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Adaptación de Toxoplasma gondii durante el cultivo in vitro : efecto en rasgos fenotípicos asociados a la virulencia
No full textTesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, leída el 03-03-2025A lo largo de los años y en numerosos estudios se ha recurrido al uso de aislados y cepas de Toxoplasma gondii mantenidas en el laboratorio por largos periodos de tiempo. No obstante, existen evidencias de que dicho mantenimiento a largo plazo puede producir cambios importantes en las características fenotípicas del parásito, incluyendo la virulencia, lo que podría enmascarar los resultados obtenidos (Lindsay et al., 1991; Buxton & Innes, 1995; Dubey et al., 1999). Los mecanismos implicados en esta adaptación están poco estudiados y, por tanto, es interesante profundizar en su investigación. El objetivo general de esta tesis doctoral fue estudiar el efecto de la adaptación en el cultivo celular a corto plazo en aislados de T. gondii recientemente obtenidos, del tipo II y III atendiendo a dos aspectos clave de su biología como son las capacidades de formación de quistes y proliferativas, así como los efectos sobre la virulencia en un modelo armonizado de ratón. Para ello, los aislados utilizados procedían de: i) cerebro de fetos abortados de ovejas (tipo II-PRU - TgShSp1 y TgShSp3- genotipo ToxoDB #3 por un lado, y tipo II TgShSp2 (#1) por el otro); ii) miocardio de oveja adulta (tipo II-PRU -TgShSp16 (#3) y tipo III - TgShSp24 (#2)); y iii) miocardio de cerdo adulto tipo III - TgPigSp1 (#2). Este panel de aislados se seleccionó por su representación de los tipos II y III, en función de: (a) predominio de estos en la población europea, (b) por su perfil de virulencia determinado en estudios previos, y (c) el conocimiento del historial de mantenimiento en cultivo celular desde su aislamiento (Fernández-Escobar et al., 2020a, 2020b, 2021)...Over the years numerous studies have used Toxoplasma gondii isolates and strains maintained in the laboratory for long periods of time. However, there is evidence that such long-term maintenance can lead to significant changes in the phenotypic characteristics of the parasite, including virulence, which may mask the results obtained (Lindsay et al., 1991; Buxton & Innes, 1995; Dubey et al., 1999). The mechanisms involved in this adaptation are poorly understood, and it is therefore of interest to investigate them further.The overall aim of this doctoral thesis was to study the effect of short-term cell culture adaptation on newly obtained T. gondii isolates of type II and III, focusing on two key aspects of their biology: cyst-forming and proliferative capacities, as well as the effects on virulence in a harmonised mouse model.For this purpose, the isolates used were from: (i) aborted sheep foetal brain (type II-PRU - TgShSp1 and TgShSp3 - ToxoDB genotype #3 on the one hand, and type II - TgShSp2 (#1) on the other); (ii) adult sheep myocardium (type II-PRU - TgShSp16 (#3) and type III - TgShSp24 (#2)); and (iii) adult pig myocardium type III - TgPigSp1 (#2). This panel of isolates was selected for their representation of types II and III, based on: (a) predominance of these genotypes in the European population, (b) their virulence profile as determined in previous studies, and (c) knowledge of the history of maintenance in cell culture since isolation (Fernández-Escobar et al., 2020a, 2020b, 2021)...Fac. de VeterinariaTRUEunpu
New animal models for the study of "Neospora caninum" infection during gestation
No full textTesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, Departamento de Sanidad Animal, leída el 13/01/2016. Tesis formato europeo (compendio de artículos)Neospora caninum es un parásito intracelular apicomplejo causante de la neosporosis, una enfermedad considerada como una de las principales causas de aborto en el ganado bovino. Esta parasitosis origina cuantiosas pérdidas económicas a nivel mundial, presentando una amplia distribución y una elevada prevalencia en el ganado bovino en la mayoría de países donde se ha estudiado. Actualmente, la inmunoprofilaxis se considera como la medida más importante para el control de la enfermedad, aunque, desafortunadamente, no existe una vacuna eficaz disponible. La única vacuna comercializada hasta el momento (Neoguard) ha sido retirada del mercado hace años debido a la baja eficacia mostrada. Por tanto, el esfuerzo de muchos grupos de investigación se centra hoy en día en el desarrollo de nuevas vacunas y fármacos eficaces y seguros frente a la neosporosis bovina. Con este fin, los modelos animales, además de ser de gran utilidad para estudiar la relación parásito-hospedador, la respuesta inmunitaria o la patogenia, son herramientas esenciales para realizar una evaluación adecuada de la eficacia y seguridad de vacunas y fármacos. Sin embargo, no existe un modelo normalizado, ya que aquellos descritos en la literatura se han llevado a cabo bajo condiciones experimentales muy variables. Estas diferencias incluyen, entre otras, la raza o estirpe de los animales empleados, el aislado de N. caninum, la manipulación del parásito para la inoculación, la vía de administración y la dosis utilizada en el ensayo. Además, en el caso de los modelos gestantes, el momento de la gestación en el cual se infecta a los animales supone una importante variable adicional. Por lo tanto, es necesario el desarrollo de modelos animales consensuados entre los diferentes laboratorios de investigación que permitan comparar y validar los resultados obtenidos en cada uno de ellos...Neospora caninum is an apicomplexan protozoan parasite considered to be one of the main causes of abortion in cattle worldwide. It shows a high prevalence and produces important economic losses as a consequence of the reproductive failure triggered by infection during pregnancy or recrudescence. To date, immunoprofilaxis is considered the best control strategy against the disease. Unfortunately, there are no current drugs or vaccines available in the market against Neospora, since the only vaccine commercialised so far (Neoguard) was withdrawn from the market on account of the low efficacy shown. Therefore, a large amount of research focuses its efforts on the development of new candidates that may be effective in protecting against abortion and vertical transmission. For this purpose, animal models, besides being of great utility for the study of parasite-host relationship, immune responses or pathogenesis, are essential tools for performing an appropriate assessment of the efficacy and safety of vaccines and drugs. However, there is not a normalized model of neosporosis, since the models described in the literature differ in the experimental designs employed. These include, among others, the strain or breed of animals used, the N. caninum isolate, the parasite manipulation for infection, route of administration and dose. Besides, for pregnant models, the time of gestation when infection takes place implies an important additional variable. All of this leads to a high degree of variability, rendering meaningful comparison of results from different laboratories a difficult task. Therefore, the elaboration of common models achieving a consensus among different laboratories is necessary, so as to permit comparison and validation of results obtained in each one of them...Depto. de Sanidad AnimalFac. de VeterinariaTRUEunpu
Identification and characterization of the NcROP40 and NcNTPase proteins, and assessment of their usefulness as vaccines against neosporosis
No full textTesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, Departamento de Sanidad Animal, leída el 28/01/2016. Tesis formato europeo (compendio de artículos)Neospora caninum es un parásito formador de quistes reconocido a nivel mundial como la principal causa de aborto en ganado vacuno, donde produce importantes pérdidas económicas. A pesar de que la vacunación se ha descrito como la estrategia de control más eficiente frente a la neosporosis bovina, hasta la fecha no existen formulaciones eficaces que prevengan la transmisión vertical y el aborto. En la actualidad, las medidas de control de la enfermedad dependen de un diagnóstico adecuado asociado a unas medidas de manejo concretas, por lo que el desarrollo de una vacuna frente a la neosporosis bovina es una tarea urgente. En este sentido, las vacunas de subunidades se presentan como una buena alternativa al uso de vacunas vivas, debido a su mayor seguridad y menor coste de producción; además, dichas vacunas pueden ser específicamente diseñadas frente a proteínas determinadas con el fin de bloquear procesos esenciales para la supervivencia del parásito. Desgraciadamente, el conocimiento de los mecanismos de invasión y proliferación de N. caninum es muy limitado a nivel molecular. Además, son pocos los estudios en los que se haya abarcado la identificación de factores de virulencia potenciales del parásito. Todo ello dificulta la selección de dianas apropiadas a la hora de diseñar nuevas formulaciones vacunales frente a la neosporosis...Neospora caninum is a cyst-forming parasite that has been recognized worldwide as the main cause of abortion in cattle producing significant economic losses. Despite vaccination having been described as the most cost-efficient strategy to control neosporosis in cattle, there are no available formulations to prevent vertical transmission and abortion. Nowadays, control options rely on diagnosis coupled with management measures, and hence, the development of an effective vaccine against bovine neosporosis has become urgent. Subunit vaccines appear as a good alternative to the use of live vaccines due to their safety and reduced costs. In addition, they can be specifically designed to act against particular proteins to block essential processes for parasite survival. Unfortunately, the basic mechanisms on how host cell invasion and proliferation is achieved by N. caninum tachyzoites have been poorly investigated at the molecular level. Moreover, the identification of potential virulence factors of N. caninum has not been extensively exploited, making the choice of proper targets to design new vaccine formulations against neosporosis difficult...Depto. de Sanidad AnimalFac. de VeterinariaTRUEunpu
Interacciones entre aislados de alta y baja virulencia de "Neospora caninum" y la placenta bovina
No full textTesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, Departamento de Sanidad Animal, leída el 29-11-2019Bovine neosporosis is one of the most important causes of abortion in cattle worldwide and Neospora caninum, an apicomplexan protozoan parasite, is the causal agent of the disease. Millionaire economic losses have been estimated in infected cattle, mainly associated with the reproductive failure. N. caninum is very effective at crossing the placental barrier and placental damage is crucial in the pathogenesis of abortion. In addition, infection during pregnancy poses a challenge for the immune system of pregnant cows. Changes in the T helper 1 and T helper 2 balance in the placenta during gestation have been associated with abortion. Bovine trophoblast and caruncular cell layers are key cellular components at the maternal-foetal interface in placentomes, playing a fundamental role in placental functionality. In addition to their role as a barrier, those cells are able to recognize and induce immune responses against N. caninum, participating in the initiation of innate immune responses at the placental level as well as in the development of an adaptative immune response...La neosporosis bovina es una de las causas más importantes de aborto en el ganado vacuno a nivel mundial. Dicha enfermedad está causada por el protozoo apicomplejo Neospora caninum, un parásito intracelular obligado formador de quistes tisulares, estrechamente relacionado con Toxoplasma gondii. La infección con este parásito causa cuantiosas pérdidas económicas en todo el mundo, principalmente asociadas al fallo reproductivo. N. caninum es capaz de cruzar la barrera placentaria de forma muy eficaz y el daño producido en la placenta al transmitirse al feto es crucial en la patogénesis del aborto. Además, la infección durante la gestación representa un desafío para el sistema inmunológico de los animales infectados. De hecho, desequilibrios en el balance de la respuesta de tipo Th1 y Th2 en la placenta durante la gestación se han asociado con el aborto. Las células del trofoblasto bovino junto con las células epiteliales de la carúncula componen la interfaz materno-fetal de los placentomas, desempeñando un papel fundamental en la funcionalidad de la placenta. Además de su papel como barrera física, impidiendo el paso de sustancias tóxicas y agentes patógenos de la madre al feto, estas células son capaces de reconocer e inducir respuestas inmunitarias frente a N. caninum, participando en la iniciación de respuestas inmunitarias innatas a nivel de la placenta, así como en el desarrollo de una respuesta inmunitaria adaptativa...Depto. de Sanidad AnimalFac. de VeterinariaTRUEunpu
Interacciones entre aislados de alta y baja virulencia de "Neospora caninum" y células diana de la respuesta inmunitaria bovina
No full textTesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, Departamento de Sanidad Animal, leída el 29-11-2019Neospora caninum, the causal agent of neosporosis, is an apicomplexan obligate intracellular parasite closely phylogenetically related to Toxoplasma gondii. Bovine neosporosis causes severe economic losses in dairy and beef industries due to the abortion and still birth of calves. Currently, there are no effective vaccines or treatments against infection by N. caninum, and control options are based on diagnosis and management practices. Neospora caninum infection underlies a complex immunological regulation that may lead to protection or contribute to the pathogenesis of abortion. Interactions of the parasite with cells of the host immune system during early infection (innate immune response), which represent the first line of defense against infections, should be critical in determining the character of the subsequent response. Macrophages play a key role in initiating early-immune responses against infections and establishing a link with the adaptive immune response. Despite the fact that these cells are essential for combating N. caninum infection, a limited number of studies have been conducted to investigate N. caninum-macrophages interaction, and most of them used murine and human cells. However, human and mouse are not natural hosts for N. caninum an dit has been demonstrated that parasite virulence can be host-specific...Neospora caninum, el agente causal de la neosporosis bovina, es un parásito apicomplejo intracelular obligado, relacionado filogenéticamente con Toxoplasma gondii. La neosporosis bovina causa importantes pérdidas económicas en la industria cárnica y lechera, como consecuencia del aborto o el nacimiento de terneros mortinatos. En la actualidad no existen tratamientos ni vacunas efectivas frente a N. caninum, y las opciones de control se basan en el diagnóstico y buenas prácticas de manejo. Tras la infección por N. caninum subyace una compleja regulación inmunológica que puede conferir protección o contribuir a la patogenia del aborto. La interacción del parásito con células del sistema inmunitario en las primeras fases de la infección (respuesta innata del hospedador), que representan la primera línea de defensa, es crítica a la hora de determinar el carácter de la respuesta subsiguiente a la infección. Los macrófagos juegan un papel clave en el inicio de la respuesta inmunitaria temprana frente a infecciones y son nexo de unión con la respuesta adaptativa. A pesar de que estas células son esenciales para combatir la infección por N. caninum, se han llevado a cabo un número limitado de estudios para investigar la interacción entre este parásito y el macrófago, y la mayoría de ellas utilizaron células humanas y murinas...Depto. de Sanidad AnimalFac. de VeterinariaTRUEunpu
Estudio de la expresión del receptor mGluR1a del sistema nervioso central de "Rattus novergicus" en la levadura "Schizosaccharomyces pombe" y líneas celulares de mamífero
Full text linkTesis de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Farmacia, Departamento de Microbiología II, leída el 30-05-2001El objetivo fundamental de este trabajo es la expresión funcional de receptores del Sistema Nervioso Central en un sistema heterólogo como son las levaduras. Se trata de intentar acoplar funcionalmente el receptor metabotrópico de L-glutamato de rata (mGluR1) a un sistema de la levadura S. Pombe cuantificable, y en concreto a la carcada de apareamiento, debido a la gran semejanza estructural y funcional de dicho receptor con los receptores de feromonas de levaduras. Esta estrategia perimitiría el estudio de su interacción con ligandos agonistas y antagonistas, el análisis molecular de los mismos y finalmente, la búsqueda y detección de nuevas moléculas farmacológicamente activas. El receptor mGluR1a fue expresado en una cepa heterotálica de la levadura Schizosaccharomyces pombe. El análisis de expresión de RNA permitió comprobar el alto nivel de la transcripción del receptor, así como se comprobó alto grado de expresión de la proteina y su correcta localización en la membrana plasmática. Pero, a pesar de estos datos alentadores y de usar un sistema de detección-cuantificación específico y altamente eficiente, desarrollado en esta memdoria para la detección de la activación de la cascada de apareamiento, los resultados obtenidos fueron negativos. El desarrollo de proteínas de fusión del receptor mGluR1a con la subunidad Ga de S. Pombe y una subunidad quimérica de la subunidad Ga. De S. Pombre y Ga0 de X. Laevis, no mejoraron los resultados. Si bien, el desarrollo de proteínas similares basadas en el receptor mam2+ de S. Pombe (de la ruta de feromonas) y estas subunidades Ga, revelaron datos significativos para comprender el mecanismo de iteneracción entre receptores y proteínas G y la realización de posteriores estudios de expresión heteróloga análogos a los efectuados. Los estudios de unión a ligando radiactivo de los transformantes y de otros estudios de electroforesis de proteínas desvelaron que el procesamiento y plegamiento del receptor mGluR1a en S. Pombe no tenía lugar correctamente y, por lo tano, afectaba a la unión del ligando y funcionalidad. Se efectuaron estudios similares en la línea celular (LCL) 45 EM 18 humana. Los estudios de expresion, mediante técnicas inmunológicas indirectas y microscopía confocal, y de unión a ligando en trasnfectantes de esta línea, indicaron lo adecuado del sistema. Por último, un estudio detallado de los anticuerpos desarrollados frente al extremo aminoterminal del receptor mGluR1a elaborados en nuestro Departamento, mediante estudios de reacción cruzada, inmunoprecipitación indirecta y análisis inmunocitoquímicos demostraron su especificidad frente al receptor mGluR1a. Estos anticuerpos fueron utilizados para estudios inmunocitoquímicos descriptivos de muestras del SNC de rata, macaco y humanosDepto. de Microbiología y ParasitologíaFac. de FarmaciaTRUEpu
Microsatellite genotyping reveals extensive genetic diversity in bovine Neospora caninum from the humid Pampa region in Argentina
No full textNeospora caninum is an apicomplexan protozoan and a major cause of abortion in cattle worldwide. In the Argentinian Humid Pampa, bovine neosporosis causes severe economic losses. Despite this, information on the genetic structure of N. caninum in this region is limited. Therefore, this study aimed to genetically characterize N. caninum isolates associated with bovine abortion in the Humid Pampa region. For this purpose, spontaneous bovine fetal tissues submitted for diagnosis to the Veterinary Diagnostic Service at INTA Balcarce during 2008–2019 were assessed by PCR, indirect fluorescent antibody test (IFAT), and histologic analysis. PCR-positive samples were tested by multilocus microsatellite genotyping (MLGs) using 9 microsatellite markers. Thirty-one different genotypes were identified from 32 samples with at least seven markers. Argentinian MLGs were grouped into two clonal clusters when analyzed using eBURST network and principal coordinate analysis. No segregation based on the year of collection, animal biotype, or geographic origin was observed. In addition, the presence of linkage disequilibrium supported the clonal propagation of Argentinian MLGs. One Argentinian subpopulation was associated with isolates from Spain, Uruguay, Brazil, and Mexico, and the other one was linked to isolates from Scotland, Spain, and Germany. These findings reveal the presence of two clonal subpopulations of N. caninum in the Humid Pampa.EEA BalcarceFil: Dorsch, Matías A. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria (INIA); Uruguay.Fil: Regidor-Cerrillo, Javier. Universidad Complutense de Madrid. Facultad de Ciencias Veterinarias; España.Fil: Ortega-Mora, Luis. Universidad Complutense de Madrid. Facultad de Ciencias Veterinarias; España.Fil: Scioli, María Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina.Fil: Morrel, Eleonora Lidia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina.Fil: Cantón, Germán Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina.Fil: Moore, Dadín. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina. IPADS Balcarce. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina.Fil: Hercker, Yanina. IPADS Balcarce. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Microsatellite genotyping reveals extensive genetic diversity in bovine Neospora caninum from the humid Pampa region in Argentina
No full textNeospora caninum is an apicomplexan protozoan and a major cause of abortion in cattle worldwide. In the Argentinian Humid Pampa, bovine neosporosis causes severe economic losses. Despite this, information on the genetic structure of N. caninum in this region is limited. Therefore, this study aimed to genetically characterize N. caninum isolates associated with bovine abortion in the Humid Pampa region. For this purpose, spontaneous bovine fetal tissues submitted for diagnosis to the Veterinary Diagnostic Service at INTA Balcarce during 2008–2019 were assessed by PCR, indirect fluorescent antibody test (IFAT), and histologic analysis. PCR-positive samples were tested by multilocus microsatellite genotyping (MLGs) using 9 microsatellite markers. Thirty-one different genotypes were identified from 32 samples with at least seven markers. Argentinian MLGs were grouped into two clonal clusters when analyzed using eBURST network and principal coordinate analysis. No segregation based on the year of collection, animal biotype, or geographic origin was observed. In addition, the presence of linkage disequilibrium supported the clonal propagation of Argentinian MLGs. One Argentinian subpopulation was associated with isolates from Spain, Uruguay, Brazil, and Mexico, and the other one was linked to isolates from Scotland, Spain, and Germany. These findings reveal the presence of two clonal subpopulations of N. caninum in the Humid Pampa.Fil: Dorsch, Matias A.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Regidor Cerrillo, Javier. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Ortega Mora, Luis Miguel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Scioli, María V.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Morrell, Eleonora Lidia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Cantón, Germán J.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Moore, Dadin Prando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Hecker, Yanina Paola. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Full text linkThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
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