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Reconocimiento Molecular Mediante Aptámeros de Péptidos Inmunotóxicos de Gluten
Get PDFLa enfermedad celiaca es una enfermedad que está a la orden del día, ya que afecta a un 1% de la población mundial. Esta enfermedad consiste en un daño que se produce en las microvellosidades del intestino delgado como consecuencia de la ingesta de gluten. Por tanto, debemos saber qué es el gluten. El gluten se define como aquella fracción proteica de un cereal (ya sea trigo, cebada, centeno o avena, y de sus variedades híbridas) que es insoluble en agua y cloruro-sódico 0,5 M. Las proteínas que lo componen se clasifican según el fraccionamiento de Osbourne en gluteninas y prolaminas. Se creía que solamente las prolaminas eran inmunotóxicas y que, por tanto, eran las únicas causantes de esta enfermedad, pero recientemente se ha descubierto que también las gluteninas lo son. Además, se sabe que el péptido inmunodominante, es decir, el indicador primario de la enfermedad celiaca, es el péptido 33-mer, que se encuentra en la alfa-gliadina del trigo. Existe una normativa europea del año 2009 que fija las cantidades límite de gluten que pueden presentar los alimentos etiquetados como “sin gluten” (20 ppm) y “bajos en gluten” (100 ppm). Estos niveles no son lo suficientemente bajos para cubrir a todos los pacientes, pero la metodología analítica existente, ofrece límites de cuantificación cercanos a estos valores, por lo que no pueden disminuirse. Por eso, en este trabajo, se pretende desarrollar un aptasensor que permita determinar la fracción inmunotóxica del gluten, siendo el primer paso para diseñar un sensor electroquímico que permita determinar gluten en alimentos en menores cantidades que los métodos que se utilizan hasta ahora. Hoy en día, los métodos más utilizados son métodos inmunoquímicos. De hecho, el método considerado como oficial, se basa en el uso de un ensayo inmunoquímico ELISA tipo sándwich, en el que se utiliza un anticuerpo frente a una secuencia concreta de una determinada proteína. Pero como alternativa, en este trabajo, se propone el uso de aptámeros frente a los anticuerpos tradicionales, por presentar características más ventajosas. Los aptámeros son secuencias de nucleótidos de ADN o ARN que adoptan una estructura tridimensional característica capaz de reconocer con elevada selectividad y afinidad a una amplia gama de moléculas diana. El aptámero Gli1 utilizado en este trabajo, se obtuvo mediante un proceso in vitro que se denomina SELEX (Systematic Evolution Ligands by Exponential enrichment) que fue realizado en el Equipo de Electroanálisis de la Universidad de Oviedo para obtener aptámeros contra el péptido 33-mer. El objetivo fundamental de este trabajo de investigación se basa en el estudio de la interacción entre el aptámero Gli1 y el péptido 33-mer, como base para desarrollar un aptasensor electroquímico que permita llevar a cabo la determinación de la fracción inmunotóxica del gluten. Un sensor electroquímico se define como un dispositivo de pequeño tamaño que, como resultado de una interacción química entre el analito en disolución y el sensor, transforma información química o bioquímica de tipo cualitativo o cuantitativo en una señal medible y útil analíticamente. Un aptasensor es un tipo concreto de sensor electroquímico, en el que se utilizan aptámeros como receptor molecular inmovilizado, en este caso, sobre un sustrato de oro. Como resultado, se obtuvo que este ensayo puede detectar 30 nM de péptido (0,15 ppm), lo que constituye el primer paso hacia el desarrollo de un ensayo competitivo para detectar gluten en muestras reales, ya que con el ensayo propuesto se determina péptido, no gluten
Diseño y optimización de fases sensoras para la detección electroquímica de ADN de bacterias patógenas
Get PDFDetección de biomarcadores proteicos de cáncer de páncreas mediante ensayos basados en aptámeros.
Get PDFEl adenocarcinoma ductal de páncreas (PDAC) es uno de los cánceres más mortales con una supervivencia a cinco años inferior al 9%. Este pésimo pronóstico se explica por la falta de biomarcadores para el cribado, que conduce a un diagnóstico en etapas tardías, y la resistencia a las terapias sistemáticas. En la última década se han identificado glicoproteínas séricas con glicosilación alterada en pacientes de cáncer de páncreas que podrían actuar como potenciales biomarcadores de diagnóstico de este tipo de cáncer. En este trabajo se explorará la utilización de nuevos receptores, los aptámeros, con capacidad para detectar la estructura glicosilada de estas proteínas, la cual se altera durante el desarrollo del cáncer. Se propone su detección mediante aptaensayos tipo sándwich.
Tareas a desarrollar:
1- Revisión bibliográfica y selección del marcador tumoral glicoproteico.
2- Evaluación de la afinidad del aptámero hacia la glicoproteína.
3- Desarrollo y caracterización de un aptasensor electroquímico
Estrategias de amplificación isotérmica combinadas con aptasensores: Aplicación a la detección de biomarcadores de cáncer.
Get PDFLos marcadores tumorales son moléculas cuya concentración en los fluidos corporales se ve alterada en presencia de un tumor maligno, actuando como indicadores de su desarrollo y evolución. Los métodos más utilizados para detectar marcadores tumorales son los inmunoensayos que emplean anticuerpos como receptores específicos. En este trabajo se propone evaluar receptores alternativos como son los aptámeros, secuencias sintéticas de ADN o ARN con una estabilidad química y térmica superior a la de los anticuerpos, y que se pueden marcar fácilmente con todo tipo de moléculas informadoras y grupos funcionales. La naturaleza nucleotídica de estos receptores sintéticos permite combinarlos con estrategias de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos, para mejorar la sensibilidad de los aptasensores que detectan marcadores asociados a cáncer. Tareas a desarrollar: construcción y caracterización del aptasensor; desarrollo de estrategias de amplificación isotérmica para mejorar la sensibilida
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Get PDFThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
Variations on the Author
Get PDF“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
Appropriate Similarity Measures for Author Cocitation Analysis
Get PDFWe provide a number of new insights into the methodological discussion about author cocitation analysis. We first argue that the use of the Pearson correlation for measuring the similarity between authors’ cocitation profiles is not very satisfactory. We then discuss what kind of similarity measures may be used as an alternative to the Pearson correlation. We consider three similarity measures in particular. One is the well-known cosine. The other two similarity measures have not been used before in the bibliometric literature. Finally, we show by means of an example that our findings have a high practical relevance.information science;Pearson correlation;cosine;similarity measure;author cocitation analysis
Hacia el desarrollo de dispositivos wearables basados en ácidos nucleicos para la monitorización de la salud
Get PDFEn este Trabajo Fin de Máster se investiga el uso de monocapas autoensambladas
sobre electrodos de oro formadas a partir de grupos alquino para la fabricación de
sensores electroquímicos basados en aptámeros. El objetivo principal es evaluar si
el enlace Au-C puede proporcionar una alternativa más estable frente al tradicional
enlace Au-S de las monocapas basadas en tioles ampliamente utilizado, pero con
limitaciones significativas en cuanto a estabilidad. Se busca así superar dichas
limitaciones para favorecer el desarrollo de sensores wearables, capaces de operar
de forma fiable en condiciones reales y de uso prolongado.
Para ello, se evaluaron distintos protocolos de modificación de electrodos con
alquinos para fabricar sensores electroquímicos funcionalizados con un aptámero
específico del antibiótico vancomicina. Se llevaron a cabo estudios de
caracterización electroquímica mediante voltamperometría cíclica y de onda
cuadrada, comparando su respuesta con la de sensores equivalentes basados en
tioles. Los resultados obtenidos indican que, si bien la inmovilización mediante
grupos alquino es viable, las monocapas resultantes presentan menor orden y nivel
de empaquetamiento, lo que se traduce en una elevada inestabilidad a lo largo del
tiempo. Estas limitaciones comprometen la utilidad práctica del sistema,
especialmente para aplicaciones que requieren medidas reproducibles y
sostenidas en el tiempo.
En conclusión, bajo las condiciones evaluadas, las monocapas de alquinos no
superan el rendimiento de los sistemas convencionales basados en tioles. No
obstante, representan un punto de partida prometedor para futuras optimizaciones
encaminadas a aprovechar las ventajas potenciales del enlace Au-C en el diseño
de sensores electroquímicos avanzados
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