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Avaliação da atividade leishmanicida do extrato aquoso de própolis verde e de sua associação com o antimoniato de meglumina livre ou lipossomal em camundongos BALB/c infectados com Leishmania infantum.
No full textPrograma de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.O presente estudo avaliou a utilização do extrato aquoso de própolis verde (EAPV) e de sua associação ao antimoniato de meglumina livre ou encapsulado em lipossomas para o tratamento da leishmaniose visceral (LV) em modelo murino. In vitro, avaliou-se o efeito do EAPV e de sua associação com o antimoniato de meglumina livre sobre a viabilidade de células J774-A1. O EAPV não apresentou toxicidade nas concentrações testadas e foi capaz de reduzir o efeito tóxico do antimoniato de meglumina livre. Para o experimento in vivo, camundongos BALB/c isogênicos foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum (cepa C43). Após duas semanas de infecção, os animais foram divididos em sete grupos (n=8) e tratados com: (1) dose única de tampão fosfato por via intraperitoneal (ip), (2) dose única de antimoniato de meglumina livre (AM) (30 mg/Kg) ip., (3) dose única de lipossomas vazios ip, (4) dose única de antimoniato de meglumina lipossomal (30 mg/Kg) ip., (5) dose diária de EAPV (500 mg/kg/dose) durante 14 dias via oral; (6) associação do EAPV (esquema terapêutico igual ao grupo 5) ao AM (30 mg/kg) ip. e (7) associação do EAPV (esquema terapêutico igual ao grupo 5) ao antimoniato de meglumina lipossomal (30 mg/kg) ip. Duas semanas após o tratamento, os animais foram eutanasiados e avaliou-se a carga parasitária no fígado e baço pelo método de diluição limitante. Além disso, foi realizada análise do perfil de células do baço por citometria de fluxo, toxicidade cardíaca, hepática e renal pela dosagem de marcadores bioquímicos (CKMB, TGO/ALT, TGP/ASP, creatinina) e a histopatologia do fígado e baço. O tratamento com EAPV reduziu a carga parasitária no fígado (44%), mas não no baço. Além disso, verificou-se uma redução na carga parasitária após tratamento com antimoniato de meglumina encapsulado em lipossoma no fígado e baço de aproximadamente 41%. Não foi observada diminuição na carga parasitária após tratamento com antimoniato de meglumina livre em nenhum dos órgãos avaliados. A administração concomitante do EAPV e antimoniato de meglumina livre reduziu a carga parasitária no fígado (24,4%), mas não no baço. No entanto, a administração concomitante do EAPV e antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas reduziu a carga parasitária tanto no fígado quanto no baço, porém no mesmo nível observado pelo tratamento com antimoniato de meglumina lipossomal. Os resultados demonstraram ausência de alteração no padrão fenotípico de células do baço por citometria de fluxo e na função hepática, cardíaca e renal por análises bioquímicas. As análises histopatológicas mostraram que a administração do EAPV assim como do AM lipossomal isoladamente ou em associação ao EAPV levou a uma melhor preservação dos tecidos hepático e esplênico quando comparados aos demais grupos experimentais. Os resultados desse trabalho permitiram concluir que o EAPV foi capaz de provocar uma redução da carga parasitária hepática no mesmo nível observado com dose única de AM lipossomal. No entanto sua associação com antimoniato de meglumina lipossomal foi capaz de reduzir a carga parasitária no fígado e baço de forma semelhante à formulação de antimoniato de meglumina lipossomal isolada. As drogas testadas não causaram alterações no perfil das células do baço bem como não apresentaram toxicidade para os órgãos avaliados.The present study evaluated the use of aqueous extract of green propolis (AEGP) and its association with free or liposomal meglumine antimoniate for the treatment of murine visceral leishmaniasis (VL). In vitro, it was evaluated the effect of AEGP on the viability of J774-A1 cells. It was observed that the AEGP showed no toxicity at the concentrations tested and it reduced the toxic effects of free meglumine antimoniate. Isogenic BALB/c mice were intravenously inoculated with 1 x 107 Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes (C43 strain). Two weeks post infection, the animals were divided into seven groups (n=8) and treated intraperitoneally, as a single dose, with either (1) phosphate buffer, (2) Sb(V) at 30 mg/kg, (3) empty liposomes, (4) liposomal Sb(V) – at 30 mg/kg, (5) AEGP at 500 mg/kg (oral, 14 days), (6) association of AEGP (500 mg/kg) with Sb(V) at 30 mg/kg or (7) association of AEGP (500 mg/kg) with Sb(V)-entrapped liposomes at 30 mg/kg. Two weeks after treatment, animals were euthanized and the parasite load associated to the liver and spleen was evaluated through the limiting dilution technique. Immunophenotyping of spleen cells was performed using flow cytometry. Enzyme activities in the serum were used to monitor hepatic, kidney and cardiac functions. Histopathological examinations of the liver and spleen were also conducted. The administration of AEGP reduced parasitic load in the liver, but not in spleen. There was a reduction in parasite load after treatment with liposomal meglumine antimoniate in the liver and spleen 41%. There was no decrease in parasite load after treatment with free meglumine antimoniate in any organ evaluated. Concomitant administration of AEGP and free meglumine antimoniate reduced the parasite load in the liver but not in spleen. However, concomitant administration of AEGP and meglumine antimoniate encapsulated in liposomes reduced the parasite load in both organs. Our results did not reveal any significant alteration in the profile of spleen cells by flow cytometry or in the liver, heart and kidney functions by biochemical analyzes. The histopathological analysis showed that administration of AEGP and/or liposomal Sb(V) was able to protect the liver and spleen tissues when compared to other groups. The results of this study indicate that the AEGP was able to reduce the parasite load only in the liver, however its association with meglumine antimoniate encapsulated in liposomes was able to reduce the parasite load in the liver and spleen. The drugs tested did not cause changes in the profile of spleen cells and showed no organ toxicity evaluated
Efeito do tratamento lipossomal com antimoniato de meglumina em camundongos infectados com Leishmania (Leishmania) chagasi : análise das vias de administração e da resposta ao fármaco em modelo de desnutrição.
No full textA leishmaniose visceral (LV) é considerada pela Organização Mundial da Saúde (OMS) uma das seis doenças endêmicas de maior relevância no mundo. Um dos principais fatores de risco para o estabelecimento e o agravamento da LV é a desnutrição protéico calórica (DPC). O espectro de drogas disponíveis para o tratamento da LV é restrito e apresenta diversas limitações em termos de toxicidade, eficácia, preço e esquemas terapêuticos. Neste trabalho, o antimoniato de meglumina (AM), umas das principais drogas utilizadas para o tratamento da leishmaniose, foi submetida ao processo de encapsulação em lipossomas. Devido a sua tendência natural de serem capturados pelas células do sistema fagocitário mononuclear, os lipossomas direcionam o fármaco para os órgãos alvo da infecção: fígado, baço e medula óssea, melhorando o aproveitamento da droga encapsulada. Diante disso, este estudo objetivou a avaliação da eficácia do fármaco leishmanicida antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas administrado por duas vias, intraperitoneal e endovenosa, para o tratamento de camundongos BALB/c infectados com L. chagasi. Os efeitos histopatológicos da infecção e do tratamento também foram avaliados em face ao quadro de desnutrição por meio da administração de uma dieta hipoprotéica contendo 4,5% de caseína. Os resultados obtidos mostraram que o tratamento utilizando dose única do AM encapsulado em lipossomas administrado na segunda semana de infecção foi eficaz em reduzir significativamente a carga parasitária do fígado, eliminar os parasitos do baço, e auxiliar indiretamente na redução do número e da área dos granulomas hepáticos, bem como no reestabelecimento dos padrões de normalidade das fibras colágenas do tipo I e III do fígado dos camundongos após três semanas do tratamento. A administração intraperitoneal do fármaco apresentou melhor viabilidade e eficácia em relação à via endovenosa. Devido a DPC observou-se uma elevada carga parasitária do fígado e do baço nos animais desnutridos em relação aos controles, contudo o tratamento dos animais desnutridos com AM lipossomal foi capaz de reduzir a carga parasitária hepática e eliminar o parasito no baço com a mesma eficácia que a encontrada nos animais controle submetidos ao mesmo tratamento. A formação granulomatosa e a deposição das fibras colágenas também foram afetadas pelo processo de desnutrição, onde o número e área dos granulomas hepáticos e a densidade das fibras do tipo III e do tipo I encontraram-se reduzidos, além da presença de maiores proporções de fibras do tipo I nestes grupos. O tratamento dos animais desnutridos com AM encapsulado em lipossomas não alterou a formação dos granulomas e não foi capaz de auxiliar no reestabelecimento do padrão das fibras colágenas ao padrão observado nos animais desnutridos não infectados.Visceral leishmaniasis (VL) is recognized as one of the six endemic diseases of major relevance in the world by the World Health Organization (WHO). Of the several risk factors, Protein Energy Malnutrition (PEM) is considered as one of the most important factors to determine the establishment and severity of the disease. Very few drugs are available for the treatment of VL and are known to have several limitations in terms of their toxicity, efficacy, price and drug regimens. In this work, meglumine antimoniate (MA), one of the main drugs used as therapy to leishmaniasis, was encapsulated in liposomes. Due to its natural tendency to be captured by the mononuclear phagocytic system cells, liposomes trigger the drug to the target organs of infection: liver, spleen and bone marrow, optimizing the utilization of the drug encapsulated. Therefore, this study aimed to evaluate the effectiveness of the leishmanicidal drug meglumine antimoniate encapsulated in liposomes, administered by two routes, intraperitoneally and intravenously for the treatment of BALB/c mice infected with L. chagasi. The histopathological effects of infection and treatment were also assessed by a clinical picture of malnutrition through the administration of a low-protein diet containing 4.5% casein. Our results showed that treatment using a single dose of MA encapsulated in liposomes, administered in the second week of infection, was effective in reducing the parasite load in liver significantly, and eliminating them from spleen. Further, the drug helped to reduce the number and area of hepatic granulomas, and in reestablishment the normal pattern of collagen fibers type I and III of the liver of BALB/c mice after three weeks of treatment. The intraperitoneal administration of the drug showed better viability and effectiveness compared to intravenously. Because of the PEM, a high parasite load of the liver and spleen in malnourished animals was found when compared to controls, however the treatment of malnourished animals with liposomal MA was able to reduce liver parasite burden and eliminate the parasite in the spleen with the same effectiveness as found in control animals underwent the same treatment. Granulomatous formation and deposition of collagen fibers were affected by the process of malnutrition that was characterized by smaller number and size of hepatic granulomas and smaller density of the fibers of type III and type I. Additionally, there was a larger presence of the type I fiber. The treatment of malnourished animals using MA encapsulated in liposomes don´t changed the granulomas formation and was not able to assist in the reestablishment of the pattern of collagen fibers to the pattern observed in uninfected malnourished animals
Avaliação da atividade de nanocápsulas com diferentes características superficiais sobre a resposta imune de células J774.A1 e sobre a infecção por Leishmania infantum.
No full textAs nanocápsulas são sistemas vesiculares em que a substância é confinada em uma cavidade preenchida com óleo ou emulsão e rodeada por uma membrana polimérica única. A influência da modificação da solubilidade, tamanho, composição química e característica superficial de nanocápsulas sobre a sua biocompatibilidade e biodistribuição no organismo já é bem conhecida. No entanto, o efeito dessas propriedades sobre o sistema imunológico ainda foi pouco explorado. Diante disso, este estudo objetivou avaliar o efeito de nanocápsulas com diferentes características superficiais (nanocápsulas poliméricas derivadas do ácido lático - PLA, nanocápsulas de PLA revestida com polietilenoglicol - PLA-PEG e nanocápsulas de PLA revestida com quitosana - PLA-QUI) sobre a resposta imune de células J774.A1 e sobre a infecção por Leishmania infantum. Os resultados obtidos demonstraram que essas nanocápsulas apresentam atividade moduladora sobre a produção de NO, TNF-α e IL-10. Na presença do soro fresco de camundongos BALB/c, essa atividade pôde ser observada em concentrações mais baixas das nanocápsulas. Além disso, os experimentos de pré-tratamento das células J774.A1 com as nanocápsulas mostraram que essas apresentaram a capacidade de promover alteração na resposta imune das células J774.A1 frente a um determinado estímulo. A análise por microscopia confocal mostrou que as nanocápsulas de PLA e PLA-PEG foram internalizadas pelas células J774.A1, tanto na presença como na ausência de soro. Essas nanocápsulas induziram aumento significativo da produção de IL-10 com consequente diminuição na produção de TNF-e NO. A quantificação por cromatografia líquida de alta eficiência demonstrou que as nanocápsulas de PLA foram mais internalizadas pelas células J774.A1 do que as nanocápsulas de PLA-PEG e PLA-QUI. A avaliação do efeito in vitro das nanocápsulas de PLA, PLA-PEG sobre a resposta imune de células J774.A1 infectadas com Leishmania infantum demonstrou que essas promoveram aumento na produção de IL-10 o que favoreceu a infecção causada pelo parasito. Considerando esses resultados, observa-se que as nanocápsulas de PLA e PLA-PEG atuam sobre as células J774.A1 de forma a promover a ativação de uma resposta anti-inflamátória. Ao contrário do que foi observado para as nanocápsulas de PLA e PLA-PEG, as nanocápsulas de PLA-QUI induziram diminuição na produção de IL-10 e aumento na produção de TNF-α e NO, ativando dessa forma uma resposta inflamatória. No entanto, essas nanocápsulas não tiveram efeito sobre a resposta imune de células J774.A1 infectadas com L. infantum. Através de seu efeito imunomodulador, as nanocápsulas de PLA, PLA-PEG e PLA-QUI podem ser utilizadas para atuar em sinergismo com determinadas drogas, podendo assim aumentar a eficiência de tratamento para muitas doenças.Nanocapsules are composed by a polymeric wall and surfactants surrounding an oily core in which lipophilic substances can be associated. The importance of modification of the solubility, size, chemical composition and surface characteristics of nanocapsules on their biocompatibility and biodistribution in the body is well known. Nevertheless, the effect of these properties on the immune system has been poorly explored. Thus, this study aimed to evaluate the effect of nanocapsules with different surface characteristics, on the immune response of J774.A1 macrophage cell line and on infection by Leishmania infantum. The results showed that these nanocapsules modulate the production of NO, TNF-α and IL-10 by J774.A1 cells. In the presence of fresh mice serum, this activity could be observed at lower polymeric concentrations. Analysis by confocal microscopy showed that PLA and PLA-PEG nanocapsules were internalized by J774.A1 cells in the presence and absence of fresh mice serum. These nanocapsules induced significant increase of IL-10 with consequent decrease on NO and TNF-α production by the cells. The quantification by high performance liquid chromatography (HPLC) showed that PLA nanocapsules were more internalized than PLA-PEG and PLA-CHI nanocapsules. The in vitro evaluation of the effect of PLA and PLA-PEG nanocapsules on the immune response of J774.A1 cells infected with L. infantum demonstrated that these nanocapsules promoted an increase on IL-10, favoring the infection by the parasite. Considering these results, it was observed that PLA and PLA-PEG nanocapsules act on J774.A1 cells in order to promote an anti-inflammatory response. In contrast, the PLA-CHI nanocapsules increased the production of TNF-α, NO and decreased the production of IL-10, activating a pro-inflammatory response. However, the PLA-CHI nanocapsules had no effect on the immune response of J774.A1 cells infected with L. infantum. Through their immunomodulatory effect, PLA, PLA-PEG and PLA-CHI nanocapsules can be used to act in synergy with certain drugs and can thus increase the efficiency of treatment for many diseases
Avaliação da atividade leishmanicida do antimônio trivalente livre ou em formulação lipossomal convencional, associado ou não ao ácido ascórbico, em camundongos BALB/c infectados com Leishmania infantum.
No full textPrograma de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.O presente estudo avaliou a utilização de lipossomas convencionais como veículos vetores do antimônio trivalente, na forma de tártaro emético, bem como sua associação ao ácido ascórbico, para o tratamento da leishmaniose visceral no modelo murino. Lipossomas constituídos por distearoilfosfatidilcolina/colesterol (5:4) foram obtidos pela metodologia de congelamento/descongelamento. A caracterização da formulação mostrou tamanho aproximado de 222,5 nm, índice de polidispersão de 0,214, eficiência de encapsulação de 15%, concentração final de 4 mg SbIII/mL e cinética de liberação bifásica avaliada in vitro. Lipossomas vazios, igualmente obtidos e hidratados com tampão fosfato serviram como controle. Camundongos BALB/c com idade entre 6 e 8 semanas foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum (cepa C43) por via endovenosa. Após seis semanas de infecção, os animais foram divididos em sete grupos (n=8) e tratados por via intraperitoneal, em dose única com: (1) tampão fosfato, (2) antimônio trivalente (SbIII) - 9 mgSb/Kg, (3) lipossomas vazios, (4) lipossomas de SbIII (9 mgSb/Kg), (5) ácido ascórbico (AA) - 300 mg/kg; (6) associação do AA (300 mg/kg) ao SbIII (9 mgSb/kg) e (7) associação de AA (300 mg/kg) aos lipossomas de SbIII (9 mgSb/kg). Dez dias após o tratamento, os animais foram eutanasiados e avaliou-se: a carga parasitária no fígado, baço e medula óssea pelo método de diluição limitante; o padrão de células do baço por citometria de fluxo; a função renal, hepática e cardíaca por análises bioquímicas e o padrão histopatológico do fígado, rins e coração. Observou-se redução significativa na carga parasitária após tratamento com antimônio trivalente lipossomal no fígado, baço e medula óssea de 47%, 33% e 47%, respectivamente, indicando a capacidade do sistema de vetorização de direcionar o medicamento para esses compartimentos. A administração concomitante do AA e SbIII livre ou em formulação lipossomal não interferiu na atividade leishmanicida do SbIII. Não foi observada diminuição na carga parasitária após tratamento com antimônio trivalente livre em nenhum dos órgãos avaliados. Os resultados mostraram nenhuma alteração no padrão fenotípico de células do baço por citometria de fluxo ou nas funções hepática, cardíaca e renal por análises bioquímicas. As análises histopatológicas mostraram que a coadministração dos lipossomas de SbIII e AA foi capaz de preservar os tecidos hepático e renal quando comparados os diferentes grupos experimentais. Os resultados desse trabalho permitiram concluir que a referida preparação lipossomal representa uma alternativa terapêutica capaz de reduzir a carga parasitária nos diferentes órgãos alvo, com potencial para a eliminação do parasito na medula óssea. A coadministração do AA aos lipossomas de SbIII acarretou redução na toxicidade do SbIII. Em conjunto, nossos dados apontam os benefícios do encapsulamento do SbIII em lipossomas unilamelares demonstrados pela redução das alterações histopatológicas para fígado e rins, particularmente em combinação com AA. Acreditamos que nosso trabalho será útil para a proposição de novos regimes terapêuticos para o tratamento da leishmaniose visceral, garantindo a adesão do paciente à terapia devido à redução dos efeitos colaterais.The present study evaluated the utilization of conventional liposomes as carriers of trivalent antimony (SbIII), and its association with ascorbic acid, for the treatment of murine visceral leishmaniasis. Liposomes composed of diestearoylphosphatidylcholine and cholesterol (5:4) were obtained according to the freeze / thaw technique and hydrated in a solution of tartar emetic. Empty liposomes, hydrated in phosphate buffer, served as control vehicles. Characterization of the liposomal formulation revealed size, polydispersity index and encapsulation efficiency of 222.5 nm, 0.214 and 15%, respectively, for a formulation containing 4 mg SbIII/mL. It also displayed biphasic release kinetics in vitro. BALB/c mice, aged 6 to 8 weeks, were intravenously inoculated with 1 x 107 Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes (C43 strain). Six weeks post infection, the animals were divided into seven groups (n=8) and treated intraperitoneally, as a single dose, with either (1) phosphate buffer, (2) SbIII at 9 mg Sb/kg, (3) empty liposomes, (4) SbIII-entrapped liposomes at 9 mg Sb/kg, (5) ascorbic acid (AA) at 300 mg/kg, (6) association of AA (300 mg/kg) with SbIII at 9 mg Sb/kg or (7) association of AA (300 mg/kg) with SbIII-entrapped liposomes at 9 mg Sb/kg. Ten days after treatment, animals were euthanized and the parasite load associated to the liver, spleen and bone marrow evaluated through the limiting dilution technique. Immunophenotyping of spleen cells was performed using flow cytometry. Enzyme activities in the serum were used to monitor hepatic, kidney and cardiac functions. Histopathological examinations of the liver, kidney and heart were also conducted. After treatment with SbIII-entrapped liposomes it was observed 47%, 33% and 47%, reductions in parasite load in the liver, spleen and bone marrow, respectively, indicating the ability of such delivery system to target the active principle to these compartments. Parallel administration of ascorbic acid with either free SbIII or SbIII-entrapped liposomes did not interfere with SbIII´s leishmanicide activity. No reduction in parasite load was observed after treatment with free SbIII for any of the investigated organs. Our results did not reveal any significant alteration in the profile of spleen cells. In addition, no impairment in the hepatic, renal and cardiac functions were observed. Histopathological analyses demonstrated that the co-administration of ascorbic acid with SbIII-entrapped liposomes was able to preserve the integrity of the hepatic and kidney tissues, in comparison to those from other experimental groups. The obtained results allowed us to conclude that our proposed SbIII liposomal preparation represents a therapeutic alternative able to reduce parasite burden with the potential to eliminate parasitism at the bone marrow. Co-administration of AA and SbIII-entrapped liposomes promoted reduced toxicity of SbIII. Collectively, our data extended the proposed benefits of unilamellar liposomes carrying SbIII by demonstrating their reduced toxicity, particularly in combination with ascorbic acid to the liver and kidney tissues. We believe our investigation can be useful for the proposal of novel therapeutic regimens to successfully treat visceral leishmaniasis aiming to guarantee patient compliance whilst minimizing potential side effects
Avaliação da resposta imune de camundongos Balb/c vacinados com antígeno de Leishmania chagasi durante um período de desnutrição protéico‐calórica.
No full textA desnutrição protéico‐calórica (DPC), as deficiências dos elementos ferro e zinco e a leishmaniose visceral (LV ou calazar) constituem importantes problemas de saúde pública, os quais afetam milhões de pessoas no mundo todo. Apesar de ser amplamente aceito que a imunidade ou a susceptibilidade a doenças infecto‐parasitárias estão diretamente relacionadas com o estado nutricional do hospedeiro, os mecanismos que governam a relação entre a PEM e a LV são múltiplos e pouco explorados. Especificamente sobre os efeitos da DPC sobre a vacinação contra a LV, nenhum estudo foi encontrado. Assim, foi avaliado neste estudo os efeitos da DPC associada à deficiência de ferro e zinco na resposta imune de camundongos BALB/c induzida pela vacinação com antígeno de Leishmania chagasi administrada durante um período de deficiência nutricional. Inicialmente os animais foram divididos em dois grupos: desnutrição (alimentados com dieta contendo 3% de caseína e deficiente em ferro e zinco) e controle (alimentados com dieta contendo 14% de caseína, contendo concentrações adequadas de ferro e zinco). Após o estabelecimento da desnutrição (avaliada através do acompanhamento semanal da massa corpórea e da medição de parâmetros bioquímicos: concentração de proteínas totais, albumina, globulinas e hemoglobina), os animais receberam os tratamentos. Camundongos dos grupos controle e desnutrição foram inoculados com solução salina tamponada com fosfato (PBS), saponina (adjuvante vacinal) ou com antígeno (Ag) de L. chagasi + saponina (vacina) (três doses dos tratamentos e da vacina foram aplicadas nos animais pela via subcutânea com uma semana de intervalo). Após uma semana da vacinação, os camundongos desnutridos foram recuperados nutricionalmente e quatro semanas após a terceira dose da vacina, todos os animais foram desafiados com 1 x 107 formas promastigotas de L. chagasi pela vida endovenosa. Quatro semanas após o desafio, os camundongos foram sacrificados e a carga parasitária hepática e esplênica, bem como a produção das citocinas IFN‐γ e IL‐4 e de óxido nítrico (NO) por esplenócitos, foram determinadas. Foi observado que a vacina de Ag de L. chagasi + saponina causou uma redução significativa na carga parasitária hepática e esplênica nos animais do grupo controle (redução de 96,1% e 94,9%, respectivamente). Entretanto, nos camundongos vacinados durante a DPC, a vacina causou uma menor redução (estatisticamente significativa) na carga parasitária tanto do fígado (57,7% de redução) quanto do baço (81,4% de redução). Além disso, observou‐se que a vacina induziu uma menor produção de IFN‐γ (estatisticamente significativa) nos animais do grupo desnutrição em comparação com os animais do grupo controle. Com relação à IL‐4, foi observado que a vacina suprimiu a produção da citocina nProtein‐energy malnutrition (PEM), zinc and iron deficiency, and visceral leishmaniasis (VL or kala‐azar) are important problems of public health, which affect millions of people worldwide. Despite accepted that the immunity or susceptibility to infectious diseases is directly related with the nutritional status ofthe host, the immunologic mechanisms that govern the relationship between the PEM and VL are multiple and little explained. Specifically on the effect of combined protein, iron and zinc deficiency in the immune response induced by a vaccine against VL, no study was found. Thus, this study evaluated the effect of PEM in immune response (of BALN/c mice) induced by Leishmania chagasi antigen vaccine administrated during a period of nutritional deficiency. Initially the mice were divided into two groups: malnutrition (fed with diet containing 3% casein and deficient in iron and zinc) and control (fed with diet containing 14% casein and sufficient in iron and zinc). After malnutrition establishment (evaluated through the weekly measurement of total body weight and determination of biochemical parameters: concentration of total proteins, albumins, globulins and haemoglobin), the animals received the treatments. Control and malnutrition mice were inoculated with phosphate buffered saline (PBS), saponin (adjuvant) or with L. chagasi antigen plus saponin (vaccine) (three doses of the treatment and of the vaccine were administrated by subcutaneous rout with a one week interval). One week after vaccination, malnourished mice were nutritionally repleted and 4 weeks after the third vaccine dose, all mice were challenged with 1 × 107 L. chagasi promastigotes given intravenously in the lateral tail vein. Four weeks after challenge, mice were killed, and spleen and liver parasite load as well as the production of IFN‐γ and IL‐4 and nitric oxide (NO) by splenocytes, were determined. It was observed that L. chagasi antigen plus saponin vaccine caused a significant reduction in parasite load in liver and spleen from mice of control roup (94.9% and 96.1% of reduction, respectively). However, in mice vaccinated during the PEM, the vaccine caused a smaller reduction (statistical significant) in parasite load in liver (57.7% of reduction) and in spleen (81.4% of reduction). Furthermore, it was observed that vaccine induced a smaller production of IFN‐γ (statistical significant) in malnutrition mice in comparison with mice from control group. With regard to IL‐4, it was observed that the vaccine suppressed the cytokine production in mice from control and malnutrition groups in comparison with mice inoculated withPBS. NO was not detected by the method used. These data suggest that PEM associated with iron and zinc deficiency may alter immune response of BALB/c mice induced by L. chagasi + saponin vaccine, even after nutritional repletion. Considering that VL may be one of a few parasitic diseases that are probably controllable by vaccination and that the responseto prophylactic vaccine depends on nutritional status, this study seeks to contribute with the understanding of the relationship between PEM and VL
Efeito do tratamento lipossomal com antimoniato de meglumina em camundongos infectados com Leishmania (Leishmania) chagasi : análise das vias de administração e da resposta ao fármaco em modelo de desnutrição.
No full textA leishmaniose visceral (LV) é considerada pela Organização Mundial da Saúde (OMS) uma das seis doenças endêmicas de maior relevância no mundo. Um dos principais fatores de risco para o estabelecimento e o agravamento da LV é a desnutrição protéico calórica (DPC). O espectro de drogas disponíveis para o tratamento da LV é restrito e apresenta diversas limitações em termos de toxicidade, eficácia, preço e esquemas terapêuticos. Neste trabalho, o antimoniato de meglumina (AM), umas das principais drogas utilizadas para o tratamento da leishmaniose, foi submetida ao processo de encapsulação em lipossomas. Devido a sua tendência natural de serem capturados pelas células do sistema fagocitário mononuclear, os lipossomas direcionam o fármaco para os órgãos alvo da infecção: fígado, baço e medula óssea, melhorando o aproveitamento da droga encapsulada. Diante disso, este estudo objetivou a avaliação da eficácia do fármaco leishmanicida antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas administrado por duas vias, intraperitoneal e endovenosa, para o tratamento de camundongos BALB/c infectados com L. chagasi. Os efeitos histopatológicos da infecção e do tratamento também foram avaliados em face ao quadro de desnutrição por meio da administração de uma dieta hipoprotéica contendo 4,5% de caseína. Os resultados obtidos mostraram que o tratamento utilizando dose única do AM encapsulado em lipossomas administrado na segunda semana de infecção foi eficaz em reduzir significativamente a carga parasitária do fígado, eliminar os parasitos do baço, e auxiliar indiretamente na redução do número e da área dos granulomas hepáticos, bem como no reestabelecimento dos padrões de normalidade das fibras colágenas do tipo I e III do fígado dos camundongos após três semanas do tratamento. A administração intraperitoneal do fármaco apresentou melhor viabilidade e eficácia em relação à via endovenosa. Devido a DPC observou-se uma elevada carga parasitária do fígado e do baço nos animais desnutridos em relação aos controles, contudo o tratamento dos animais desnutridos com AM lipossomal foi capaz de reduzir a carga parasitária hepática e eliminar o parasito no baço com a mesma eficácia que a encontrada nos animais controle submetidos ao mesmo tratamento. A formação granulomatosa e a deposição das fibras colágenas também foram afetadas pelo processo de desnutrição, onde o número e área dos granulomas hepáticos e a densidade das fibras do tipo III e do tipo I encontraram-se reduzidos, além da presença de maiores proporções de fibras do tipo I nestes grupos. O tratamento dos animais desnutridos com AM encapsulado em lipossomas não alterou a formação dos granulomas e não foi capaz de auxiliar no reestabelecimento do padrão das fibras colágenas ao padrão observado nos animais desnutridos não infectados.Visceral leishmaniasis (VL) is recognized as one of the six endemic diseases of major relevance in the world by the World Health Organization (WHO). Of the several risk factors, Protein Energy Malnutrition (PEM) is considered as one of the most important factors to determine the establishment and severity of the disease. Very few drugs are available for the treatment of VL and are known to have several limitations in terms of their toxicity, efficacy, price and drug regimens. In this work, meglumine antimoniate (MA), one of the main drugs used as therapy to leishmaniasis, was encapsulated in liposomes. Due to its natural tendency to be captured by the mononuclear phagocytic system cells, liposomes trigger the drug to the target organs of infection: liver, spleen and bone marrow, optimizing the utilization of the drug encapsulated. Therefore, this study aimed to evaluate the effectiveness of the leishmanicidal drug meglumine antimoniate encapsulated in liposomes, administered by two routes, intraperitoneally and intravenously for the treatment of BALB/c mice infected with L. chagasi. The histopathological effects of infection and treatment were also assessed by a clinical picture of malnutrition through the administration of a low-protein diet containing 4.5% casein. Our results showed that treatment using a single dose of MA encapsulated in liposomes, administered in the second week of infection, was effective in reducing the parasite load in liver significantly, and eliminating them from spleen. Further, the drug helped to reduce the number and area of hepatic granulomas, and in reestablishment the normal pattern of collagen fibers type I and III of the liver of BALB/c mice after three weeks of treatment. The intraperitoneal administration of the drug showed better viability and effectiveness compared to intravenously. Because of the PEM, a high parasite load of the liver and spleen in malnourished animals was found when compared to controls, however the treatment of malnourished animals with liposomal MA was able to reduce liver parasite burden and eliminate the parasite in the spleen with the same effectiveness as found in control animals underwent the same treatment. Granulomatous formation and deposition of collagen fibers were affected by the process of malnutrition that was characterized by smaller number and size of hepatic granulomas and smaller density of the fibers of type III and type I. Additionally, there was a larger presence of the type I fiber. The treatment of malnourished animals using MA encapsulated in liposomes don´t changed the granulomas formation and was not able to assist in the reestablishment of the pattern of collagen fibers to the pattern observed in uninfected malnourished animals
Avaliação da resposta imune a vacinas de antígeno particulado de Leishmania sp e sua associação com vacina de DNA pCI-neo-p36(lack) em camundongos balb/c desafiados com Leishmania chagasi.
No full textA leishmaniose visceral é uma enfermidade crônica que pode atingir 98% de mortalidade em humanos não tratados. Pela sua gravidade e alta prevalência, a vacinação é um meio importante de proteção. Alguns tipos de vacinas vêm sendo testados, dentre eles, as vacinas de antígeno particulado e a de DNA. Estas vacinas demonstraram a capacidade de reduzir a carga parasitária no fígado e no baço em modelo murino e induzir a produção de IFN- , com indução de uma resposta celular prolongada, em alguns casos. No nosso estudo, camundongos BALB/c foram vacinados com três doses de uma vacina subcutânea contendo 100 μg de antígeno particulado de L. chagasi, L. braziliensis ou L. amazonensis e 50 μg de saponina como adjuvante, associada ou não a uma vacina intramuscular, em duas doses, com 100 μg de pCI-neop36( LACK). Esta vacina de DNA continha um gene que codifica a proteína LACK (homóloga de Leishmania de receptores de proteína kinase C ativada), uma proteína de 36 kDa, conservada nas várias espécies e formas do ciclo de vida da Leishmania. Nos dois protocolos de vacinação, os camundongos foram desafiados 4 ou 12 semanas após a administração da vacina com 1 x 107 formas promastigotas de L. chagasi e sacrificados 5 semanas após o desafio para análise da capacidade protetora das vacinas, no fígado e no baço, e de indução da produção de IFN- e IL-4 pelos esplenócitos. Os dados mostraram que a vacina pCI-neo-p36(LACK) associada à vacina de antígeno particulado de L. chagasi induziu maior grau de proteção que a vacina de antígeno particulado administrada isoladamente, especialmente no fígado quando o desafio foi feito 4 semanas após a vacinação. Além disso, a vacina de antígeno de L. amazonensis, quando associada ou não a vacina pCI-neo-p36(LACK), induziu uma maior redução da carga parasitária do que a de L. braziliensis, no entanto nenhuma destas duas vacinas induziu proteção maior que a vacina de antígeno de L. chagasi. As vacinas induziram a produção significativa de IFN-g mas não de IL-4 que, em alguns casos, foi suprimida. Apesar da capacidade da associação das vacinas em aumentar a proteção contra o parasito, problemas relacionados com o uso de vacinas de DNA precisam ser melhor compreendidos.American visceral leishmaniasis is a chronic disease that can reach 98% of human mortality when not treated. Due to its severity and high incidence, vaccination has become an important approach to protection. Several vaccines have been tested, amongst then, freeze-thawed antigen and DNA vaccines. These two vaccines have demonstrated the capacity to reduce the parasite burden in liver and spleen in murine model and to induce the production of IFN- , with the induction of a long-term cellular immunity in some cases. In our study, BALB/c mice were vaccinated with a three doses subcutaneous vaccine containing 100 μg of L. chagasi, L. braziliensis or L. amazonensis freeze-thawed antigen with 50 μg of saponin as an adjuvant, associated or not with an intramuscular one, in two doses, with 100 μg of pCI-neo-p36(LACK). This DNA vaccine was constituted of LACK (Leishmania homologue of receptors for activated C kinase) expression gene, a 36 kDa protein highly conserved in all species and life cycle stages of Leishmania. In the two vaccines protocols, mice were challenged intravenously with 1 x 107 L. chagasi promastigotes 4 or 12 weeks after booster and sacrified 5 weeks after challenge for the analysis of the vaccines protective capacity in liver and spleen and the measure of the production of IFN-g and IL-4 by splenocytes. Data showed that the pCI-neo-p36(LACK) associated to L. chagasi freeze-thawed antigen induced a higher protection than the freeze-thawed antigen alone, specially in liver when the challenge was performed 4 weeks after booster. In addiction, L. amazonensis vaccine induced a greater reduction in parasite burden than L. braziliensis. The vaccines induced a significant production of IFN-g but not of IL-4, that was suppressed is some cases. Despite the showed capability of the vaccines association in increase the protection against the parasite, problems with the use of DNA vaccines must be reviewed
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Get PDFThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
Variations on the Author
Get PDF“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
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