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Development of llama bispecific single domain antibodies for the treatment of trastuzumab refractive breast cancers
No full textLe trastuzumab est le traitement de référence des cancers du sein « HER2 amplifié ». Outre les limitations inhérentes à toute IgG, cet anticorps est inefficace pour traiter les tumeurs exprimant que modérément (cancers hormonaux) ou faiblement (triple négatif) HER2. L'objectif de ces travaux de thèse est de concevoir de nouveaux anticorps bispécifiques destinés au traitement de cancers du sein échappant à l'action du trastuzumab. Nous nous sommes appuyés sur des formats innovants, basés sur l'utilisation d'anticorps simple domaine de lama (sdAb) comme unité de reconnaissance antigénique. Deux anticorps bispécifiques Fab-like (bsFab) ont été développés, l'un dirigé contre HER2 (HER2bsFab) et l'autre ciblant la mésothéline (MesobsFab), un antigène surexprimé dans 30 à 70% des cancers du sein « triple négatif ». En liant spécifiquement et de façon efficace FcγRIII, ces deux bsFabs ne compètent pas avec les IgG endogènes, ne fixent pas FcγRIIB et activent fortement les NKs. In vitro, HER2bsFab induit de fortes sécrétions de cytokines pro-inflammatoires et de puissantes ADCCs contre des lignées de cancer du sein indépendamment du niveau d'expression d'HER2 et du polymorphisme FcγRIIIA-158. In vivo, HER2bsFab montre une nette supériorité comparé au trastuzumab contre des tumeurs ne surexprimant que modérément HER2. HER2bsFab et MesobsFab induisent in vitro de fortes cytotoxicités contre deux lignées de cancer du sein « triple négatif » et des résultats préliminaires réalisés chez la souris semblent confirmer ces observations. A termes, l'utilisation de ces anticorps permettrait d'étendre la proportion de patientes traitables de façon efficace par immunothérapie.Trastuzumab is established as standard of care for the treatment of HER2high breast cancers. However, in addition to Fc-related limitations inherent to IgG antibodies, trastuzumab is inefficient to treat low- (triple-negative) or moderate-HER2-overexpressing (hormone-receptor-positive) breast cancers. Based on the unique structural and functional properties of llama single domain antibodies (sdAbs), we report the design of two Fab-like bispecific antibodies targeted to HER2 (HER2bsFab) and mesothelin (MesobsFab), an antigen overexpressed in several human tumors, including triple-negative breast cancers. The two bsFabs display a unique, specific and high affinity for FcγRIII. As a consequence, they do not bind the FcγRIIB inhibitor receptor and bypass competition with endogenous IgGs. HER2bsFab mediated ADCC at picomolar concentration against HER2high as well as HER2moderate cell lines. In vivo HER2bsFab potently inhibited HER2high tumor growth and more importantly, exhibited a net superiority over trastuzumab at inhibiting HER2moderate tumor growth. Moreover, FcγRIIIA-engagement by HER2bsFab was independent of FcγRIIIA-158 polymorphism and induced a stronger NK cells activation in response to target cell recognition. Such findings led us to investigating the efficacy of bsFabs in a context of low-HER2-overexpression displays by triple-negative breast cancers. In vitro characterization showed that both HER2bsFab and MesobsFab trigger efficient lysis of two different triple-negative breast cancer cell lines. Altogether, these findings would enable the treatment of a broader population of patients than that eligible with current HER2-targeted therapies
Generation of a single domain antibody for the development of a therasnostic and immunotherapeutic approach by bispecific antibodies of mesothelin positive cancers
No full textLes nanobodies, plus petits fragments d'anticorps fonctionnels, constituent grâce à leurs propriétés originales, des molécules polyvalentes et attrayantes pour développer des outils théranostiques associant imagerie moléculaire non invasive et radioimmunothérapie. La MSLN est une glycoprotéine membranaire de 40kda surexprimée par de nombreux cancers. Dans le cancer elle jouerait un rôle dans les processus d’invasion, de migration, de prolifération et de chimiorésistance.Une fois obtenu et caractérisé, le nanobodyanti-MSLN sera utilisé pour évaluer la faisabilité d’un diagnostic par imagerie nucléaire et d’une thérapie par radiothérapie des cancers MSLN+. Ce nanobody sera parallèlement utilisé pour la construction d’ anticorps bispécifiques afin d'évaluer la faisabilité d’une stratégie d’immunothérapie antitumorale.Après différentes stratégies de sélection/criblage par phage display, un nanobody anti-mésothéline candidat a été sélectionné, et caractérisé d'un point de vue fonctionnel (capacité de liaison, épitope, internalisation). Les expériences réalisées in vivo dans des modèles murins de xénogreffes sous-cutanées ont montré, dans les 2 cas, une accumulation rapide et spécifique du nanobody anti-MSLN au site tumoral comparé aux témoins négatifs et une élimination rapide des tissus normaux. En utilisant ce même nanobody pour le développement d'anticorps bispécifiques de type Fab ciblant simultanément la mésothéline et les cellules T effectrices, nous avons montré in vitro la capacité de ce format à induire spécifiquement la cytotoxicité des LT CD8 envers des cellules tumorales mésothéline positives.Nanobodies, smaller fragments of functional antibodies, constitute, thanks to their original properties, versatile and attractive molecules to develop theranostic tools combining non-invasive molecular imaging and radioimmunotherapy. MSLN is a 40kda membrane glycoprotein overexpressed by many cancers. In cancer, it plays a role in the processes of invasion, migration, proliferation and chemoresistance.Once obtained and characterized, the nanobodyanti-MSLN will be used to evaluate the feasibility of nuclear imaging diagnosis and radiotherapy of MSLN+ cancers. In parallel, this nanobody will be used for the construction of bispecific antibodies to evaluate the feasibility of an antitumor immunotherapy strategy.After different selection/phage display strategies, a candidate anti-mesothelin nanobody was selected and functionally characterized (binding capacity, epitope, internalization). Experiments performed in vivo in mouse models of subcutaneous xenografts showed, in both cases, a rapid and specific accumulation of the anti-MSLN nanobody at the tumor site compared to negative controls and a rapid elimination from normal tissues. Using the same nanobody for the development of bispecific Fab antibodies targeting simultaneously mesothelin and effector T cells, we demonstrated in vitro the ability of this format to specifically induce CD8 LT cytotoxicity towards mesothelin positive tumor cells
Development of bispecific antibodies for cancer immunotherapy
No full textStimuler la réponse immunitaire anti-tumorale constitue une voie d’avenir indiscutable pour le traitement des cancers. Aujourd'hui, les thérapies ciblées à base d'anticorps ont une place majeure dans l’immunothérapie des cancers du sein de par leur impact positif sur le pronostic des patientes. Cependant, les cancers du sein triple négatifs (TNBC) résistent aux innovations thérapeutiques actuelles, et, par défaut de traitement ciblé efficace, restent de sombre pronostic. Notre équipe développe des stratégies d’immunothérapie à base d'anticorps bispécifiques (bsFabs) conçus à partir de fragments d'anticorps de camélidés qui présentent la particularité de cibler simultanément les cellules immunitaires et tumorales. Ainsi, mon projet visait à évaluer le potentiel anti-tumoral de deux bsFabs sur des modèles précliniques de TNBC à travers leur capacité à activer et à rediriger le système immunitaire contre les cellules tumorales. La finalité du projet est de proposer un nouvel axe de thérapie ciblée susceptible d'améliorer le pronostic des patientes atteintes de TNBC.Mounting evidence of the key contribution of NK cells in immunity against cancer has boosted the investigations on NK cell-based therapies. Among these strategies, monoclonal antibody-based therapeutics (mAbs) are currently the fastest growing segment of the medicine market. Despite therapeutic innovations, triple negative breast cancers (TNBC) remain insensitive to the current targeted or hormono-therapies. Our objective is to manipulate NK cell functions and tumor targets using an original format of nanobody-based bispecific antibodies (bsFab) to revert the dampened immune response for treating TNBC. Thus, we generate two bsFabs able to crosslink NK and tumor cells. NK antitumor effects driven by mAbs and bsFabs, alone or in combination, were investigated in vitro and in vivo on preclinical TNBC models. Here, we demonstrate the potential of bsFabs to enlarge the number of patients eligible for breast cancer immunotherapy and prompt to consider combination strategies
Development of bispecific antibodies based on single-domain antibodies to counteract tumor induced immune tolerance
No full textLe caractère invasif d’un cancer est déterminé non seulement par le génotype des cellules tumorales, mais aussi par le dialogue cellules tumorales/environnement extracellulaire qui participe à la mise en place d’un environnement immunosuppresseur. De nouvelles stratégies d’immunothérapie visant des points de contrôle de l’activation lymphocytaire par le biais d’anticorps dits immunomodulateurs ont récemment révolutionné les approches thérapeutiques pour certains cancers. Ces anticorps ont pour objectif de bloquer des points de contrôles inhibiteurs ou au contraire de stimuler des points de contrôle activateurs afin de réinstaurer une réponse anti-tumorale efficace. Ces stratégies qui ciblent principalement les cellules T ont permis d’obtenir des résultats remarquables dans le traitement de différents types de cancers mais présentent certaines limites. Moduler l’activité de cellules immunitaires innées, notamment les cellules NK, constitue une piste particulièrement prometteuse. Dans ce contexte, le but ce projet de thèse a consisté à développer de nouveaux formats d'anticorps immunomodulateurs ciblant le récepteur activateur NKG2D exprimé par différentes populations de cellules (NK, TCD8+, NKT, et Tγδ) et possédant un rôle majeur dans l’immunosurveillance des cancers. Les formats d’anticorps créés sont constitués de fragments d’anticorps à domaine unique dérivés de camélidés séléctionnés grâce à la technologie de phage display. Les molécules générées ont été caractérisées pour leurs propriétés de liaison à NKG2D et pour leurs capacités à activer et recruter des cellules NK au travers de différents tests fonctionnels in-vitro.Invasiveness of a cancer is determined not only by the genotype of the tumor cells, but also by the tumor cell/extracellular environment dialogue that contributes to the establishment of an immunosuppressive environment and tumor escape. New immunotherapy strategies targeting checkpoints of lymphocyte activation using immunomodulatory antibodies have recently revolutionized therapeutic approaches for some cancers. These antibodies aim to block inhibitory checkpoints (PD-1 / PD-L1, CTLA-4) or, on the contrary, to stimulate activating checkpoints (4-1BB, OX40) in order to reinstate an effective anti-tumor response. These immunomodulation strategies that primarily target effector T cells have achieved remarkable results in the treatment of different types of cancer but have certain limitations. Modulating the activity of innate immune cells, especially NK cells, is a particularly promising approach. In this context, the goal of this thesis project in collaboration with the pharmaceutical company Sanofi was to develop new formats of immunomodulatory antibodies targeting the NKG2D activating receptor expressed by different cell populations (NK, TCD8+, NKT, and Tγδ) with a major role in the immunosurveillance of cancers. Our antibodies (Fab-Like) consist of the human CH1 and CL domains as a natural motif of heterodimerization and single-domain antibody fragments derived from camelids selected using phage display. Bivalent (NKG2DxNKG2D) and bispecific (NKG2DxHER2) molecules generated were characterized for their NKG2D binding properties and their ability to activate and recruit NK cells through various in vitro functional assays
La procarboxypeptidase A-S6 : complexe ternaire caracteristique des bovides
No full textSIGLECNRS T 55965 / INIST-CNRS - Institut de l'Information Scientifique et TechniqueFRFranc
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Full text linkThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
Variations on the Author
Full text link“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
Appropriate Similarity Measures for Author Cocitation Analysis
Full text linkWe provide a number of new insights into the methodological discussion about author cocitation analysis. We first argue that the use of the Pearson correlation for measuring the similarity between authors’ cocitation profiles is not very satisfactory. We then discuss what kind of similarity measures may be used as an alternative to the Pearson correlation. We consider three similarity measures in particular. One is the well-known cosine. The other two similarity measures have not been used before in the bibliometric literature. Finally, we show by means of an example that our findings have a high practical relevance.information science;Pearson correlation;cosine;similarity measure;author cocitation analysis
Etude des interactions protéine-lipide (exemple du système lipase/colipase pancréatique)
No full textAIX-MARSEILLE2-BU Méd/Odontol. (130552103) / SudocSudocFranceF
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