzima β-glucocerebrosidasi. Dal momento che l’innesco aberrante di meccanismi infiammatori cellulari è un aspetto peculiare della malattia, ci siamo concentrati sullo studio del pathway della necroptosi, forma di morte cellulare programmata dettata dall’infiammazione. Dall’analisi dell’espressione genica e dalla valutazione dei livelli proteici in modelli cellulari Gaucher-like, ottenuti tramite inibizione enzimatica, abbiamo evidenziato come la chinasi RIP1, primo effettore della via di segnalazione sia iperattivato nello stato patologico. Per disporre di un sistema d’analisi più accurato stiamo mettendo a punto modelli che sfruttano cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) derivate da paziente e donatore sano. Tramite gene editing la più comune mutazione puntiforme causante la malattia (N370S), è stata inserita in iPSCs derivate da donatore sano. Le cellule sono state trasfettate, tramite nucleofezione, con il plasmide pSpCas9(BB)-2A-Puro codificante per la Cas9 e per una guida a RNA in grado di indirizzarne il taglio sito-specifico. La sequenza stampo per l’inserimento della mutazione è stata introdotta sotto forma di DNA a singolo filamento. La presenza della mutazione è stata verificata tramite PCR effettuata con primer specifici su pool di cellule trasfettate.
Parallelamente, da cellule mononucleate del sangue periferico di un paziente Gaucher con mutazione N370S/L444P sono state ottenute iPSCs grazie a trasduzione con i vettori virali Sendai codificanti per i fattori di riprogrammazione: Klf4, cMyc e KOS.
Il monitoraggio del differenziamento verso destino ematopoietico sarà portato avanti concentrandosi nello specifico sul tipo cellulare macrofagico in quanto maggior target dell’accumulo sfingolipidico caratterizzante la malattia
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