739 research outputs found
Role of inositide signalling regulation in higher-risk MDS patients during epigenetic therapy
No full textBackground: Inositide signalling pathways are involved in cell
growth, differentiation and apoptosis and play a role in
the progression of myelodysplastic syndromes (MDS) towards
acute myeloid leukemia (AML). The combination of the DNA
methyltransferase inhibitor azacitidine (AZA) and the HDAC inhibitor
valproic acid (VPA) in patients with IPSS intermediate-2/high-risk
MDS has been demonstrated to be active and associated with a high
response rate in patients with MDS and unfavourable prognosis
(Voso MT et al, 2009).
Introduction: In the last few years, our group demonstrated not
only that phosphoinositide-phospholipase C beta1 (PI-PLCbeta1)
promoter gene is hyper-methylated in higher-risk MDS, but also that is affected by epigenetic therapy (Follo MY et al, PNAS 2009; Follo
MY et al. Leukemia 2010). Indeed, AZA, alone or in combination with
VPA was able to induce PI-PLCbeta1 demethylation and expression.
Purpose: In this study we further investigated the role of lipid
signalling pathways during epigenetic therapy, focusing on the
functional effect of AZA and VPA on PI-PLCbeta1 promoter in highrisk
MDS patients.
Materials and Methods: The study included 20 higher-risk MDS
patients (IPSS risk: intermediate-2 or high): 8 of them were treated
with AZA alone (75 mg/m2/day SC for 7 days/28 days), whereas 6 of
them received the combination of AZA with VPA (600–1500 mg/daily
orally) and the remaining 6 were treated only with best supportive
care. For each patient we analyzed the effect of epigenetic therapy
in correlation to PI-PLCbeta1 signalling, by analyzing the binding
affinity of transcription factors correlated to hematopoietic stem
cell differentiation and proliferation, as well as by quantifyng the
expression of molecules involved in the epigenetic machinery, such
as Class I HDACs.
Results: 8/20 (40%) of our MDS patients showed a favourable
hematologic response to epigenetic therapy and an increase in PIPLCbeta1
expression, as compared with the pre-treatment period,
thus confirming the involvement of this molecule in response
to demethylating agents. Moreover, MDS patients responding to
epigenetic treatment seem to involve the recruitment of specific
transcription factors on PI-PLCbeta1 promoter during the regulation
of methylation processes. Taken together, our data are consistent
with the hypothesis of a correlation between epigenetic treatment
and PI-PLCbeta1 signalling, thus hinting at a role for PI-PLCbeta1 in
monitoring the efficacy of epigenetic therapy and paving the way
for the development of innovative therapeutic strategies in MD
A fast and simple method for simultaneous mixed site-specific mutagenesis of a wide coding sequence.
No full textSite-specific mutagenesis at one or multiple sites has recently become an invaluable strategy in functional proteomic studies and genetic engineering.We describe a novel PCR-based procedure for site-specific mutagenesis that permits in a single-step all three types of nucleotide sequence mutation (deletion, insertion and substitution).The entire procedure is carried out in one tube and takes about 3 to 4 h. The method utilizes two primers, one of which is phosphorylated at the 5'-terminus, that are designed to directly anneal back-to-back to the target sequence inserted in a plasmid. For deletion type of mutagenesis (of virtually no limits of extent), primers anneal at the ends of the sequence to be deleted. For insertion and substitution types of mutagenesis, the primers bear the mutagenic sequences in a tail. The entire circular plasmid, here tested for a maximum length of 7 kbp, is amplified by inverse PCR. The PCR product incorporates the desired mutagenesis and, after ligation, the plasmid is ready for cloning in bacteria.The method has been proved very efficient to delete up to 279 nucleotides, to introduce simultaneously deletions, insertions and substitutions and to perform the alanine-scanning in a wide coding region. The procedure is suitable for applications in gene engineering and for construction of libraries
Biocompatibility, endocytosis, and intracellular trafficking of mesoporous silica and polystyrene nanoparticles in ovarian cancer cells: effects of size and surface charge groups
No full textManeerat Ekkapongpisit,1 Antonino Giovia,1 Carlo Follo,1 Giuseppe Caputo,2,3 Ciro Isidoro11Laboratory of Molecular Pathology and Nanobioimaging, Department of Health Sciences, Università del Piemonte Orientale “A Avogadro”, Novara, 2Dipartimento di Chimica dell’Università di Torino, Torino, 3Cyanine Technology SpA, Torino, ItalyBackground and methods: Nanoparticles engineered to carry both a chemotherapeutic drug and a sensitive imaging probe are valid tools for early detection of cancer cells and to monitor the cytotoxic effects of anticancer treatment simultaneously. Here we report on the effect of size (10–30 nm versus 50 nm), type of material (mesoporous silica versus polystyrene), and surface charge functionalization (none, amine groups, or carboxyl groups) on biocompatibility, uptake, compartmentalization, and intracellular retention of fluorescently labeled nanoparticles in cultured human ovarian cancer cells. We also investigated the involvement of caveolae in the mechanism of uptake of nanoparticles.Results: We found that mesoporous silica nanoparticles entered via caveolae-mediated endocytosis and reached the lysosomes; however, while the 50 nm nanoparticles permanently resided within these organelles, the 10 nm nanoparticles soon relocated in the cytoplasm. Naked 10 nm mesoporous silica nanoparticles showed the highest and 50 nm carboxyl-modified mesoporous silica nanoparticles the lowest uptake rates, respectively. Polystyrene nanoparticle uptake also occurred via a caveolae-independent pathway, and was negatively affected by serum. The 30 nm carboxyl-modified polystyrene nanoparticles did not localize in lysosomes and were not toxic, while the 50 nm amine-modified polystyrene nanoparticles accumulated within lysosomes and eventually caused cell death. Ovarian cancer cells expressing caveolin-1 were more likely to endocytose these nanoparticles.Conclusion: These data highlight the importance of considering both the physicochemical characteristics (ie, material, size and surface charge on chemical groups) of nanoparticles and the biochemical composition of the cell membrane when choosing the most suitable nanotheranostics for targeting cancer cells.Keywords: nanoparticles, imaging, lysosomes, vesicular traffic, ovarian cancer, caveoli
Effect of azacitidine on inositide-dependent signalling pathways in low-risk MDS patients
No full textBackground: Azacitidine is a DNA methyltransferase inhibitor
currently used for the treatment of higher-risk myelodysplastic
syndromes (MDS) which has also been proven an effective treatment
of lower-risk MDS (Silverman LR et al, J Clin Oncol 2002; Musto P
et al, Cancer 2010). Inositide signalling is involved in cell growth,
differentiation and apoptosis, therefore affecting cell processes and
playing a role in the pathogenesis of several malignancies.
Introduction: Our group recently demonstrated that phosphoinositide-phospholipase
C beta1 (PI-PLCbeta1) is involved in the
MDS progression to AML and is affected by epigenetic therapy
(Follo MY et al, J Cell Biochem 2010; Follo MY et al, Leukemia
2010). Namely, PI-PLCbeta1 specifically targets Cyclin D3, which
is in turn implicated in hematopoietic stem cell proliferation and
differentiation.
Purpose: In this study, we analyzed the role of PI-PLCbeta1-
dependent signalling pathways during epigenetic therapy, focusing
on the effect of azacitidine on PI-PLCbeta1 downstream target Cyclin
D3 in lower-risk MDS patients.
Materials and Methods: The analysis included 25 patients (IPSS risk:
low or intermediate-1) treated with azacitidine alone (75 mg/m2
subcutaneous daily for 5 consecutive days every 28 days, for a total
of 8 courses). For each patient we followed the effect of azacitidine
in correlation to both PI-PLCbeta1 and Cyclin D3 expression.
Results: Our results show that 9/25 (36%) of our lower-risk MDS
patients showed a hematologic response to azacitidine (Complete
Remission: 4 patients, Partial Remission: 1 patient, Hematologic
Improvements: 4 patients), as well as an increase in PI-PLCbeta1
expression, as compared with pre-treatment levels. Furthermore,
ongoing analyses are trying to disclose whether Cyclin D3 activation
is also implicated in azacitidine response, therefore affecting
hematopoietic stem cell differentiation processes.
Conclusions: Overall, our data hint at a correlation between
azacitidine therapy and PI-PLCbeta1 signalling, possibly via the
activation of Cyclin D3, even in lower-risk MDS, thus indicating
that PI-PLCbeta1 could be useful not only for evaluating the efficacy
of azacitidine but also for disclosing the molecular mechanisms
underlying this kind of treatment in lower-risk MD
Similarities and differences in the biogenesis, processing and lysosomal targeting between zebrafish and human pro-Cathepsin D: functional implications.
No full textFollo-piloten 2013-2018. Rapport fra første periode
No full textFollo-piloten er et samarbeidsprosjekt mellom alle kulturskolene i Follo og Norges musikkhøgskole (NMH) om musikkutdanning av barn på alle nivåer. Samarbeidet er forankret i en avtale mellom kulturskolene i Follo og NMH. I denne rapporten kan du lese om resultatene av samarbeidet i perioden 2013–2018. Kulturskolene i Follo og NMH har samarbeidet om følgende områder: 1. Utvikling og implementering av lokale læreplaner 2. Kompetansebehov i opplæringen, med særlig fokus på kulturskolene, sett i forhold til NMHs ordinære studier 3. Praksisplasser 4. Talentutvikling/forutdanning for høyere musikkutdanning 5. Musikkformidling 6. Faglig og pedagogisk etter- og videreutdanning for lærere og ledere 7. De estetiske fagenes plass i grunnopplæringen 8. Kulturskolene som faglige kompetansesentre 9. Forsknings- og utviklingsarbeid Fra 2017 har Akershus fylkeskommune gått inn som samarbeidspartner, og fra 2018 vil prosjektet bli utvidet til å omfatte kulturskoler og musikklinjer ved videregående skoler og folkehøgskoler i hele Akershus. Det er en målsetting om at modellen som utvikles gjennom dette samarbeidet skal kunne inspirere andre fylker til å gå inn i tilsvarende samarbeid med sine kommuner. Bjørg J. Bjøntegaard har vært prosjektansvarlig ved Norges musikkhøgskole og skrevet rapporten i samarbeid med prosjektledelsen. Hun er førsteamanuensis i instrumentaldidaktikk og praksis ved NMH og har utgitt en rekke metodeverk og lærebøker på ulike nivåer.SAMMENDRAG
Follo-regionen består av følgende kommuner: Enebakk, Frogn, Nesodden, Oppegård, Ski, Vestby og Ås. Alle kommunene har kulturskoler.
Kulturskolene i Follo har til sammen 3200 elever og varierer i størrelse fra 251 til 800 elever. Kulturskolene har 2602 elevplasser i musikk. Seks av kulturskolene har fordypningsprogrammer i musikk. Kulturskolenes fordypningsgrupper samarbeider godt på tvers av kommunegrensene.
Follo-piloten er et prosjekt der kulturskolene i Follo, i samarbeid med Norges musikkhøgskole (NMH), har gått sammen om å utvikle nye innfallsvinkler til musikkopplæringen gjennom tett kontakt mellom institusjonene på ulike nivåer i opplæringen. Målsettingen er at alle elever skal få undervisning tilpasset elevenes ønsker og behov.
Tanken om å utvikle et samarbeid med Norges musikkhøgskole startet med samarbeidet mellom musikere i Dextra Musica (Sparebankstiftelsen DNB) og kulturskolene i Follo. Man så gjennom dette samarbeidet muligheter for en tettere kontakt mellom kulturskolene og det profesjonelle musikkliv/høyere utdanning.
Samarbeidet i Follo-piloten er forankret i en avtale mellom kulturskolene i Follo og Norges musikkhøgskole (vedlegg 1), der institusjonene i perioden 2013–2018 skal samarbeide om følgende:
1. Utvikling og implementering av lokale læreplaner
2. Kompetansebehov i opplæringen, med særlig fokus på kulturskolene, sett i forhold til NMHs ordinære studier
3. Praksisplasser
4. Talentutvikling/forutdanning for høyere musikkutdanning
5. Musikkformidling
6. Faglig og pedagogisk etter- og videreutdanning for lærere og ledere
7. De estetiske fagenes plass i grunnopplæringen
8. Kulturskolene som faglige kompetansesentre
9. Forsknings- og utviklingsarbeid
Nedenfor følger noen oppsummerende kommentarer til de ulike punktene i avtalen:
1. Utvikling og implementering av lokale læreplaner
―― NMH har bidratt med kurs og lærerressurser i forbindelse med utvikling og implementering av lokale læreplaner, og kulturskolene i Follo har samarbeidet om utvikling og ferdigstillelse av felles fagplaner.
2. Kompetansebehov i opplæringen, med særlig fokus på kulturskolene, sett i forhold til NMHs ordinære studier
―― Kulturskolelærere og rektorer fra kulturskolene i Follo har bidratt med sin kompetanse i forbindelse med arbeidslivsseminarer for studenter innenfor de pedagogiske og utøvende utdanningene.
3. Praksisplasser
―― Kulturskolene har fungert som praksisarenaer for 40–50 NMH-studenter pr. år. Dette arbeidet har vært svært givende, men også krevende pga. komplisert organisering for alle involverte parter.
4. Talentutvikling/forutdanning for høyere musikkutdanning
―― Talentutvikling har vært Follo-pilotens hovedfokus i perioden. Det er på dette området NMH har kunnet bidra på en spesielt god måte gjennom sin faglige, instrumentale fordypningskompetanse. Skolene har sammen utviklet modeller og programmer som er spesielt rettet mot elever som ønsker å legge ekstra innsats i arbeidet med musikk.
Følgende aktiviteter har vært gjennomført i perioden:
A. Fordypningsprogrammet
I fordypningsprogrammet har elever som har bestått en opptaksprøve, undervisningstimer med lærer fra NMH der lokal lærer også er til stede på timene og samarbeider med NMH om undervisningen.
B. Mesterklasseprogrammet
I mesterklasseprogrammet tilbys samlinger innenfor alle instrumentgrupper fire ganger i året. Grupper på ca. 10 elever møtes på NMH eller lokalt og får undervisning av lærer fra NMH.
C. Frittstående mesterklasser, seminarer og kurs
En rekke frittstående mesterklasser, seminarer og kurs har vært arrangert i perioden, ofte på initiativ fra den enkelte kulturskole.
D. Rekrutteringsprosjekter
Det har vært gjennomført rekrutteringsprosjekter innenfor fagott, obo, bratsj og kontrabass.
E. Orkestervirksomhet (FUSO)
Orkestervirksomheten har vært stor og omfattende på alle nivåer.
Til sammen har det vært gjennomført ca. 90 arrangementer innenfor talentutvikling/ forutdanning for høyere musikkutdanning i perioden 2014–2018. Utdypende rapporter fra de ulike kulturskolene viser den enkelte skoles aktivitetsnivå.
5. Musikkformidling
―― Norges musikkhøgskole og Follo-piloten har samarbeidet godt om formidlingsaktiviteter, blant annet med deltakelse av studenter fra NMH i samspill med elever fra kulturskolene. Follopiloten har i tillegg samarbeidet med andre aktører om store prosjekter som har gitt synlige og positive resultater. Til sammen har det vært gjennomført over 30 konserter av ulike format i perioden, i tillegg til en rekke mindre konserter som ikke er omtalt i denne rapporten.
6. Faglig og pedagogisk etter- og videreutdanning for lærere og ledere
―― Det har vært gjennomført flere etterutdanningskurs for lærere og ledere innenfor øving, prestasjonsforberedelse, bruk av Ipad i undervisningen, jazzimprovisasjon, fagplanarbeid m.m.
7. De estetiske fagenes plass i grunnopplæringen
―― Musikk i Skolen utarbeidet en kursrekke for lærere som underviser i musikk uten formell musikkutdanning. Det var stor interesse for kursene i kartleggingsfasen, men relativt dårlig oppslutning fra grunnskolene da kursene skulle settes i gang.
8. Kulturskolene som faglige kompetansesentre
―― Follo-piloten har ikke hatt en aktiv rolle i utformingen av de ulike kulturskolene som faglige kompetansesentre. Kulturskolene viser imidlertid at aktivitetsnivået på dette området er høyt i mange av skolene, noe arbeidet med Follo-piloten også har bidratt til.
9. Forsknings og utviklingsarbeid
―― Aktivitetene i Follo-piloten har blitt kontinuerlig fulgt opp gjennom intervju-undersøkelser og systematiserte tilbakemeldinger underveis i perioden. NMH har hatt et ansvar for dette, i samarbeid med prosjektansvarlig og prosjektleder.
I tillegg har det vært utlyst stipend til masterstudenter som ønsker å skrive masteroppgaver som er knyttet til kulturskoleaktiviteter. To studenter har fått tilsagn om stipend i perioden.
Kulturskolerektorene melder at Follo-piloten har bidratt til å etablere nye samspillsarenaer og gjort et mulig å kunne tilby mer undervisningstid til elever som ønsker å fordype seg i musikk.
Praksissamarbeidet er utvidet i en positiv retning med større ansvar til kulturskolene. Mulighetene for erfaringsutveksling mellom ulike aktører i prosjektene har gitt kulturskolene gode impulser til videre utvikling. Elever og lærere har fått utvidet tilgang til kurs, samt et utvidet faglig nettverk med NMH som sentral samarbeidspartner.
I budsjettforhandlingene i Akershus fylkeskommune i desember 2016 gjorde Akershus fylke vedtak om å bevilge et tilskudd på 1,5 millioner kroner til talentsatsingen i Follo-piloten. Beløpet ble etter budsjettvedtak for 2018 utvidet til 2 millioner kroner på permanent basis. Akershus fylkeskommune ønsker med dette at det skal etableres et talentutviklingsprogram og en samarbeidsarena hvor også fagmiljøene og rekrutteringen av elever til musikk, dans og dramalinjene ved de videregående skolene og folkehøgskolene med musikk i Akershus, blir involvert sammen med kommunene/kulturskolene og Norges musikkhøgskole.
Follo-piloten er godt i gang med planleggingen av aktiviteter knyttet til denne utvidelsen
Nuclear phospholipase C isoenzyme imbalance leads to pathologies in brain, hematologic, neuromuscular, and fertility disorders
No full textPhosphoinositide-specific phospholipases C (PI-PLCs) are involved in signaling pathways related to critical cellular functions, such as cell cycle regulation, cell differentiation, and gene expression. Nuclear PI-PLCs have been studied as key enzymes, molecular targets, and clinical prognostic/diagnostic factors in many physiopathologic processes. Here, we summarize the main studies about nuclear PI-PLCs, specifically, the imbalance of isozymes such as PI-PLC1 and PI-PLC, in cerebral, hematologic, neuromuscular, and fertility disorders. PI-PLC1 and PI-PLC1 affect epilepsy, depression, and bipolar disorder. In the brain, PI-PLC1 is involved in endocannabinoid neuronal excitability and is a potentially novel signature gene for subtypes of high-grade glioma. An altered quality or quantity of PI-PLC contributes to sperm defects that result in infertility, and PI-PLC1 aberrant inositide signaling contributes to both hematologic and degenerative muscle diseases. Understanding the mechanisms behind PI-PLC involvement in human pathologies may help identify new strategies for personalized therapies of these conditions.—Ratti, S., M. Y. Follo, G. Ramazzotti, I. Faenza, R. Fiume, P-G. Suh, J. A. McCubrey, L. Manzoli, and L. Cocco. Nuclear phospholipase C isoenzyme imbalance leads to pathologies in brain, hematologic, neuromuscular, and fertility disorders
The physiological roles of primary phospholipase C
No full textThe roles of phosphoinositide-specific phospholipase C (PLC) have been extensively investigated in diverse cell lines and pathological conditions. Among the PLC isozmes, primary PLCs, PLC-β and PLC-γ, are directly activated by receptor activation, unlike other secondary PLCs (PLC-ɛ, PLC-δ1, and PLC-η1). PLC-β isozymes are activated by G protein couple receptor and PLC-γ isozymes are activated by receptor tyrosine kinase (RTK). Primary PLCs are differentially expressed in different tissues, suggesting their specific roles in diverse tissues and regulate a variety of physiological and pathophysiological functions. Thus, dysregulation of phospholipases contributes to a number of human diseases and primary PLCs have been identified as therapeutic targets for prevention and treatment of diseases. Here we review the roles of primary PLCs in physiology and their impact in pathology
Protein kinase C involvement in cell cycle modulation
No full textProtein kinases C (PKCs) are a family of serine/threonine kinases which act as key regulators in cell cycle progression and differentiation. Studies of the involvement of PKCs in cell proliferation showed that their role is dependent on cell models, cell cycle phases, timing of activation and localization. Indeed, PKCs can positively and negatively act on it, regulating entry, progression and exit from the cell cycle. In particular, the targets of PKCs resulted to be some of the key proteins involved in the cell cycle including cyclins, cyclin-dependent kinases (Cdks), Cip/Kip inhibitors and lamins. Several findings described roles for PKCs in the regulation of G1/S and G2/M checkpoints. As a matter of fact, data from independent laboratories demonstrated PKC-related modulations of cyclins D, leading to effects on the G1/S transition and differentiation of different cell lines. Moreover, interesting data were published on PKC-mediated phosphorylation of lamins. In addition, PKC isoenzymes can accumulate in the nuclei, attracted by different stimuli including diacylglycerol (DAG) fluctuations during cell cycle progression, and target lamins, leading to their disassembly at mitosis. In the present paper, we briefly review how PKCs could regulate cell proliferation and differentiation affecting different molecules related to cell cycle progression
Phosphoinositide-specific phospholipase C in health and disease
No full textPhospholipases are widely occurring and can be found in several different organisms, including bacteria, yeast, plants, animals, and viruses. Phospholipase C (PLC) is a class of phospholipases that cleaves phospholipids on the diacylglycerol (DAG) side of the phosphodiester bond producing DAGs and phosphomonoesters. Among PLCs, phosphoinositide-specific PLC (PI-PLC) constitutes an important step in the inositide signaling pathways. The structures of PI-PLC isozymes show conserved domains as well as regulatory specific domains. This is important, as most PI-PLCs share a common mechanism, but each of them has a peculiar role and can have a specific cell distribution that is linked to a specific function. More importantly, the regulation of PLC isozymes is fundamental in health and disease, as there are several PLC-dependent molecular mechanisms that are associated with the activation or inhibition of important physiopathological processes. Moreover, PI-PLC alternative splicing variants can play important roles in complex signaling networks, not only in cancer but also in other diseases. That is why PI-PLC isozymes are now considered as important molecules that are essential for better understanding the molecular mechanisms underlying both physiology and pathogenesis, and are also potential molecular targets useful for the development of innovative therapeutic strategies.open
- …
