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Encapsulation of proteins into human erythrocytes: a kinetic investigation.
No full textModerate osmotic shocks of human erythrocytes by hypotonic dialysis (0.06 mosmol/kg) induce cell swelling and formation of pores, without causing apparent lysis. Using 125I-labeled macromolecules of different molecular weight and net charge, we followed the kinetics and efficiency of their encapsulation into erythrocytes. After a 20-30 min period of cell dialysis, macromolecules of up to 50 kDa begin diffusing into the swollen cells by a process which can be described by a first-order two-compartment kinetics. Adsorption to the external cell surface was insignificant, while adsorption to the inner membrane surface was substantial (15-20\%) only for positively charged proteins, at physiological pH. After resealing, pores of a 12-14 kDa cut-off might remain open allowing some release of entrapped material (20-30\%), depending on the final cytocrit, while the remaining might be associated with inner membrane or cytosolic components. Although the method of hypotonic dialysis is known to affect minimally the biophysical and immunological properties of red blood cell membranes, the interaction of encapsulated material with cell constituents would need to be further assessed when considering red cells as macromolecular carriers
Red blood cells as carriers for delivering of proteins.
No full textThe potential use of red blood cells as a carrier system for transport and delivery of pharmacological substances is well documented. Various methods have been attempted for encapsulation of drugs; in this review we evaluate critically all the procedures illustrating their advantages and disadvantages. Moreover, we present kinetic studies of protein encapsulation by moderate hypotonic dialysis, which allows entrapment of molecules with MW less than 50,000 Da with negligible stress of the erythrocyte membrane. Furthermore data reveal that the resealing procedure commonly used is insufficient to completely seal pores of loaded erythrocytes, allowing entrapped proteins with MW less than 12-14,000 Da to escape. However, only 20-30\% of the entrapped material is released, depending on the final cytocrit, while the remaining is associated to the inner membrane or to cytosolic components. Although the method of hypotonic dialysis is known to be the one that minimally affects the biophysical and immunological properties of the red blood cell membrane, the interaction of encapsulated material with cell costituents would need to be further assessed when considering red cells as macromolecular carriers
Proteomic, pigment composition and organization of thylakoid membranes in iron-deficient spinach leaves
No full textPROTEOMICA E METABOLOMICA PER L'INDIVIDUAZIONE DI INDICATORI SENSIBILI DI SICUREZZA E QUALITA' NELLA FILIERA AGROALIMENTARE
No full textIl programma di ricerca si propone di utilizzare metodologie d’indagine innovative per contribuire all’innalzamento degli standard di sicurezza e qualità alimentare per mezzo di:
1-Sviluppo di metodi immunometrici chemiluminescenti ELISA, rapidi e molto sensibili, per l’individuazione e la quantificazione della contaminazione da parte di batteri a potenziale patogeno in materie prime, prodotti trasformati e alimenti conservati. Al fine di permettere procedure di screening veloce per la ricerca contemporanea di diversi ceppi batterici, i metodi saranno sviluppati in formato multianalita per le specie: Escherichia coli, Yersina enterocolitica, Listeria monocytogenes e Salmonella thyphimurium.
2-Definizione di una strategia analitica integrata e multidimensionale: a) per l’individuazione e caratterizzazione di diversi aspetti relativi alla patogenicità “effettiva” dei microrganismi, in relazione alle loro caratteristiche biofisiche, quali presenza di fimbrie e capacità di formare biofilm; b) per l’identificazione e la misura quantitativa di nuovi marker, sia proteici sia metabolici, associabili alle differenti patogenicità e riguardanti eventualmente anche i meccanismi di comunicazione interbatterica (quorum sensing).
3-Sviluppo, nel sistema modello “sfarinato di nocciola/Bacillus cereus”, di strategie per la totale identificazione dei componenti peptidici e proteici presenti negli alimenti volutamente contaminati da microrganismi notoriamente patogeni, da comparare con alimenti di controllo al fine di individuare le tossine prodotte per poi sviluppare metodi per la loro determinazione quantitativa.
4-Sviluppo di metodi analitici innovativi e affidabili per l’identificazione strutturale di allergeni caratteristici di arachide e nocciola e identificazione di peptidi marker. Sviluppo di metodi, sia basati su HPLC-MS sia immunometrici, per l’analisi in alimenti di allergeni naturali derivanti da adulterazione o da contaminazione durante il processo tecnologico di produzione.
Inoltre si intendono sviluppare nuove metodologie analitiche per la proteomica e metabolomica vegetale e di microrganismi per mezzo di:
1-Nuovi protocolli di estrazione, purificazione e frazionamento di proteine e metaboliti.
2-Tecniche micro-separative in cromatografia e loro abbinamento con ESI-MS; produzione e valutazione di colonne monolitiche polimeriche.
3-Strategie identificative per la metabolomica tramite HPLC-MS/MS.
4-Una nuova strategia identificativa di sequenze peptidiche (TAGs) per il riconoscimento di proteine mediante un approccio “multi task”, che utilizzi le differenti caratteristiche degli spettrometri di massa Q-TOF e Q-TRAP.
5-Metodi di misura quantitativa relativa in proteomica e metabolomica che non utilizzino metodologie ICAT.
6-Metodi multi-analita e multi-matrice per l’analisi di micotossine
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Full text linkThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
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