1,720,954 research outputs found
Interaktion von Flotillin-2 mit desmosomalen Proteinen: Etablierung der BioID-Methode
Get PDFPemphigus vulgaris ist eine schwere Autoimmunerkrankung, die durch eine Blasenbildung in der Haut und in den Schleimhäuten charakterisiert ist. Die Blasenbildung ist auf eine Akantholyse, d.h. eine Dissoziation des Epithelverbands, zurückzuführen. Diese wird durch Autoantikörper vom Typ IgG, auch PV-IgG genannt, ausgelöst, die vor allem gegen Desmoglein 3 gerichtet sind. Bei Desmogleinen handelt es sich um transmembranäre Glykoproteine, die speziell bei Desmosomen vorkommen. Man unterscheidet hier die Isoformen 1 bis 4. Letztendlich führt die Bindung der PV- IgG an das Desmoglein 3 zu einer Zerstörung von Desmosomen. Desmoglein 3 interagiert unter physiologischen Bedingungen im Rahmen der Funktion von Desmosomen zusammen mit Plakoglobin mit den Flotillinen.
Die Flotillin-Familie besteht aus zwei Proteinen: Flotillin 1 und 2, wobei letzteres in dieser Arbeit untersucht wurde. Flotilline sind hochkonservierte und ubiquitär exprimierte Proteine. Durch Oligomerisierung und zusätzliche Palmitoyl- bzw. Myristoylreste sind sie in der Lage, an die Plasmamembran zu binden. Sie spielen beispielsweise eine Rolle im Signalweg des EGF-Rezeptors und der Clathrin- vermittelten Endozytose.
Die vorliegende Arbeit hatte das Ziel, eine Methode zu etablieren, um das Interaktom von Flot2 darzustellen, sowie ein geeignetes Zellmodell für weitere Untersuchungen zu identifizieren. Mit Hilfe von Immunassays wurde zunächst die Klonierung und Expression von Flot2-Fusionsproteinen nachgewiesen; hierzu gehören Y163F-BirA* und Reg1-BirA*. Bei ersterem wurde ein Tyrosin an der 163. Stelle in der Aminosäuresequenz des Flot2 durch ein Phenylalanin ausgetauscht, letzteres stellt den Wildtyp von Flot2 dar. Y163 stellt im Flot2 eine wichtige Phosphorylierungstelle dar und ist damit für die Regulation seiner Funktion wichtig. Beide wurden mit einer bakteriellen Biotinligase fusioniert, wodurch Interaktionspartner von Flot2 anhand ihrer Biotinylierung identifiziert werden können. Unter Zuhilfenahme der Methodik der BioID konnte die Interaktion bei der Flot2-Mutanten mit Flotillin 1 in gleichem Ausmaß nachgewiesen werden wie zuvor mit der Methodik der Co-Immunpräzipiation. Damit eignet sich die BioID zur Untersuchung des gesamten Interaktoms. Außerdem wurde gezeigt, dass die Expression der Flot2 sowie dessen Interaktion mit endogenem Flotillin 1 in hTert Zellen unabhängig vom Calciumgehalt ist. Lediglich die Lokalisation von Flot2 ändert sich, sodass es bei intrazellulären Calciumspiegeln von 2 mmol/l vor allem an der Plasmamembran lokalisiert ist, während es bei Spiegeln von 0,05 mmol/l perinukleär lokalisiert ist. Darüber hinaus konnten die Zelllinien hTert, HaCaT sowie MCF7, als Flot2-Knockout Varianten, als die vielversprechendsten Zellmodelle für weitere Untersuchungen identifiziert werden.Sonstige Drittmittelgeber/-inne
N-Glycanase-1-Mangel – Charakterisierung von Genvarianten
Get PDFN-Glycanase-1-Mangel ist eine kongenitale Störung der Deglykosylierung. Die Krankheit ist durch fünf Kernsymptome geprägt: globale Entwicklungsverzögerung, Choreoathetose, Erhöhung von Leberwerten in Blutuntersuchungen, Hypo-/Alakrimie und eine progressive, sensomotorische Neuropathie. Der Erkrankung liegen Mutationen im Enzym N-Glycanase-1 (NGLY1) zu Grunde. Die N-Glycanase-1 ist vor allem an der ER-assoziierten Degradation von Proteinen beteiligt. Dabei werden N-Glykane vor der proteasomalen Degradation entfernt. Daneben interagiert es unter anderem mit NRF1/NFE2L1 und hat einen Einfluss auf unterschiedliche Signalwege. Bisher sind etwa 56 Mutationen bekannt, die zu der Erkrankung führen. Die Konsequenz jener Mutationen ist ein verminderter Spiegel von N-Glycanase-1 und somit eine verminderte Enzymaktivität. Der genaue Pathomechanismus ist jedoch Gegenstand aktueller Forschung und noch nicht abschließend geklärt. Mögliche Ansätze beziehen sich unter anderem auf eine Verminderung des oben genannten NRF1/NFE2L1 als Transkriptionsfaktor für proteasomale Gene.
Diese Arbeit hatte das Ziel, die zwei NGLY1-Varianten, R390Q und R401*, des N-Glycanase-1-Mangels zu charakterisieren. Dafür wurde zunächst eine NGLY1-KO-Zelllinie generiert. Mit dieser wurde dann das Expressionsverhalten der Genvarianten nach transienter Transfektion untersucht. Die Expression von R390Q konnte mit den verwendeten NGLY1-Antikörpern nachgewiesen werden, während dieser Nachweis bei R401* ausblieb.
Im Weiteren sollte ein Aktivitätsassay zur Bestimmung der Enzymaktivität von NGLY1 bzw. dessen Genvarianten etabliert werden. Hierzu wurde ein Venuskonstrukt, genannt ddVenus, verwendet, das erst nach Deglykosylierung durch NGLY1 fluoresziert. Damit konnte ein Rückschluss aus der Fluoreszenz auf die NGLY1-Enzymaktivität gezogen werden. Die Ergebnisse zeigten, dass die Enzymaktivität bei beiden Genvarianten hoch signifikant vermindert war. In weiteren Versuchen konnte die Aktivität von R390Q mit Betain nicht gesteigert werden, während bei R401* und der Verwendung von 50 μM Amlexanox mit einer Inkubationszeit von 48 Stunden eine Aktivitätssteigerung festgestellt werden konnte, die jedoch nicht signifikant war. Darüber hinaus wurde aufgezeigt, dass NRF1/NFE2L1 in den KO-Zellen in prozessierter Form akkumuliert. Eine Kompensation durch transiente Transfektion von NGLY1 oder der Genvarianten R390Q oder R401* konnte nicht erreicht werden
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Get PDFThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
Variations on the Author
Get PDF“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
Appropriate Similarity Measures for Author Cocitation Analysis
Get PDFWe provide a number of new insights into the methodological discussion about author cocitation analysis. We first argue that the use of the Pearson correlation for measuring the similarity between authors’ cocitation profiles is not very satisfactory. We then discuss what kind of similarity measures may be used as an alternative to the Pearson correlation. We consider three similarity measures in particular. One is the well-known cosine. The other two similarity measures have not been used before in the bibliometric literature. Finally, we show by means of an example that our findings have a high practical relevance.information science;Pearson correlation;cosine;similarity measure;author cocitation analysis
Dispelling the Myths Behind First-author Citation Counts
Get PDFWe conducted a full-scale evaluative citation analysis study of scholars in the XML research field to explore just how different from each other author rankings resulting from different citation counting methods actually are, and to demonstrate the capability of emerging data and tools on the Web in supporting more realistic citation counting methods. Our results contest some common arguments for the continued
use of first-author citation counts in the evaluation of scholars, such as high correlations between author rankings by first-author citation counts and other citation
counting methods, and high costs of using more realistic citation counting methods that are not well-supported by the ISI databases. It is argued that increasingly available digital full text research papers make it possible for citation analysis studies to go beyond what the ISI databases have directly supported and to employ more
sophisticated methods
koamabayili/VECTRON-author-checklist: VECTRON author checklist
No full textWe have done our best to complete the author checklist relating to the use of animals in the hut study. Note that the objective for the hut study was to evaluate the IRS treatment applications for residual efficacy against Anopheles mosquitoes, including the local An. coluzzii mosquito population. Cows were only used to attract mosquitoes into the huts and no tests were carried out directly on the cows. The author checklist is intended for use with studies where experiments are carried out on animals, which is why we have had such difficulty in completing this for the hut study, as many of the questions do not relate to how the cows were used
Author-wise bibliometric analysis based on entropy.
No full textAuthor-wise bibliometric analysis based on entropy.</p
- …
