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Lípidos de biomembranas
Get PDFA l presente no hay una definición del término lípido que sea aceptada universalmente, en general se describe a los lípidos como sustancias de origen natural que son solubles en solventes orgánicos como el Cl3CH, éter dietílico, hexanos y alcoholes. Este concepto excluiría a los compuestos producidos por síntesis y a otros compuestos (esteroides, carotenoides, terpenos y ácidos biliares) que también son reconocidos como lípidos. Christie (1) ha propuesto una definición de lípidos: Los lípidos son ácidos grasos y sus derivados y aquellas sustancias relacionadas biosintéticamente o funcionalmente a esos compuestos. Por otra parte en el libro «A lipid glossary»(2), se propone una definición de lípidos bastante aproximada a la de Christie: Los lípidos son compuestos basados en ácidos grasos o sustancias relacionadas con los mismos como los correspondientes alcoholes o las bases de esfingosina. Esta definición incluye la mayor parte de los grupos de compuestos generalmente reconocidos como lípidos. Para tener una idea del amplio grupo de compuestos que comprende esta definición, veamos qué sustancias incluye: Los ácidos grasos (AG), alcoholes y aldehídos se presentan naturalmente en forma combinada. A menudo se encuentran como ésteres y forman amidas en los esfingolípidos. Los AG se encuentran unidos al glicerol formando mono, di y triacilglicéridos o en combinación con una unidad estructural adicional formando los fosfolípidos, glicosidiacilgliceroles y los éter-lípidos. Los AG pueden estar esterificados con esteroles (ésteres de esteroles) y con alcoholes de cadena larga (ceras) en lugar del glicerol. Existe otra forma de clasificar a los lípidos que es aplicable en la separación cromatográfica de los mismos: Lípidos simples: son aquellos cuya hidrólisis produce al máximo dos tipos de productos primarios por mol. Ejemplo triacilglicéridos (TG), esteroles (colesterol) y ésteres de esteroles. Capítulo1 22 Lípidos complejos: son aquellos cuya hidrólisis produce tres o más productos primarios por mol. Ejemplo: fosfolípidos (FL) y glicolípidos (GL). Una forma adicional de clasificarlos es como lípidos neutros y polares: Lípidos neutros: son aquellos lípidos que no poseen átomos cargados. Ejemplo: TG, esteroles (colesterol) y ésteres de esteroles (sinónimo de lípidos simples). Lípidos polares: son aquellos lípidos que poseen grupos polares o cargados (PO4 3-, SO4 2-, etc). Ejemplo: FL, GL, etc. (sinónimo de lípidos complejos). Veamos ahora una clasificación de lípidos neutros y polares provenientes de tejidos animales y de plantas: Lípidos neutros 1. mono, di y triacilgliceroles. 2. ácidos grasos libres y metil ésteres de AG. 3. colesterol y ésteres de colesterol. 4. alcoholes provenientes de AG. 5. ceras (ésteres de alcoholes de cadena larga y AG). Lípidos polares 1. fosfolípidos acídicos: 1. ácido fosfatídico. 2. fosfatidilglicerol. 3. difosfatidilglicerol (cardiolipina). 2. fosfolípidos: 1. fosfatidilcolina y lisofosfatidilcolina. 2. fosfatidiletanolamina y lisofosfatidiletanolamina. 3. fosfatidilserina y lisofosfatidilserina. 4. fosfatidilinositol. 5. fosfonolípidos. 3. glicolípidos: 1. monogalactosil diacilglicerol. 2. digalactosil diacilglicerol. 4. esfingolípidos 1 esfingomielina y otros. 2 ceramidas. 3 monoglicosilceramidas (cerebrósidos). 4 di, tri y tertraglicosilceramidas (globósidos y fucósidos). 5 sulfátidos. Todos los lípidos polares son de naturaleza anfipática, es decir, su estructura contiene una región polar y otra no polar. Son también anfipáticos algunos lípidos neutros como el colesterol libre y los ácidos grasos libres, debido a que contienen grupos polares pequeños (-OH y –COOH, respectivamente) en su estructura...Fil: Rodriguez, Joaquin Valentin. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Técnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiología Clínica y Aplicada; ArgentinaFil: Cravero, Raquel Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Química Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Química Rosario; ArgentinaFil: Gallo, Carla. Universidad Peruana Cayetano Heredia. Facultad de Ciencias y Filosofía
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Design of a Simple Slow Cooling Device for Cryopreservation of Small Biological Samples
Get PDFBACKGROUND: Slow cooling is a cryopreservation methodology where samples are cooled to its storage temperature at controlled cooling rates. OBJECTIVE: Design, construction and evaluation of a simple and low cost device for slow cooling of small biological samples. MATERIALS AND METHODS: The device was constructed based on Pye’s freezer idea. A Dewar flask filled with liquid nitrogen was used as heat sink and a methanol bath containing the sample was cooled at constant rates using copper bars as heat conductor. RESULTS: Sample temperature may be lowered at controlled cooling rate (ranging from 0.4ºC/min to 6.0ºC/min) down to ~-60ºC, where it could be conserved at lower temperatures. An example involving the cryopreservation of Neuro-2A cell line showed a marked influence of cooling rate over post preservation cell viability with optimal values between 2.6 and 4.6°C/min. CONCLUSION: The cooling device proved to be a valuable alternative to more expensive systems allowing the assessment of different cooling rates to evaluate the optimal condition for cryopreservation of such samples.Fil: Juan de Paz, Leonardo. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Técnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiología Clínica y Aplicada; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; ArgentinaFil: Robert, María Celeste. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Técnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiología Clínica y Aplicada; ArgentinaFil: Graf, Daniel Adolfo. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Técnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiología Clínica y Aplicada; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; ArgentinaFil: Guibert, Edgardo Elvio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Técnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiología Clínica y Aplicada; ArgentinaFil: Rodriguez, Joaquin Valentin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Técnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiología Clínica y Aplicada; Argentin
A device to record ultra-rapid cooling profiles
Get PDFThis work deals with the construction and performance of a measuring system capable of estimating temperature at sufficiently high speed (up to 1000 samples/sec). Due to its simple design and the utilization of standard materials, it could serve to recording the cooling profile of ultra-rapid procedures. An immersion device was also developed with the purpose of normalize the penetration speed of the sample in the LN2. The device allows also the comparative analysis of different cooling profiles. The system consists of an immersion device of the sample in the cooling agent, a temperature measurement system developed by Kleihans F and a laptop computer. To test the system, we recorded the cooling profiles of 10 L of distilled water and 6 M glycerol solution, obtaining a cooling rate of 8732 °C.min-1 and 4441 °C.min-1 respectively. Also we determine a cooling rate of 204.012 °C.min-1 during the immersion of the thermocouple assembly in LN2. Although, the same device, with small technical modifications related to the handling of the sample, could be used to evaluate the recovery from LN2 temperature to room temperature (re-warming).Fil: Juan de Paz, Leornardo. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; ArgentinaFil: Graf, Daniel Adolfo. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; ArgentinaFil: Scandizzi, Angel Luis. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; ArgentinaFil: Guibert, Edgardo Elvio. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rodriguez, Joaquin Valentin. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin
Biopreservation of Hepatocytes: Current Concepts on Hypothermic Preservation, Cryopreservation, And Vitrification
Get PDFIsolated liver cells (primarily isolated hepatocytes) have found important applications in science and medicine over the past 40 years in a wide range of areas, including physiological studies, investigations on liver metabolism, organ preservation and drug de-toxification, experimental and clinical transplantation. An integral component of many of these works is the need to store the isolated cells, either for short or long-term periods. This review covers the biopreservation of liver cells, with a focus on the history of liver cell biopreservation, the application of hypothermia for short-term storage, standard cryopreservation methods for isolated hepatocytes, the biopreservation of other types of liver cells, and recent developments such as vitrification of hepatocytes. By understanding the basis for the different approaches, it will be possible to select the best options for liver cell biopreservation in different applications, and identify ways to improve preservation protocols for the future.Fil: Fuller, Barry J.. University College London; Estados UnidosFil: Petrenko, Alexander Y.. Ukraine Academy of Sciences; UcraniaFil: Rodriguez, Joaquin Valentin. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Somov, Alexander Y.. Ukraine Academy of Sciences; UcraniaFil: Balaban, Cecilia Lucía. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Guibert, Edgardo Elvio. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin
Extended cold storage of cultured hepatocytes impairs endocytic uptake during normothermic rewarming
Get PDFDuring hypothermic preservation of cells (0-4°C), metab¬olism is diminished and energy-dependent transport processes are arrested. The effect of hypothermic preservation of hepatocytes in endocytic transport following rewarming has not been previously reported. We evaluated the uptake of EGF (Epidermal Growth Factor) ligand conjugated to fluorescent Quantum Dots (QDs) probes in rat hepatocytes after 24 and 72 h cold storage in University of Wisconsin (UW) solution at 4°C. QDs uptake was visualized during rewarming to 37°C under air or, in a second approach, at the end of rewarming under 5% CO2. After 24 h in UW solution, QDs were internalized under both rewarming conditions similar to non-preserved hepatocytes and cells maintained a normal cytoskeleton distribution. However, in hepatocytes preserved 72 h none of the cells internalized QDs, which remained bound to the membranes. After rewarming, this group showed diminished actin staining while viability was maintained at ~70%. Our results present evidence that, hypothermic preservation for 72 h in UW solution at 4°C does not prevent EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) activation but irreversibly impairs endocytic uptake upon EGF stimulation; presumably due to actin cytoskeleton disassembling. Our approach can be applied on other membrane receptor systems and with other hypothermic preservation solutions to understand the effect of cooling in endocytic transport and to determine the optimal cold storage period.Fil: Hovanyecz, P.. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; ArgentinaFil: Guibert, Edgardo Elvio. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; ArgentinaFil: Pellegrino, Jose Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Instituto de Fisiología Experimental (i); ArgentinaFil: Rodriguez, Joaquin Valentin. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; ArgentinaFil: Sigot, Valeria. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; Argentin
Estimation of interferences in the determination of fructosamine of feline and canine serum
Get PDFLa concentración de fructosamina en suero es útil para monitorear el control de la glucemia en un período precedente.En muestras de sangre, la presencia de hemoglobina y bilirrubina pueden causar interferencias en técnicas analíticas diagnósticas. Por ello, el objetivo de este trabajo fue evaluar la posible interferencia al medir fructosamina sérica de gatos y perros clínicamente sanos. Se construyeron interferogramas, agregando concentraciones crecientes del posible interferente a pools de sueros de ambas especies. Se estudiaron concentraciones de hemoglobina desde 0.19 a 7.5 g/l en felinos, y de 0.16 a 6.10 g/l en caninos. Para bilirrubina, desde 6 a 600 mg/l, en ambas especies. Los resultados mostraron interferencia positiva y aditiva de hemoglobina en felinos (≥1.60 g/l) e interferencia negativa en caninos (≥1.20 g/l). En ambas especies se observaron interferencias positivas y aditivas para bilirrubina en el rango de concentraciones estudiadas (≥30 mg/l para felinos y ≥150 mg/l para caninos).The fructosamine serum concentration reflects the degree of glycemic control obtained during a preceding period. Usually, the presence of hemoglobin or bilirrubin in blood samples, could cause interferences in the laboratory analytical assays.Thus, we investigated the possible interferences on fructosamine determinations in serum from healthy cats and dogs. To testing and quantify the interference, we construct interferograms adding increased concentrations of hemoglobin or bilirrubin to serum pools of cats or dogs. We tested serum hemoglobin concentrations from 0.19 to 7.5 g/l in feline sera and 0.16 to 6.10 g/l in canine sera. The bilirrubin testing was done from 6 to 600 mg/l in both species sera. The results had shown a hemoglobin positive and additive interference in feline sera (≥1.60 g/l) and a negative interference in canine sera (≥1.20 g/l). In addition both species had shown positive and additive bilirrubin interferences (≥30 mg/l for feline sera and ≥150 mg/l for canine sera).Fil: Colla, Cora. Universidad Nacional de Rosario; ArgentinaFil: Rodriguez, Joaquin Valentin. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Tecnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiologia Clinica y Aplicada; ArgentinaFil: Rabe, Gabriela. Universidad Nacional de Rosario; ArgentinaFil: Patalano, Claudio. Universidad Nacional de Rosario; ArgentinaFil: Perassi, María Eugenia. Universidad Nacional de Rosario; ArgentinaFil: Bordone, Facundo. Universidad Nacional de Rosario; ArgentinaFil: Cerruti, Jorgelina. Universidad Nacional de Rosario; Argentin
A simple and reliable refractometric method to determine the total solids concentration of the cervico-vaginal bovine mucus samples
Get PDFCervico-vaginal mucus (CVM) is a viscoelastic substance continuously produced by secretory cells of the endocervix and the vagina of cows. Its physicochemical composition varies depending on the hormonal status of the estrous cycle. In veterinary medicine refractometry is a widely diffused technique to determine total solids (TS) content of biological samples, but there are not published data of CVM total solids from refractometric measures. Refractometric TS determination contributes to the qualitative constituents analysis of CVM, additionally it is an easier and more inexpensive technique than gravimetric TS determination. The main goal of the present paper was to validate a refractometric method to estimate TS concentration of the soluble fraction of CVM samples. Samples were collected from seventy-three Holando Argentino cows of Santa Fe province farms in Argentina. Cows were classified in three experimental groups: healthy, subclinical (SE) and clinical endometritis (CE) group. To achieve a solubilisation protocol for CVM samples, four Triton™ X-100 concentrations were tested. Refractive index (RI) and gravimetric total solid (gTS) concentration of solubilised samples were determined for the three experimental groups. A mathematical equation was determined with the experimental data from the healthy group, in order to obtain calculated total solid concentration (cTS) from refractivity (R) values. To validate the RI method for CVM samples, cTS concentrations were compared with gTS concentrations from endometritis group samples. Triton™ X-100 0.01% (V/V) improved CVM samples handling and did not change physicochemical parameters (gTS, Na+ and K+ concentration, and RI values). The linear regression equation obtained was: cTS (g/dL) = (R – 0.67)/16.2, r2 = 0.91. Correlation between gTS and cTS concentration was: r = 0.97 for SE group and r = 0.97 for CE group. The homogenization protocol allowed the measurement of physicochemical parameters without altering their values. A high correlation coefficient between cTS and gTS postulates refractometry as an accurate method to determine TS concentration for solubilised CVM samples.Fil: Savia, Caren Luciana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Osorio, Juliana Soledad. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Técnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiología Clínica y Aplicada; ArgentinaFil: Rodriguez, Joaquin Valentin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Técnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiología Clínica y Aplicada; ArgentinaFil: Guibert, Edgardo Elvio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Secretaria de Ciencia y Técnica. Centro Binacional de Investigación en Criobiología Clínica y Aplicada; ArgentinaFil: Rinaudo, Agustín. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Get PDFThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
Variations on the Author
Get PDF“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
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