74 research outputs found
Anaphylaxis mediated through a humanized high affinity IgE receptor.
No full textMast cells and basophils, which are activated by IgE and allergens through the high affinity IgE receptor (Fc epsilon RI), play a prominent role in anaphylaxis in the mouse. Mice deficient in this receptor become resistant to passive anaphylaxis. As a first step in developing an in vivo model that more closely mimics the IgE-mediated responses in man, we used a combination of transgenic and embryonic stem cell technology to generate a mouse line in which the murine Fc epsilon RI alpha-chain has been replaced with its human homologue. We demonstrate here that these mice express a tetrameric high affinity IgE receptor, in which the human alpha-chain associates with the murine beta- and gamma-chains, and that upon triggering with relevant Ag, this receptor mediates the initiation of the expected intracellular events. In addition, we show that the human alpha-chain restores an anaphylactic response to the nonresponsive alpha-deficient parental mouse line. This "humanized" mouse represents a potentially important model system, not only for studying the role of IgE in human immune responses, but also for testing potential therapeutic reagents that can interfere with responses mediated through the human Fc epsilon RI receptor.Journal ArticleResearch Support, Non-U.S. Gov'tResearch Support, U.S. Gov't, P.H.S.info:eu-repo/semantics/publishe
An antitumor cellular vaccine based on a mini-membrane IgE
No full textThe IgE-mediated immune system activation can be redirected to combat tumors. Mouse and human IgE have been shown to provide a potent adjuvant effect in antitumor vaccination, with a crucial role played by FcεRI. This effect results from T cell-mediated adaptive immune response. Modified vaccinia virus Ankara (MVA) has been used to infect IgE-loaded tumor cells. These results led to a shift toward a highly safe protocol employing membrane IgE (mIgE), thus eliminating any possible anaphylactogenicity caused by circulating IgE. Evidence that human mIgE and a truncated version lacking IgE Fabs (tmIgE) bind and activate FcεRI has been fundamental and forms the core of this report. Human tmIgE has been engineered into a recombinant MVA (rMVA-tmIgE), and the expression of tmIgE and its transport to the surface of rMVA-tmIgE-infected cells has been detected by Western blot and cytofluorimetry, respectively. FcεRI activation by tmIgE has been confirmed by the release of β-hexosaminidase in a cell-to-cell contact assay using human FcεRI-transfected RBL-SX38 cells. The rMVA-tmIgE antitumor vaccination strategy has been investigated in FcεRIα(-/-) human FcεRIα(+) mice, with results indicating a level of protection comparable to that obtained using soluble human IgE tumor cell loading. The rMVA-tmIgE vector represents a device that suits safe IgE-based antitumor vaccines, harboring the possibility to couple tmIgE with other gene insertions that might enhance the antitumor effect, thus bringing the field closer to the clinics
Antitumor IgE adjuvanticity : key role of Fc epsilon RI
No full textWorking with C57BL/6 mouse tumor models, we had previously demonstrated that vaccination with IgE-coated tumor cells can protect against tumor challenge, an observation that supports the involvement of IgE in antitumor immunity. The adjuvant effect of IgE was shown to result from eosinophil-dependent priming of the T cell-mediated adaptive immune response. The protective effect is likely to be mediated by the interaction of tumor cell-bound IgE with receptors, which then trigger the release of mediators, recruitment of effector cells, cell killing and tumor Ag cross-priming. It was therefore of utmost importance to demonstrate the strict dependence of the protective effect on IgE receptor activation. First, the protective effect of IgE was confirmed in a BALB/c tumor model, in which IgE-loaded modified VV Ankara-infected tumor cells proved to be an effective cellular vaccine. However, the protective effect was lost in Fc(epsilon)RIalpha(-/-) (but not in CD23(-/-)) knockout mice, showing the IgE-Fc(epsilo)nRI interaction to be essential. Moreover, human IgE (not effective in BALB/c mice) had a protective effect in the humanized knockin mouse (Fc(epsilon)RIalpha(-/-) hFc(epsilon)RIalpha(+)). This finding suggests that the adjuvant effect of IgE could be exploited for human therapeutics
Allergy-associated FcRbeta is a molecular amplifier of IgE- and IgG-mediated in vivo responses.
No full textA role for the Fc receptor beta chain (FcRbeta) in the pathogenesis of allergy has been suggested by genetic studies. FcRbeta is a subunit common to the high-affinity IgE (FcepsilonRI) and low-affinity IgG (FcgammaRIII) receptors, both of which contribute to the initiation of allergic reactions. Current in vitro data suggest that FcRbeta can function as either a positive or negative regulator, leaving a mechanistic explanation for its association with the development of atopy unclear. To address this controversy, we have generated novel mouse models relevant to human Fc receptor function. Analysis of FcepsilonRI- and FcgammaRIII-dependent responses in these mice provides unequivocal genetic evidence that FcRbeta functions as an amplifier of early and late mast cell responses and, remarkably, in vivo anaphylactic responses.In VitroJournal ArticleResearch Support, Non-U.S. Gov'tinfo:eu-repo/semantics/publishe
Rewitalizacja zasobów przyrody w otoczeniu Kanału Bydgoskiego
No full textDue to the unique value of the Bydgoszcz Canal, the natural resources surround it are a crucial part of its landscape. The author of the article indicates which crucial steps associated with the revitalization process should be taken so as to ensure that new touristic recreational functions for the Canal are created
Anti-bromodeoxyuridine monoclonal antibody: an alternative tool for the identification of replicated DNA at the electron microscope level.
No full textpeer reviewedA new method for identifying the replicated DNA at the electron microscope level is described. Cells were first exposed in vitro to 5-bromodeoxyuridine (BUdR) in conjunction with 5-fluorodeoxyuridine (FUdR) and BUdR incorporated into DNA was then detected on Lowicryl-embedded sections by immunogold technique using a monoclonal anti-BUdR antibody. After using this method, chromatin and chromosomes are strongly labelled
Role de récepteur nucléaire ROR-alpha dans les lymphocytes T régulateurs
No full textLes facteurs de transcription de la superfamille des récepteurs nucléaires jouent de multiples rôles dans le développement et la fonction des lymphocytes T régulateurs (TREG). Les TREG sont des cellules régulatrices/suppressives qui contrôlent les réponses d’autres types cellulaires et l’homéostasie locale des tissus.Comme les TREG sont actives au sein de divers organes, tant à l’homéostasie qu’en conditions inflammatoires,ils doivent répondre à la fois aux contexte local au sein du tissus et à un environnement immunologiquement agressif tout en préservant leurs propriétés tolérogéniques au cours du temps. Ces caractéristiques apparemment antinomiques sont contrôlées par un réseau transcriptionnel complexe au sein duquel le facteur de transcription FOXP3 joue un rôle prédominant. Au cours des dernières années, de nombreuses études se sont intéressées aux TREG présent dans les tissus non lymphoïdes (NLT). Ces populations ont été étudiées aussi bien à l’homéostasie qu’en conditions inflammatoires dans diverses pathologies. Des facteurs de transcriptions spécifiques d’un tissus ou d’une fonction déterminées ont été mis en évidence et leur rôle régulateur dans le développement, l’activation, la migration et l’immunosuppression a été caractérisé. RORa est un récepteur nucléaire qui contrôle le développement cérebellaire et hépatique, le métabolisme systémique, la différenciation des lymphocytes auxiliaires TH17, des cellules lymphoïdes innées (ILC) de type 2 et 3. RORa est fortement exprimé dans les TREG des NLT, y compris dans le tissus adipeux viscéral (VAT), l’intestin et la peau. . . .Ces populations de TREG exprimant RORa ont été associées à diverses pathologies. Cependant seule une étude récente a été consacrée à leur rôle précis. L’implication de RORa dans de nombreuses fonction, sa forte expression au sein des TREG des NLT nous a poussé a étudier le rôle de ces TREG exprimant RORa dans diverses pathologies. Dans ce butit, nous avons généré des souris spécifiquement déficientes pour RORa au sein des TREG (RORaFoxp3/Foxp3 ). Nous avons émis l’hypothèse que RORa contrôle le développement ou la fonction des TREG en conditions homéostatiques et dans des pathologies inflammatoires des NLT. Aussi nous avons caractérisé le phénotype des animaux RORaFoxp3/Foxp3 et en particulier les TREG du VAT à l’homéostasie, où la réponse de type 2 est protectrice et dans un modèle d’obésité (et d’insulino-résistance) induit par l’obésité (DIO) dans laquelle nous avons mis en évidence un rôle protecteur important des TREG exprimant RORa dans ces deux conditions expérimentales. Nous également étudié la contribution de ces cellules dans un modèle d’inflammation allergique (AAI) induite par un acarien (HDM) caractérisé par une forte réponse de type 2 et montré une aggravation de la pathologie. Pour étudier le mécanisme moléculaire de l’action de RORa au sein des TREG, nous avons procédé à une analyse transcriptomique des cellules isolées dans diverses conditions expérimentales in vivo et in vitro et avons étudié le rôle de RORa dans les modifications épigénétiques au sein des TREG en caractérisation l’acétylation des histones dans le génome entier. Cette étude nous a permis de mieux appréhender comment les TREG étaient régulées par un facteur nucléaire à l’homéostasie et en conditions inflammatoires. Les récepteurs nucléaires représentent des cibles thérapeutiques intéressantes compte tenu de leur action pléiotropique et de leurs ligands de petite taille. Compte tenu de l’importance des TREG dans l’homéostasie tissulaire et dans de nombreuses pathologies, cibler de tels facteurs au sein d epopulations cellulaires spécifiques représente une stratégie prometteuse dans le case de RORa et des TREG.Transcription factors of the nuclear receptor superfamily have a vast influence on development and function ofregulatory T cell (TREG) cells. TREG cells are suppressive immune cells of adaptive immune system. Their mainfunctions are control of inflammatory response mounted by other immune cells and maintenance of localtissue homeostasis. As TREG act at various sites of the body and both in homeostatic and inflammatory state,they need to adequately respond to local tissue-specific cues as well as adapt to aggressive immuneenvironments while preserving their long-lasting tolerogenic properties. This is achieved by weaving complextranscriptional networks, converging at transcription factors with various coordination functions, the mainbeing forkhead box P3 (FOXP3). During last few years, many studies focused on TREG cells found innon-lymphoid tissue (NLT). These populations of TREG are examined in the contexts of homeostasis and manyinflammatory diseases, and tissue- or function-specific transcription factor (TF) were assigned to some ofthem as regulators of development, activation, proliferation, stability, migration and suppressive functions.Retinoic acid receptor-related orphan receptor alpha (RORa) is a nuclear receptor, which controls cerebellumdevelopment, liver and whole-body metabolism and differentiation of T-helper (TH)17, type 2 innate lymphoidcells (ILC2) and type 3 innate lymphoid cells (ILC3). RORa is highly expressed in NLT TREG, includingpopulations in visceral adipose tissue (VAT), intestine and skin, and gets more and more mentions in thearticles dedicated to TREG in NLT. These RORa-expressing populations of TREG were all shown to be involvedin various pathologies. However, RORa role in TREG was directly addressed only once in a recent study. It’sactive involvement in various processes, high expression in NLT TREG and lack of knowledge make RORa anattractive target for investigation, to deepen current view of homeostasis control by TREG and thus betterunderstand mechanisms of development of associated diseases. To attain these objectives, a mouse strain withTREG-specific RORa deficiency was generated. Our central hypothesis is that RORa controls development orfunction of TREG cells in homeostasis of NLT and potentially in inflammatory diseases. For studying a role ofRORa in NLT TREG during control of tissue homeostasis, in particular, VAT TREG, we have charachterizedphenotype of untreated RORaFoxp3/Foxp3 mice and challenged mice with a model of diet-induced obesity(DIO). In both cases we have found an important role of TREG-expressed RORa. To further investigate a roleof RORa in TREG during pathologies and it’s contribution to various types of immune response we have testedan involvement of RORa in TREG in the model of allergic pathology, namely house dust mite (HDM)-inducedallergic airway inflammation (AAI) model.To elucidate molecular mechanisms of RORa action in TREG cells, we have performed gene expression profilingof TREG cells from examined tissues and conditions in vivo, as well as in vitro. We also have studied a role ofRORa in epigenetic landscape of TREG cells in vitro by probing histone acetylation marks genome wide. As aresult of this study, we have gained a broader understanding of TREG control by nuclear receptors and TF ingeneral in homeostatic conditions and during inflammation. Nuclear receptors proved to be useful targets fortherapeutic agents thanks to their versatile functions inside the cell and to ligand-dependency. Given thecrucial importance of TREG cells in organismal homeostasis and their involvement in numerous pathologies,targeting particular cues inside these cells may be a powerful tool in new treatment strategies. Results of ourstudy might serve as a basis for development of novel pharmaceutical agents targeting RORa
Influence du métabolisme des acides biliaires sur l'immunité hépatique chez la souris
No full textLes acides biliaires (AB) jouent un rôle essentiel dans la régulation du métabolisme lipidique et glucidique via leur fixation à divers récepteurs nucléaires ou membranaires tels que Farnesoid X Receptor (FXR), Takeda G protein coupled Receptor 5 (TGR5) ou dans une moindre mesure, Vitamin D Receptor (VDR), pour lesquels ils présentent une affinité variable. Dans un contexte de maladies métaboliques telles que le diabète de Type 2 (DT2), la stéatohépatite non alcoolique (NASH) ou de cholangites (CBP ou CSP), toutes associées à une inflammation, la régulation du métabolisme est fortement perturbée1. Récemment, le rôle d'isomères d'AB secondaires (3 oxo-lithocholic acid (LCA), isoalloLCA, isodeoxhycholic acid (DCA)) comme modulateurs directs des fonctions immunes, en particulier des lymphocytes T du colon, via leur expression de VDR ou d'autres mécanismes impliquant la régulation de FOXP3 a été démontré2-4. Par ailleurs, l'usage d'un agoniste de FXR, l'acide obéticholique (OCA) a été approuvé en 2016 par la Food Drug Administration (FDA)5 en tant que traitement de seconde ligne pour les patients atteints de cholangite biliaire primitive (CBP) et est en cours d'essai clinique de phase III (RESERVE) pour le traitement de la NASH.Lorsque la signalisation des dérivés d'AB ainsi que leurs récepteurs constituent des cibles thérapeutiques privilégiées, les études précliniques relatives au métabolisme des AB menées chez la souris ne sont pas directement transposables à l'Homme compte tenu de leurs différences majeures. En effet, les hépatocytes murins expriment l'enzyme CYP2C70, catalysant la conversion de l'acide chénodésoxycholique (CDCA), en acides et β-muricholique (MCA). L'inactivation du gène Cyp2c70 chez la souris (Cyp2c70-/-) conduit à l'obtention d'une composition en AB « humanisée », plus hydrophobe : dépourvue de MCA, enrichie en CDCA et en LCA6,7. Tous les souriceaux développent une cholestase transitoire qui n'évolue en fibrose progressive que chez les femelles adultes8. De manière inattendue, chez les mâles et femelles adultes, nous avons mis en évidence des altérations du système immunitaire hépatique affectant les lignées myéloïdes et lymphoïdes. En effet, les cellules de Kupffer (KC), macrophages résidents du foie, présentent une expression diminuée, par rapport aux souris de type sauvage (WT), de CD1d, un récepteur de surface apparenté au Complexe Majeur d'Histocompatibilité (CMH) de classe I des cellules présentatrices d'antigènes (CPA)9,10. Dans le foie, la littérature décrit d'autres CPA exprimant CD1d, telles que les hépatocytes, déficients en Cyp2c70 dans notre modèle d'étude, les cellules dendritiques (DC) et les cellules endothéliales sinusoïdales du foie (LSEC)11-16. Ce récepteur permet la présentation d'antigènes lipidiques au TCR invariant exprimé par les NKT (iNKT), induisant leur activation spécifique. Le foie des souris Cyp2c70-/- présente deux fois moins d'iNKT, suggérant un possible défaut de présentation antigénique. Notre étude in vitro de la production de cytokines a révélé des altérations fonctionnelles des KCs et des iNKT stimulées par le LPS ou le PMA/Ionomycine respectivement. Les KCs des souris Cyp2c70-/- semblent produire davantage de TNF et d'IL-1β qu'au sein des souris Cyp2c70+/+ lorsque les iNKT produisent significativement plus d'IL-17A et d'IFN. Ces changements dans la synthèse des cytokines suggèrent une altération de la polarisation vers un phénotype pro-inflammatoire dans les souris Cyp2c70-/-. L'analyse transcriptomique (RNAseq) d'iNKT hépatiques purifiées, caractérisée par un enrichissement des gènes impliqués dans les voies de transduction du signal et de réponse pro-inflammatoire médiée par la synthèse de cytokines, confirme cette activation. Sur base de ces résultats, nous poursuivons l'étude du mécanisme par lequel une composition « humanisée » en AB chez les souris Cyp2c70-/- affecte les iNKT, en nous attachant particulièrement à la présentation antigénique des CPA.Bile acids (BA) play an essential role in the regulation of lipid and carbohydrate metabolism via their binding to various nuclear or membrane receptors such as Farnesoid X Receptor (FXR), Takeda G protein coupled Receptor 5 (TGR5) or, to a lesser extent, Vitamin D Receptor (VDR), for which they present a variable affinity. In the context of metabolic diseases such as Type 2 diabetes (T2D), non-alcoholic steatohepatitis (NASH) or cholangitis (PBC or PSC), all associated with inflammation, the regulation of metabolism is strongly disturbed1. Recently, the role of secondary BA isomers (3 oxo-lithocholic acid (LCA), isoalloLCA, isodeoxhycholic acid (DCA)) as direct modulators of immune functions, in particular of colonic T cells, via their expression of VDR or other mechanisms involving FOXP3 regulation has been demonstrated2-4. Furthermore, the use of an FXR agonist, the obeticholic acid (OCA) was approved in 2016 by the Food Drug Administration (FDA)5 as a second-line treatment for patients with Primary Biliary Cholangitis (PBC) and is currently in a phase III clinical trial (RESERVE) for the treatment of NASH. Although the signaling of BA derivatives and their receptors are prime therapeutic targets, preclinical studies on BA metabolism in mice cannot be directly transposed to humans due to their major differences. Indeed, murine hepatocytes express the CYP2C70 enzyme, which catalyzes the conversion of chenodeoxycholic acid (CDCA) to β-muricholic acid (MCA). The inactivation of the Cyp2c70 gene in mice (Cyp2c70-/-) leads to a more hydrophobic, "humanized" BA composition: lacking MCA, enriched in CDCA and LCA6,7. All pups develop a transient cholestasis that evolves into progressive fibrosis only in adult females8. Unexpectedly, in both adult males and females, we found alterations in the hepatic immune system affecting the myeloid and lymphoid lineages. Indeed, Kupffer cells (KC), liver-resident macrophages, show a decreased expression, compared to wild-type (WT) mice, of CD1d, a surface receptor related to the Major Histocompatibility Complex (MHC) class I on antigen presenting cells (APC)9,10. In the liver, the literature describes other APCs expressing CD1d, such as hepatocytes, deficient in Cyp2c70 in our study model, dendritic cells (DCs) and liver sinusoidal endothelial cells (LSECs)11-16. This receptor allows the presentation of lipid antigens to the invariant TCR expressed by NKTs (iNKT), inducing their specific activation. The liver of Cyp2c70-/- mice has half as many iNKTs, suggesting a possible defect in antigen presentation. Our in vitro study of cytokine production revealed functional alterations of KCs and iNKTs stimulated by LPS or PMA/Ionomycin respectively. KCs from Cyp2c70-/- mice appear to produce more TNFα and IL-1β than in Cyp2c70+/+ mice when iNKTs produce significantly more IL-17A and IFNγ. These changes in cytokine synthesis suggest an altered polarization toward a proinflammatory phenotype in Cyp2c70-/- mice. Transcriptomic analysis (RNAseq) of purified hepatic iNKT, characterized by an enrichment of genes involved in signal transduction pathways and pro-inflammatory response mediated by cytokine synthesis, confirms this activation. Based on these results, we are further investigating the mechanism by which a "humanized" BA composition in Cyp2c70-/- mice affects iNKTs, with particular focus on the antigenic presentation of APCs
Restriction of Th2 responses by interleukin-6 and identification of a new transcription factor expressed in follicular helper T cells
No full textL’objectif de notre travail a été de caractériser le rôle de l’IL-6 dans la différenciation des lymphocytes Tfh et des lymphocytes Th2. Les lymphocytes Tfh ont pour fonction d’aider les lymphocytes B à produire des anticorps indispensables pour nous protéger contre divers pathogènes. Les lymphocytes Th2, quant à eux, sont spécialisés dans l’élimination de parasites extracellulaires tels que les helminthes.<p>Dans un premier temps, nous avons voulu identifier les gènes dont l’expression est induite par l’IL-6, avec comme objectif une meilleure compréhension des mécanismes permettant aux lymphocytes T de se différencier en cellules Tfh.<p>Au cours de notre travail, nous avons identifié le facteur de transcription, MyoR (Myogenic Repressor) comme étant exprimé au sein des lymphocytes T helper et dont l’expression est induite par l’IL-6. Nos observations expérimentales ont démontré que le facteur MyoR n’est pas indispensable pour la différenciation des lymphocytes Tfh, ni pour leur fonction. Cependant, l’expression de l’ARNm codant pour MyoR pourrait être utilisée comme un biomarqueur des cellules Tfh in vitro ou in vivo.<p>Nous avons ensuite caractérisé la réponse immune induite in vivo par des cellules présentatrices d’antigènes issues de souris déficientes pour l’IL-6. Cette approche nous a permis de mettre en évidence le rôle immunosuppresseur de l’IL-6 sur le développement des réponses de type Th2. En effet, nous avons montré que l’injection de BMDCs (Bone Marrow derived dendritic cells) IL-6-/- dans des souris receveuses de type sauvage induisent une réponse Th2 augmentée in vivo.<p>Nos résultats suggèrent que l’inhibition de la réponse Th2 par l’IL-6 in vivo et in vitro pourrait impliquer la présence d’un ou de plusieurs miRNAs.<p>Cette inhibition pourrait être un mécanisme de rétrocontrôle afin d’éviter une exacerbation de la réponse immune Th2.Doctorat en Sciencesinfo:eu-repo/semantics/nonPublishe
Detection of Chloroplast DNA by Using Fluorescent Monoclonal Anti-Bromodeoxyuridine Antibody and Analysis of Its Fate During Zygote Formation in Chlamydomonas Reinhardtii
No full textpeer reviewedA monoclonal anti-bromodeoxyuridine antibody conjugated to fluorescein was used to detect the chloroplast nucleoids after specific incorporation of bromodeoxyuridine (BUdR) into the chloroplast DNA of Chlamydomonas reinhardtii. The incorporation of BUdR was enhanced by simultaneous treatment with fluorodeoxyuridine (FUdR). The method was applied to analyze the fate of chloroplast DNA in zygotes resulting from mating between BUdR-treated gametes (mt+ or mt-) and untreated gametes of opposite mating-type. In crosses between wild-type strains, the nucleoids of mt+ origin remained in the large majority of zygotes whereas those of mt- origin most often disappeared within the first hours following copulation. In crosses of the type mat-3 mt+ x wild-type mt- (the mat-3 mutation permits a high transmission of chloroplast genes from the mt- parent), the nucleoids of mt- origin were generally not eliminated which indicates that the mat-3 mutation prevents the selective destruction of paternal chloroplast DNA in the zygote
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