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Em texto e no contexto social: mulher e literatura afro-brasileiras
No full textTese - (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Comunicação e Expressão, Programa de Pós-Graduação em Literatura, Florianópolis, 2011Quem é, onde e como está a mulher negra na literatura e sociedade brasileira? A partir desses questionamentos surgiu esta pesquisa que para obter respostas a essas perguntas fez antes uma leitura do trajeto trilhado pelas conquistas femininas no século XX, principalmente dentro da academia, até esse momento atual, ressaltando, entre outros aspectos, a necessidade da junção de gênero a discussões sobre raça, classe . Pesquisa cuja maior proposta é identificar a representação de gênero e raça nas obras Úrsula e do conto #A escrava# (2004), de Maria Firmina dos Reis (século XIX)); Quarto de despejo: memórias de uma favelada (1960), de Carolina Maria de Jesus; Ponciá Vicêncio (2003) e Becos da memória (2006), de Conceiçao Evaristo; e As mulheres de Tijucopapo (1982), O lago encantado de Grongonzo (1992) e Obsceno Abandono: amor e perda (2002), de Marilene Felinto. Busco com isso uma melhor compreensão da condição social e literária da mulher negra na sociedade brasileira do século XIX até o XXI. Além do objetivo maior desta pesquisa, ela também tem o intuito de refletir sobre a condição social e literária da mulher negra na literatura e sociedade, a partir da presença das mesmas como sujeito e objeto de suas escrituras.Who, where and how is the Black woman in Brazilian literature and society? This search arose from such questions. To answer them, I have completed a comprehensive study of women's achievements in the twentieth century, particularly in academia, through which I have noted, among other things, the need for gender to join discussions on race, class, and/or ethnicity. The main purpose of this work is to identify the representation of gender and race in the books Úrsula and of shortstory "A escrava" (2004), by Maria Firmina dos Reis (nineteenth century); Quarto de despejo: mémorias de uma favelada (1960), by Carolina Maria de Jesus; Ponciá Vicêncio (2003) and Becos da memória (2006), by Conceição Evaristo; and As mulheres de Tijucopapo (1982), O lago encantado de Grongonzo (1992) and Obsceno abandono: amor e perda (2002), by Marilene Felinto. Search for a better understanding of the social and literary condition of the Black woman in Brazilian society in the nineteenth through the twenty-first centuries. And also to reflect on the condition of Black women in literature and society, studying their presence as subjects and objects of their writing
Tipagem molecular e evolução do gênero Paracoccidioides
No full textDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008.A PCM é uma micose sistêmica que ocorre em vários países da América Latina, principalmente Brasil, Venezuela e Colômbia e, afeta principalmente indivíduos da população rural. Estudos de variabilidade genética de isolados do Paracoccidioides brasiliensis, utilizando diferentes tipos de marcadores moleculares, já mostraram uma alta variabilidade genética deste patógeno. O isolado Pb01, em especial, diverge das 3 espécies filogenéticas identificadas previamente (S1, PS2, PS3) e sua classificação taxonômica dentro do gênero Paracoccidioides ainda permanece não definida. Neste trabalho, foram identificados mais 16 isolados que apresentaram um genótipo semelhante ao Pb01, por análise de um marcador molecular presente no íntron1 do gene hsp70, os quais foram denominados “Pb01-like”. Utilizando a metodologia do reconhecimento de espécies filogenéticas pela concordância genealógica (GCPSR), este trabalho teve como objetivo investigar a existência de um grupo sistematicamente significante que abrigasse estes isolados do tipo “Pb01-like”, em uma amostragem total de 88 isolados. Para análise filogenética foram utilizados os métodos de máxima parcimônia e análise de Bayes de 13 loci polimórficos, tanto individuais ou concatenados, o que permitiu agrupar estes isolados “Pb01-like” em um grupo filogenético separado das 3 espécies filogenéticas S1, PS2 e PS3. Foi detectado um alto número de polimorfismos fixados entre os dois grupos geneticamente isolados, o que sugere um bloqueio do fluxo gênico entre eles. O evento de especiação do grupo filogenético “Pb01-like” é simpátrico uma vez que compartilha algumas regiões geográficas das outras 3 espécies filogenéticas. Os dois grupos, “Pb01-like” e S1,PS2,PS3, são altamente divergentes e o tempo médio estimado de isolamento genético entre eles foi de 19 milhões de anos atrás. A análise de recombinação possibilitou detectar que o evento de recombinação ocorre dentro das duas populações de forma separada, o que é compatível com o isolamento reprodutivo. De acordo com o critério do método de reconhecimento de espécies filogenéticas pela concordância genealógica (GCPSR) o grupo “Pb01-like” pode ser considerado uma nova espécie filogenética, diferente das três espécies filogenéticas previamente mencionadas (Matute et al., 2006), uma vez que o clado correspondente aos isolados “Pb01-like” aparece fortemente sustentado nas genealogias geradas a partir dos dados de polimorfismo de 13 loci analisados, tanto simples como concatenados, com valores de probabilidade posterior (1.0) e “bootstrap” (100%) altamente significantes. Análise sobre características morfológicas, possibilidade de cruzamento genético, características fenotípicas e da doença (PCM), utilizando isolados representativos dos 2 grupos, se encontram em andamento. Se forem confirmadas as características exclusivas e específicas para cada grupo aqui identificado, em conjunto com os dados de filogenia molecular, isto sustentaria fortemente a descrição formal de uma nova espécie para o gênero Paracoccidioides. e devido a grande relevância deste patógeno na área médica na América Latina seria importante nomear o clado “Pb01-like”. Uma nova nomenclatura pode facilitar a comunicação entre médicos patologistas e pesquisadores da área. Para a espécie filogenética correspondente aos isolados “Pb01-like” sugere-se a descrição formal de uma nova espécie: Paracoccidioides lutzii, em tributo ao médico micologista Adolpho Lutz, que foi o pioneiro a descrever o fungo patogênico humano P. brasiliensis há exatamente 100 anos atrás (1908). _______________________________________________________________________________ ABSTRACTParacoccidioidomycosis is a systemic illness with an area of occurrence covering most of Latin America, with highest prevalence in Brazil, Venezuela and Colombia, and that affects mainly individuals living in the countryside. Studies on difference isolates of the causative agent, Paracoccidoides brasiliensis, have revealed a great degree of genetic variability in this pathogen. The Pb01 isolate, in particular, differs from the three previously described phylogenetic species (S1, PS2 and PS3; Matute et al., 2006) and its taxonomic classification in the genus Paracoccidioides remains undefined. In the present work, sixteen isolates genotypically similar to Pb01 have been identified by analysis of a molecular marker from the first intron of the hsp70 gene; these isolates have been dubbed ‘Pb01-like’. Using the method of recognition of phylogenetic species by genealogic concordance (GCPSR), this work aimed at looking into the existence of a systematically significant group of ‘Pb01-like’ isolates from a total of 88 samples. For phylogenetic analysis the methods of maximal likelihood and Bayesian analysis were applied to thirteen polymorphic regions, including individual and concatenated loci. This allowed the grouping of the ‘Pb01-like’ isolates in a phylogenetic group distinct from S1, PS2 and PS3. A high number of fixed polymorphisms was identified between the ‘Pb01-like’ cluster and that composed of the other three species, which suggests a blockage of all genetic flow between them. The speciation event that defined the new phylogenetic group is sympatric relative to S1 and PS2. The group that includes S1, PS2 and PS3 and the ‘Pb01-like’ cluster are highly divergent and have been genetically isolated for about 19 million years. Recombination analysis revealed that recombination events occur independently inside the two groups, which suggests reproductive isolation. In keeping with GCPSR, the ‘Pb01-like group’ can be considered a new phylogenetic species distinct from the other three, since the clade corresponding to ‘Pb01-like’ isolates is strongly supported by all pedigrees independently generated from polymorphism data of the thirteen loci, with values of posterior probability (1.0) and of bootstrap agreement (100%) highly significant. Further analysis of morphological, phenotypical and pathogenic profiles, and of the possibility of mating, is under way for isolates representative of all species. If exclusive and specific characteristics are identified for the ‘Pb01-like’ group, this would justify, in conjunction with molecular phylogeny data, the formal description of a new species for the genus Paracoccidioides, which would be accompanied by a renaming of the group, in the light of the medical relevance of this pathogen in Latin America. A new nomenclature would obviously ease information exchange among pathologists and researchers. We suggest formally to name the phylogenetic species encompassing the ‘Pb01-like’ clade as Paracoccidioides lutzii, as a tribute to medical mycologist Adolpho Lutz, who first described human pathogen P. brasiliensis exactly one hundred years ago.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecula
Caracterização e análise da expressão de genes (sod3 e ccp) envolvidos no estresse oxidativo em Paracoccidioides brasiliensis
No full textDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006.O fungo Paracoccidioides brasiliensis é dimórfico e patogênico ao homem. Ele é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), a micose sistêmica de maior incidência da América Latina. O estabelecimento da infecção é dependente da transição de micélio para levedura e este processo in vitro é reversível e regulado pela mudança de temperatura de 22 °C para 36 °C. O projeto ¿Genoma funcional e diferencial do fungo Paracoccidioides brasiliensis¿ identificou 6.022 PbAEST, que correspondem a genes expressos no fungo, representando aproximadamente 80% do genoma do fungo. Na interação patógeno-hospedeiro, a resposta eficiente do patógeno contra o ataque oxidativo imposto pelas células fagocitárias do hospedeiro facilita a sua sobrevivência no hospedeiro. Os genes potencialmente envolvidos na resposta ao estresse oxidativo em P. brasiliensis, identificados no projeto transcriptoma, foram categorizados em 4 classes: enzimas antioxidantes (12 PbAESTs), biossíntese e metabolismo da glutationa e regeneração de NADPH (11 PbAESTs), homeostase de íons metálicos (3 PbAEST) e fatores transcricionais (7 PbAESTs). Entre as seqüências anotadas no transcriptoma, foram estudadas neste trabalho aquelas que codificam para a CuZn superóxido dismutase GPI-ancorada (PbSOD3) e a citocromo c peroxidase (PbCCP). A superóxido dismutase retira do ambiente radical superóxido produzindo peróxido de hidrogênio e por sua vez, a citocromo c peroxidase, uma das peroxidases existentes nas células, reduz o peróxido de hidrogênio a água. A seqüência de cDNA que codifica para a enzima CuZnSOD GPI-ancorada (PbSOD3) de P. brasiliensis foi completamente seqüenciada. Esta enzima possui massa molecular deduzida de 24,3 kDa e a assinatura característica da família CuZnSOD e da região de ancoragem a GPI na região carboxi-terminal. A análise comparativa das seqüências protéicas PbSOD3 e Sod5 de C. albicans indicou cerca de 40% de similaridade em toda a extensão da proteína, sendo mais conservadas as regiões da assinatura do sítio catalítico e de ancoragem a GPI. A análise no programa PSORT II indicou que a PbSOD3 deve estar localizada na parede celular (34,8% de probabilidade) ou com a mesma probabilidade, na membrana celular. A seqüência de cDNA que codifica para a citocromo c peroxidase (PbCCP) está parcial e a seqüência da proteína deduzida mostra a presença do sítio ativo da peroxidase, sendo bastante conservada quando comparada com CCPs de outros fungos. A análise de Southern blot indicou que os genes que codificam para as enzimas PbSOD3 e CCP estão presentes no genoma do fungo em cópia única. A análise da expressão dos genes que codificam para a PbSOD3 e PbCCP durante a transição dimórfica in vitro, mostrou que ocorreu uma oscilação; entretanto, não ocorreu uma alteração do padrão de expressão significativamente diferente entre as formas de micélio e levedura. Também não foi observada variação significativa da expressão para ambos os genes, em nível transcricional, durante o choque térmico a 42 °C. Os ensaios de medida de atividade enzimática extracelular para a enzima SOD de P. brasiliensis, utilizando o meio de cultura das células de levedura, não detectaram atividade desta enzima, sugerindo que a mesma deve estar associada à parede celular e/ou membrana celular. A atividade enzimática da CCP de P. brasiliensis durante o choque térmico a 42 °C diminuiu em função do tempo de incubação das células de levedura, entretanto os valores ainda eram altos no fim do choque térmico, indicando que provavelmente este patógeno é capaz de responder ao estresse oxidativo durante esta condição de drástica alteração fisiológica. Os dados sugerem fortemente que o P. brasiliensis está apto, desde a forma de micélio, a responder contra as injúrias provocadas pelo estresse oxidativo, uma vez que este patógeno apresenta níveis similares de expressão dos genes sod3 e ccp nas duas formas, micélio e levedura. Experimentos de RNAi ou nocaute dos genes sod3 e ccp de P. brasiliensis devem ser realizados para efetivamente demonstrar a função destas enzimas na proteção contra o estresse oxidativo. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTParacoccidioides brasiliensis is a dimorphic and human pathogenic fungus. It is the causative agent of paracoccidiodoμycoses (PCM), an endemic disease widespread in Latin
América. The establishment of infection depends on the transition from mycelium to yeast form and this process in vitro is reversible and dependent on temperature shifts from 22 C
to 36 C. The transcriptome project identified 6.022 PbAEST that corresponds to
expressed genes in fungus, representing approximately 80% of fungus genome. This data has allowed the identification of genes related in different biological processes of the
fungus such as dimorphism, virulence and pathogenicity. In pathogen−host interaction, an efficient pathogen.s response against oxidative attack imposed from host phagocytic cells
facilitates the pathogen survival in host. The genes potentially related in oxidative stress response in P. brasiliensis identified in transcriptoma project were categorized in 4 groups:
antioxidant enzymes (12 PbAESTs); biosynthesis and metabolism of glutathione and NADPH regeneration (11 PbAESTs); ions homeostasis (3 PbAESTs) and transcription factors (7 PbAESTs). Among the annoted sequences in transcriptome, that ones coding for
enzymes superoxide dismutase GPI−anchored (PbSOD3) and cytochrome c peroxidase
(PbCCP) were analyzed in this study. The enzyme superoxide dismutase removes
superoxide radical producing hydrogen peroxide and cytochroμe c peroxidase, one of peroxidases existing in cells, reduces hydrogen peroxide to water. The cDNA sequence coding for CuZnSOD GPI−anchored enzyμe from P. brasiliensis was completely sequenced. The deduced amino acid sequence of PbSOD3 has the molecular mass predicted of 24,3 kDa and pI of 6,05; furthermore, it has the protein signature of CuZnSOD
family and a region for GPI anchoring in carboxyl−terminus. The comparative analysis of protein sequences of PbSOD3 and Sod5 of C. albicans indicated approximately 40% of similarity for the entire protein, where the most conserved regions are catalytic site of
enzyme and GPI anchoring. The PSORTII program analysis revealed that PbSOD3 may be located in cell wall (34,8% of probability) or membrane plasmatic with the same probability. The cDNA sequence coding for cytochroμe c peroxidase is parcial and the protein deduced sequence has the active site of peroxidases and this region is very
conserved when compared with CCPs of other fungi. The Southern blot analysis revealed that the genes coding for enzymes PbSOD3 and PbCCP are present as single copies in the fungus genome. The expression analysis of the same genes demonstrated an oscillation
during dimorphic transition in vitro, however, do not occur any significantly difference in the gene expression pattern between mycelium and yeast forms. Also, it has not shown any
significant difference in gene expression pattern during heat shock at 42 C, at transcriptional level, for both genes. The extracellular enzymatic activity assay, using yeast
culture medium (or supernatant), was done to verify P. brasiliensis SOD activity with no activity detected. This result suggests that this enzyme may be associated to cell wall
and/or plasmatic membrane. The enzymatic activity of P. brasiliensis CCP during heat shock at 42 C decreases in function of incubation time of yeast cells, but the values remained high at the end of heat shock, indicating that probably this pathogen is able to
respond to oxidative stress during this drastic physiological change. These data strongly suggest that P. brasiliensis is capable, since mycelium form, to counteract injuries from
oxidative stress, because this pathogen presents siμilar levels of gene expression for sod3 and ccp in mycelium and yeast forms. Experiments in vitro and in vivo through gene silencing (RNAi) or nocaute may be designed utilizing P. brasiliensis sod3 e ccp genes to efficiently determine if these enzimes are important to protect against oxidative stress.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecula
Resumo da 145ª Reunião das Bibliotecas do SBU - 23/05/2016
No full textes: Adriana Cristina Fernandes, Ana Aparecida Granzotto Llagostera, Ana Maria Rabetti, Cássia Raquel Da Silva, Daniela Feijó Simões, Danielle Thiago Ferreira, Felipe Souza Bueno, Josidelma Francisca C. de Souza, Juliana Camargo, Karina Gama Cubas da Silva, Márcia Aparecida Pillon DAlloia, Márcia Regina Garbelni Sevillano, Márcia Rodrigues Ramos Torres, Márcio Souza Martins, Maria do Carmo de Oliveira, Maria Helena Segnorelli, Mirian Clavico Alves, Oscar Eliel, Sandra Aparecida Pereira, Sandra Maria Carlos Cartaxo, Silvia Rosana Modena Martini, Simone Lucas G. de Oliveira, Vanessa Evelyn Costa.
Ausências Justificadas: Fabiana Benine, Tereza Cristina Oliveira Nonato de Carvalho, Valéria dos Santos Gouveia Martins, Sueli Ferreira Júlio de Oliveira, Mônica Aparecida O. Nascimento.
Ausências Injustificadas: Adreilde de Souza O. Silva, Danielle Dantas de Sousa, Dulce Inês L.S. Augusto, Marilda Truzzi, Rosana Evangelista Poderoso
Convidada: Silvia Regina Shirom
Resumo da 147ª Reunião das Bibliotecas do SBU - 30/08/2016
No full textes: Ana Maria Rabetti, Adreilde de Souza O. Silva, Adriana Cristina Fernandes, Ana A. G. Llagostera, Cássia Raquel da Silva, Daniela Feijó Simões, Danielle Dantas de Sousa, Danielle Thiago Ferreira, Dulce Ines L. S. Augusto, Fabiana Benine, Felipe Souza Bueno, Gustavo Lebre de Marco, Josidelma Francisca C. de Souza, Karina G. C. da Silva, Márcia Ap. Pillon DAloia, Márcia Regina G. Sevillano, Márcia Rodrigues Ramos Torres, Márcio Souza Martins, Marcos Roberto Grassi, Maria do Carmo de Oliveira, Maria Helena Segnorelli, Marilda Truzzi, Mirian Clavico Alves, Mônica Ap. O. Nascimento, Oscar Eliel, Rosana Evangelista Poderoso, , Sandra Maria Carlos Cartaxo, Simone Lucas G. de Oliveira, Sueli Ferreira Júlio de Oliveira e Valéria dos Santos G. Martins.
Ausências Justificadas: Juliana Ravaschio Franco de Camargo, Rosaelena Scarpeline, Sandra Aparecida Pereira, Silvia Rosana Modena Martini e Vanessa Evelyn Costa.
Ausências Injustificadas: Nenhuma
Convidados: Mirian Cristina Alves e Eliana B. S. Moreira
Resumo da 148ª Reunião das Bibliotecas do SBU - 29/09/2016
No full textes: Ana Maria Rabetti, Adriana Cristina Fernandes, Cássia Raquel da Silva, Danielle Dantas de Sousa, Danielle Thiago Ferreira, Dulce Ines L. S. Augusto, Fabiana Benine, Felipe Souza Bueno, Gustavo Lebre de Marco, Josidelma Francisca C. de Souza, Juliana Ravaschio Franco de Camargo, Karina G. C. da Silva, Márcia Ap. Pillon DAloia, Márcia Regina G. Sevillano, Márcia Rodrigues Ramos Torres, Márcio Souza Martins, Marcos Roberto Grassi, Maria do Carmo de Oliveira, Maria Helena Segnorelli, Marilda Truzzi, Mônica Ap. O. Nascimento, Oscar Eliel, Sandra Aparecida Pereira, Sandra Maria Carlos Cartaxo, Silvia Rosana Modena Martini, Simone Lucas G. de Oliveira, Sueli Ferreira Júlio de Oliveira, Valéria dos Santos G. Martins e Vanessa Evelyn Costa.
Ausências Justificadas: Adreilde de Souza O. Silva, Ana A. G. Llagostera, Daniela Feijó Simões, Mirian Clavico Alves e Rosana Evangelista Poderoso.
Ausências Injustificadas: Rosaelena Scarpeline.
Convidados: Crisllene Queiroz Custódio, Edson Cardoso de Castro, Eliana Barbosa Moreira e Natália Elisabeth Marangoni Cosiuc
Análise da expressão gênica de macrófagos murinos infectados por fungos patogênicos (Paracoccidioides brasiliensis e Histoplasma capsulatum)
No full textTese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2007.Paracoccidioides brasiliensis e Histoplasma capsulatum são os agentes etiológicos da Paracoccidioidomicose e Histoplasmose, respectivamente. Paracoccidioides brasiliensis causa uma micose sistêmica em humanos com maior incidência na América Latina enquanto Histoplasma capsulatum pode ser encontrado principalmente nos Estados Unidos. A regulação gênica global de genes envolvidos na resposta inata contra estes fungos é pouco conhecida. No presente trabalho foi investigado o perfil transcricional de macrófagos infectados com P. brasiliensis e Histoplasma capsulatum. O RNA total de macrófagos infectados e não infectados foi extraído, hibridizado contra microarranjos de cDNA e analisados. A abordagem cinética usada neste trabalho para analisar o perfil transcricional de macrófagos murinos durante a interação tanto com P. brasiliensis quanto por H. capsulatum proporcionou um melhor entendimento dos eventos que culminam na ativação coordenada e temporal de moléculas de defesa durante esta interação. Os resultados encontrados neste trabalho indicam que as leveduras destes patógenos induzem nos macrófagos uma modulação gênica dinâmica de moléculas que podem favorecer inicialmente a sobrevivência destes fungos no interior dos fagócitos. Por outro lado, observou-se nesta interação que os macrófagos parecem responder induzindo genes relacionados a atividade fungicida, possivelmente na tentativa de conter a disseminação do fungo. Adicionalmente, considerando as análises simultâneas de expressão gênica diferencial para o P. brasiliensis, descrito por nosso grupo em trabalho anterior, após 6 horas de infecção, foi proposto um modelo de interação para o P. brasiliensis-macrófago. Dessa forma, a indução da expressão de genes pelo fungo importantes para sua adaptação no microambiente do macrófago aliado a indução de moléculas do macrófago relacionados a quimiotaxia e fagocitose sugere que a invasão de novas células pelo fungo pode ser uma estratégia favorável para esse patógeno se manter viável e se multiplicar no hospedeiro. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTParacoccidioides brasiliensis and Histoplasma capsulatum are the thermo-dimorphic fungi that cause the Paracoccidioidomycosis and Histoplasmose, respectively. Paracoccidioides brasiliensis causes a human systemic mycosis with high incidence in Latin America and Histoplasma capsulatum is specially found in the United States. Little is known about the global regulation of genes involved in the innate immune host response to this fungus. In the presente work was investigated the kinetic profile of peritoneal macrophage infected with P. brasiliensis and Histoplasma capsulatum. Total RNA from infected and non infected macrophages was extracted, hybridized onto arrays and analyzed. The results showed in this work to suggest which the pathogens have been induced in macrophages a dynamic gene modulation that can create favorable conditions for fungal persistence. By the other hand the macrophages to induced genes related with fungicide activity, probably in a tentative of elimination of the fungus. In addition, considering the simultaneous analyses of differential gene expression for the P. brasiliensis reported before by our group, at six hours post infection, was proposed a model at molecular level for the P. brasiliensis-macrophage early interaction. In this regard, the induction of gene expression by P. brasiliensis specially related which its adaptation in macrophage microenvironment of macrophage probably is a strategy developed by this fungus for its viability into the host cells.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Departamento de Biologia Celular (IB CEL)Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecula
Caracterização do módulo regulador do fator de transcrição Mlc1 de Cryptococcus neoformans
No full textTese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016.Texto liberado parcialmente pelo autor. Conteúdo restrito: Apêndices.Fatores de transcrição da família Gti1/Pac2 ocorrem exclusivamente em fungos e foram cooptados pela evolução para desempenhar papéis reguladores distintos de acordo com a espécie, papéis esses que vão do controle da transição micélio-levedura e virulência em fungos termodimórficos, à regulação do acasalamento em Candida e do metabolismo secundário em patógenos de plantas. Como essas são funções-chaves para patogênese, levantamos a hipótese de que o homólogo em Cryptococcusneoformans poderia também controlar a virulência, no caso em questão de um importante patógeno fúngico de humanos, que causa uma doença que vitima centenas de milhares de pessoas todo ano. O mutante para o gene que caracterizamos retém a capacidade de secretar diversas substâncias associadas à virulência – melanina, urease e fosfolipase – mas é hipocapsular e tem um defeito de citocinese e de crescimento a 37 °C. É avirulento em camundongos e hipovirulento em Galleria a 30 °C, o que indica que a temperatura do hospedeiro não é a única razão para o fenótipo observado. Além disso, a análise de RNA-Seq mostra que na ausência da proteína correspondente, a expressão da maioria das ORFscodantes do locus MAT é parcial ou completamente reprimida a 37 °C num meio de cultura de células. Entretanto, o mutante não apresenta um defeito na iniciação do acasalamento. Estes resultados dão suporte à idéia de que acasalamento e a resposta a estresses ambientais são mecanismos que evoluíram paralelamente, e é o primeiro relato de um fator de transcrição que controla o locus MAT de um patógeno fúngico num contexto independente do acasalamento. A proteína foi, portanto, nomeada MAT locuscontroller 1 (“controladora do locus MAT 1”, Mlc1).Gti1/Pac2 transcription factors occur exclusively in fungi and have been co-opted during evolution to perform distinct regulatory roles according to species, ranging from yeast-to-mycelium transition and virulence in dimorphic fungi, to mating in Candida and secondary metabolism in plant pathogens. As these roles are important in causing disease, we hypothesized that the Cryptococcus neoformans homologue could also control virulence in this important fungal pathogen, which causes a disease that kills hundreds of thousands of people each year. The mutant for this gene retains the ability to secrete several substances associated with virulence – melanin, urease and phospholipase – but is hypocapsular and has a cytokinesis and a growth defect at 37 °C. It is avirulent in mice and hypovirulent in Galleria at 30 °C, which indicates that host temperature is not the only reason. Furthermore, RNA-Seq analysis shows that in the absence of the protein, the expression of most protein-coding ORFs of the MAT locus is partial or completely repressed at 37 °C in a cell culture medium. However, the mutant does not have a defect in mating initiation. These results support the idea that mating and the response to environmental stress are co-evolved mechanisms, and is the first report of a transcription factor that controls the MAT locus of a fungal pathogen in a mating-unrelated context. The protein has thus been named MAT locus controller 1 (Mlc1).Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecula
Especiação, genômica comparativa e reprodução sexuada no complexo de espécies do gênero Paracoccidioides
No full textTese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012.A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica que ocorre em vários países da América Latina, principalmente Brasil, Venezuela e Colômbia, afetando principalmente indivíduos da população rural. Por meio de estudos realizados nos campos da Biologia Molecular, Biologia Evolutiva e Ecologia no gênero Paracoccidioides, foi proposto neste trabalho uma nova espécie: Paracoccidioides lutzii sp. nov. Análises filogenéticas, estudos de genômica comparativa, análises de recombinação genética e análises morfológicas demonstram que P. lutzii representa uma linhagem altamente divergente monofileticamente separada de P. brasiliensis. P. lutzii é frequentemente encontrado nas regiões Centro-Oeste e Norte do Brasil. Os estudos comparativos entre os genomas de P. brasiliensis e P. lutzii revelaram uma alta divergência e diferenças significativas no tamanho do genoma, conteúdo gênico, elementos transponíveis, e repetições simples foram identificadas entre estas espécies. Estudos comparativos entre as espécies divergentes P. brasiliensis e P. lutzii geraram informações que podem ser utilizadas na clínica bem como no diagnóstico da PCM. Estudos de filogenia molecular indicaram que estas duas espécies de Paracoccidioides teriam um ciclo de vida sexuado devido à detecção de eventos de recombinação genética dentro destas populações. Estudos de genômica comparativa de todos os fungos dimórficos e patogênicos, usando como base os dados já classicamente descritos para a levedura Saccharomyces cerevisiae, revelaram a presença de genes relacionados à reprodução sexuada que incluem: o locus MAT e genes de receptores de feromônios, de feromônio-α, de enzimas de processamento de feromônios e reguladores de sinalização de resposta a feromônios. A expressão destes genes foi avaliada por PCR em tempo real em isolados de Paracoccidioides nas formas de micélio e levedura, demostrando-se ter uma expressão preferencial na forma filamentosa, similar ao que já foi descrito para Histoplasma capsulatum e Blastomyces dermatitidis. Além disto, a expressão dos genes relacionados ao ciclo sexual teve um aumento significativo quando na presença de feromônios obtidos de sobrenadantes de co-cultura de isolados de tipos sexuais opostos. Cruzamentos de diferentes tipos sexuais, tanto de P. brasiliensis como de P. lutzii, possibilitaram a identificação de ascocarpos jovens com presença de hifas enoveladas e constritas, relacionadas ao estágio inicial do acasalamento em fungos “Pezizomycotina”. Estes dados genômicos e morfológicos fortemente indicam a existência de ciclo sexual no gênero Paracoccidioides. _________________________________________________________________________________ ABSTRACTParacoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis that occurs in several Latin American countries, mainly Brazil, Venezuela and Colombia, affecting mostly the rural population. Through studies in the fields of Molecular Biology, Evolutionary Biology and Ecology in the genus Paracoccidioides, it was proposed in this work a new species: Paracoccidioides lutzii sp. nov. Phylogenetic analyzes, comparative genomics, analysis of genetic recombination and morphological analysis showed that P. lutzii represents a separate species, highly divergent from P. brasiliensis. P. lutzii is often found in the midwest and north part of Brazil. Comparative genomics studies between P. brasiliensis and P. lutzii revealed a high divergence and differences in genome size, gene content, transposable elements and DNA repeats were identified between these species. Comparative studies between the diverging species P. brasiliensis and P. lutzii generated information that can be useful in the clinical diagnosis of PCM. Evolutionary studies suggested that these two species of Paracoccidioides have a sexual phase in its life cycle due detection of recombination events within these populations. Studies of comparative genomics of all dimorphic fungal pathogens, using classically described genes for the yeast Saccharomyces cerevisiae, revealed the presence of genes related to sexual reproduction that include: the MAT locus, pheromone receptors and genes encoding for α-pheromone, processing enzymes and regulatory pheromone response to pheromone signaling cascade. The expression of these genes has been evaluated by real time PCR of Paracoccidioides isolates in yeast and mycelial forms, showing an increased expression in the filamentous form, similar to what was already described for Histoplasma capsulatum and Blastomyces dermatitidis. Moreover, the expression of genes related to sexual cycle increased significantly after exposure of pheromone taken from co-culture supernatants of strains of opposite sex type. Sexual crosses between different mating types, of P. brasiliensis and P. lutzii, enabled the identification of young ascocarps with hyphae reeled and constricted, related to the initial stage of mating in Pezizomycotina fungi. These genomic and morphological data strongly indicate the existence of sexual cycle in the genus Paracoccidioides.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Departamento de Biologia Celular (IB CEL)Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecula
Análise de polimorfismo no gene CTLA-4 em pacientes com paracoccidioidomicose
No full textDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008.A proteína CTLA-4 é expressa principalmente em células T ativadas, possuindo um papel fundamental na resposta imune, exercendo efeito regulador na ativação de célula T através da sua ligação com as moléculas da família B7, as quais são expressas em células apresentadoras de antígenos. Polimorfismos no gene CTLA-4 têm sido associados a várias doenças autoimunes e, recentemente, à doenças neoplásicas e infecciosas. A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica, causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. As manifestações clínicas desta doença estão associadas a vários fatores como a secreção alterada de citocinas, hipergamaglobulinemia, e depressão da imunidade celular, sendo que a hiporesponsividade é também atribuída a uma maior expressão de CTLA-4 em células T de pacientes quando comparados a indivíduos controles. O presente trabalho teve por objetivo estudar a possível associação dos SNPs -318C/T na região promotora e +49A/G do éxon 1 do gene CTLA-4 com a PCM. Para isso, 74 pacientes com PCM e 76 indivíduos controles provenientes de regiões distintas do País tiveram suas freqüências alélicas e genotípicas determinadas. A comparação das freqüências genotípicas e alélicas, entre os grupos pacientes e controles, não mostrou diferenças significativas que pudessem associar o polimorfismo dos SNPs -318 e +49 do gene CTLA-4 com a PCM. A análise dos resultados referentes às freqüências haplotípicas obtidas mostrou que existe um forte desequilíbrio de ligação (D'=1) entre os SNPs -318 e +49 para os dois grupos estudados. Porém, a análise realizada não revelou diferenças significativas entre as freqüências haplotípicas dos grupos. Outro ponto importante analisado foi o estudo da estrutura genética (ancestralidade) dos grupos de pacientes e controles. Verificou-se que há predomínio de ancestralidade européia sobre as ancestralidades ameríndia e africana em ambos os grupos. Através desses resultados foi possível determinar que a população utilizada no estudo é geneticamente homogênea, e que o resultado negativo da associação detectado para o gene CTLA-4 e a PCM não está relacionado a ancestralidade da amostragem. Este trabalho demonstra que não foi observada nenhuma associação entre o polimorfismo dos SNPs -318 e +49 do gene CTLA-4 com a resistência e/ou susceptibilidade à Paracoccidioidomicose.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecula
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