48 research outputs found
Bone densitometry and bone markers in wild ungulates. Possible future application
No full textPósterAnimal health has a huge impact on public health, food production, economy and environment. The animals, and especially wildlife, are considered the source of more than 70% of emerging diseases. Health surveillance of wildlife is critical in order to control these diseases. This surveillance includes the capture and handling of animals for different purposes. In these operations a stress response occurs and the risk of traumatic injuries increases. Many of the traditional imaging diagnostic techniques are already widely used in veterinary. By contrast, the use of QUS, DXA and biochemical markers of bone remodeling is not widespread. This is accentuated in the field of wildlife. Our intention is to make a review of the noninvasive diagnostic methods for assessing bone status, with particular attention to the DXA and bone biochemical markers
Epidemiological and clinicopathological study of Leptospira spp. infection in cats in Spain (Catalonia and Extremadura)
No full textLa leptospirosi és una zoonosi re-emergent, causada per un bacteri del gènere Leptospira. És la zoonosi bacteriana més estesa a tot el món. El seu principal reservori són els mamífers, inclosos els gats domèstics. Sol propagar-se a través de terres i aigües contaminades. Un animal infectat pot desenvolupar un estat agut de la malaltia o esdevenir un reservori. Les investigacions realitzades durant els últims 8 anys han estudiat el gat com a reservori de la infecció. Actualment, no hi ha dades sobre l’epidemiologia de la infecció en gats a Espanya i és possible que la prevalença variï segons la ubicació geogràfica, tal com s’ha publicat a nivell mundial.
La major part de les dades clínic-patològiques publicades relacionades amb la leptospirosi en gats provenen d’infeccions agudes o experimentals. No obstant això, la informació en l’espècie és escassa en els casos de portadors renals crònics. Les diferències en els paràmetres clínic-patològics entre animals infectats de forma natural i no infectats, podrien ajudar als clínics en el reconeixement i diagnòstic de portadors renals crònics de leptospires en gats.
L’objectiu general d’aquesta tesi va ser proporcionar un coneixement més ampli sobre la infecció per leptospires en gats, per mitjà dels següents objectius específics:
1. Avaluar la presència d’anticossos contra espècies patògenes de Leptospira i determinar la presència d’ADN en l’orina i la sang, en gats de vida lliure de dues àrees geogràfiques diferents d’Espanya.
2. Determinar les diferències en els paràmetres hematològics, bioquímics i de l’urianàlisi, entre gats infectats de forma natural i gats lliures de la infecció.
3. Valorar les variables de la resposta inflamatòria i de l’estat antioxidant en gats infectats de forma natural i gats lliures de la infecció.
Es van realitzar tres estudis. En el primer, vam determinar la prevalença d’anticossos, la presència d’ADN de Leptospira spp. patògena en sang i orina en gats de vida lliure de dues regions geogràfiques d’Espanya. Es van detectar anticossos en 10/244 gats (4,1%). El serovar trobat amb més freqüència va ser Cynopteri. Mostres de sang de 1/89 gats (1,12%) i mostres d’orina de 4/232 (1,72%) gats, van amplificar per la presència d’ADN leptospiral. En conclusió, els gats de vida lliure a Espanya poden eliminar en la seva orina ADN de leptospires patògenes i ser una possible font per a la infecció humana.
En el segon estudi, es van avaluar les diferències en l’hematologia, el perfil bioquímic i els paràmetres urinaris entre els gats infectats de forma natural per leptospires patògenes i els lliures de la infecció. Els gats infectats de forma natural van tenir valors més baixos d’eritròcits, hemoglobina, albúmina, creatinina i urea, comparats amb els gats lliures de la infecció. Els gats positius que van amplificar l’ADN de Leptospira spp. (orina o sang) van tenir un risc més gran de desenvolupar anèmia no regenerativa mentre que en els gats seropositius era més probable que es produís proteïnúria. La infecció crònica i l’exposició a leptospires porta a anormalitats hematològiques i a alteracions lleugeres en el perfil bioquímic i el urianàlisi.
En el tercer estudi mitjançant una anàlisi de components principals (ACP) es van avaluar les proteïnes inflamatòries (PFA) i la capacitat antioxidant total (CAT) per obtenir un major coneixement sobre el curs de la malaltia en gats. El nostre treball va concloure que els gats infectats per l’ADN de Leptospira spp. van tenir una resposta inflamatòria de fase aguda, a diferència dels gats seropositius. A més, hi va haver un augment en les concentracions sèriques de la CAT que indiquen una resposta antioxidant en aquesta infecció, la qual és proporcional al títol d’anticossos i no a la presència d’ADN bacterià.La leptospirosis es una zoonosis re-emergente, causada por una bacteria del género Leptospira. Es la zoonosis bacteriana más extendida en todo el mundo. Su principal reservorio son los mamíferos, incluidos gatos domésticos. Suele propagarse a través de suelos y aguas contaminadas. Un animal infectado puede desarrollar un estado agudo de la enfermedad o convertirse en un reservorio. Las investigaciones realizadas durante los últimos 8 años han estudiado al gato como reservorio de la infección. Actualmente, no existen datos sobre la epidemiología de la infección en gatos en España y es posible que la prevalencia varíe según la ubicación geográfica, tal y como se ha publicado a nivel mundial.
La mayor parte de los datos clínico-patológicos publicados relacionados con la leptospirosis en gatos, provienen de infecciones agudas o experimentales. Sin embargo, la información en la especie es escasa en el caso del estado de portador renal crónico. Las diferencias en los parámetros clínico-patológicos entre animales infectados de forma natural y no infectados, puedan ayudar a los clínicos en el reconocimiento y diagnóstico de portadores renales crónicos de leptospiras en gatos.
El objetivo general de esta tesis fue proporcionar un conocimiento más amplio sobre la infección por leptospiras en gatos, por medio de los siguientes objetivos específicos:
1. Evaluar la presencia de anticuerpos frente a especies patógenas de Leptospira y determinar la presencia de ADN en la orina y la sangre, en gatos de vida libre de dos áreas geográficas diferentes de España.
2. Determinar las diferencias en los parámetros hematológicos, bioquímicos y del uroanálisis, entre gatos infectados de forma natural y gatos libres de la infección.
3. Valorar las variables de la respuesta inflamatoria y del estado antioxidante en gatos infectados de forma natural y gatos libres de la infección.
Se realizaron tres estudios. En el primero, determinamos la prevalencia de anticuerpos, la presencia de ADN de Leptospira spp. patógenas en sangre y orina, en gatos de vida libre en dos regiones geográficas de España. Se detectaron anticuerpos en 10/244 gatos (4,1%). El serovar encontrado con más frecuencia fue Cynopteri. Muestras de sangre de 1/89 gatos (1,12%) y muestras de orina de 4/232 (1,72%) gatos, amplificaron para la presencia de ADN leptospiral. En conclusión, los gatos de vida libre en España pueden eliminar en su orina, ADN de leptospiras patógenas y ser una posible fuente para la infección humana.
En el segundo estudio, se evaluaron las diferencias en la hematología, el perfil bioquímico y los parámetros urinarios, entre los gatos infectados por leptospiras patógenas de forma natural y los libres de la infección. Los gatos infectados de forma natural tuvieron valores más bajos de eritrocitos, hemoglobina, albúmina, creatinina y urea, comparados con los gatos libres de la infección. Los gatos positivos que amplificaron el ADN de Leptospira spp. (orina o sangre), tuvieron un riesgo mayor de desarrollar anemia no regenerativa, mientras que, en los gatos seropositivos era más probable que se produjera proteinuria. La infección crónica y la exposición a leptospiras conduce a anormalidades hematológicas y a alteraciones ligeras en el perfil bioquímico y el uroanálisis.
En el tercer estudio se evaluaron a través de un Análisis de Componentes Principales (ACP), las proteínas inflamatorias (PFA) y la capacidad antioxidante total (CAT) para obtener un mayor conocimiento sobre el curso de la enfermedad en los gatos. Nuestro trabajo concluyó que los gatos infectados por el ADN de Leptospira spp. tuvieron una respuesta inflamatoria de fase aguda, a diferencia de los gatos seropositivos. Además, hubo un aumento en las concentraciones séricas de la CAT, que indican una respuesta antioxidante en esta infección, la cual es proporcional al título de anticuerpos y no a la presencia de ADN bacteriano.Leptospirosis is a re-emerging zoonosis, caused by a bacterium of the genus Leptospira. It is the most widespread bacterial zoonosis worldwide. Its main reservoir are mammals, including domestic cats. It is usually spread through contaminated soil and water. An infected animal may develop an acute state of the disease or become a reservoir. Research carried out during the last 8 years, has studied the cat as a reservoir of the infection. Currently, there are no data on the epidemiology of the infection in cats in Spain and prevalence may vary depending on the geographical location, as it has been published worldwide.
Most of the clinicopathological data published associated with leptospirosis in cats are from acute or experimental infections. Nevertheless, the information in the species is very scarce in case of the chronic renal carrier state. The differences in clinicopathological parameters between naturally infected and leptospires-free animals may assist clinicians in the recognition and diagnosis of chronic renal carrier state of leptospires in cats.
The general goal of this thesis was to provide more extensive knowledge about leptospires infection in cats, through the following specific objectives:
1. To evaluate the presence of antibodies against pathogenic Leptospira species and to determine the presence of DNA in urine and blood in free-roaming cats from two different geographical areas in Spain.
2. To determine differences in haematology, biochemical profile and urinary parameters between naturally infected cats and leptospires-free cats.
3. To assess the variables of the inflammatory response and antioxidant state in naturally infected cats and leptospires-free cats.
Three studies were carried out. In the first one, we determined antibodies prevalence, blood DNA, and shedding of DNA from pathogenic Leptospira species in the urine of free-roaming cats, in two geographical regions in Spain. Antibodies were detected in 10/244 cats (4.1%). The most common serovar detected was Cynopteri. Blood samples from 1/89 cats (1.12%) and urine samples from 4/232 cats amplified for leptospiral DNA (1.72%). In conclusion, free-roaming cats in Spain can shed pathogenic Leptospira spp. DNA in their urine and may be a source of human infection.
In the second study, the differences in haematology, biochemical profile and urinary parameters between naturally infected by pathogenic leptospires and leptospires-free were studied. Cats naturally infected had lower values of RBC, haemoglobin, albumin, creatinine and urea compared to leptospires-free cats. Positive Leptospira spp. DNA amplification cats were at high risk for the development of non-regenerative, whereas, seropositive cats were more likely to have proteinuria. Chronic infection and exposure to leptospires lead to haematological abnormalities and slight alterations in the biochemical profile and urinalysis.
The third study evaluated the inflammatory proteins (APPs) and the total antioxidant capacity (TAC) to gain knowledge about the course of the disease in cats, through a Principal Component Analysis (PCA). Our work concludes that Leptospira spp. DNA infected cats had an acute phase response, unlike, to seropositive cats. Besides, there was an increase in TAC serum concentrations indicating an antioxidant response in the infection, which is proportional to the antibody titre and not to the presence of bacterial DNA.Universitat Autònoma de Barcelona. Programa de Doctorat en Medicina i Sanitat Animal
Acute phase proteins in wild boar, Pyrenean chamois and Spanish ibex : method validation and reference values
No full textHi ha un grup de proteïnes plasmàtiques, anomenades proteïnes de fase aguda (PFAs), la concentració de les quals canvia quan es produeixen lesions tissulars induïdes per traumes o estrès i per condicions infeccioses i inflamatòries. La funció principal de les PFAs és recuperar la homeòstasi i limitar el creixement microbià. La quantificació de la concentració de les PFAs pot ser utilitzada com a eina pel diagnòstic i pronòstic, així com pel seguiment de tractaments. A la bibliografia hi ha molts articles que descriuen els diferents patrons de les proteïnes enfront diferents malalties. No obstant, la utilitat de les APPs i la seva dinàmica en malalties pròpies de poblacions salvatges no ha estat determinada. Els mètodes de laboratori que s'utilitzen actualment per mesurar les APPs s'haurien de validar abans de proporcionar cap resultat. Això és especialment important en les espècies salvatges, on les tècniques dels animals domèstics s'extrapolen sense validació prèvia, i per tant la fiabilitat dels resultats es desconeguda. Els objectius principals d'aquest treball són validar els mètodes analítics disponibles per la determinació de proteïnes de fase aguda en ungulats domèstics per al seu ús en ungulats salvatges, així com proporcionar valors de referència per a les espècies estudiades i verificar la utilitat d'aquestes proteïnes de fase aguda. En l'ESTUDI I, realitzat en el senglar, es va determinar la concentració sèrica de sis APPs: l'haptoglobina (Hp), el sèrum amiloide A (SAA), la proteïna C-reactiva (CRP) i la proteïna de fase aguda major de porcí (Pig-MAP) utilitzant kits comercials. Els kits de les dues últimes proteïnes mencionades dissenyats específicament per la seva aplicació en mostres de porcí. També es van determinar la glicoproteïna àcida soluble (ASG) i la ceruloplasmina (Cp) mitjançant mètodes analítics descrits prèviament. Tots els mètodes utilitzats van demostrar una bona precisió (CV 15%), excepte per les proteïnes ASG i SAA que van presentar coeficients de variació (CVs) entre anàlisis més alts. Aquests dos CVs van ésser obtinguts pel pool de concentració baixa. L'estudi d'interferència va demostrar que l'hemòlisi produeix interferència en totes les proteïnes estudiades, sobretot el SAA. Totes les proteïnes estudiades van presentar diferències significatives entre les concentracions d'animals sans i malalts. Els valors de referència obtinguts pels senglars sans van ser similars als descrits prèviament en altres treballs realitzats en el porc domèstic. En l'ESTUDI II es van comparar dos mètodes diferents per la determinació de la CRP en el senglar. Un mètode immunoturbidimètric (TIA) específic de humana amb un mètode immunoenzimàtic (ELISA) específic de porcí. També es va validar el mètode immunoturbidimètric per al seu ús en els senglars. La regressió Passing-Bablok va demostrar que hi havia un error proporcional entre TIA i ELISA. Aquest error es va reduir quan es va utilitzar un calibrador de porcí fabricat en el laboratori. La validació del TIA amb el calibrador de porcí obtingut al laboratori va demostrar tenir una bona precisió i una bona exactitud. Es va demostrar també que l'hemòlisi produeix interferències importants en l'anàlisi de la CRP amb mostres de senglar amb el TIA. La validació dels mètodes de la Hp, SAA, ASG i Cp pel seu ús en l'isard es va realitzar en l'ESTUDI III. En general, tots els mètodes van presentar bona precisió i exactitud. Les mostres procedents d'animals sans van produir molts valors per sota del límit de detecció establert per les proteïnes Hp i SAA. La ASG es va veure afectada significativament per l'hemòlisi. Els valors obtinguts d'animals sans i malalts van ser significativament diferents entre sí. Els mètodes de determinació de la Hp i el SAA van ser avaluats pel seu ús en la cabra salvatge en l'ESTUDI IV. Aquests mètodes van demostrar tenir bona precisió intra-assaig i bona exactitud. En l'estudi inter-assaig es va observar una gran imprecisió per ambdues proteïnes. La inflamació induïda amb la injecció de trementina va produir un canvi significatiu en la concentració de Hp i SAA. En canvi, la infecció experimental amb llengua blava no va produir canvis significatius en cap de les proteïnes estudiades. Els mètodes validats per la determinació de les PFA en aquests quatre estudis van demostrar que els resultats que produeixen son fiables i que per tant es poden aplicar en les espècies estudiades, amb l'excepció d'alguns paràmetres que caldria tenir en compte quan s'utilitzin aquests mètodes. De la mateixa manera, hi va haver diferències significatives entre els animals sans i malalts en totes les proteïnes estudiades en el senglar i l'isard, i en l'haptoglobina i l'amiloide A sèric en la cabra salvatge. En aquesta última espècie les dues proteïnes estudiades van produir canvis de concentració suficients com per poder discriminar bé entre abans i després de l'establiment d'una resposta inflamatòria induïda per la injecció de trementina.Hay un grupo de proteínas plasmáticas, llamadas proteínas de fase aguda (PFAs), la concentración de las cuales cambia cuando se producen lesiones tisulares inducidas por traumas o estrés y por condiciones infecciosas e inflamatorias. La función principal de las PFAs es restablecer la homeostasis y limitar el crecimiento microbiano. La cuantificación de la concentración de las PFAs puede ser utilizada como herramienta para el diagnóstico y pronóstico, así como para el seguimiento de tratamientos. En la bibliografía hay muchos artículos que describen los diferentes patrones de las proteínas frente distintas enfermedades. Sin embargo, la utilidad de las APPs y su dinámica en enfermedades propias de poblaciones salvajes no ha sido determinada. Los métodos de laboratorio que se utilizan actualmente para medir las APPs deberían ser validados antes de proporcionar ningún resultado. Esto es especialmente importante en las especies salvajes, donde las técnicas de los animales domésticos se extrapolan sin validación previa, y por tanto la fiabilidad de los resultados es desconocida. Los objetivos principales de este trabajo son validar los métodos analíticos disponibles para la determinación de proteínas de fase aguda en ungulados domésticos para su uso en ungulados salvajes, así como proporcionar valores de referencia para las especies estudiadas y verificar la utilidad de estas proteínas de fase aguda. En el ESTUDIO I, realizado en el jabalí, se determinó la concentración sérica de seis APPs: haptoglobina (Hp), el amiloide A sérico (SAA), la proteína C-reactiva (CRP) y la proteína de fase aguda mayor de porcino (Pig-MAP) utilizando kits comerciales. Los kits de las dos últimas proteínas mencionadas diseñados específicamente para su aplicación en muestras de porcino. También se determinaron la glicoproteína ácida soluble (ASG) y la ceruloplasmina (Cp) mediante métodos analíticos descritos previamente. Todos los métodos utilizados demostraron una buena precisión (CV 15%), excepto para las proteínas ASG y SAA que presentaron coeficientes de variación (CVs) entre análisis más altos. Estos dos CVs fueron obtenidos para el pool de concentración baja. El estudio de interferencia demostró que la hemólisis produce interferencia en todas las proteínas estudiadas, sobretodo el SAA. Todas las proteínas estudiadas presentaron diferencias significativas entre las concentraciones de animales sanos y enfermos. Los valores de referencia obtenidos por jabalíes sanos fueron similares a los descritos previamente en otros trabajos realizados en el cerdo doméstico. En el ESTUDIO II se compararon dos métodos diferentes para la determinación de la CRP en el jabalí. Un método immunoturbidimètrico (TIA) específico de humana con un método immunoenzimàtico (ELISA) específico de porcino. También se validó el método immunoturbidimètrico para su uso en los jabalíes. La regresión Passing-Bablok demostró que había un error proporcional entre TIA y ELISA. Este error se redujo cuando se utilizó un calibrador de porcino fabricado en el laboratorio. La validación del TIA con el calibrador de porcino obtenido en el laboratorio demostró tener una buena precisión y una buena exactitud. Se demostró también que la hemólisis produce interferencias importantes en el análisis de la CRP con muestras de jabalí con el TIA. La validación de los métodos de la Hp, SAA, ASG y Cp para su uso en el rebeco se realizó en el ESTUDIO III. En general, todos los métodos presentaron buena precisión y exactitud. Las muestras procedentes de animales sanos produjeron muchos valores por debajo del límite de detección establecido para las proteínas Hp y SAA. La ASG se vio afectada significativamente por la hemólisis. Los valores obtenidos de animales sanos y enfermos fueron significativamente diferentes entre sí. Los métodos de determinación de la Hp y el SAA fueron evaluados para su uso en la cabra montés en el ESTUDIO IV. Estos métodos demostraron tener buena precisión intra-ensayo y buena exactitud. En el estudio inter-ensayo se observó una gran imprecisión para ambas proteínas. La inflamación inducida con la inyección de trementina produjo un cambio significativo en la concentración de Hp y SAA. En cambio, la infección experimental con lengua azul no produjo cambios significativos en ninguna de las proteínas estudiadas. Los métodos validados para la determinación de las PFA en estos cuatro estudios demostraron que los resultados que producen son fiables y que por tanto se pueden aplicar en las especies estudiadas, con la excepción de algunos parámetros que habría que tener en cuenta cuando se utilicen estos métodos. Del mismo modo, hubo diferencias significativas entre los animales sanos y enfermos en todas las proteínas estudiadas en el jabalí y el rebeco, y en la haptoglobina y el amiloide A sérico en la cabra montesa. En esta última especie las dos proteínas estudiadas produjeron cambios de concentración suficientes como para poder discriminar bien entre antes y después del establecimiento de una respuesta inflamatoria inducida por la inyección de trementina.Acute phase proteins (APPs) are a group of plasma proteins that change in concentration after any tissue injury induced by infection, inflammation, trauma or stress. Their main function is to restore homeostasis and limit microbial growth. The quantification of APPs can be used as a tool for diagnostic and prognostic as well as to monitor treatments. In the literature there are many articles describing the APPs patterns against different diseases in domestic animals, mainly livestock. However, the usefulness of APPs and their dynamics in diseases typical of wild populations has not been characterized. Analytical validation of the laboratory methods in use for the determination of APP should be assessed before the report of any value. This is especially important in wild animals, in which often the techniques in use in domestic animals are extrapolated without prior validation, so that the reliability of the results is unknown. The main goals of the present thesis are to validate analytical methods available for determination of APPs in domestic ungulates for its use in wild ungulates, to provide reference values and to verify the utility of several APPs for the species studied. In STUDY I six different APPs in wild boar were studied: serum haptoglobin (Hp), serum amyloid A (SAA), C-reactive protein (CRP) and porcine major acute phase protein (Pig-MAP) concentrations were determined using commercial kits available, the last two were porcine-specific methods; Acid soluble glycoprotein (ASG) and ceruloplasmin (Cp) were analyzed using assay methods described previously in literature. All the methods demonstrated good precision (CVs 15%), except inter assay CVs for ASG and SAA with the low concentration pool. Hemolysis affected all the proteins studied, mostly the SAA. There were significant differences between healthy and diseased animals. Reference ranges obtained for healthy wild boars were similar to those reported previously in literature for domestic pigs. In STUDY II a human CRP turbidimetric immunoassay (TIA) was compared to the porcine specific enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) CRP and validated for its use in wild boar. Passing bablok regression demonstrated that there was a proportional error between TIA and ELISA which was reduced using a porcine in-house calibrator. The validation of TIA CRP with the porcine in-house calibrator showed good precision and accuracy. Important interference was observed in the study of hemolysis. The method validation of Hp, SAA, ASG and Cp conducted in STUDY III in Pyrenean chamois demonstrated good precision and accuracy of all the proteins studied. Hp and SAA yielded many values below the limit of detection when samples from healthy animals were analyzed. ASG was significantly affected by hemolysis. The values obtained from healthy and diseased animals were significantly different from each other. Hp and SAA methods were evaluated for Spanish ibex in STUDY IV with good intra-assay precision and accuracy. An important inter-assay imprecision was observed for both proteins. Inflammation induced by turpentine injection produced a significant change in the concentration of Hp and SAA. No significant changes in any of the proteins studied were observed when a experimentally bluetongue virus infection was induced. APPs methods validated in these studies demonstrated to be reliable in the species studied, except for some parameters that should be kept in mind when implementing these methods. Likewise, significant differences between healthy and disease animals were observed for all the proteins studied in wild boar and Pyrenean chamois. In Spanih ibex, haptoglobin and serum amyloid A discriminated well before and after the establishment of an aseptic inflammation induced by turpentine injection
Estudi farmacològic del Carprofen ex vivo i in vivo en l’espècie porcina
No full textEl Carprofè s’utilitza com a agent antiinflamatori, analgèsic i antipirètic. Pertany a la família de medicaments antiinflamatoris no esteroideus. S’utilitza en medicina veterinària en nombroses espècies, tot i així està molt poc estudiat el seu ús en l’espècie porcina. D’altra banda, alguns efectes indesitjables s’associen a la seva administració sistèmica. Les rutes locals alternatives són especialment útils per facilitar la seva administració en animals.
La hipòtesis d’aquest treball és trobar noves formes de dosificació del Carprofè per diverses vies en l’espècie porcina. Per això, ens plantegem diversos objectius: hem volgut conèixer la capacitat de permeació del Carprofè a través d’estudis ex vivo vehiculitzat en nanopartícules o en solució en mucoses i teixits oculars per aconseguir conèixer la seva possible eficàcia, tolerància i seguretat per aquestes vies i oferir alternatives terapèutiques. D’altra banda, volem conèixer el comportament farmacocinètic del Carprofè en l’espècie porcina i així, poder avaluar tots el paràmetres per la via intravenosa i intramuscular. Finalment, ens proposem validar diferents mètodes d’anàlisis per donar fiabilitat als resultats obtinguts.
En aquesta tesis hem realitzat tres treballs per donar resposta als notres objectius:
1. L’objectiu principal del primer article és validar la idoneïtat dels experiments de permeació ex vivo de Carprofè en membranes mucoses porcines (bucals, sublinguals i vaginals) i teixits oftàlmics (còrnia, esclera i conjuntiva) destinats a ser representatius de condicions in vivo. Els resultats es poden consultar en el següent article publicat:
- Gómez-Segura, L.; Parra, A.; Calpena, A.C.; Gimeno, Á.; Boix-Montañes, A. Carprofen Permeation Test through Porcine Ex Vivo Mucous Membranes and Ophthalmic Tissues for Tolerability Assessments: Validation and Histological Study. Veterinary Sciences. 2020, 7, 152.
2. L’objectiu principal del segon treball és la investigació de la permeació ex vivo de Carprofè mitjançant cèl·lues de Franz a través de diferents tipus de membranes mucoses porcines i teixits oftàlmics (prèviament esmentats) per comparar la formulació de nanopartícules de Carprofè i Carprofè en solució. A més, es van realitzar estudis in vivo per verificar que les formulacions no afectaven l’estructura cel·lular i establir la quantitat retinguda als teixits. Els resultats es poden consultar en el següent article publicat:
- Gómez-Segura, L.; Parra, A.; Calpena-Campmany, A.C.; Gimeno, Á.; Gómez de Aranda, I.; Boix-Montañes, A. Ex Vivo Permeation of Carprofen Vehiculated by PLGA Nanoparticles through Porcine Mucous Membranes and Ophthalmic Tissues. Nanomaterials. 2020, 10, 355.
3. El tercer treball es base en l’objectiu de proporcionar un estudi per primera vegada de la farmacocinètica del Carprofè en porcs Yorkshire-Landrace. A més, un nou mètode d’anàlisi mitjançant cromatografia de líquids per espectrometria de masses ens ha permès calcular les concentracions plasmàtiques, avaluar els paràmetres farmacocinètics i la biodisponibilitat (també hem validat aquest nou mètode analític). Els resultats es podran consultar pròximament en el següent article pendent de ser publicat:
- Gómez-Segura, L.; Parra, A.; Gimeno, Á; Calpena-Campmany, A.C.; Bellido, D.; Soriano-Ruiz J.L.; Boix-Montañes A. Application of liquid chromatography/mass spectrometry for bioanalysis of Carprofen in swine: pharmacokinetics and bioavailability. Pendent d’enviar.
Com a conclusions finals s’ha demostrat la idoneïtat d’aquest test per quantificar la distribució de Carprofè amb una bona tolerabilitat histològica en els teixits porcins estudiats. Tanmateix, es va concloure que les nanopartícules de Carprofè poden ser una eina útil per al tractament tòpic de la inflamació local en medicina veterinària i humana. Per finalitzar, s’ha descrit i validat un nou mètode per caracteritzar la farmacocinètica del Carprofè en porcs i proposar un règim de dosificació en aquesta espècie.El Carprofè utiliza como agente antiinflamatorio, analgésico y antipirético. Pertenece a la familia de medicamentos antiinflamatorios no esteroideos. Se utiliza en medicina veterinaria en numerosas especies, aún así está muy poco estudiado su uso en la especie porcina. Por otra parte, algunos efectos indeseables se asocian a su administración sistémica. Las rutas locales alternativas son especialmente útiles para facilitar su administración en animales.
La hipótesis de este trabajo es encontrar nuevas formas de dosificación del Carprofè por diversas vías en la especie porcina. Por ello, nos planteamos varios objetivos: hemos querido conocer la capacidad de permeación del Carprofè a través de estudios ex vivo vehiculizado en nanopartículas o en solución en mucosas y tejidos oculares para lograr conocer su posible eficacia, tolerancia y seguridad por estas vías y ofrecer alternativas terapéuticas. Por otra parte, queremos conocer el comportamiento farmacocinético del Carprofè en la especie porcina y así, poder evaluar todos los parámetros para la vía intravenosa e intramuscular. Finalmente, nos proponemos validar diferentes métodos de análisis para dar fiabilidad a los resultados obtenidos.
En esta tesis hemos realizado tres trabajos para dar respuesta a los Notro objetivos:
1. El objetivo principal del primer artículo es validar la idoneidad de los experimentos de permeación ex vivo de Carprofè en membranas mucosas porcinas (bucales, sublinguales y vaginales) y tejidos oftálmicos (córnea, esclera y conjuntiva) destinados a ser representativos de condiciones in vivo . Los resultados se pueden consultar en el siguiente artículo publicado:
- Gómez-Segura, L .; Parra, A .; Calpena, A.C .; Gimeno, Á .; Boix-Montañes, A. Carprofen Permeation Test through Porcine Ex Vivo Mucous Membranas and Ophthalmic Tissues for Tolerability Assessments: Validation and Histological Study. Veterinary Sciences. 2020, 7, 152.
2. El objetivo principal del segundo trabajo es la investigación de la permeación ex vivo de Carprofè mediante Cellu de Franz a través de diferentes tipos de membranas mucosas porcinas y tejidos oftálmicos previamente mencionados para comparar la formulación de nanopartículas de Carprofè y Carprofè en solución. Además, se realizaron estudios in vivo para verificar que las formulaciones no afectaban la estructura celular y establecer la cantidad retenida a los tejidos. Los resultados se pueden consultar en el siguiente artículo publicado:
- Gómez-Segura, L .; Parra, A .; Calpena-Campmany, A.C .; Gimeno, Á .; Gómez de Aranda, Y .; Boix-Montañes, A. Ex Vivo Permeation of Carprofen Vehiculated by PLGA nanoparticles through Porcine Mucous Membranas and Ophthalmic Tissues. Nanomateriales. 2020, 10, 355.
3. El tercer trabajo se base en el objetivo de proporcionar un estudio por primera vez de la farmacocinética del Carprofè en cerdos Yorkshire-Landrace. Además, un nuevo método de análisis mediante cromatografía de líquidos por espectrometría de masas nos ha permitido calcular las concentraciones plasmáticas, evaluar los parámetros farmacocinéticos y la biodisponibilidad (también hemos validado este nuevo método analítico). Los resultados se podrán consultar próximamente en el siguiente artículo pendiente de ser publicado:
- Gómez-Segura, L .; Parra, A .; Gimeno, Á; Calpena-Campmany, A.C .; Bellido, D .; Soriano-Ruiz J.L .; Boix-Montañes A. Application of liquid chromatography / mass spectrometry for Bioanalysis of Carprofen in swine: pharmacokinetics and Bioavailability. Pendiente de enviar.
Como conclusiones finales se ha demostrado la idoneidad de este test para cuantificar la distribución de Carprofè con una buena tolerabilidad histológica en los tejidos porcinos estudiados. Sin embargo, se concluyó que las nanopartículas de Carprofè pueden ser una herramienta útil para el tratamiento tópico de la inflamación local en medicina veterinaria y humana. Para finalizar, se ha descrito y validado un nuevo método para caracterizar la farmacocinética del Carprofè en cerdos y proponer un régimen de dosificación en esta especie.Carprofen is used as an anti-inflammatory, analgesic and antipyretic agent. It belongs to the family of non-steroidal anti-inflammatory drugs. It is used in veterinary medicine in many species, although its use in the porcine species is very little studied. On the other hand, some side effects are associated with its systemic administration. Alternative local routes are especially useful for ease of administration in animals.
The hypothesis of this work is to find new ways of dosing Carprofen in various ways in porcine species. Therefore, we set ourselves several objectives: we wanted to know the permeation capacity of Carprofen through ex vivo studies carried in nanoparticles or in solution in mucous membranes and eye tissues to get to know its possible efficacy, tolerance and safety by these routes offer therapeutic alternatives. On the other hand, we want to know the pharmacokinetic behavior of Carprofen in the porcine species and thus be able to evaluate all the parameters intravenously and intramuscularly. Finally, we propose to validate different methods of analysis to give reliability to the results obtained.
In this thesis we have carried out three works to respond to our objectives:
1. The main objective of the first article is to validate the suitability of ex vivo permeation experiments of Carprofen in porcine mucous membranes (buccal, sublingual and vaginal) and ophthalmic tissues (cornea, sclera and conjunctiva) intended to be representative of in vivo conditions. . The results can be consulted in the following published article:
- Gómez-Segura, L .; Parra, A .; Calpena, A.C .; Gimeno, Á .; Boix-Montañes, A. Carprofen Permeation Test through Porcine Ex Vivo Mucous Membranes and Ophthalmic Tissues for Tolerability Assessments: Validation and Histological Study. Veterinary Sciences. 2020, 7, 152.
2. The main objective of the second work is the investigation of the ex vivo permeation of Carprofen by Franz cells through different types of porcine mucous membranes and ophthalmic tissues previously mentioned to compare the formulation of nanoparticles of Carprofen and Carprofen in solution. In addition, in vivo studies were performed to verify that the formulations did not affect cell structure and to establish the amount retained in tissues. The results can be consulted in the following published article:
- Gómez-Segura, L .; Parra, A .; Calpena-Campmany, A.C .; Gimeno, Á .; Gómez de Aranda, I .; Boix-Montañes, A. Ex Vivo Permeation of Carprofen Vehiculated by PLGA Nanoparticles through Porcine Mucous Membranes and Ophthalmic Tissues. Nanomaterials. 2020, 10, 355.
3. The third work is based on the aim of providing a first study of the pharmacokinetics of Carprofen in Yorkshire-Landrace pigs. In addition, a new method of analysis by liquid chromatography by mass spectrometry has allowed us to calculate plasma concentrations, evaluate pharmacokinetic parameters and bioavailability (we have also validated this new analytical method). The results will be available soon in the following article pending publication:
- Gómez-Segura, L .; Parra, A .; Gimeno, Á; Calpena-Campmany, A.C .; Bellido, D .; Soriano-Ruiz J.L .; Boix-Montañes A. Application of liquid chromatography / mass spectrometry for bioanalysis of Carprofen in swine: pharmacokinetics and bioavailability. Pending submission.
Final conclusions have been shown to be suitable for this test to quantify the distribution of Carprofen with good histological tolerability in swines tissues studied. However, it was concluded that Carprofen nanoparticles may be a useful tool for the topical treatment of local inflammation in veterinary and human medicine. Finally, a new method has been described and validated to characterize the pharmacokinetics of Carprofen in swines and to propose a dosing regimen in this species.Universitat Autònoma de Barcelona. Programa de Doctorat en Medicina i Sanitat Animal
Estudio de la hematología y la bioquímica sanguínea de las rapaces nocturnas ibéricas
No full textLa importancia de la hematología y la bioquímica sanguínea en medicina aviar se refleja en el incremento de estudios destinados a la obtención de los intervalos de referencia en muchas especies de aves en general y en las Estrigiformesen particular. Para interpretar correctamente sus valores se requiere conocer la influencia que los factores ambientales, fisiológicos y metodológicos ejercen sobre los mismos. La edad es un factor muy relevante, especialmente en el primer periodo de vidalas aves donde acontece el proceso de crecimiento. Estudios realizados sobre otras especies de aves han demostrado que la edad influye sobre los parámetros hematológicos y bioquímicos produciendo cambios significativos en sus valores. El objetivo de esta tesis doctoral fue determinar los intervalos de referencia hematológicos en cinco especies de Estrigiformes en diferentes clases de edad. Se muestrearon 339 animales; 92 cárabo comunes (Strix aluco), 88 mochuelos europeos (Athene noctua), 96 autillos europeos (Otus scops), 17 búhos chicos (Asio otus) y 48 lechuzas comunes (Tyto alba), procedentes de dos centros de recuperación de fauna salvaje localizados en la región Nord-Este de España. De todos los parámetros analizados, únicamente las concentraciones de colesterol y albúmina junto a la osmolaridad plasmática no mostraron variabilidad inter específica. El resto de parámetros variaron entre especies. Respecto a la comparación entre clases de edad, los resultados de nuestro estudio muestran que dentro delorden de las Estrigiformes se produce un incremento con la edad en el recuento total de eritrocitos, valor hematocrito y en las concentraciones de hemoglobina. Por el contrario, la concentración de fósforo y la actividad de la fosfatasa alcalina disminuyeron con la edad. Adicionalmente, dentro de la familia Strigidae se observó un incremento en las concentraciones de gamma globulina y sodio, y un descenso de la cifra total de leucocitos y de la concentración de calcio con la edad. Esta tesis doctoral demuestra la importancia de considerar la edad como un factor relevante en la obtención de los intervalos de referencia hematológicos y bioquímicos en las Estrigiformes, y evidencia que los pollos de estas especies son como una cohorte independiente. En base a ello se han propuesto dos intervalos de referencia. En la segunda parte de este trabajo de tesis doctoral quisimos valorar la modificación propuesta por Arock et al., 2013 de un método semi-directo (MSDTLC) de recuento total leucocitario basado en el colorante eosinofílico del segundo paso de la tinción de Diff-Quick y determinar su grado de relación con el método directo hemocitométrico de Natt y Herrick, que tradicionalmente se emplea en la sangre aviar en los laboratorios. Se muestrearon 20 animales,10 cárabos comunes (Strix aluco) y 10 buitres leonados (Gyps fulvus). Se observó una buena correlación entre métodos (r=0.89), ausencia de errores de tipo constante o proporcional y Bias= 2.06 (95 % CI -6.44 a 10.57). El método semi-directo obtuvo unaimprecisión intra observador mayor (CV=16.3%) y una menor imprecisión entre observadores (CV= 8.5%) que la observada en el método de Natt y Herrick. En conclusión, el método modificado de recuento leucocitario total, MSDTLC recientemente propuesto, permite un recuento fiable tanto de heterófilos como de eosinófilos en las muestras sanguíneas de cárabo común y de buitre leonado, muestra una alta precisión y por tanto puede ser empleado como alternativa de otros métodos semi-directos, cuando el método hemocitométrico directo no está disponibleThe importance of hematological and blood biochemistry testing in avian veterinary medicine is reflected in the increasing numbers of studies leading to the identification of reference intervals of Strigiformes. To conduct a proper clinical interpretation, a set of characteristic health values is required and the influence of the environmental, physiological and methodological factors should be understood. The age is an influential factor especially in the first time of life when the most rapid growth rate or increase in body mass occurs, and studies in other avian groups have shown the age significantly influences producing detectable changes in hematological and blood biochemistry parameters. The objective of this study was to determine baseline data of hematologic and blood biochemistry parameters of five species of Iberian Strigiformes in different age classes. 341 nocturnal birds of preys were sampled from wildlife health centers, 92 Tawny Owls, 88 Little Owls, 96 Scops Owls, 17 Long-eared Owls and 48 Barn Owls. Only the reference interval of cholesterol, albumin and plasmatic osmolality did not show inter-specific variability. The others hematologic and biochemical parameters varied between the species. Between the age classes considered, a common trend was observed. Into the Strigiforme Order no differences were observed between juveniles and adults in any hematologic and blood biochemistry parameter. The packed cell volume, red blood cell count and hemoglobin of chicks were significantly lower than juveniles and adults, and alkaline phosphatase activity and phosphorus concentrations were significantly higher. In the Strigidae family, sodium and gamma globulins increased with age and total WBC and calcium decreased. Our results evidenced the importance of considering age classes for the establishment of hematologic and biochemical reference intervals in the Strigiformes, and provide evidence that data from chicks of this Order were identified as unique group compared to older cohorts; therefore two hematologic and blood biochemical reference intervals by age have been defined. Based on the staining affinity of heterophils and eosinophils in the step 2 of Diff-Quick stain, it has been proposed to test a novel modified semi-direct method for total leukocyte count. The purpose of this study was compare this semi-direct Romanowskybased quick stain method with the direct method of Natt and Herrick and to study the intra and inter-observer imprecision in samples from two species of birds with a different differential leukocyte counts. 20 samples of tawny owl (Strix aluco) and griffon vulture (Gyps fulvus) were used to calculate the WBC by the two methods. A good correlation was observed, r = 0.89; no constant and/or proportional error was found. The Bias was 2.06 (95 % CI -6.44 to 10.57). The intra-observer imprecision of a semi-direct Romanowsky-based quick stain method was higher (in tawny owl CV = 18.3% and griffon vulture CV = 14.3%) than the Natt and Herrick method, but the inter-observer imprecision was lower (in tawny owl CV = 24% and griffon vulture = 7%) than the Natt and Herrick method. In conclusion, the techniques did not produce equivalent results, but the semi-direct Romanowsky-based quick stain method allowed reliable counting of both heterophils and eosinophils in tawny owl and griffon vultures blood samples and showed high precision and therefore could be used as an alternative of other semi-direct counting methods when direct hemocytomer method is not available
Caracterización morfológica, hematológica y bioquímica clínica en cinco razas asnales españolas para programas de conservación
No full textConsultable des del TDXTítol obtingut de la portada digitalitzadaDeterminadas razas autóctonas de asnos (Andaluza, Catalana, Mallorquina, Asno de las Encartaciones y Zamorano-Leonesa) han sufrido a lo largo del tiempo importantes y frecuentes variaciones cuantitativas, generalmente negativas y particularmente atribuibles al olvido técnico impuesto por la marginación que ha provocado la explotación de otras especies y la industrialización del campo. La disminución de sus efectivos y el cruce indiscriminado con otras razas las ha conducido al estado de razas en peligro de extinción (RD 1682, 1997), y ha conllevado a un gran confusionismo descriptivo de sus características etnológicas. El objetivo último y fundamental del proyecto CICYT AG98-0503 que se está llevando a cabo, es sentar las bases para la conservación, mantenimiento y mejora de los animales que integran cada una de estas razas, centrándose principalmente en las fases I, II y III del protocolo marcado por la FAO para poblaciones en peligro de extinción, es decir, en la conservación «in situ». Esta tesis doctoral se ha centrado en una parte de la fase II del programa de conservación, concretamente en su caracterización racial a nivel morfológico, hematológico y bioquímico clínico. Para ello, se ha llevado a cabo un trabajo de campo centrado en la búsqueda de ejemplares de las 5 razas en distintas comunidades autónomas, con la finalidad de reflejar la situación actual de la población, tomar diferentes medidas zoométricas para realizar su caracterización fenotípica (morfológica), así como extraer muestras sanguíneas, para poder establecer los valores de referencia y normalidad tanto a nivel hematológico, bioquímico y de proteínas plasmáticas. Se efectuaron extracciones sanguíneas a 491 animales de ambos sexos, tanto jóvenes como adultos; y en los animales adultos, o sea, aquéllos mayores de 3 años (317 animales), fueron tomadas un total de 26 medidas corporales (cefálicas, troncales y extremidades) para el análisis biométrico. La descripción y análisis de los parámetros estadísticos de tendencia central y de dispersión, así como el estudio y análisis de los factores: edad, sexo y raza, tanto para las variables hematológicas, bioquímicas, proteínas plasmáticas y morfológicas, nos proporcionaron valores de referencia fiables para ser utilizados tanto en la caracterización racial como en el ámbito clínico. Mediante la caracterización morfológica, aspiramos a la diagnosis racial; esto es, al encuadre del animal objeto de observación y estudio, a un grupo etnológico diferenciado. Los resultados obtenidos a partir de las 26 mediciones biométricas nos proporcionaron datos importantes para diferenciar unos animales de otros, para agruparlos en conjuntos específicos y, fundamentalmente, para deducir proporciones que a su vez indiquen aptitudes funcionales. Estas proporciones las obtuvimos con el análisis de 12 índices zoométricos corporales (etnológicos y funcionales), los cuales evidenciaron las relaciones existentes entre algunos elementos de compacidad, alzada, longitud y peso. El análisis de las correlaciones entre las 26 medidas morfométricas, para cada una de las razas y por sexos, permitieron identificar las interacciones existentes entre y dentro las distintas regiones corporales (tronco, extremidades y cabeza), y el análisis factorial de componentes principales (ACP) permitió observar el grado de relación existente entre dichas razas, así como determinar las variables de mayor importancia en la definición morfoestructural, con la finalidad de reducir el número de variables a emplear en la caracterización práctica y rutinaria de los animales en trabajos posteriores, reduciendo así la complejidad de los mismos. Para ello la matriz de datos de las 26 variables zoométricas estudiadas fue sometida a un análisis multivariante, es decir, sometimos los datos a un análisis canónico, en el que las variables fueron transformadas en variables canónicas (factor I, II y III). Estos tres factores resumieron en total un 99,71 % de la información aportada por las 26 variables de origen, el factor I contribuyó en un 95,85 %, el factor II en un 3,25 % y el factor III en un 0,61 % al total de la varianza explicada. El perímetro torácico, alzada a la cruz, diámetro longitudinal, alzada a las palomillas, alzada al nacimiento de la cola, alzada al dorso, alzada a la pelvis, y la alzada a la grupa, diámetro dorso-esternal y longitud de la cabeza, determinaron principalmente el factor I siendo éstas por tanto, las variables de mayor peso en la caracterización racial Por otro lado, el análisis del nivel de divergencia existente entre las 5 poblaciones de asnos estudiados, basándonos en caracteres cuantitativos, lo realizamos mediante el uso de la Distancia de Mahalanobis, así como con el análisis de componentes principales (ACP). Los resultados mostraron la existencia de tres grupos, sin una evidencia clara de agrupamiento por distancia geográfica. Por ello, debemos suponer que la filogenia y evolución morfológica de los asnos peninsulares ha sido un proceso complejo, englobando distintos patrones de diferenciación para los distintos grupos de caracteres, debido probablemente a la acción medioambiental y a presiones selectivas desiguales. Las mayores diferencias las encontramos entre la raza Andaluza y el Asno de las Encartaciones, mientras que las menores se localizaron entre el asno Zamorano-Leonés y el Mallorquín. Tanto en el ACP como en el cálculo de la distancia de Mahalanobis observamos como la raza Zamorano-Leonesa es la que de algún modo se encontraría en medio de todas ellas, es decir, la que presenta menores distancias morfológicas con las cuatro restantes. Los resultados de los principales estadísticos descriptivos, analizados en el estudio de 15 variables hematológicas, 11 variables bioquímicas y proteínas plasmáticas, nos proporcionaron los valores de normalidad en cada una de las razas. El análisis de varianza para el factor raza indicó la existencia de diferencias estadísticamente significativas entre las 5 poblaciones de asnos. La edad resultó ser el factor modulador con más peso sobre los parámetros sanguíneos, ya que las diferencias encontradas entre animales jóvenes (3 años) fueron notables (11 de 15 variables hematológicas y 7 de 11 bioquímicas presentaron diferencias significativas). Sin embargo, las diferencias encontradas para el factor sexo reflejaron la existencia de un bajo dimorfismo sexual en lo referente a parámetros hematológicos y bioquímicos, y nulo en cuanto a las proteínas plasmáticas.Certain autochthonous breeds of donkeys (Andaluza, Catalana, Mallorquina, Encartaciones and Zamorano-Leonesa) have suffered important and frequent quantitative variations throughout the time, that generally have been negative, probably due to the intense mechanization of the country-side and the introduction of other species of asses. The decrease of the census of their populations and the indiscriminate mixture with other breeds have lead them to the state of «endangered breeds» (RD 1682, 1997), and have done confuse their ethnic characteristics. The main objective of this thesis is first of all, reflect the present situation of the Spanish donkey breeds and in the other hand, make the biometrical, haematological and biochemical characterization of their endangered populations. This work has followed the rules marked by the FAO Expert Consultation for the identification of possible stocks for conservation and as basic tool for the study, maintenance and conservation of animal genetic biodiversity. For the biometrical study 317 adult animals (older than 3 years) have been sampled and a total of 26 corporal measures (cephalic, trunk and extremities) for each individual were taken. The results obtained from these measurements provided us important information to differ individuals from others, to group them in specific sets and, mainly, to deduce proportions that indicate functional aptitudes. We obtained these proportions analysing 12 corporal indices (ethnological and functional), which demonstrates the existing relationships between some elements of compactness, height, length and weight. For the haematological, biochemical and plasma proteins study, blood samples have taken from 491 animals of both genders and age (young and adult). The description and analysis of the average, variance, and age, sex and race factors provided us guaranteed reference values to be used for the racial characterization and for the clinical scope. The correlation's analyses between the 26 corporal measures, for each one of the breeds and genders, allowed identifying the existing interactions between and within the different corporal regions (trunk, extremities and head). The factorial analysis of principal components (ACP) allowed to observe the existing relationship degree between these breeds, and to determine the most important variables of the morphological definition, with the purpose to reduce the number of variables to be used in the practical and routine characterization of the animals in later studies, reducing then the complexity of them. To do it, all the information of the 26 corporal variables was subject to a multivariate analysis, in fact, subject in a canonical analysis, where the variables were transformed into canonical variables (factor I, II and III). These three factors summarized 99.71 % of the information by the original 26 variables, the factor I contributed in 95.85 %, factor II in 3.25 % and factor III in 0.61 % to the total of the explained variance. The thoracic perimeter, length diameter, withers height, sacrum height, root of tail height, back height, pelvis height, and rump height, the back-sternal diameter and head length, mainly determined factor I, being the heaviest weight variables for the racial characterization. On the other hand, using the Mahalanobis Distance, and also with ACP, we obtained the divergence level between the 5 donkey populations studied, according on quantitative characters. The results showed the existence of three groups, without clear evidence of clustering by geographic distance. For this reason, we must suppose that phylogenetic and morphologic evolution of the peninsular donkeys have been a complex process, including different patterns of differentiation for the different characters groups, probably coming from the environmental action and to unequal selective pressures. The greater differences were found between the Andaluza and Encartaciones breeds, while the minors were located between the Zamorano-Leonesa and Mallorquina. Using the ACP and also in the Mahalanobis Distance, we observed that the Zamorano-Leonesa breed is the one that presents minor morphologic distances with the others. The analysis of breed factor of 15 haematological parameters, 11 biochemical parameters and plasma proteins indicated the existence of statistically significant differences between the 5 populations analyzed. Age had the most influence on blood parameters because the differences found between young and adult animals were remarkable (11 of 15 haematological variables and 7 of 11 biochemical ones presented significant differences). In contrast, less significant differences between genders were found for sex factor so we demonstrate the existence of a low sexual dimorphism for haematological and biochemical parameters
Diagnostic imaging of the loggerhead sea turtle (Caretta caretta)
No full textConsultable des del TDXTítol obtingut de la portada digitalitzadaThe aims of this work are: 1. To provide the normal cervical and coelomic radiographic appearance of the Loggerhead sea turtle, in the dorso-ventral view, as well as other useful landmarks, to allow for correlation of shell scutes with internal anatomic structures. 2. To provide the normal radiographic anatomy of the limbs of the Loggerhead sea turtle in combination with data obtained from computed tomography - osteological, gross anatomical and histological data. 3. To describe the normal ultrasonographic appearance of cervical structures and coelomic organs of the Loggerhead sea turtle, and to provide the respective images of frozen cross-sections for anatomical reference. 4. To provide normal computed tomographic images of the vertebral column and coelomic structures of the Loggerhead sea turtle, by establishing reference standards for organ size and position in this species; to provide images of virtual tracheo-bronchoscopy and 3D reconstructions of the respiratory tract and bone structures. 5. To provide the normal magnetic resonance imaging (MRI) appearance of coelomic structures of Loggerhead sea turtles in T1 and T2-weighted scans via comparison with cross-sectional anatomic sections of this species
Estudio de la hematología y la bioquímica sanguínea de las rapaces nocturnas ibéricas
No full textLa importancia de la hematología y la bioquímica sanguínea en medicina aviar se refleja en el incremento de estudios destinados a la obtención de los intervalos de referencia en muchas especies de aves en general y en las Estrigiformesen particular.
Para interpretar correctamente sus valores se requiere conocer la influencia que los factores ambientales, fisiológicos y metodológicos ejercen sobre los mismos. La edad es un factor muy relevante, especialmente en el primer periodo de vidalas aves donde acontece el proceso de crecimiento.
Estudios realizados sobre otras especies de aves han demostrado que la edad influye sobre los parámetros hematológicos y bioquímicos produciendo cambios significativos en sus valores.
El objetivo de esta tesis doctoral fue determinar los intervalos de referencia hematológicos en cinco especies de Estrigiformes en diferentes clases de edad. Se muestrearon 339 animales; 92 cárabo comunes (Strix aluco), 88 mochuelos europeos (Athene noctua), 96 autillos europeos (Otus scops), 17 búhos chicos (Asio otus) y 48 lechuzas comunes (Tyto alba), procedentes de dos centros de recuperación de fauna salvaje localizados en la región Nord-Este de España.
De todos los parámetros analizados, únicamente las concentraciones de colesterol y albúmina junto a la osmolaridad plasmática no mostraron variabilidad inter específica. El resto de parámetros variaron entre especies.
Respecto a la comparación entre clases de edad, los resultados de nuestro estudio muestran que dentro delorden de las Estrigiformes se produce un incremento con la edad en el recuento total de eritrocitos, valor hematocrito y en las concentraciones de hemoglobina. Por el contrario, la concentración de fósforo y la actividad de la fosfatasa alcalina disminuyeron con la edad. Adicionalmente, dentro de la familia Strigidae se observó un incremento en las concentraciones de gamma globulina y sodio, y un descenso de la cifra total de leucocitos y de la concentración de calcio con la edad.
Esta tesis doctoral demuestra la importancia de considerar la edad como un factor relevante en la obtención de los intervalos de referencia hematológicos y bioquímicos en las Estrigiformes, y evidencia que los pollos de estas especies son como una cohorte independiente. En base a ello se han propuesto dos intervalos de referencia.
En la segunda parte de este trabajo de tesis doctoral quisimos valorar la modificación propuesta por Arock et al., 2013 de un método semi-directo (MSDTLC) de recuento total leucocitario basado en el colorante eosinofílico del segundo paso de la tinción de Diff-Quick y determinar su grado de relación con el método directo hemocitométrico de Natt y Herrick, que tradicionalmente se emplea en la sangre aviar en los laboratorios. Se muestrearon 20 animales,10 cárabos comunes (Strix aluco) y 10 buitres leonados (Gyps fulvus).
Se observó una buena correlación entre métodos (r=0.89), ausencia de errores de tipo constante o proporcional y Bias= 2.06 (95 % CI -6.44 a 10.57). El método semi-directo obtuvo unaimprecisión intra observador mayor (CV=16.3%) y una menor imprecisión entre observadores (CV= 8.5%) que la observada en el método de Natt y Herrick.
En conclusión, el método modificado de recuento leucocitario total, MSDTLC recientemente propuesto, permite un recuento fiable tanto de heterófilos como de eosinófilos en las muestras sanguíneas de cárabo común y de buitre leonado, muestra una alta precisión y por tanto puede ser empleado como alternativa de otros métodos semi-directos, cuando el método hemocitométrico directo no está disponible.The importance of hematological and blood biochemistry testing in avian veterinary
medicine is reflected in the increasing numbers of studies leading to the identification of
reference intervals of Strigiformes. To conduct a proper clinical interpretation, a set of
characteristic health values is required and the influence of the environmental,
physiological and methodological factors should be understood. The age is an influential
factor especially in the first time of life when the most rapid growth rate or increase in
body mass occurs, and studies in other avian groups have shown the age significantly
influences producing detectable changes in hematological and blood biochemistry
parameters.
The objective of this study was to determine baseline data of hematologic and blood
biochemistry parameters of five species of Iberian Strigiformes in different age classes.
341 nocturnal birds of preys were sampled from wildlife health centers, 92 Tawny Owls,
88 Little Owls, 96 Scops Owls, 17 Long-eared Owls and 48 Barn Owls.
Only the reference interval of cholesterol, albumin and plasmatic osmolality did not
show inter-specific variability. The others hematologic and biochemical parameters
varied between the species.
Between the age classes considered, a common trend was observed. Into the Strigiforme
Order no differences were observed between juveniles and adults in any hematologic
and blood biochemistry parameter. The packed cell volume, red blood cell count and
hemoglobin of chicks were significantly lower than juveniles and adults, and alkaline
phosphatase activity and phosphorus concentrations were significantly higher. In the
Strigidae family, sodium and gamma globulins increased with age and total WBC and
calcium decreased.
Our results evidenced the importance of considering age classes for the establishment of
hematologic and biochemical reference intervals in the Strigiformes, and provide
evidence that data from chicks of this Order were identified as unique group compared
to older cohorts; therefore two hematologic and blood biochemical reference intervals
by age have been defined.
Based on the staining affinity of heterophils and eosinophils in the step 2 of Diff-Quick
stain, it has been proposed to test a novel modified semi-direct method for total
leukocyte count. The purpose of this study was compare this semi-direct Romanowskybased
quick stain method with the direct method of Natt and Herrick and to study the
intra and inter-observer imprecision in samples from two species of birds with a different
differential leukocyte counts. 20 samples of tawny owl (Strix aluco) and griffon vulture
(Gyps fulvus) were used to calculate the WBC by the two methods.
A good correlation was observed, r = 0.89; no constant and/or proportional error was
found. The Bias was 2.06 (95 % CI -6.44 to 10.57). The intra-observer imprecision of a
semi-direct Romanowsky-based quick stain method was higher (in tawny owl CV = 18.3%
and griffon vulture CV = 14.3%) than the Natt and Herrick method, but the inter-observer
imprecision was lower (in tawny owl CV = 24% and griffon vulture = 7%) than the Natt
and Herrick method.
In conclusion, the techniques did not produce equivalent results, but the semi-direct
Romanowsky-based quick stain method allowed reliable counting of both heterophils
and eosinophils in tawny owl and griffon vultures blood samples and showed high
precision and therefore could be used as an alternative of other semi-direct counting
methods when direct hemocytomer method is not available
Acute phase proteins in wild boar, pyrenean chamois and spanish ibex: method validation and reference values
No full textHi ha un grup de proteïnes plasmàtiques, anomenades proteïnes de fase aguda (PFAs), la concentració de les quals canvia quan es produeixen lesions tissulars induïdes per traumes o estrès i per condicions infeccioses i inflamatòries. La funció principal de les PFAs és recuperar la homeòstasi i limitar el creixement microbià. La quantificació de la concentració de les PFAs pot ser utilitzada com a eina pel diagnòstic i pronòstic, així com pel seguiment de tractaments. A la bibliografia hi ha molts articles que descriuen els diferents patrons de les proteïnes enfront diferents malalties. No obstant, la utilitat de les APPs i la seva dinàmica en malalties pròpies de poblacions salvatges no ha estat determinada. Els mètodes de laboratori que s’utilitzen actualment per mesurar les APPs s’haurien de validar abans de proporcionar cap resultat. Això és especialment important en les espècies salvatges, on les tècniques dels animals domèstics s’extrapolen sense validació prèvia, i per tant la fiabilitat dels resultats es desconeguda. Els objectius principals d'aquest treball són validar els mètodes analítics disponibles per la determinació de proteïnes de fase aguda en ungulats domèstics per al seu ús en ungulats salvatges, així com proporcionar valors de referència per a les espècies estudiades i verificar la utilitat d’aquestes proteïnes de fase aguda. En l’ESTUDI I, realitzat en el senglar, es va determinar la concentració sèrica de sis APPs: l’haptoglobina (Hp), el sèrum amiloide A (SAA), la proteïna C-reactiva (CRP) i la proteïna de fase aguda major de porcí (Pig-MAP) utilitzant kits comercials. Els kits de les dues últimes proteïnes mencionades dissenyats específicament per la seva aplicació en mostres de porcí. També es van determinar la glicoproteïna àcida soluble (ASG) i la ceruloplasmina (Cp) mitjançant mètodes analítics descrits prèviament. Tots els mètodes utilitzats van demostrar una bona precisió (CV <15%), excepte per les proteïnes ASG i SAA que van presentar coeficients de variació (CVs) entre anàlisis més alts. Aquests dos CVs van ésser obtinguts pel pool de concentració baixa. L’estudi d’interferència va demostrar que l’hemòlisi produeix interferència en totes les proteïnes estudiades, sobretot el SAA. Totes les proteïnes estudiades van presentar diferències significatives entre les concentracions d’animals sans i malalts. Els valors de referència obtinguts pels senglars sans van ser similars als descrits prèviament en altres treballs realitzats en el porc domèstic. En l’ESTUDI II es van comparar dos mètodes diferents per la determinació de la CRP en el senglar. Un mètode immunoturbidimètric (TIA) específic de humana amb un mètode immunoenzimàtic (ELISA) específic de porcí. També es va validar el mètode immunoturbidimètric per al seu ús en els senglars. La regressió Passing-Bablok va demostrar que hi havia un error proporcional entre TIA i ELISA. Aquest error es va reduir quan es va utilitzar un calibrador de porcí fabricat en el laboratori. La validació del TIA amb el calibrador de porcí obtingut al laboratori va demostrar tenir una bona precisió i una bona exactitud. Es va demostrar també que l’hemòlisi produeix interferències importants en l’anàlisi de la CRP amb mostres de senglar amb el TIA. La validació dels mètodes de la Hp, SAA, ASG i Cp pel seu ús en l’isard es va realitzar en l’ESTUDI III. En general, tots els mètodes van presentar bona precisió i exactitud. Les mostres procedents d'animals sans van produir molts valors per sota del límit de detecció establert per les proteïnes Hp i SAA. La ASG es va veure afectada significativament per l'hemòlisi. Els valors obtinguts d'animals sans i malalts van ser significativament diferents entre sí. Els mètodes de determinació de la Hp i el SAA van ser avaluats pel seu ús en la cabra salvatge en l’ESTUDI IV. Aquests mètodes van demostrar tenir bona precisió intra-assaig i bona exactitud. En l’estudi inter-assaig es va observar una gran imprecisió per ambdues proteïnes. La inflamació induïda amb la injecció de trementina va produir un canvi significatiu en la concentració de Hp i SAA. En canvi, la infecció experimental amb llengua blava no va produir canvis significatius en cap de les proteïnes estudiades.
Els mètodes validats per la determinació de les PFA en aquests quatre estudis van demostrar que els resultats que produeixen son fiables i que per tant es poden aplicar en les espècies estudiades, amb l’excepció d'alguns paràmetres que caldria tenir en compte quan s’utilitzin aquests mètodes. De la mateixa manera, hi va haver diferències significatives entre els animals sans i malalts en totes les proteïnes estudiades en el senglar i l’isard, i en l’haptoglobina i l’amiloide A sèric en la cabra salvatge. En aquesta última espècie les dues proteïnes estudiades van produir canvis de concentració suficients com per poder discriminar bé entre abans i després de l'establiment d’una resposta inflamatòria induïda per la injecció de trementina.Hay un grupo de proteínas plasmáticas, llamadas proteínas de fase aguda (PFAs), la concentración de las cuales cambia cuando se producen lesiones tisulares inducidas por traumas o estrés y por condiciones infecciosas e inflamatorias. La función principal de las PFAs es restablecer la homeostasis y limitar el crecimiento microbiano. La cuantificación de la concentración de las PFAs puede ser utilizada como herramienta para el diagnóstico y pronóstico, así como para el seguimiento de tratamientos. En la bibliografía hay muchos artículos que describen los diferentes patrones de las proteínas frente distintas enfermedades. Sin embargo, la utilidad de las APPs y su dinámica en enfermedades propias de poblaciones salvajes no ha sido determinada. Los métodos de laboratorio que se utilizan actualmente para medir las APPs deberían ser validados antes de proporcionar ningún resultado. Esto es especialmente importante en las especies salvajes, donde las técnicas de los animales domésticos se extrapolan sin validación previa, y por tanto la fiabilidad de los resultados es desconocida.
Los objetivos principales de este trabajo son validar los métodos analíticos disponibles para la determinación de proteínas de fase aguda en ungulados domésticos para su uso en ungulados salvajes, así como proporcionar valores de referencia para las especies estudiadas y verificar la utilidad de estas proteínas de fase aguda.
En el ESTUDIO I, realizado en el jabalí, se determinó la concentración sérica de seis APPs: haptoglobina (Hp), el amiloide A sérico (SAA), la proteína C-reactiva (CRP) y la proteína de fase aguda mayor de porcino (Pig-MAP) utilizando kits comerciales. Los kits de las dos últimas proteínas mencionadas diseñados específicamente para su aplicación en muestras de porcino. También se determinaron la glicoproteína ácida soluble (ASG) y la ceruloplasmina (Cp) mediante métodos analíticos descritos previamente. Todos los métodos utilizados demostraron una buena precisión (CV <15%), excepto para las proteínas ASG y SAA que presentaron coeficientes de variación (CVs) entre análisis más altos. Estos dos CVs fueron obtenidos para el pool de concentración baja. El estudio de interferencia demostró que la hemólisis produce interferencia en todas las proteínas estudiadas, sobretodo el SAA. Todas las proteínas estudiadas presentaron diferencias significativas entre las concentraciones de animales sanos y enfermos. Los valores de referencia obtenidos por jabalíes sanos fueron similares a los descritos previamente en otros trabajos realizados en el cerdo doméstico.
En el ESTUDIO II se compararon dos métodos diferentes para la determinación de la CRP en el jabalí. Un método immunoturbidimètrico (TIA) específico de humana con un método immunoenzimàtico (ELISA) específico de porcino. También se validó el método immunoturbidimètrico para su uso en los jabalíes. La regresión Passing-Bablok demostró que había un error proporcional entre TIA y ELISA. Este error se redujo cuando se utilizó un calibrador de porcino fabricado en el laboratorio. La validación del TIA con el calibrador de porcino obtenido en el laboratorio demostró tener una buena precisión y una buena exactitud. Se demostró también que la hemólisis produce interferencias importantes en el análisis de la CRP con muestras de jabalí con el TIA.
La validación de los métodos de la Hp, SAA, ASG y Cp para su uso en el rebeco se realizó en el ESTUDIO III. En general, todos los métodos presentaron buena precisión y exactitud. Las muestras procedentes de animales sanos produjeron muchos valores por debajo del límite de detección establecido para las proteínas Hp y SAA. La ASG se vio afectada significativamente por la hemólisis. Los valores obtenidos de animales sanos y enfermos fueron significativamente diferentes entre sí.
Los métodos de determinación de la Hp y el SAA fueron evaluados para su uso en la cabra montés en el ESTUDIO IV. Estos métodos demostraron tener buena precisión intra-ensayo y buena exactitud. En el estudio inter-ensayo se observó una gran imprecisión para ambas proteínas. La inflamación inducida con la inyección de trementina produjo un cambio significativo en la concentración de Hp y SAA. En cambio, la infección experimental con lengua azul no produjo cambios significativos en ninguna de las proteínas estudiadas.
Los métodos validados para la determinación de las PFA en estos cuatro estudios demostraron que los resultados que producen son fiables y que por tanto se pueden aplicar en las especies estudiadas, con la excepción de algunos parámetros que habría que tener en cuenta cuando se utilicen estos métodos. Del mismo modo, hubo diferencias significativas entre los animales sanos y enfermos en todas las proteínas estudiadas en el jabalí y el rebeco, y en la haptoglobina y el amiloide A sérico en la cabra montesa. En esta última especie las dos proteínas estudiadas produjeron cambios de concentración suficientes como para poder discriminar bien entre antes y después del establecimiento de una respuesta inflamatoria inducida por la inyección de trementina.Acute phase proteins (APPs) are a group of plasma proteins that change in concentration after any tissue injury induced by infection, inflammation, trauma or stress. Their main function is to restore homeostasis and limit microbial growth. The quantification of APPs can be used as a tool for diagnostic and prognostic as well as to monitor treatments. In the literature there are many articles describing the APPs patterns against different diseases in domestic animals, mainly livestock. However, the usefulness of APPs and their dynamics in diseases typical of wild populations has not been characterized. Analytical validation of the laboratory methods in use for the determination of APP should be assessed before the report of any value. This is especially important in wild animals, in which often the techniques in use in domestic animals are extrapolated without prior validation, so that the reliability of the results is unknown.
The main goals of the present thesis are to validate analytical methods available for determination of APPs in domestic ungulates for its use in wild ungulates, to provide reference values and to verify the utility of several APPs for the species studied.
In STUDY I six different APPs in wild boar were studied: serum haptoglobin (Hp), serum amyloid A (SAA), C-reactive protein (CRP) and porcine major acute phase protein (Pig-MAP) concentrations were determined using commercial kits available, the last two were porcine-specific methods; Acid soluble glycoprotein (ASG) and ceruloplasmin (Cp) were analyzed using assay methods described previously in literature. All the methods demonstrated good precision (CVs<15%), except inter assay CVs for ASG and SAA with the low concentration pool. Hemolysis affected all the proteins studied, mostly the SAA. There were significant differences between healthy and diseased animals. Reference ranges obtained for healthy wild boars were similar to those reported previously in literature for domestic pigs.
In STUDY II a human CRP turbidimetric immunoassay (TIA) was compared to the porcine specific enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) CRP and validated for its use in wild boar. Passing bablok regression demonstrated that there was a proportional error between TIA and ELISA which was reduced using a porcine in-house calibrator. The validation of TIA CRP with the porcine in-house calibrator showed good precision and accuracy. Important interference was observed in the study of hemolysis.
The method validation of Hp, SAA, ASG and Cp conducted in STUDY III in Pyrenean chamois demonstrated good precision and accuracy of all the proteins studied. Hp and SAA yielded many values below the limit of detection when samples from healthy animals were analyzed. ASG was significantly affected by hemolysis. The values obtained from healthy and diseased animals were significantly different from each other.
Hp and SAA methods were evaluated for Spanish ibex in STUDY IV with good intra-assay precision and accuracy. An important inter-assay imprecision was observed for both proteins. Inflammation induced by turpentine injection produced a significant change in the concentration of Hp and SAA. No significant changes in any of the proteins studied were observed when a experimentally bluetongue virus infection was induced.
APPs methods validated in these studies demonstrated to be reliable in the species studied, except for some parameters that should be kept in mind when implementing these methods. Likewise, significant differences between healthy and disease animals were observed for all the proteins studied in wild boar and Pyrenean chamois. In Spanih ibex, haptoglobin and serum amyloid A discriminated well before and after the establishment of an aseptic inflammation induced by turpentine injection
