1,721,001 research outputs found
Carcinogénesis por acetato de medroxiprogesterona (mpa) en el ratón Balb/c : estudios "in vivo" de factores involucrados en la progresión y en la inducción tumoral
Get PDFESTUDIOS DE LA REGULACIÓN DEL CRECIMIENTO TUMORAL En nuestro laboratorio se demostró que el tratamiento con MPA induce adenocarcinomasde mama en hembras vírgenes BALB/c. A partir de estos tumores se originaron distintaslíneas tumorales in vivo, la mayoria de las cuales dependían del MPA para su crecimientoen los animales transplantados. Respecto a la capacidad regulatoria del MPA sobre el crecimiento tumoral, los resultadosobtenidos muestran que: a. En las líneas dependientes de MPA (MPA-D), esta hormona fue capaz de estimularel crecimiento tumoral, aún mucho tiempo después de que los tumores habían sidotransplantados. b. La remoción de la hormona provocó la regresión de tumores ya palpables que, sinembargo, retomaron su crecimiento algunas semanas más tarde. En los pasajes subsiguientesla mayoría de estos tumores retuvieron sus receptores hormonales y su comportamiento MPA-D. c. La ovariectomía retardó, aún en presencia del MPA, el crecimiento de los tumores MPA-D, pero no afectó el crecimiento de los tumores autónomos. d. En las líneas MPA-D la P tuvo una actividad estímulatoria similar a la del MPA. e. En los animales sialoadenectomizados el MPA no perdió la capacidad de estimularel crecimiento tumoral. f. El MPA disminuyó los niveles de RP y aumentó los niveles de RE en las lineas MPA-D. A continuación se estudió la capacidad inhibitoria de los estrógenos sobre tumores MPA-D y autónomos RE+: a. Todas las dosis utilizadas de BE y de E2 inhibieron el crecimiento y produjeron laregresión de los adenocarcinomas inducidos por MPA, de los tumores primarios yde sus metástasis, aún en presencia de MPA o P. b. Las dosis más altas de BE no inhibieron el crecimiento de adenocarcinomas de mamaespontáneos RE-. c. Entre un 20 y un 50 % de los tumores MPA-D se hicieron resistentes al tratamientoestrogénico. En los pasajes subsiguientes estos tumores permanecieron resistentes aestrógenos y la mayoría conservó el patrón MPA-D. ESTUDIOS DE INDUCCIÓN TUMORAL En este trabajo también se llevaron a cabo experimentos en los cuales se investigósi la ovariectomía o la sialoadenectomía afectaban la capacidad tumorigénica del MPA ysi la P también era capaz de inducir tumores de mama. Los resultados mostraron que: a. El tratamiento con MPA aumenta la incidencia de tumores de mama en una cepaportadora de MMTV como C3H. b. Tanto la ovariectomía como la sialoadenectomía redujeron significativamente la capacidadtumorigénica del MPA. c. El tratamiento con P indujo tumores de mama en hembras vírgenes BALB/c. Lostumores inducidos por P fueron diferentes a los inducidos por MPA, mientras queéstos fueron mayoritariamente de histología ductal y HD, los inducidos por progesteronafueron de morfología lobulillar y HI. d. Tanto en los tumores inducidos por MPA como por P se encontró que la morfologíaductal se asociaba a un crecimiento HD, mientras que la morfología lobulillar estabaasociada a un patrón de crecimiento autónomo. A partir de estos resultados se puede concluir que los progestágenos sintéticos y naturalesinducen, en la cepa BALB/c, adenocarcinomas de mama ductales y lobulillares quedifieren entre sí en su sensibilidad hormonal. Mientras que la mayoría de los tumores ducta-les son muy sensibles a la presencia de hormonas y factores estimulatorios e inhibitorios,los tumores lobulillares presentan un crecimiento autónomo. Dado que en las mujeres aparecentumores mamarios con ambas morfologías, este modelo brinda la posibilidad de estudiarlos eventos que determinan y regulan el crecimiento de los dos tipos de neoplasias.Fil: Kordon, Edith Claudia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Carcinogénesis por acetato de medroxiprogesterona (mpa) en el ratón Balb/c : estudios "in vivo" de factores involucrados en la progresión y en la inducción tumoral
No full textESTUDIOS DE LA REGULACIÓN DEL CRECIMIENTO TUMORAL En nuestro laboratorio se demostró que el tratamiento con MPA induce adenocarcinomasde mama en hembras vírgenes BALB/c. A partir de estos tumores se originaron distintaslíneas tumorales in vivo, la mayoria de las cuales dependían del MPA para su crecimientoen los animales transplantados. Respecto a la capacidad regulatoria del MPA sobre el crecimiento tumoral, los resultadosobtenidos muestran que: a. En las líneas dependientes de MPA (MPA-D), esta hormona fue capaz de estimularel crecimiento tumoral, aún mucho tiempo después de que los tumores habían sidotransplantados. b. La remoción de la hormona provocó la regresión de tumores ya palpables que, sinembargo, retomaron su crecimiento algunas semanas más tarde. En los pasajes subsiguientesla mayoría de estos tumores retuvieron sus receptores hormonales y su comportamiento MPA-D. c. La ovariectomía retardó, aún en presencia del MPA, el crecimiento de los tumores MPA-D, pero no afectó el crecimiento de los tumores autónomos. d. En las líneas MPA-D la P tuvo una actividad estímulatoria similar a la del MPA. e. En los animales sialoadenectomizados el MPA no perdió la capacidad de estimularel crecimiento tumoral. f. El MPA disminuyó los niveles de RP y aumentó los niveles de RE en las lineas MPA-D. A continuación se estudió la capacidad inhibitoria de los estrógenos sobre tumores MPA-D y autónomos RE+: a. Todas las dosis utilizadas de BE y de E2 inhibieron el crecimiento y produjeron laregresión de los adenocarcinomas inducidos por MPA, de los tumores primarios yde sus metástasis, aún en presencia de MPA o P. b. Las dosis más altas de BE no inhibieron el crecimiento de adenocarcinomas de mamaespontáneos RE-. c. Entre un 20 y un 50 % de los tumores MPA-D se hicieron resistentes al tratamientoestrogénico. En los pasajes subsiguientes estos tumores permanecieron resistentes aestrógenos y la mayoría conservó el patrón MPA-D. ESTUDIOS DE INDUCCIÓN TUMORAL En este trabajo también se llevaron a cabo experimentos en los cuales se investigósi la ovariectomía o la sialoadenectomía afectaban la capacidad tumorigénica del MPA ysi la P también era capaz de inducir tumores de mama. Los resultados mostraron que: a. El tratamiento con MPA aumenta la incidencia de tumores de mama en una cepaportadora de MMTV como C3H. b. Tanto la ovariectomía como la sialoadenectomía redujeron significativamente la capacidadtumorigénica del MPA. c. El tratamiento con P indujo tumores de mama en hembras vírgenes BALB/c. Lostumores inducidos por P fueron diferentes a los inducidos por MPA, mientras queéstos fueron mayoritariamente de histología ductal y HD, los inducidos por progesteronafueron de morfología lobulillar y HI. d. Tanto en los tumores inducidos por MPA como por P se encontró que la morfologíaductal se asociaba a un crecimiento HD, mientras que la morfología lobulillar estabaasociada a un patrón de crecimiento autónomo. A partir de estos resultados se puede concluir que los progestágenos sintéticos y naturalesinducen, en la cepa BALB/c, adenocarcinomas de mama ductales y lobulillares quedifieren entre sí en su sensibilidad hormonal. Mientras que la mayoría de los tumores ducta-les son muy sensibles a la presencia de hormonas y factores estimulatorios e inhibitorios,los tumores lobulillares presentan un crecimiento autónomo. Dado que en las mujeres aparecentumores mamarios con ambas morfologías, este modelo brinda la posibilidad de estudiarlos eventos que determinan y regulan el crecimiento de los dos tipos de neoplasias.Fil: Kordon, Edith Claudia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Discovery of BRCA Mutations: Historical Perspective of Its Scientific, Clinical and Social Impact
Get PDFIn the human genome, BRCA1 and BRCA2 (for BReast CAncer 1 and 2) genes encode for proteins involved in several functions that are crucial for the maintenance of genome stability and integrity. They participate in DNA damage response and repair pathways and, therefore, act as tumor suppressor genes. Mutations in these genes, which are located in chromosomes 17q21 and 13q13 respectively, are responsible for a great fraction of inherited breast and ovarian cancers, as well as other pathologies, such as Fanconi Anemia. Approximately 30 years ago, a report from a group of the School of Public Health at the University of California about a hypothetical gene that led to predisposition to early-onset breast cancer in certain families changed the history of breast cancer research, diagnosis, and prevention. Nowadays, the accessibility of genetic testing and the availability of different approaches as wide coverage screenings, prophylactic mastectomies, and risk-lowering drugs benefits BRCA1 and BRCA2 mutation carriers enormously. This chapter summarizes the unique trajectory of BRCA research and its scientific and social implications.Fil: Burachik, Natalia Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Ortiz, Ana Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Kordon, Edith Claudia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentin
Mechanisms involved in the oncogenic activity of the protein R-spondin3 in the mammary gland
Get PDFLos genes R-spondin (Rspo) codifican para una familia de proteínas de secreción quemodulan las vías de señalización Wnt y están involucradas en múltiples procesos normales ypatológicos, de desarrollo y diferenciacion. Nuestro grupo determinó que particularmente Rspo3, aparece frecuentemente mutado y sobre-expresado en tumores inducidos por el virus deltumor mamario murino (MMTV), induciendo la transformación de células mamarias. Estosresultados también fueron corroborados posteriormente por otro grupo de trabajo. En el marco de esta tesis doctoral, demostramos que Rspo3 puede ser expresado porcélulas mamarias, no infectadas por MMTV, particularmente en aquellas que presentanmarcadores basales. De hecho, líneas tumorales mamarias que no expresan receptoreshormonales y poseen un fenotipo altamente metastásico son las que expresan niveles más altosde este gen. A continuación, nos propusimos determinar si Rspo3 se expresa en la glándulamamaria murina normal. Para ello, a partir de tejido de hembras vírgenes de la cepa C57B/L6, sesepararon las diferentes poblaciones celulares mediante citometría de flujo, y por RT-PCRcuantitativa se pudo determinar que la subpoblación basal enriquecida en células stem (Lin- /CD24+/CD29hi) expresa Rspo3, mientras que este ARNm no fue detectado en la subpoblaciónluminal. Al evaluar el efecto de RSPO3 sobre la línea epitelial mamaria no-tumoral NMuMG,hallamos que esta proteína favorecía características celulares asociadas a la transición epiteliomesenquimal,como la reducción en los niveles de E-cadherina y el incremento en la expresiónde Fibronectina, así como cambios morfológicos característicos de este proceso. Para investigar las consecuencias de la disminución de la expresión endógena de Rspo3 enlas células tumorales mamarias, se transfectó de manera estable células de la línea murina SCg6con diferentes secuencias de shRNA específicos para Rspo3. En aquellos clones en los que severificó una importante disminución en la expresión de dicha proteína se observó, por análisis de RT-PCR cuantitativa e inmunofluorescencia, una reducción en los niveles de marcadores basalescomo Vimentina. También, pudimos determinar en dichos clones la inhibición de la capacidadmigratoria de estas células así como la reducción en los niveles de actividad nuclear de β-catenina, lo que sugiere que Rspo3 estaría participando a través de la activación de la víacanónica de Wnt. Finalmente, se inocularon células de la línea SCg6 con Rspo3 efectivamente silenciado enlas glándulas mamarias o subcutáneamente y se evaluó la capacidad tumorigénica de lasmismas. Hallamos que estos clones no generaban tumores o lo hacían con una latencia mayorque las células SCg6 parentales. En conjunto, estos resultados demuestran que Rspo3 es relevante para el mantenimientode la capacidad tumorigénica de las células mamarias y sugieren que participaría en elmantenimiento del fenotipo basal tanto de células mamarias normales como tumorales.R-spondin genes encode for a family of secreted proteins that modulate Wnt signalingpathways. They have been involved in the embryonic development, tissue differentiation,diverse diseases and they have been postulated as potent stem cells grow factors. Our groupestablished that Rspo, particularly Rspo3, is frequently mutated and over-expressed in inducedtumors by the Mouse Mammary Tumor Virus (MMTV) and its over-expression induces mammarycells transformation. These results also have been found later by another group. In this thesis, we demonstrated that Rspo3 can be expressed by mammary cells, whichexpress basal/mesenchymal markers, even in absence of MMTV infection. Particularly, cell lineswhich do not express hormonal receptors and have a highly metastatic phenotype, express highlevels of Rspo3. Then, we studied the expression of Rspo3 in the normal murine mammaryglands. Tissues from virgin females of C57B/L6 strain were obtained and the different mammarycell populations were isolated by flow cytometry. The results obtained by quantitative RT-PCRindicate that the basal stem- enriched subpopulation (Lin-/CD24+/CD29hi) expresses Rspo3 butnot the luminal cells. We evaluated the effect of Rspo3 in non-tumoral mammary epithelial cell line NMuMGand we found that RSPO3 promoted characteristics associated with epithelial-to-mesenchymaltransition favors, a reduction in the levels of the epithelial marker e-cadherin and an increase inthe basal/mesenchymal marker fibronectin, associated with a change in cell morphology. In order to analyze the effect of Rspo3 silencing, mammary tumor cell line SCg6 wasstably transfected with specific shRNA sequences against Rspo3. We observed a decrease in Vimentin expression by analysis of quantitative RT-PCR and immunofluorescence. Furthermore,we detected the inhibition of migration ability by "wound healing assay" and a decrease in β-catenin nuclear activity, suggesting that Rspo3 could be promoting canonical pathway activation. Finally, we studiedether the tumorigenic ability oh the SCg6-shRspo3 cell line in vivo byinjecting cells into the mammary glands or subcutaneously in mice. Tumor generation appearedlate or in some cases no tumors were found compared to control SCg6-shScrambled cellsinjected in mice. Taking together, these results demonstrate that Rspo3 is relevant in the maintenance ofmammary tumoral characteristics, and suggest that this protein could participate in themaintenance of basal phenotype in normal and oncogenic mammary cells.Fil: Tocci, Johanna Melisa. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Tristetraprolina (TTP) role in mammary gland epithelium differentiation and function
No full textEl desarrollo de la glándula mamaria es un proceso complejo de múltiples etapas. Delembarazo a la lactancia, el crecimiento lóbulo-alveolar es seguido por la diferenciación completadel epitelio mamario, responsable de la producción y secreción de leche. Al destete se produceun cambio rápido en la señalización de supervivencia a muerte celular que involucra la expresióny actividad de factores pro-inflamatorios. El control de la vida media del ARNm juega un papel central en el desarrollo normal y laenfermedad: varias condiciones patológicas, como la inflamación y el cáncer, se encuentranfuertemente correlacionadas con la desregulación en la estabilidad del mRNA de genes proinflamatorios. Durante la inflamación, TTP (codificada por el gen Zfp36) actúa como reguladornegativo de la inflamación, desestabilizando ARNm que codifica para citoquinas inflmatoriascomo TNFα e Interleuquina 6 (Il6). Además, a pesar de que el contexto en el cual la actividad de TTP ha sido más estudiada es en la respuesta inflamatoria, actualmente existen claras evidenciasde que esta proteína previene la progresión tumoral inhibiendo la expresión de factores proangiogénicosy proteasas de matriz. Los resultados mostrados en esta Tesis indican que TTP se expresa en la mama normalhumana y murina, particularmente en el epitelio diferenciado. También observamos que, almenos en la glándula mamaria de ratón, durante la lactancia se induce la expresión de Zfp36 através de la activación de STAT5a. Para demostrar que TTP es relevante en el mantenimiento delamamantamiento utilizamos ratones doble-transgénicos en los cuales la expresión de larecombinasa Cre en la mama luego del parto resulta en la deleción de Zfp36. Se analizaronmuestras de tejidos tomados a diferentes tiempos de lactancia y luego del destete de las crías. Elanálisis de los mismos muestra en los animales experimentales alteraciones morfológicas de losalvéolos partir de los 10 días de amamantamiento, así como una mayor deposición de colágenoluego del retiro de la crías. Por inmuno-histoquímica, hallamos evidencias del adelantamiento dela involución por la presencia caspasa-3 clivada, así como un aumento en los niveles de STAT3fosforilado. Finalmente, por qRT-PCR cuantitativa detectamos un aumento de expresión de lascitoquinas inflamatorias LIF, Il6 y TNFα durante la lactancia. En conjunto, estas observacionesindican que la ausencia de TTP promueve el inicio de la involución mamaria. Por lo tanto la presencia de esta proteína contribuye significativamente al mantenimiento de la lactancia,previniendo el desarrollo de eventos pro-inflamatorios que desencadenan la involución mamaria. Teniendo en cuenta que el escenario pro-inflamatorio que se genera luego del destete estaríaasociada a una ventana de mayor riesgo de desarrollo de cáncer en los años posteriores al parto,la presencia de TTP en la en la glándula normal diferenciada estaría también asociada a suactividad supresora tumoral en este tejido.Mammary gland development is a complex, multistep process. From pregnancy tolactation, lobulo-alveolar growth is followed by the complete differentiation of mammaryepithelium, which allows the production and secretion of milk proteins. At weaning, a rapidswitch from survival to death signaling occurs, leading to involution, which involves extensiveremodeling and an innate immune response in the tissue. Messenger RNA (mRNA) decay is a critical mechanism to control the expression ofmany genes in normal development, inflammation and cancer. TTP (coded by the Zfp36 gene) isa RNA-binding protein that destabilizes several pro-inflammatory cytokine mRNAs as TNFαand Interleukin 6 (Il6). Although the context in which the activity of TTP has been most studiedis in the inflammatory response, there are now strong evidence that this protein also preventstumor progression by inhibiting the expression of pro-angiogenic factors and matrix proteases. The results presents in this Thesis indicate that TTP is expressed in the normal mammarygland from human and mouse. Particularly, TTP is highly expressed in the normal mammaryepithelium during lactation. We also observed that, at least in the mouse gland, lactogenesisenhances TTP expression, probably through STAT5a activation. In addition, to determinewhether TTP plays a relevant role during lactation, WAP-Cre recombinase transgenic mice, inwhich the enzyme is expressed uniquely in the lactating mammary tissue, were crossed with lox-P TTP transgenic animals. Then, we analyzed the mammary tissue at different times afterparturition and after separating the pups from their mothers (forced involution). We foundmorphological alteration of the alveoli in lactating bi-transgenic animals, as well as increasedcollagen deposition after the retirement of offspring, suggesting that TTP is contributing tomaintenance of lactation. In addition, immuno-histochemical analysis revealed initiation of earlyinvolution, detected by clived caspase-3 and increased levels of phosphorylated STAT3 one weekbefore weaning. Then, we also found, by quantitative RT-PCR, higher expression ofinflammatory cytokines, as LIF, Il6 and TNFα. These observations indicate that TTPsignificantly contributes to lactation maintenance in the normal mammary gland, preventing thedevelopment of pro-inflammatory events that trigger breast involution. Since the proinflammatoryscenario in which mammary involution occurs has been associated to a window of increased risk for breast cancer development, TTP expression during breastfeeding would alsoplay a relevant role in breast cancer suppression.Fil: Goddio, María Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Mechanisms involved in the oncogenic activity of the protein R-spondin3 in the mammary gland
No full textLos genes R-spondin (Rspo) codifican para una familia de proteínas de secreción quemodulan las vías de señalización Wnt y están involucradas en múltiples procesos normales ypatológicos, de desarrollo y diferenciacion. Nuestro grupo determinó que particularmente Rspo3, aparece frecuentemente mutado y sobre-expresado en tumores inducidos por el virus deltumor mamario murino (MMTV), induciendo la transformación de células mamarias. Estosresultados también fueron corroborados posteriormente por otro grupo de trabajo. En el marco de esta tesis doctoral, demostramos que Rspo3 puede ser expresado porcélulas mamarias, no infectadas por MMTV, particularmente en aquellas que presentanmarcadores basales. De hecho, líneas tumorales mamarias que no expresan receptoreshormonales y poseen un fenotipo altamente metastásico son las que expresan niveles más altosde este gen. A continuación, nos propusimos determinar si Rspo3 se expresa en la glándulamamaria murina normal. Para ello, a partir de tejido de hembras vírgenes de la cepa C57B/L6, sesepararon las diferentes poblaciones celulares mediante citometría de flujo, y por RT-PCRcuantitativa se pudo determinar que la subpoblación basal enriquecida en células stem (Lin- /CD24+/CD29hi) expresa Rspo3, mientras que este ARNm no fue detectado en la subpoblaciónluminal. Al evaluar el efecto de RSPO3 sobre la línea epitelial mamaria no-tumoral NMuMG,hallamos que esta proteína favorecía características celulares asociadas a la transición epiteliomesenquimal,como la reducción en los niveles de E-cadherina y el incremento en la expresiónde Fibronectina, así como cambios morfológicos característicos de este proceso. Para investigar las consecuencias de la disminución de la expresión endógena de Rspo3 enlas células tumorales mamarias, se transfectó de manera estable células de la línea murina SCg6con diferentes secuencias de shRNA específicos para Rspo3. En aquellos clones en los que severificó una importante disminución en la expresión de dicha proteína se observó, por análisis de RT-PCR cuantitativa e inmunofluorescencia, una reducción en los niveles de marcadores basalescomo Vimentina. También, pudimos determinar en dichos clones la inhibición de la capacidadmigratoria de estas células así como la reducción en los niveles de actividad nuclear de β-catenina, lo que sugiere que Rspo3 estaría participando a través de la activación de la víacanónica de Wnt. Finalmente, se inocularon células de la línea SCg6 con Rspo3 efectivamente silenciado enlas glándulas mamarias o subcutáneamente y se evaluó la capacidad tumorigénica de lasmismas. Hallamos que estos clones no generaban tumores o lo hacían con una latencia mayorque las células SCg6 parentales. En conjunto, estos resultados demuestran que Rspo3 es relevante para el mantenimientode la capacidad tumorigénica de las células mamarias y sugieren que participaría en elmantenimiento del fenotipo basal tanto de células mamarias normales como tumorales.R-spondin genes encode for a family of secreted proteins that modulate Wnt signalingpathways. They have been involved in the embryonic development, tissue differentiation,diverse diseases and they have been postulated as potent stem cells grow factors. Our groupestablished that Rspo, particularly Rspo3, is frequently mutated and over-expressed in inducedtumors by the Mouse Mammary Tumor Virus (MMTV) and its over-expression induces mammarycells transformation. These results also have been found later by another group. In this thesis, we demonstrated that Rspo3 can be expressed by mammary cells, whichexpress basal/mesenchymal markers, even in absence of MMTV infection. Particularly, cell lineswhich do not express hormonal receptors and have a highly metastatic phenotype, express highlevels of Rspo3. Then, we studied the expression of Rspo3 in the normal murine mammaryglands. Tissues from virgin females of C57B/L6 strain were obtained and the different mammarycell populations were isolated by flow cytometry. The results obtained by quantitative RT-PCRindicate that the basal stem- enriched subpopulation (Lin-/CD24+/CD29hi) expresses Rspo3 butnot the luminal cells. We evaluated the effect of Rspo3 in non-tumoral mammary epithelial cell line NMuMGand we found that RSPO3 promoted characteristics associated with epithelial-to-mesenchymaltransition favors, a reduction in the levels of the epithelial marker e-cadherin and an increase inthe basal/mesenchymal marker fibronectin, associated with a change in cell morphology. In order to analyze the effect of Rspo3 silencing, mammary tumor cell line SCg6 wasstably transfected with specific shRNA sequences against Rspo3. We observed a decrease in Vimentin expression by analysis of quantitative RT-PCR and immunofluorescence. Furthermore,we detected the inhibition of migration ability by "wound healing assay" and a decrease in β-catenin nuclear activity, suggesting that Rspo3 could be promoting canonical pathway activation. Finally, we studiedether the tumorigenic ability oh the SCg6-shRspo3 cell line in vivo byinjecting cells into the mammary glands or subcutaneously in mice. Tumor generation appearedlate or in some cases no tumors were found compared to control SCg6-shScrambled cellsinjected in mice. Taking together, these results demonstrate that Rspo3 is relevant in the maintenance ofmammary tumoral characteristics, and suggest that this protein could participate in themaintenance of basal phenotype in normal and oncogenic mammary cells.Fil: Tocci, Johanna Melisa. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Tristetraprolina (TTP) role in mammary gland epithelium differentiation and function
Get PDFEl desarrollo de la glándula mamaria es un proceso complejo de múltiples etapas. Delembarazo a la lactancia, el crecimiento lóbulo-alveolar es seguido por la diferenciación completadel epitelio mamario, responsable de la producción y secreción de leche. Al destete se produceun cambio rápido en la señalización de supervivencia a muerte celular que involucra la expresióny actividad de factores pro-inflamatorios. El control de la vida media del ARNm juega un papel central en el desarrollo normal y laenfermedad: varias condiciones patológicas, como la inflamación y el cáncer, se encuentranfuertemente correlacionadas con la desregulación en la estabilidad del mRNA de genes proinflamatorios. Durante la inflamación, TTP (codificada por el gen Zfp36) actúa como reguladornegativo de la inflamación, desestabilizando ARNm que codifica para citoquinas inflmatoriascomo TNFα e Interleuquina 6 (Il6). Además, a pesar de que el contexto en el cual la actividad de TTP ha sido más estudiada es en la respuesta inflamatoria, actualmente existen claras evidenciasde que esta proteína previene la progresión tumoral inhibiendo la expresión de factores proangiogénicosy proteasas de matriz. Los resultados mostrados en esta Tesis indican que TTP se expresa en la mama normalhumana y murina, particularmente en el epitelio diferenciado. También observamos que, almenos en la glándula mamaria de ratón, durante la lactancia se induce la expresión de Zfp36 através de la activación de STAT5a. Para demostrar que TTP es relevante en el mantenimiento delamamantamiento utilizamos ratones doble-transgénicos en los cuales la expresión de larecombinasa Cre en la mama luego del parto resulta en la deleción de Zfp36. Se analizaronmuestras de tejidos tomados a diferentes tiempos de lactancia y luego del destete de las crías. Elanálisis de los mismos muestra en los animales experimentales alteraciones morfológicas de losalvéolos partir de los 10 días de amamantamiento, así como una mayor deposición de colágenoluego del retiro de la crías. Por inmuno-histoquímica, hallamos evidencias del adelantamiento dela involución por la presencia caspasa-3 clivada, así como un aumento en los niveles de STAT3fosforilado. Finalmente, por qRT-PCR cuantitativa detectamos un aumento de expresión de lascitoquinas inflamatorias LIF, Il6 y TNFα durante la lactancia. En conjunto, estas observacionesindican que la ausencia de TTP promueve el inicio de la involución mamaria. Por lo tanto la presencia de esta proteína contribuye significativamente al mantenimiento de la lactancia,previniendo el desarrollo de eventos pro-inflamatorios que desencadenan la involución mamaria. Teniendo en cuenta que el escenario pro-inflamatorio que se genera luego del destete estaríaasociada a una ventana de mayor riesgo de desarrollo de cáncer en los años posteriores al parto,la presencia de TTP en la en la glándula normal diferenciada estaría también asociada a suactividad supresora tumoral en este tejido.Mammary gland development is a complex, multistep process. From pregnancy tolactation, lobulo-alveolar growth is followed by the complete differentiation of mammaryepithelium, which allows the production and secretion of milk proteins. At weaning, a rapidswitch from survival to death signaling occurs, leading to involution, which involves extensiveremodeling and an innate immune response in the tissue. Messenger RNA (mRNA) decay is a critical mechanism to control the expression ofmany genes in normal development, inflammation and cancer. TTP (coded by the Zfp36 gene) isa RNA-binding protein that destabilizes several pro-inflammatory cytokine mRNAs as TNFαand Interleukin 6 (Il6). Although the context in which the activity of TTP has been most studiedis in the inflammatory response, there are now strong evidence that this protein also preventstumor progression by inhibiting the expression of pro-angiogenic factors and matrix proteases. The results presents in this Thesis indicate that TTP is expressed in the normal mammarygland from human and mouse. Particularly, TTP is highly expressed in the normal mammaryepithelium during lactation. We also observed that, at least in the mouse gland, lactogenesisenhances TTP expression, probably through STAT5a activation. In addition, to determinewhether TTP plays a relevant role during lactation, WAP-Cre recombinase transgenic mice, inwhich the enzyme is expressed uniquely in the lactating mammary tissue, were crossed with lox-P TTP transgenic animals. Then, we analyzed the mammary tissue at different times afterparturition and after separating the pups from their mothers (forced involution). We foundmorphological alteration of the alveoli in lactating bi-transgenic animals, as well as increasedcollagen deposition after the retirement of offspring, suggesting that TTP is contributing tomaintenance of lactation. In addition, immuno-histochemical analysis revealed initiation of earlyinvolution, detected by clived caspase-3 and increased levels of phosphorylated STAT3 one weekbefore weaning. Then, we also found, by quantitative RT-PCR, higher expression ofinflammatory cytokines, as LIF, Il6 and TNFα. These observations indicate that TTPsignificantly contributes to lactation maintenance in the normal mammary gland, preventing thedevelopment of pro-inflammatory events that trigger breast involution. Since the proinflammatoryscenario in which mammary involution occurs has been associated to a window of increased risk for breast cancer development, TTP expression during breastfeeding would alsoplay a relevant role in breast cancer suppression.Fil: Goddio, María Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Relevance of Tristetrapolin (TTP) on the maintenance of mammary epothelium progenitor compartment
No full textLa estabilidad de los ARN mensajeros (ARNm) está controlada por proteínas que se unen a secuencias enriquecidas en adenina y uracilo (ARE) en sus regiones 3' no traducidas (3'UTR) denominadas colectivamente proteínas de unión a AU (AUBP). Esta Tesis se centra en el análisis del papel biológico en la glándula mamaria de una AUBP en particular llamada Tristetraprolina (TTP). TTP modifica decaimiento de sus transcriptos blanco, muchos de las cuales codifican para citoquinas proinflamatorias (TNFα, IL-6, LIF, CSF2, IL-10), pero también para oncoproteínas, como c-Myc, Ciclina D1, VEGF y metaloproteinasas, entre otras. De acuerdo con ello, los niveles de TTP están reducidos en diferentes tipos de tumores, incluido el cáncer de mama, respecto al tejido normal. Comprender la función fisiológica de TTP en la glándula mamaria adulta nos ayudaría a determinar cómo la reducción en su expresión podría facilitar el crecimiento tumoral. En este sentido, nuestro grupo ha demostrado que, en la glándula mamaria, la expresión de TTP está aumentada en ratones hembra durante la lactancia y este efecto puede ser imitado por el tratamiento con prolactina en cultivo celular. En ratones TTP knockout condicionales (MG-TTP KO) obtenidos cruzando ratones TTPfl/fl con animales transgénicos WAP-Cre, hemos determinado que la pérdida de TTP en la glándula mamaria durante la lactancia afecta la alimentación de las crías e induce una involución precoz. Para explorar los resultados de la deficiencia de TTP en etapas tempranas del desarrollo, trasplantamos tejido de glándula mamaria de ratones TTP-KO vírgenes en almohadillas de grasa depletadas de su propio epitelio correspondientes a hembras receptoras wild type (WT). Después de 10 semanas, las hembras trasplantadas con epitelio mamario TTP-KO mostraron una morfogénesis deficiente en comparación con los implantes mamarios control. Estos datos sugirieron un impacto de TTP en las células indiferenciadas que impulsan el desarrollo de la glándula mamaria. En esta Tesis probamos la hipótesis mencionada anteriormente en primer lugar a través de la generación y análisis de una línea celular con menor expresión de TTP (TTP-KD) producida por transfección estable de células epiteliales mamarias HC11 con shRNA específicos para el ARN de TTP. Elegimos esta línea celular porque poseen propiedades stem, similares a las células progenitoras mamarias in vivo. Curiosamente, las células TTP-KD mostraron una reducción en sus tasas de supervivencia, aumento de la apoptosis y niveles incrementados de proteínas pro-apoptóticas como la caspasa 3 clivada (CC3) y BAX. Fenotípicamente, las células TTP-KD revelaron una capacidad disminuida para formar mamosferas en cultivo 3D y repoblar las almohadillas de grasa clareadas de ratones hembra BALB/c vírgenes a 10 semanas post implantación. Estos resultados indican que la muerte celular observada podría haber tenido un impacto significativo en el compartimento de células progenitoras mamarias. Hemos encontrado que las células TTP-KD mostraron una elevada expresión de los mensajeros Il-6 y Tnfα, dos blancos conocidos de TTP que codifican para citoquinas inflamatorias. De forma acorde, estas células presentaron niveles aumentados de fosfo-STAT3 y fosfo-p65 o subunidad RelA de NF-κB, proteínas cuyas vías correspondientes son activadas por IL-6 y TNFα, respectivamente. Ambas vías de señalización están implicadas en la apoptosis y la respuesta inflamatoria en la glándula mamaria. Como se ha reportado previamente, TTP es fosforilada y consecuentemente inactivada por MK2, una proteína río abajo en la vía de p38, la cual es inducida en microambientes estresantes y activada por TNFα. Hemos detectado fosfo-p38 aumentada en células TTP-KD, lo cual además se correlaciona con una actividad de TTP significativamente reducida, medida a través de la transfección transitoria de una construcción que contiene el ADNc de luciferasa río arriba del 3'UTR de Tnfα. Además de la regulación positiva de fosfo-p38, tanto fosfo-ERK1/2 como fosfo-JNK1/2 están disminuidas en las células TTP-KD. Curiosamente, la inhibición farmacológica de p38 mediante el tratamiento de células TTP-KD con SB203580 redujo los niveles de CC3 y fosfo-p65. Además, el tratamiento de células TTP-KD con SB203580 también restaura la actividad de TTP y la autorrenovación en cultivo 3D. Se lograron efectos similares al agregar Etanercept, un receptor de TNFα soluble que se utiliza para tratar enfermedades inflamatorias. Para abordar cómo la deleción de TTP afecta el potencial de diferenciación de la glándula mamaria durante preñeces sucesivas, aprovechamos nuestros ratones bi-transgénicos WAP- Cre/TTPfl/fl. Se ha demostrado que el promotor WAP no solo es activo en el epitelio mamario durante la lactancia, sino también en las células progenitoras "inducidas por la preñez" (PI-MEC), que participan en el desarrollo ductal y alveolar durante la preñez y la lactancia. Después de dos preñeces, las hembras que carecen de TTP en las células WAP+ mostraron alvéolos dramáticamente subdesarrollados en comparación con las ratonas control, lo que destaca la relevancia de la TTP en la preservación de las células progenitoras mamarias. Además, las glándulas lactantes de WAP-Cre/TTPfl/fl multíparas mostraron niveles incrementados de CC3 y fosfo-p38 en comparación con las ratonas control, lo que presenta semejanza con la línea celular TTP-KD. En resumen, nuestros resultados indican que la expresión de TTP es necesaria para la supervivencia de las células progenitoras mamarias al prevenir eventos proinflamatorios espontáneos y asociados al estrés, que pueden inducir la muerte normal de las células madre mamarias. En las células tumorales mamarias, los mismos efectos, impulsados por la pérdida de TTP, pueden promover la progresión del cáncer de mama y un mal pronóstico para la paciente. Por lo tanto, encontrar estrategias para mantener TTP en niveles de expresión elevados en la glándula mamaria protegería el compartimento progenitor sano y, simultáneamente, evitaría la progresión de las células cancerosas transformadas (fórmula aproximada, revisar la misma en el original).The stability of messenger RNAs (mRNAs) is controlled by proteins that bind sequences enriched in adenine and uracil (AREs) in their 3 untranslated regions (3 UTR) called collectively AU-binding proteins (AUBPs). This Thesis is focused on the analysis of the biological role of one particular AUBP called Tristetraprolin (TTP) in the mammary gland. TTP alters the decay of targeted transcripts, many of them coding for pro-inflammatory cytokines (i.e. TNFα, IL-6, LIF, CSF2, IL-10), but also oncoproteins, as c-Myc, Cyclin D1, VEGF and metalloproteinases, among others. Accordingly, TTP is downregulated in different tumor types, including breast cancer. Understanding the physiological function of TTP in the adult mammary gland would help us to determine how its down regulation might facilitate tumor growth. In this regard, our group has demonstrated that, in the mammary gland, TTP expression is increased in female mice during lactation and this effect can be mimic by prolactin treatment in cell culture. In conditional TTP knockout mice (MG-TTP KO) obtained by crossing TTPfl/fl with WAP-Cre transgenic animals, we have determined that TTP loss in the mammary gland during lactation impairs pup feeding and induces early involution. To explore the outcomes of TTP deficiency in earlier developmental stages, we transplanted mammary gland tissue from virgin TTP-KO mice into cleared fat pads of wild type (WT) female recipients. After 10 weeks, mice transplanted with TTP-KO mammary epithelium displayed deficient branching morphogenesis compared to control WT mammary implants. This data suggested an impact of TTP on undifferentiated cells that fuel mammary gland development. In this Thesis we tested the above-mentioned hypothesis firstly through the generation and analysis of a TTP knockdown cell line (TTP-KD) produced by stable transfection of HC11 mammary epithelial cells with specific TTP-shRNA constructs. We chose this cell line because it displays stem-like properties, similar to mammary progenitor cells in vivo. Interestingly, TTP-KD cells exhibited impaired survival rates, increased apoptosis and augmented levels of pro-apoptotic proteins such as cleaved caspase 3 (CC3) and BAX. Phenotypically, TTP-KD cells revealed a decreased capacity to form mammospheres in 3D culture and to repopulate cleared fat pads of virgin BALB/c female mice after 10 weeks post-implantation. These results indicate that the observed cell death could have had a significant impact on the mammary progenitor cell compartment. We have found that TTP-KD cells displayed high expression of Il-6 and Tnfα mRNAs, two known targets of TTP that code for inflammatory cytokines. Accordingly, these cells presented increased levels of phospho-STAT3 and phospho-p65 or RelA NF-κB subunit, proteins whose corresponding pathways are activated by IL-6 and TNFα, respectively. To be noted, both are implicated in apoptosis and inflammatory response of mammary gland tissue. As it has been reported previously, TTP is phosphorylated and consequently inactivated by MK2, a protein down-stream of the p38 pathway, which is induced in stressful microenvironments and activated by TNFα. We have detected augmented phospho-p38 in TTP-KD cells, which correlates with a significantly reduced TTP activity, measured through transient transfection of a construct containing the luciferase cDNA upstream of Tnfα 3’UTR. Besides phospho-p38 upregulation, both phospho-ERK1/2 and phospho-JNK1/2 are decreased in TTP-KD cells. Interestingly, pharmacological inhibition of p38 by treatment of TTP-KD cells with SB 203580, reduced both CC3 and phospho-p65 levels. Furthermore, this treatment also restores TTP activity and self-renewal in 3D culture of TTP-KD cells. Similar effects were accomplished by adding Etanercept, a soluble TNFα receptor used for treating inflammatory diseases. To address how TTP deletion affects mammary gland differentiation potential during successive pregnancies, we took advantage of our bi-transgenic mice WAP-Cre/TTPfl/fl. It has been proved that WAP promoter is not only active in mammary epithelium during lactation, but also in “pregnancy-induced” progenitor cells (PI-MECs), which are involved in ductal and alveolar development during pregnancy and lactation. After two pregnancies, female mice lacking TTP in WAP+ cells showed dramatically underdeveloped alveoli compared to control mice, which highlights the relevance of TTP in the preservation of mammary progenitor cells. Moreover, lactating glands of multiparous WAP-Cre/TTPfl/fl had increased CC3 and phospho-p38 levels compared to control mice, which shows resemblance with the cultured TTP-KD cell lines. In summary, our results indicate that TTP expression is required for mammary progenitor cell survival by preventing spontaneous pro-inflammatory and stress-associated events, which can induce normal mammary stem cell death. In mammary tumor cells, the same effects, driven by TTP loss, may promote breast cancer progression and a bad prognosis for the patient. Therefore, finding strategies for maintaining TTP at high expression levels in the mammary gland would protect the healthy progenitor compartment and, simultaneously, prevent progression of transformed cancer cells (fórmula aproximada, revisar la misma en el original).Fil: Stedile, Micaela Nadia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
The BA-BCS 2021: an initial “trial” for integrating basic science and medical progress on breast cancer in a Latin-American country
Get PDFThe first Buenos Aires Breast Cancer Symposium (BA-BCS) was held in a virtual format, between the 17th and the 21st of May 2021. The main goal of the meeting was to facilitate the interaction among physicians and basic researchers from South America and with peers from the rest of the world. To embrace their different interests and concerns, the congress included not only talks on basic, translational and clinical research, but also round tables to discuss diagnostic methods, research financing and biobank management, as well as virtual poster sessions in which the youngest fellows presented their recent findings. This report provides a brief overview of the talks delivered during the meeting, which addressed a wide variety of vital issues for breast cancer research mostly focused on the accurate diagnosis, prevention and treatment of this illness. The presentations included a wide spectrum of themes including hormone receptors and the relevance of their mutations, immunotherapy, cancer stem cells, mouse models, environmental hazards, genetics and epigenetics, local and systemic therapies, liquid biopsies, the metastatic cascade, therapy resistance and dormancy, among others.Fil: Kordon, Edith Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Lanari, Claudia Lee Malvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Mando, Pablo. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Novaro, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Rossi, Mario. Universidad Austral; ArgentinaFil: Simian, Marina. Universidad Nacional de San Martín; Argentin
Búsqueda de factores involucrados en el origen y la evolución de tumores mamarios murinos, su relevancia enla biología de la mama normal : participación del LIF en estos procesos
Get PDFEl virus del tumor mamario murino (MMTV),es un retrovirus de tipo B que induce el desarrollo de tumores de mama, en ratones suceptibles a la infección, mediante mutagénesis insercional en genes de células somáticas. En este trabajo se utilizaron ratones de la cepa BALB/c infectados con la variante viral MMTV(LA),la cual fue encontrada previamente en nuestro laboratorio. Se ha descripto anteriormente que los ratones infectados con esta variante viral, poseen una incidencia de tumores de mama del 90%. Estos tumores presentan inicialmente un crecimiento preñez-dependiente (HD)que luego se independiza del control hormonal para mostrar un fenotipo hormono-independiente (HI). Para determinar si el compartimiento lobulo-alveolar es o no un factor relevante en la inducción de tumores por el MMTV(LA),se infectaron crías transgénicas WAP-TGFβ1 con esta variante viral mediante el amamantamiento utilizando madres infectadas con el virus. Estos ratones transgénicos expresan TGFBl bajo el control del promotor de la proteína WAP. Este promotor pertenece a una proteína de la leche abundante en murinos, es específica del epitelio mamario y se activa principalmente durante la preñez tardía y la lactancia. Ha sido demostrado previamente, que las hembras transgénicas para WAP-TGFβ1 son incapaces de amamantar a sus crías. Esto se debe a que la sobre-expresión de este factor durante la preñez, desencadena un incremento de la apoptosis en las células alveolares responsables de la producción y secreción de leche. Otra consecuencia de la expresión del transgen es la senescencia prematura de las células progenitoras (stem cells) mamarias, puesta en evidencia por la pérdida de la capacidad clonogénica de las mismas. Los resultados obtenidos en el presente trabajo indican que la actividad pro-apoptótica del TGFβ1 sobre las células lobulo-alveolares mamarias, no redujo la capacidad tumorigénica del MMTV(LA). Por otro lado, encontramos que la infección de las hembras WAPTGFβ1 con el MMTV(LA)revirtió la senescencia prematura de las células progenitores inducida por el transgen. El hecho que la infección con MMTV induzca el restablecimiento de la capacidad clonogénica de las “stem cells” mamarias transgénicas, sugiere que un evento temprano de la oncogénesis inducida por este vian podría ser la inmortalizaciónde las células progenitoras mamarias. Estos resultados (junto con los reportados por otros autores) sugieren que las "stem cells" mamarias podrían ser un blanco preferencial para la actividad oncogénica del MMTV. Esto implicaría un origen y crecimiento clonal para estos tumores. En relación con esta hipótesis se estudió, por análisis de Southern blot, el DNA de las inserciones virales exógenas en los pasajes de tumores mamarios inducidos por MMTV(LA). Estos experimentos se basan en el hecho que sólo puede encontrarse un patrón de bandas especifico y estable del DNA viral en todos los pasajes tumorales, si los tumores originales poseen un origen clonal u oligoclonal. El análisis de los resultados de 17 líneas tumorales in vivo generadas por pasajes singenéicos, muestran que los tumores HD se originan frecuentemente a partir de distintas células mamarias infectadas, mientras que los tumores HI surgen a partir de una sola célula. En todos los casos analizados, se encontraron nuevas inserciones de MMTV(LA) durante la progresión de tumores policlonales HD a tumores monoclonales HI. Por lo tanto, en este modelo, la progresión tumoral se produce asociada al surgimiento de clones que contienen inserciones ausentes o minoritarias en los tumores HD originales. Se ha reportado que la expresión del LIF tanto en el útero como en algunas líneas celulares de cáncer de mama puede ser regulada por estrógeno y progesterona. Sin embargo, no existían evidencias en la literatura sobre la expresión ni la actividad del LIF en la glándula mamaria normal. Por otro lado, se conoce bien que la presencia del LIF es necesaria para mantener a las “stem cells" embrionarias en estado pluripotente. Dado que la glándula mamaria está regulada por hormonas ováricas y que existen células progenitoras mamarias especificas involucradas en el desarrollo mamario normal y tumoral, nos propusimos investigar la participación del LIF en la biologia de la glándula mamaria. Nuestros resultados muestran que este factor se expresa durante el desarrollo de la glándula mamaria del ratón en mamas de hembras vírgenes y preñadas. Sin embargo, hallamos que su expresión máxima se induce durante la fase temprana de la involución mamaria postlactancia. En esta etapa, se habia demostrado que la acumulación de la leche causada por la falta de succión induce la liberación de factores locales que desencadenan la activación del factor de transcripción Stat3 y apoptosis del epitelio mamario. Aunque se sabía que dicho factor cumple un rol fundamental en desencadenar apoptosis durante esta fase, se desconocian los factores involucrados en su activación. Los resultados mostrados aquí indican que el LIF se libera como un factor local durante la fase temprana de la involución debido a la acumulación de la leche en la mama e induce apoptosis en el epitelio. Además detenninamos que el LIF es capaz de inducir la activación de Stat3 en el epitelio mamario in vivo. Por otro lado, nuestros resultados muestran que todos los tumores mamarios inducidos por MMTV(LA) poseen altos niveles de expresión de LIF y de activación de Stat3 y sugieren que el primero sería al menos parcialmente responsable de la activación del segundo. Si bien hemos encontrado el rol biológico de este camino de señalización (LIF-Stat3) en la glándula mamaria normal, queda todavía por dilucidar la significancia de este mecanismo en los tumores mamarios. En conclusión, los resultados presentados aquí refuerzan la idea que las células pluripotenciales y los factores asociados a prevenir su diferenciación, pueden cumplir un rol relevante en la biología de la glándula mamaria normal y tumoral.Mouse mammary tumor virus (MMTV) is a type B retrovirus that causes mammary tumors in susceptible mice by insertional mutagenesis. In the present work it has been used the MMTV(LA),which has been first found in our laboratory. It has been previously showed that mice infected with this variant have a mammary tumor incidence of 90%. These tumors initiain show a hormone-dependent (HD) behavior, but evolve afterwards to a hormone-independent (HI)phenotype. In order to determine whether or not the mammary gland lobulo-alveolar compartiment is relevant for MMTV(LA)-induced tumorigenesis, WAP-TGFβ1 transgenic mice were nursed with MMTV(LA) infected mothers. This transgenic mice, express TGFβ1 under the control of the whey acidic protein (WAP) promoter. This promoter corresponds to a compicuos murine milkprotein, is mammary epithelium-specific and most active during late pregnancy and lactation. It has been demonstrated that TGFβ1 transgenic female mice are unable to lactate. This is because the ectopic expression of this factor in the lobular compartment of the mammary gland during pregnancy induces an increased rate of alveolar apoptosis. Another consequence of the WAP-TGFβ1 transgene expression is the premature senescence of the mammary specific epithelial stem cells manifested in a significant decreased capacity of WAP-TGFβ1 mammary transplant to grow and repopulate a cleared normal fat pad. The results showed herein indicate that WAP-TGFβ1 expression and the consequent lower number of lobulo-alveolar cells in the transgenic animals did not abrogate MMTV(LA) capacity to induce mammary tumors. On the other hand, we have found that MMTV(LA) infection reverted the proviously observed early senecence of WAP-TGFβ1 transgenic mammary epithelium. Since MMTV infection induces a recovery in the clonogenic capacity of the transgenic mammary stem cells, it raises the possibility that mammary stem cells inmortalization would be an early event in MMTV(LA)induced tumorigenesis. Our results show that mammary stem cells could be a preferencial target for MMTV-induced tumorigenesis. This implies a clonal origin for these tumors. Then, to test this hypothesis, Southern blot analysis of MMTV insertions in tumor cell DNA was performed. These studies were carried out based on the fact that a specific and reproducible pattem of bands can only be found in a mono or oligoclonal cell populations. Analysis from 17 tumor lines generated from pregnant MMTV(LA) infected females indicated that HD tumors frequently arise from different mammary infected cells while all HI tumor variants arise from a single cell. In all the cases analyzed herein, new MMTV(LA) insertions were found during progression from policlonal HD to monoclonal HI tumors. It has been reported that leukemia inhibitory factor (LIF) expression could be regulated by estrogen and progesterone in uterus and in some mammary tumor cell lines. However, there were no reports about LIF expression or activity in the normal mammary gland. On the other hand, it is very well known the importance of the LIF presence in order to maintain pluripotent embryonic stem cells. Since mammary gland is regulated by ovaric hormone and there are mammary specific stem cells involved in normal and neoplastic development. We decided to investigate LIF participation in the mammary gland biology. Our results show that LIF is expressed during mammary development in Virgin and pregnant females. However, LIF expression picks shortly after weaning during the early phase of mammary involution. It has been demonstrated that during this period, milk stasis caused by the lack of suckling results in the induction of local factors that lead to the activation of Stat3 transcription factor and mammary epithelium apoptosis. The results presented herein demonstrate that LIF is secreted as a mammary local factor in response to milk stasis and induces mammary ephitelium apoptosis. Moreover, we also demonstrate that LIF induces Stat3 phosphorylation in the mammary gland in vivo. On the other hand, we have found high LIF expression and Stat3 activation in all the MMW(LA) induced HD and HI mammary tumors and our results suggest that LIF would be at least partialliy responsible of that activation. While the biological role of this pathway in the nomal mammary gland has been very reciently uncover, its significance in mammary neoplastic glands remains to be elucidated. In conclusion, the results showed herein support the relevant role of mammary stem cells and factors possibly associated with the prevention of their differentiation, in the biology of normal and neoplastic mammary gland.Fil:Schere Levy, Carolina P.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
- …
