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Nitrogen regulation of protein–protein interactions and transcript levels of GlnK PII regulator and AmtB ammonium transporter homologs in Archaea
No full textGene homologs of GlnK PII regulators and AmtB-type ammonium transporters are often paired on prokaryotic genomes, suggesting these proteins share an ancient functional relationship. Here, we demonstrate for the first time in Archaea that GlnK associates with AmtB in membrane fractions after ammonium shock, thus, providing a further insight into GlnK-AmtB as an ancient nitrogen sensor pair. For this work, Haloferax mediterranei was advanced for study through the generation of a pyrE2-based counterselection system that was used for targeted gene deletion and expression of Flag-tagged proteins from their native promoters. AmtB1-Flag was detected in membrane fractions of cells grown on nitrate and was found to coimmunoprecipitate with GlnK after ammonium shock. Thus, in analogy to bacteria, the archaeal GlnK PII may block the AmtB1 ammonium transporter under nitrogen-rich conditions. In addition to this regulated protein–protein interaction, the archaeal amtB-glnK gene pairs were found to be highly regulated by nitrogen availability with transcript levels high under conditions of nitrogen limitation and low during nitrogen excess. While transcript levels of glnK-amtB are similarly regulated by nitrogen availability in bacteria, transcriptional regulators of the bacterial glnK promoter including activation by the two-component signal transduction proteins NtrC (GlnG, NRI) and NtrB (GlnL, NRII) and sigma factor σN (σ54) are not conserved in archaea suggesting a novel mechanism of transcriptional control
Pia pii principis rectio
No full textPIA PII PRINCIPIS RECTIO
Pia pii principis rectio (1)
Title page (1)
Widmung an Landgraf Carl von Hessen-Kassel (2)
Ode (26)
Pia Pii Principis Rectio. Pars I-II (27)
Propositio (47)
Confirmatio (49)
Exegesis. Pars I-III (52)
Usus I-V (71)
Gebet (95)
Oden (97)
Chronogramm (104)
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De Praeclaris Aeneae Sylvii Sev Pii II. Pontificis In Romanas Litteras Meritis Oratio
No full textDE PRAECLARIS AENEAE SYLVII SEV PII II. PONTIFICIS IN ROMANAS LITTERAS MERITIS ORATIO
De Praeclaris Aeneae Sylvii Sev Pii II. Pontificis In Romanas Litteras Meritis Oratio ([I])
Titelblatt ([I])
Text ([III]
Note sur un désordre du Vat. graec. PII II 1
No full textSorlin Henri. Note sur un désordre du Vat. graec. PII II 1. In: Scriptorium, Tome 34 n°1, 1980. pp. 77-78
Involvement of auxin and LTP proteins in the regulation of root nodule formation in Medicago truncatula - Sinorhizobium meliloti Symbiosis
Get PDFQuesto progetto di dottorato ha avuto come obiettivi: i) valutazione del ruolo del’auxina di derivazione batterica nella simbiosi rizobio-leguminosa, che dà origine a noduli di tipo indeterminato, ii) lo studio funzionale di MtN5, una proteina di tipo “Pathogenesis Related”, che viene indotta precocemente durante la nodulazione e che presenta omologie di sequenza con membri della famiglia delle Lipid Transfer Protein vegetali.
L’auxina (acido indol-3-acetico, IAA) è un ormone vegetale implicato in molti aspetti che riguardano la vita e lo sviluppo delle piante; un suo coinvolgimento nello sviluppo del nodulo radicale era stato ipotizzato già all’inizio del secolo scorso. Studi successivi hanno dimostrato un’inibizione del trasporto acropeto di IAA nella radice a seguito dell’infezione con rizobi, con un conseguente accumulo di fitormone a livello del sito di infezione. E’ stato dimostrato che la maggior parte dei batteri della rizosfera che producono effetti di promozione sulla crescita della pianta, rizobi inclusi, possiedono vie biosintetiche per IAA. I rizobi sono in grado di sintetizzare auxina in coltura liquida e, molto probabilmente, mantengono questa capacità anche durante la nodulazione. Ad oggi, però, i dati riguardanti il ruolo dell’auxina batterica nello sviluppo dei noduli sono ancora controversi; sono stati infatti documentati sia effetti stimolatori che inibitori.
Molti degli eventi che stanno alla base dell’associazione simbiotica tra rizobi e leguminose devono ancora essere chiariti. Ad esempio, la natura e la funzione dei segnali ormonali scambiati tra ospite e simbionte non sono ancora stati compresi nel dettaglio, così come le differenze e i parallelismi nella risposta delle leguminose verso il simbionte e verso i patogeni della radice. A tal riguardo, recenti osservazioni hanno dimostrato che la repressione della via di segnalazione intracellulare dell’auxina risulta in una maggiore resistenza innata delle piante verso microrganismi patogeni.
Piante di Medicago truncatula, specie modello per le leguminose che producono noduli di tipo indeterminato, e Medicago sativa (erba medica), specie correlata di interesse agronomico, sono state nodulate sia con rizobi wild-type e che con rizobi in grado di iper-produrre IAA (S. meliloti IAA). I risultati ottenuti hanno dimostrato che piante nodulate con S. meliloti IAA producevano un numero maggiore di noduli (aumento del 50% in M. sativa e
aumento del 100% in M. truncatula) e un apparato radicale più ramificato. Inoltre il contenuto di auxina nei noduli prodotti da rizobi IAA è mediamente 10 volte superiore alla concentrazione dei noduli prodotti da rizobi wild-type. I livelli di espressione dei geni responsabili del trasporto di auxina è stato valutato mediante RT-PCR quantitativa (qRT-PCR) e il carrier di efflusso MtPIN2 è risultato significativamente più espresso (circa 2 volte) nel tessuto radicale di piante nodulate con rizobi IAA rispetto alle radici infettate con il rizobio di controllo. Questi risultati suggeriscono che l’effetto di promozione osservato sulla nodulazione e sull’accrescimento della radice laterale siano dovuti alla produzione di IAA nel nodulo e ad una sua redistribuzione all’interno dell’apparato radicale.
E’ stato ampiamente dimostrato che l’ossido nitrico (NO) agisce come secondo messaggero nell’induzione di radici laterali e avventizie stimolata da auxina. Considerando la comune organogenesi tra radici laterali e avventizie e noduli indeterminati, in questo lavoro abbiamo dimostrato che esiste un collegamento tra auxina e NO nella via di segnalazione che porta all’induzione del nodulo.
Per mezzo di uno screening preliminare, condotto mediante qRT-PCR e volto ad individuare geni differenzialmente espressi in piante nodulate con rizobi IAA e piante nodulate con rizobi wild-type, fu osservato che il gene MtN5 era più espresso negli apparati radicali di piante infettate con rizobi iperproduttori di auxina. Il prodotto genico di MtN5 è stato annotato come una Lipid Transfer Protein (LTP) putativa. Le LTP vegetali sono caratterizzate dalla capacità sia di legare lipidi in vitro che di inibire la crescita di microrganismi. In questo progetto di tesi è stato dimostrato che MtN5 possiede la capacità di legare lisolipidi e che, come molti altri membri di questa famiglia di proteine, possiede attività antimicrobica in vitro, in particolare contro Fusarium semitectum, Xanthomonas campestris e S. meliloti.
Lo studio del profilo di espressione conferma che MtN5 viene precocemente indotta durante la nodulazione e che è specificamente localizzata all’interno del nodulo radicale. Inoltre, l’infezione di piante con F. semitectum provoca l’accumulo di MtN5 nel tessuto radicale.
La funzione di MtN5 nella nodulazione è stata studiata mediante la generazione di radici avventizie transgeniche, sia overesprimenti che silenziante per il gene di interesse. Le radici
silenziate per MtN5 sviluppano circa la metà dei noduli rispetto a radici di controllo, mentre in radici transgeniche over-esprimenti MtN5 il numero di noduli è risultato incrrementato del 300% rispetto al controllo. I risultati ottenuti dimostrano che MtN5 facilita l’interazione simbiotica tra M. truncatula e S. meliloti, agendo probabilmente negli stadi precoci dell’infezione, e suggeriscono che MtN5 potrebbe avere un ruolo nella protezione dei noduli verso patogeni della radice. Ulteriori studi sono comunque necessari per ottenere una immagine più chiara del ruolo di MtN5 sia nella simbiosi che nella risposta verso i patogeni.The present thesis has had two main focuses: i) the evaluation of the role of bacteria-derived auxin in the symbiosis between rhizobia and legumes that bear indeterminate nodules, ii) the functional study of MtN5, a pathogenesis related protein which presents sequence homology with the members of the plant Lipid Transfer Proteins (LTP) family and is precociously induced during nodulation.
Auxin (indol-3-acetic acid, IAA) is a phytohormone involved in many aspects of plants growth and development; The role of auxin in the development of the rhizobia-legumes symbiosis was first hypothesised at the beginning of the twentieth century. More recent studies have demonstrated that auxin is accumulated at the site of infection as a consequence of the inhibition of the acropetal auxin transport in roots upon rhizobia inoculation. The production of IAA has also been documented in plant-associated rhizobacteria, including rhizobia, that have promoting effects on plants growth. When grown in liquid media, rhizobia can synthesize auxin and most likely they retain the same capability also during the nodule development. However, up to date, the data concerning the role of bacteria-derived auxin in the establishment of the symbiotic association are still contradictory, since both stimulatory and inhibitory effects have been documented.
Thus, there are still open questions in the understanding of the events that result in the establishment of the symbiosis. First of all the nature and the function of the hormonal signal(s) exchanged between the host and the symbiont are not thoroughly unfolded, as well as the parallelisms and the differences in the responses of legumes against root pathogens and root symbiont. In these regards, recent findings have pointed out that plants innate immunity results, at least in part, from the down-regulation of the auxin signalling pathway.
Medicago truncatula and Medicago sativa plants were nodulated with both wild-type and auxin hyper-synthesising rhizobia (Sinorhizobium meliloti IAA). The results obtained showed that plants nodulated with S. meliloti IAA produced a higher number of root nodules (50% more nodules in M. sativa and 100% more nodules in M. truncatula) and a more branched root apparatus. The root nodules elicited by S. meliloti IAA had a higher IAA content (at least 10-fold) when compared to control nodules. The expression levels of the auxin carriers were
evaluated and the efflux facilitator MtPIN2 resulted more abundant (about 2-fold) in the root tissue of IAA plants when compared to wild-type plants These data suggested that such promoting effects on nodulation and lateral root growth might be due to the increased auxin content detected in IAA nodule produced by auxin hyper-synthesising rhizobia, as well as to a redistribution of the phytohormone in the root tissue.
It has been largely demonstrated that nitric oxide (NO) acts as second messenger in the auxin-induced pathway that leads to formation of lateral and adventitious roots. Since root nodules have the same organogenetic origin of lateral and adventitious roots, the possible connection between NO and root nodule induction was investigated and we demonstrated that NO participate in the signalling pathway for root nodule induction.
During a preliminary screening carried out by means of qRT-PCR, it has been found that N5 gene of M. truncatula was more abundantly expressed in roots nodulated with S. meliloti IAA with respect to roots infected by wild-type rhizobia. The gene product of MtN5 was annotated as putative Lipid Transfer Protein (LTP). LTPs are characterized by their ability to bind lipids in vitro and the majority of them exhibits antimicrobial activity. In this thesis, it has been demonstrated that the recombinant MtN5 protein is able to bind lysolipids and possesses inhibitory activity against Fusarium semitectum, Xanthomonas campestris and S. meliloti.
The studies of the expression pattern of both MtN5 transcript and MtN5 protein confirmed that it is precociously induced during nodulation and revealed that it is specifically localized in the root nodule. In addition, when M. truncatula plants are infected with the root pathogenic fungus F. semitectum, MtN5 protein is accumulated in the root apparatus.
The function of MtN5 in nodulation has been studied through the generation of transgenic adventitious roots, both over-expressed and silenced for the gene of interest. MtN5-silenced roots developed approximately 50% fewer nodules as compared to control roots, whereas in hairy roots over-expressing MtN5 the nodule number was increased by about 300% with respect to control roots. Collectively the data indicate that MtN5 facilitates the symbiotic interaction between M. truncatula and S. meliloti, probably acting in the early stages of rhizobia infection, and suggest that it might have a role in the protection of nodules against
root pathogen. However, further studies are needed to have a clear picture of the role played by MtN5 in both symbiosis and defence response against pathogens
Generation of the electroretinogram M-wave and PII components in the amphibian retina
No full textThe electroretinogram (ERG) is a field potential generated by the electrical activity of the retina in response to a flash of light. The ERG is measured in humans and is useful in the diagnosis of retinal pathologies. The investigations reported in this thesis were undertaken with the expectation that a more thorough characterization of ERG generation would enhance the diagnostic utility of the ERG and aid in understanding of the pathophysiology of retinal diseases.The ERG was studied in the dark-adapted, isolated retina preparation of the toad, Bufo marinus. K\sp+-sensitive microelectrodes, as well as conventional intra- and extracellular microelectrodes, were used to record (K\sp+) \sb0 changes, the intraretinal ERG, the vitreal ERG, and Muller cell responses.Using the aspartate receptor agonist, N-methyl-DL-aspartate, the M-wave was identified in the vitreal ERG. This represents the first report of this potential in a vitreal ERG recording. From the data, it is concluded that the M-wave is generated by a Muller cell response to the proximal K\sp+ increase. The M-wave was also found to be the principal component of the threshold ERG. A model of M-wave generation was constructed that is useful for understanding the contribution of the proximal K\sp+ increase to the ERG and that can account for the differences between the M-waves of amphibian and cat.By exploiting the different neuropharmacologies of retinal neurons, the PII component was also isolated. To the knowledge of the author, this is the first report of the isolation of a PII component in the ERG of a non-mammalian species. The results presented strongly support the hypothesis that the PII component is generated by a Muller cell response to the distal K\sp+ increase, analogous to that which generates the ERG b-wave. In addition, it was found that at photopic levels, an orange (600 nm) flash enhanced the DC component of PII when compared with a rod-matched, green (500 nm) flash. This result indicates that it may be possible to study the isolated DC component in the human ERG without pharmacological means.Made available in DSpace on 2011-05-07T13:57:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Un papa e un poeta alla crociata: Pio II e Porcelio de' Pandoni
No full textIl De felicitate temporum Pii II si presenta come un canzoniere impegnativo, segnato da una spiccata varietas di contenuti, dedicatari in seconda ,digeneri e forme, in cui la poesia si intreccia alla storia, alla oratoria, al panegirico. Nel complesso ed eterogeneo tessuto del canzoniere la storia affiora assai spesso, prediligendo la veste metrica degli esametri e die distici elegiaci, ma ricorrendo anche a saffiche, endecasillabi faleci e sistemi metrici; spesso anzila storia assume un valore centrale e pregnante nel senso del carme storico-politico, in cui poesia e storia, intendo soprattutto storia contemporanea trovano perfetta sintesi. Quale posto occupa allora la politica per la crociata che del pontificato di Pio II fu il fulcro in questo canzoniere che programmaticamente celebra la felicitas temporum di questo pontefice, una felicitas che appunto lo affianca ai grandi eroi felices per antonomasia dell’antichità, Silla, Cesare? Certamente il motivo della crociata contro i turchi conquistatori di Costantinopoli costituisce un leit-motiv di una serie di componimenti, ed in particolare di carmi de vita ac moribus di Pio II, che si rintracciano nella trama del canzoniere e che replicano un genere poetico caro alla produzione di Pandoni costellata da brevi poemetti biografici celebrativi di illustri personalità del suo temp
Per l'edizione del De felicitate temporum divi Pii II di Porcelio de' Pandoni
No full textIl De felicitate temporum divi Pii II è un canzoniere impegnativo, segnato da una spiccata varietas di contenuti, dedicatari in seconda ,digeneri e forme, in cui la poesia si intreccia alla storia, alla oratoria, al panegirico. Anzitutto intreccio di poesia e prosa: non a caso I e VI libro si aprono con un proemio in prosa seguito da una versione in versi; nel I libro si legge un’epistola in prosa indirizzata a Domenico Maddaleno Capodiferro; nel IV libro si legge una lunga consolatio in prosa indirizzata a Iacopo Ammannati pe rla morte del fratello Stefano seguita da una silloge di carmi funebri ed epitaffi; e nel VII libro alla versione in prosa sulla genealogia di Goro Lolli si accompagna una narratio in versi; nell’ottavo libro ancora in prosa si legge la gratulatio per il ritorno di Pio II a Roma; e un saluto in prosa a Ludovico Foscareno seguito da un’elegia allo stesso. E ancora intreccio di epigrammata, poemata ed elegiae; intreccio di componimenti brevi, tanti epitaffi, distici, ma anche di componimenti lunghi, epigrammi ed elegie, acui si affiancano veri e propri poemi epici, in quel formato prediletto da Pandoni ridotto ad un canto o a due canti come avviene per il poema dedicato ai fratelli Orsini che campeggia nel VI libro. Ci troviamo così dinanzi ad una costruzione elaborata, di cui i due testimoni manoscritti (Vat.Lat. 1670 / Reg.Lat. 1991) documentano la faticosa messa a punto, in un gioco di rifacimenti, ricusazioni e ridefinizioni
Tissue Localization and Extracellular Matrix Degradation by PI, PII and PIII Snake Venom Metalloproteinases: Clues on the Mechanisms of Venom-Induced Hemorrhage
Get PDF20 páginas, 4 figuras, 3 tablas y 7 tablas en material suplementario.Snake venom hemorrhagic metalloproteinases (SVMPs) of the PI, PII and PIII classes were compared in terms of tissue localization and their ability to hydrolyze basement membrane components in vivo, as well as by a proteomics analysis of exudates collected in tissue injected with these enzymes. Immunohistochemical analyses of co-localization of these SVMPs with type IV collagen revealed that PII and PIII enzymes co-localized with type IV collagen in capillaries, arterioles and post-capillary venules to a higher extent than PI SVMP, which showed a more widespread distribution in the tissue. The patterns of hydrolysis by these three SVMPs of laminin, type VI collagen and nidogen in vivo greatly differ, whereas the three enzymes showed a similar pattern of degradation of type IV collagen, supporting the concept that hydrolysis of this component is critical for the destabilization of microvessel structure leading to hemorrhage. Proteomic analysis of wound exudate revealed similarities and differences between the action of the three SVMPs. Higher extent of proteolysis was observed for the PI enzyme regarding several extracellular matrix components and fibrinogen, whereas exudates from mice injected with PII and PIII SVMPs had higher amounts of some intracellular proteins. Our results provide novel clues for understanding the mechanisms by which SVMPs induce damage to the microvasculature and generate hemorrhage.This work was performed in partial fulfillment of the requirements for the PhD degree for Cristina Herrera at Universidad de Costa Rica.Peer reviewe
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