1,720,972 research outputs found
miR-579-3p restrains tumor heterogeneity to overcome resistance to target therapies in metastatic melanoma
Full text linkMy PhD thesis has been directed to the study of the mechanisms responsible for the development of drug resistance in melanoma. A large subset of melanoma patients harbors activating mutations in the BRAF oncogene at position V600. These mutations sensitize tumors to inhibition by inhibitors of BRAF in combination with inhibitors of the downstream kinase MEK. This has led in the past years to approval of combo therapies composed of a BRAF and a MEK inhibitor for these patients. These combo therapies give rise to strong objective responses and provide significant improvements in overall survival. However their duration in time is strongly limited by the development of drug resistance. While initial studies focused mainly in genetic mechanisms at the basis of de novo drug resistance, in recent years several groups, including my PhD supervisor, focused their attention of non genetic mechanisms and in particular to phenotypic changes underlying drug adaptation. In this context several microRNAs have been shown to play an important role, in particular miR-579-3p which was discovered some years ago as an oncosuppressor and antagonist of drug resistance in the lab of my supervisor.
In order to assess the role of this microRNA my PhD thesis has been directed initially to build and characterize a human melanoma cell line engineered to express miR-579-3p in a transcriptionally inducible manner. After the initial characterization the cell line has been subjected to a series of studies which have led to the demonstration that miR-579 is able to severely affect the development of drug resistance. A particular emphasis has been given to bulk RNA sequencing studies as well as to single cell mass cytometry which have shown that induction of expression of miR-579-3p is able to impair drug adaptive mechanism and to strongly diminish the degree of the heterogeneity in a isogenic cell population of melanoma cells when these cells are exposed to the selective pressure of BRAF and MEK inhibitors
Role of IL-23/IL-17 axis in the development of atherosclerotic plaque
Full text linkLe malattie cardiovascolari costituiscono la principale causa di morte nei paesi industrializzati e, in tempi più recenti, hanno iniziato
ad interessare anche i paesi in via di sviluppo (Libby P. et al., 2021); prendono origine dallo sviluppo della placca aterosclerotica che
si forma in seguito all’accumulo di lipidi e cellule immunitarie nella regione sub-endoteliale delle arterie di grande e medio calibro. Il
sistema immunitario, attraverso la risposta innata e adattativa, svolge un ruolo importante nello sviluppo, progressione o regressione
dell’aterosclerosi. I macrofagi, cellule dell’immunità innata, sono dotati di un elevato grado di plasticità in risposta agli stimoli del
microambiente circostante. In particolare, si definiscono macrofagi “classicamente attivati” o pro-infiammatori di tipo M1, i macrofagi
stimolati con citochine di tipo Th1 (IL-1β, TNF-α e IFN-γ) e lipopolisacaride (LPS) (Abbas S.M. et al., 2018). In risposta a questi
stimoli, i macrofagi si attivano e si differenziano in macrofagi ad attività pro-infiammatoria. La via di segnalazione canonica è quella
mediata da IRF/STAT tramite il reclutamento di STAT1 che termina con l’attivazione del fattore di trascrizione NF-kB che a sua volta
regola l’espressione di citochine e chemochine quali IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-23 responsabili di un ulteriore reclutamento di cellule
immunitarie infiammatorie e dell’amplificazione dell' infiammazione (Abbas S.M et al., 2018). Le citochine di tipo Th2 (IL-4, IL-13)
inducono macrofagi M2 o “alternativamente attivati” attraverso la via di segnalazione canonica IRF/STAT con il reclutamento di
STAT6. I macrofagi così attivati rilasciano citochine anti-infiammatorie quali IL-10 e l’antagonista del recettore per IL-1β. Le citochine
IL-4 e IL-13 inducono un sottotipo di M2 caratterizzati dall’espressione di alti livelli di CD206 (sottotipo M2a), mentre l’interazione
dei macrofagi con immunocomplessi e LPS produce il sottotipo M2b che produce citochine sia pro- che anti-infiammatorie (IL-10, IL-
1β, IL-6 e TNF-α). La stimolazione dei macrofagi con glucocorticoidi e IL-10 attiva il sottotipo M2c che produce prevalentemente le
citochine anti-infiammatorie IL-10 e TGF-β, infine gli agonisti dei TLR attraverso il recettore dell’adenosina promuovono la
polarizzazione dei macrofagi verso il sottotipo M2d che rilascia citochine anti-infiammatorie ed il fattore di crescita VEGF (Lin P. et
al., 2021; Liu N. et al., 2021; Mohmmad-Rezaei M., et al., 2021)
IL-23, prodotta principalmente da cellule dendritiche e macrofagiche, si lega al recettore eterodimerico IL-12Rβ1 e IL-23R e attiva la
via di segnalazione JAK/STAT mediante STAT3, rilasciando citochine pro-infiammatorie quali IL-17A (Ergberg A. et al., 2020).
Nonostante sia stato ampliamente riportato il ruolo pro-infiammatorio di IL-23 in varie patologie come le malattie infiammatorie
intestinali, l’artrite reumatoide e la psoriasi (Erbel C. et al., 2014; Abbas et al., 2015; Hawkes JE et al, 2018; Hou Y. et al, 2018; Bianchi
E et al, 2019; Liu T. et al., 2020) ancora non è del tutto chiaro il suo ruolo nell’aterosclerosi, oggetto del mio progetto di dottorato.
Dato che i macrofagi svolgono un ruolo importante nella placca aterosclerotica ed il microambiente circostante può influire sulla loro
polarizzazione, è stato inizialmente studiato il ruolo di IL-23 sulla polarizzazione dei macrofagi utilizzando, come sistema sperimentale,
cellule mononucleate (PMCs) provenienti da sangue periferico di donatori sani. I PMCs sono stati indotti a differenziare in vitro in
macrofagi mediante l’aggiunta del fattore di differenziazione M-CSF per 6 giorni, successivamente sono stati polarizzati in senso
M1(MIFN), aggiungendo LPS (10ng/ml) ed IFN-γ (10ng/ml), oppure verso il fenotipo M2 (MIL-10 o MIL4), aggiungendo IL-10
(10ng/ml) o IL-4 (10ng/ml) per 18ore. Inizialmente è stata valutata la citotossicità di IL-23 in macrofagi M0, MIFN e MIL-4 mediante
il saggio Trypan blue, utilizzando tre concentrazioni diverse di IL-23 (10ng/ml; 50ng/ml e 100ng/ml) e LPS (10ng/ml) per 8h. I risultati
ottenuti hanno mostrato che IL-23 non induce tossicità in nessuna delle concentrazioni studiate e per nessuno dei trattamenti eseguiti.
Le successive analisi sulle citochine pro-infiammatorie (IL-1β, IL-6 e TNF-α) e quelle antiinfiammatorie (IL-10), mediante Real-Time
PCR e saggi immunoenzimatici, hanno evidenziato che IL-23 (100ng/ml) induce significativamente l' espressione e il rilascio di IL-6
in tutte le sottopopolazioni esaminate (RT-PCR; M0=3,1646 volte superiore al controllo, MIFN= 1,24924 volte superiore rispetto al
controllo, MIL-4= 2,87917 rispetto al controllo. Test ELISA; M0= 24,462 pg/ml, MIFN= 50,7804 pg/ml, MIL-4=110,101 pg/ml),
mentre in condizioni pro-infiammatorie, ovvero in presenza di LPS (10ng/ml) per i macrofagi MIFN e MIL-4 o LPS (200ng/ml) e
IFN-γ (25ng/ml) per i macrofagi M0, IL-23, aumenta significativamente l' espressione di IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10 solo nei macrofagi
MIFN (IL-1β; 24,0926 volte superiore rispetto al controllo, IL-6; 33,16 volte superiore rispetto al controllo; TNF-α; 3,23344 volte
superiore rispetto al controllo) (n=4 prove).
Per valutare se IL-23 possa intervenire anche nel reclutamento delle cellule monocito-macrofagiche, visto che quest’ultime migrano
nel sito target all' interno dei tessuti guidati da un' ampia gamma di agenti chemiotattici, sono stati effettuati saggi di migrazione in
camere di Boyden in presenza delle tre concentrazioni di IL-23 precedentemente testate (10ng/ml,50ng/ml e 100ng/ml). Dai risultati è
emerso che l’effetto maggiore si riscontra significativamente su cellule MIFN esposte a una concentrazione di IL-23 pari a 50 ng/ml e
il valore risulta essere superiore al 50% rispetto all’effetto prodotto da MCP-1, mentre nei macrofagi MIL-4 l’effetto chemiotattico
prodotto da IL-23 risulta essere inferiore al 50% rispetto all’effetto prodotto da MCP-1. A causa della difficoltà di reperire donatori di
sangue durante il periodo di chiusura per pandemia COVID-19, è stata utilizzata la linea cellulare monocitica umana THP-1. Le cellule
THP-1 sono state coltivate in presenza di PMA per 24 ore e dopo un periodo di resting sono state polarizzate in senso M1, M2a e M2c
o lasciate non polarizzate M0. Le cellule sono state successivamente stimolate con IL-23 (100ng/ml) e in presenza o assenza di stimolo
pro infiammatorio (LPS 10ng/ml o 200ng/ml IFN-γ 25ng/ml) per 8 ore. I risultati ottenuti mediante Real-Time PCR (n=3 prove),
focalizzando sempre sulla polarizzazione dei macrofagi, hanno mostrato che nella sola popolazione di macrofagi M0, IL-23 induce
l' espressione significativa delle citochine pro-infiammatorie IL-1ß (2,24255 volte superiore rispetto al controllo), IL-6 (3,28573 volte
superiore rispetto al controllo) e TNF-α,(2,319 volte superiore al controllo) suggerendo un'azione pro-infiammatoria e l' attivazione dei
macrofagi, mentre negli altri sottotipi non induce alcun cambiamento dell'espressione delle citochine pro-infiammatorie. I risultati
hanno, inoltre, mostrato che in tutte le popolazioni studiate, IL-23 induce un aumento significativo dell' espressione di IL-10
(M0=3,09279 volte superiore rispetto al controllo, M1=1,54044 volte superiore rispetto al controllo; M2a=1,80495; M2c=1,77277
volte superiore rispetto al controllo).
Il co-trattamento di LPS con IL-23 aumenta significativamente l' espressione di IL-1β (M0=11,7636 volte superiore rispetto al controllo;
M1= 1,51246 volte superiore rispetto al controllo; M2a=8,83959 volte superiore rispetto al controllo; M2c=16,142 volte superiore
rispetto al controllo), IL-6 (M0=356,572 volte superiore rispetto al controllo; M1=2,15239 volte superiore rispetto al controllo; M2a=
221,005 volte superiore rispetto al controllo; M2c=509,872 volte superiore rispetto al controllo), TNF-α (M0=8,03037 volte rispetto al
controllo; M1=1,54109; M2a=7,04826 volte superiore rispetto al controllo; M2c= 16,2489 volte superiore rispetto al controllo) e IL-
10 (M0=29,1812 volte superiore rispetto al controllo; M1=2,4427 volte superiore rispetto al controllo; M2a= 16,9109 volte superiore
rispetto al controllo; M2c=48, 8999 volte superiore rispetto al controllo) in tutti i fenotipi di macrofagi, suggerendo che IL-23 abbia
un' azione sinergica con LPS aumentando l' infiammazione.
Un recente studio condotto sul modello murino di Hou Y. e colleghi ha rilevato che IL-23 induce la produzione di IL-17A, IL-17F, IL-
22 e IFN-γ nei macrofagi peritoneali (Hou Y. et al, 2018). Conseguentemente la nostra attenzione si è spostata sul pathway IL-23/IL-
17. I macrofagi M0, derivati da monociti circolanti, sono stati polarizzati e trattati con IL-23 (100ng/ml) in presenza o assenza di
stimolo pro infiammatorio (LPS 10ng/ml o LPS 200ng/ml e IFN-γ 25ng/ml) per 8 ore. Le cellule trattate sono state analizzate mediante
Test ELISA per la produzione di IL-17A, IL-22 e IL-10. I risultati ottenuti hanno mostrato come, sorprendentemente, tutti i macrofagi
analizzati producano IL-17A (M0= 29,0382 pg/ml, MIFN= 4,5216 pg/ml e MIL-4= 20,58212 pg/ml) e i macrofagi non differenziati
ne rappresentano la principale fonte di produzione. Inoltre, i macrofagi MIFN sono gli unici macrofagi che producono IL-22 (2,05
pg/ml), mentre, come è ormai noto, gli M2 sono i principali produttori di IL-10 (462,4 pg/ml).
Sulla base di questi risultati, l' attenzione si è focalizzato sulla popolazione non ancora differenziata di macrofagi, M0. Sono state quindi
analizzate l'espressione degli mRNA e la produzione delle citochine IL-17A, IL-22, IL-10, coinvolte nell' asse IL-23/IL-17, in macrofagi
derivati da monociti di donatori sani. I risultati hanno evidenziato che IL-23 induce un aumento significativo dell' espressione degli
RNA messaggeri e conseguente produzione di IL-17A nei macrofagi M0, mentre in associazione con LPS e IFN-γ potenzia
significativamente l' espressione e il rilascio di IL-17A e IL-10, suggerendo che LPS abbia un'azione sinergica con IL-23. L’analisi in
immunofluorescenza con doppia marcatura (CD86 e IL-17A) ha permesso non solo di confermare la produzione di IL-17A ma anche
di verificare che la popolazione esaminata sono macrofagi (CD86+). Analizzando il pathway a valle di IL-23 i risultati hanno
confermato l’induzione significativa dell' espressione di STAT3, seppur lieve, a seguito del trattamento unicamente con IL-23.
Lo studio dell’espressione e della presenza dei marcatori di superficie permette di classificare il fenotipo dei macrofagi prodotti in
seguito alla stimolazione con IL-23. L' analisi dei marker di superficie, mediante citometria a flusso, ha mostrato che i macrofagi M0,
stimolati con IL-23 (100ng/ml), inducono un fenotipo poco chiaro. Infatti, questa stimolazione ha mostrato un aumento significativo
del marcatore M1 (CD86) (MFI= 4,5) rispetto alle cellule non trattate ma anche del marcatore M2 (CD206) (MFI= 1,04667). Tuttavia,
il marcatore di superficie CD86 sembra essere più diffuso.
L’analisi morfologica e morfometrica di placche umane, stabili e complicate, ha evidenziato una maggiore presenza di IL-17A e CD86
nelle placche complicate rispetto alle placche stabili. L’analisi in immunofluorescenza effettuata su sezioni di placca aterosclerotica
umana ha confermato la presenza di IL-17A nei macrofagi CD86 positivi nelle placche aterosclerotiche (Pearson's coefficient= 0.738)Atherosclerosis is the main cause of death in industrialized countries and, more recently, it has also started to affect developing countries. The immune system plays a key role in the disease progression. Both innate and adaptive immunity cells are involved in the inflammatory response. Macrophages, belonging to the innate immunity, are plastic cells and their phenotype can be influenced by the surrounding microenvironment. Indeed, these cells can polarize into two types of macrophages: one characterized by a proinflammatory phenotype, called M1, which promotes inflammation by releasing proinflammatory cytokines, and one characterized by an anti-inflammatory phenotype, M2, which releases anti-inflammatory cytokines. In human atherosclerotic plaques the localization of M1 and M2 is different. Indeed, M1 macrophages are aggregated on the shoulders of the vulnerable plaques while M2 macrophages are present in the stable region away from the lipid core. Cytokines can drive macrophages’ phenotype and functions. IL-23 is a proinflammatory cytokine involved in various inflammatory and autoimmune diseases, which may also play a role in the development of atherosclerosis. IL-23 binds to its receptor IL-23R and IL-12Rβ1 and activates the JAK/STAT signaling pathway via STAT3, releasing cytokines such as IL-17A, IL-22 and IL-6. Our study focused on investigating the role of IL-23 in atherosclerosis. In particular, we analysed the role of IL-23 in macrophage polarization by Real-Time PCR, immunoenzymatic assay, flow cytometry and immunofluorescence. The analysis was carried out both on macrophages derived from THP-1 cell line models and on macrophages derived from monocytes obtained from healthy donors. Results regarding macrophages derived from human leukemia THP-1 cell line showed that IL-23 promotes the expression of the pro-inflammatory cytokines IL-1ß, IL-6 and TNF-α in M0 macrophages, suggesting the induction of macrophage activation. It also led to an increase in the expression of IL-10 in all populations studied. In inflammatory conditions, after the stimulation with lipopolysaccharide (LPS), IL-23 increased the expression of IL-1β, IL-6 and TNF-α and IL-10 levels in all macrophage phenotypes, suggesting a synergic action with LPS. Experiments on macrophages derived from healthy donors’ monocytes did not give the same results. Indeed, IL-23 induced the expression and release of IL-6 in all subpopulations examined, while the expression of IL-1β, IL-6, TNF-α and IL-10 only increased in M1 macrophages in pro-inflammatory conditions. Furthermore, IL-23 induced M1 macrophages migration suggesting a chemotactic function. Another surprising phenomenon observed was that all macrophages produced IL-17A, with resting macrophages representing the main source of production. IL-23 also induced an increase in the expression of IL-22 and IL-10 in resting macrophages and, in association with LPS and IFN-γ, it potentiated the expression and production of IL-17A and IL-10, suggesting a synergic action between LPS and IL-23. Indeed, the stimulation with IL-23 increased both CD86 and CD206 surface markers, although, CD86 appeared to be prevalent. The immunofluorescence analysis showed that all macrophages produce IL-17A and that IL-23 increases its production, while the immunohistochemistry analysis confirms the presence of macrophages and IL-17A in atherosclerotic plaques and their co-localization
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Full text linkThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
Variations on the Author
Full text link“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
Appropriate Similarity Measures for Author Cocitation Analysis
Full text linkWe provide a number of new insights into the methodological discussion about author cocitation analysis. We first argue that the use of the Pearson correlation for measuring the similarity between authors’ cocitation profiles is not very satisfactory. We then discuss what kind of similarity measures may be used as an alternative to the Pearson correlation. We consider three similarity measures in particular. One is the well-known cosine. The other two similarity measures have not been used before in the bibliometric literature. Finally, we show by means of an example that our findings have a high practical relevance.information science;Pearson correlation;cosine;similarity measure;author cocitation analysis
Promozione del benessere sociale ed emotivo nei giovani: presentazione di un progetto pilota.
No full textIl benessere sociale ed emotivo dei giovani è uno stato di equilibrio emotivo, psicologico, socio-relazionale e fisico che permette al soggetto di viversi come autoefficace e integrato nella società.
Le Linee guida per la “promozione del benessere sociale ed emotivo nei giovani di età compresa tra gli 11 e i 19 anni” (Blank et al., 2009) riportano gli elementi del nucleo teorico della Life Skills Education per definire una serie di raccomandazioni utili a strutturare interventi di promozione della salute e che possono essere così riassunte:
•definire una cornice strategica;
•individuare principi chiave e condizioni dell’intervento;
•strutturare programmi educativi;
•lavorare con genitori e famiglie;
•lavorare in collaborazione con i giovani;
•istituire un aggiornamento professionale continuo.
Da queste basi, il progetto pilota triennale di Life Skills Education per la promozione del benessere sociale ed emotivo presentato nell’Istituto Comprensivo “A. Manzi” di Guidonia, mira a implementare – attraverso attività psico-educative mirate per gli studenti, le famiglie e gli insegnanti – nella popolazione target (studenti di età 11-14):
•felicità, fiducia in se stessi e non sperimentazione di sentimenti depressivi (benessere emotivo);
•un senso di autonomia e controllo sulla propria vita, resilienza, partecipazione alla vita relazionale (benessere psicologico);
•l’abilità di avere buoni rapporti con altri e di evitare comportamenti distruttivi, delinquenza, violenza e bullismo (benessere sociale).
Le fasi dell’azione educativa prevedono:
1.una fase di valutazione di bisogni e risorse dell’adolescente, della famiglia e della scuola;
2.la definizione dell’area di abilità di vita che sarà oggetto d’intervento e la formazione degli insegnanti;
3.la fase operativa.
L’obiettivo finale è la sperimentazione e la standardizzazione di un modello d’intervento di alta efficacia e facile applicabilità e l’eventuale replicabilità in altre realtà sociali.
Blank et al. (2009) Systematic review of the effectiveness of universal interventions which aim to promote emotional and social wellbeing in secondary schools. London: NICE
Dispelling the Myths Behind First-author Citation Counts
Full text linkWe conducted a full-scale evaluative citation analysis study of scholars in the XML research field to explore just how different from each other author rankings resulting from different citation counting methods actually are, and to demonstrate the capability of emerging data and tools on the Web in supporting more realistic citation counting methods. Our results contest some common arguments for the continued
use of first-author citation counts in the evaluation of scholars, such as high correlations between author rankings by first-author citation counts and other citation
counting methods, and high costs of using more realistic citation counting methods that are not well-supported by the ISI databases. It is argued that increasingly available digital full text research papers make it possible for citation analysis studies to go beyond what the ISI databases have directly supported and to employ more
sophisticated methods
koamabayili/VECTRON-author-checklist: VECTRON author checklist
No full textWe have done our best to complete the author checklist relating to the use of animals in the hut study. Note that the objective for the hut study was to evaluate the IRS treatment applications for residual efficacy against Anopheles mosquitoes, including the local An. coluzzii mosquito population. Cows were only used to attract mosquitoes into the huts and no tests were carried out directly on the cows. The author checklist is intended for use with studies where experiments are carried out on animals, which is why we have had such difficulty in completing this for the hut study, as many of the questions do not relate to how the cows were used
- …
