1,721,016 research outputs found
Recovery of acid proteases from fishery discards with aqueous micellar two-phase systems and their use for X-ray film recycling
No full textThe continuous expansion of fish production results in increasing amounts of discards, i.e. viscera, skin and frame, whose inappropriate disposal causes environmental damage. Conversion of this waste into value-added products is one of the best alternatives to reduce the pollution problem. The feasibility of using aqueous micellar two-phase systems (AMTPS), formed by biodegradable Genapol X-080 (GX-080) and sodium citrate, to recover valued acid proteases from surubí (Pseudoplatystoma sp) fishery discards was evaluated for the first time. The effects of biomass load, pH and surfactant concentration on the extraction were analyzed using a two-level full factorial design. GX-080 concentration and biomass load were the most significant factors (p < 0.05). AMTPS formed by GX-080 4% w/w showed a successful performance for the recovering of 69% of AP from the crude extract in the surfactant-rich phase with a purification factor of 1.83. Regard to the storage stability, this extract conserved at least 89% of its proteolytic activity for 76 days at 0 °C. It also showed a notable hydrolyzing activity of the gelatin-silver coating of used X-ray films, thus opening new perspectives on the use of acid proteases for recycling purposes.Fil: Acevedo Gomez, Antonella Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Bustillo, Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Nerli, Bibiana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Procesos Biotecnológicos y Químicos Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Procesos Biotecnológicos y Químicos Rosario; Argentin
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Full text linkThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
Variations on the Author
Full text link“Variations on the Author” discusses two of Eduardo Coutinho’s recent films (Um Dia na Vida, from 2010, and Últimas Conversas, posthumously released in 2015) and their contribution to the general question of documentary authorship. The director’s filmography is characterized by a consistent yet self-effacing form of authorial self-inscription: Coutinho often features as an interviewer that rather than express opinions propels discourses; an interviewer that is good at listening. This mode of self-inscription characterizes him as an author who is not expressive but who is nonetheless markedly present on the screen. In Um Dia na Vida, however, Coutinho is completely absent form the image, while Últimas Conversas, on the contrary, includes a confessional prologue that moves the director from the margins to the center of his films. This article examines the ways in which these works stand out in the filmography of a director who offers new insights into the notion of cinematic authorship
Appropriate Similarity Measures for Author Cocitation Analysis
Full text linkWe provide a number of new insights into the methodological discussion about author cocitation analysis. We first argue that the use of the Pearson correlation for measuring the similarity between authors’ cocitation profiles is not very satisfactory. We then discuss what kind of similarity measures may be used as an alternative to the Pearson correlation. We consider three similarity measures in particular. One is the well-known cosine. The other two similarity measures have not been used before in the bibliometric literature. Finally, we show by means of an example that our findings have a high practical relevance.information science;Pearson correlation;cosine;similarity measure;author cocitation analysis
Actividad antimicrobiana de una PLA2 básica aislada del veneno de Bothrops diporus
No full textLa Organización Mundial de la Salud ha enfatizado la necesidad de nuevos medicamentos para combatir la resistencia bacteriana a
los antibióticos. Esto ha provocado una búsqueda de nuevos agentes terapéuticos de diversas fuentes naturales, como proteínas y
péptidos con potente actividad antimicrobiana de organismos secretores. En nuestro país una de las serpientes venenosas de mayor
importancia médica es Bothrops diporus ("yarará chica"). Su veneno ha demostrado tener efecto inhibitorio sobre numerosas cepas
gram positivas y negativas, sin embargo, no se ha estudiado previamente esta actividad con las toxinas purificadas. Es por ello que,
el objetivo de este trabajo fue estudiar el potencial efecto antimicrobiano de una PLA2 básica aislada del veneno de B. diporus sobre
una cepa de Staphylococcus aureus.
Se trabajó con un pool de venenos desecados, homogeneizados y conservado a –20oC. El aislamiento y purificación de la enzima
PLA2 se llevó a cabo en dos etapas; una cromatografía de intercambio iónico (Sulfopropil-celulosa), y una cromatografía de
exclusión molecular (Sephadex G75). A cada fracción obtenida se le ensayó la actividad hemolítica indirecta, actividad proteolítica y
se estimó el peso molecular de la enzima mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). Las bacterias
Staphylococcus aureus (ATCC 25923TM), se cultivaron y repicaron en medio de agar tripticasa de soya (TSA, Britania), en
condiciones aeróbicas a 37°C. En el test de microdilución las suspensiones bacterianas se ajustaron al tubo N° 0.5 de la escala Mc
Farland (1.5 x108 ufc/mL) y se pre incubaron con igual volumen de la PLA2 en distintas concentraciones (5.5-350 μg/mL
finales). Luego de 24 h de incubación a 37°C la turbidez fue determinada a 620 nm. Se realizaron controles de crecimiento utilizando
caldo TSA en lugar de la enzima y un control de actividad inhibitoria positiva con antibiótico (Piperacilina-Tazobactam). La actividad
antibacteriana fue medida como una inhibición del aumento de la turbidez. Además, de las determinaciones que evidenciaron un
efecto inhibitorio significativo, se tomó una alícuota con ansa y se sembró en placas de agar TSA por método de dilución en placa
incubando durante 24 h a 37°C.
En cuanto a los resultados obtenidos, la primer etapa cromatográfica de intercambio iónico permitió separar y concentrar las
proteínas con carga positiva o básicas del veneno de B. diporus. Esta fracción se separó en una segunda etapa de cromatografía de
exclusión molecular logrando resolver diferentes picos proteicos. Todas las fracciones presentaron actividad hemolítica indirecta,
seleccionándose el último pico proteico por ser el único con ausencia de actividad proteolítica. Se evaluó la pureza de la enzima por
SDS-PAGE, observándose una banda homogénea con un peso molecular de ~14 kDa.
Esta PLA2 básica aislada del veneno de Bothrops diporus evidenció un efecto inhibitorio del crecimiento bacteriano dependiente de
la concentración, luego de 24 h de incubación a 37°C. El crecimiento de Staphylococcus aureus disminuyó aproximadamente un
15% con las dosis intermedias de la enzima ensayada (88, 125 y 175 μg/mL) y se pudo comprobar que con las concentraciones más
altas (250 y 350 μg/mL) se inhibió el crecimiento bacteriano en un 28% y 43% respectivamente con respecto al control de
crecimiento. La dilución en placa de la concentración más alta ensayada y con mayor efecto inhibitorio demostrado por el test de
microdilución evidenció el desarrollo de un menor número de colonias con respecto al control.
Estudios previos han reportado coincidentemente que varias PLA2 aisladas del género Bothrops poseen actividad antimicrobiana
frente a las cepas de S. aureus. Estos resultados preliminares sientan base en el estudio de la PLA2 aislada de B. diporus como
potencial prototipo de antibiótico
Efecto inhibitorio sobre la adhesión de células tumorales de una fosfolipasa A2 (PLA2) aislada del veneno de Bothrops alternatus
No full textEl cáncer es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en el mundo. La diseminación de células cancerosas desde el
tumor primario (metástasis) es la principal causa de mortalidad en estos pacientes. Las células metastásicas pasan por cuatro
procesos esenciales: desprendimiento, migración, invasión y adhesión celular.
En el nordeste argentino, Bothrops alternatus (yarará grande) es una de las especies de serpientes más distribuidas. Entre los
componentes principales de su veneno se encuentran las fosfolipasas A2 (PLA2). Previamente se ha logrado aislar y caracterizar
una PLA2 acídica de este veneno que demostró no ser miotóxica in vivo o in vitro. El hecho de que esta toxina acídica aislada del
veneno de yarará grande no sea citotóxica per se y la potencial unión con integrinas alfa v beta 3, demostrada por estudios teóricos
in silico, hicieron de esta toxina un blanco interesante para evaluar su potencial efecto inhibitorio sobre la adhesión de células
tumorales de la línea LM3. Para ello en primer lugar se aisló una PLA2 acídica del veneno de Bothrops alternatus (30mg) mediante
dos etapas cromatográficas, una cromatografía de intercambio iónico (DEAE) y una segunda cromatografía de exclusión molecular
(Sephadex G-75). Ensayos de actividad proteolítica, actividad hemolítica indirecta y SDS-PAGE se realizaron para control de su
pureza. Una vez obtenida la enzima, se evaluó su citotoxicidad (3h - 95, 190 y 380 μg/mL) sobre las células de la línea tumoral LM3
en DMEM-5% SFB a 37°C-5% CO2. Para el ensayo de inhibición de la adhesión, las células fueron pre-incubadas por 30 min a
37°C con las concentraciones no-citotóxicas de la PLA2 o en medio de cultivo (control) y sembradas en placas de 96 wells. Luego de
1.5h, las células no adheridas fueron removidas con un lavado suave con buffer fosfato. Las células adheridas fueron fijadas y
coloreadas con el colorante cristal violeta. El porcentaje de adhesión fue determinado por comparación de las absorbancias leídas
(620nm) con las del promedio de los controles, considerado como 100% de adhesión.
Los resultados mostraron que, en primer lugar se logró aislar una PLA2 acídica del veneno de B. alternatus de aproximadamente 28
KDa. A los tiempos y concentraciones ensayadas no evidenció ser citotóxica sobre las células de la línea LM3. Utilizando estas
concentraciones no citotóxicas, demostró inhibir la adhesión celular de forma dosis dependiente. La disminución en la adhesión se
observó a partir de concentraciones superiores a 190 μg/mL, inhibiendo en aproximadamente un 40% este proceso celular con la
máxima dosis ensayada (380 μg/mL).
En conclusión, la fosfolipasa A2 (PLA2) acídica aislada del veneno de Bothrops alternatus (yarará grande) inhibe la adhesión de
células tumorales in vitro de manera dosis dependiente. Si bien es necesario realizar más estudios, estos hallazgos sugieren el uso
potencial de esta toxina como prototipo de droga con efecto antitumoral
Potencial aplicación en técnicas de cultivo celular del colágeno obtenido de la piel de surubí
No full textEl colágeno se emplea en la fabricación de alimentos, productos cosméticos, farmacéuticos y en la industria biomédica debido a su
versatilidad, biocompatibilidad y biodegradabilidad. En las últimas décadas el colágeno proveniente de animales acuáticos ha
concitado un gran interés, siendo numerosos los estudios publicados sobre su extracción y caracterización. Entre otras propiedades
interesantes que posee, ha demostrado ser una alternativa al colágeno extraído de mamíferos en diversas aplicaciones biomédicas.
La fuente principal del colágeno de animales acuáticos es la piel, subproducto abundante de la industrialización del pescado. En el
NEA se producen 74 tn de surubí cuyo procesamiento genera subproductos que podrían transformarse en productos de valor
agregado, contribuyendo a la disminución de los problemas ambientales asociados a su deposición final y aumentando el retorno
económico de las industrias procesadoras de pescado. En este sentido, el colágeno es la proteína de la matriz extracelular más
usada para el cultivo celular puesto que facilita la fijación celular, el crecimiento, la diferenciación, la migración y la morfogénesis del
tejido. En estas técnicas se emplean matrices naturales o artificiales que permiten desarrollar cultivos tridimensionales, siendo la más
utilizada la matriz de colágeno. Así, el objetivo de este trabajo fue obtener colágeno de la piel de surubí pintado utilizando un extracto
con actividad pepsina y evaluar la formación de geles para ser empleados en técnicas de cultivo celular. Las vísceras y la piel de
ejemplares de surubí (P. corruscans) fueron suministrados por miembros del SIVEP y almacenados a -20°C hasta su utilización. El
extracto crudo rico en pepsina (EC) se preparó por disgregación mecánica del estómago de surubí empleando buffer fosfato 50mM
pH 7 (1g tejido/5mL), se centrifugó, el sobrenadante se liofilizó y se conservó a -20°C hasta su utilización. La extracción de colágeno
de la piel de surubí (CS) se realizó mediante adición del EC (10 U/g de piel) durante 72h. El CS se secó empleando una bomba de
vacío y el sólido obtenido se reservó a -20°C hasta su utilización. Se cuantificó el contenido de hidroxiprolina y el patrón de proteínas
(SDS-PAGE) del CS. Se prepararon soluciones de CS en ácido acético 0,5M (5mg/mL), se esterilizaron con filtros de 0,22μm. Para
la formación de geles en baño de hielo se mezclaron en proporción 8:1 solución de CS estéril:10X (DMEM) y se llevó a pH 7 con
NaOH 0,1M. Se sembraron 500 uL de la mezcla por pocillo en placas para cultivo celular de 24 wells. La polimerización se realizó en
un incubador de CO2 durante 24h a 37°C. Como patrón se utilizó el colágeno comercial bovino (CB). En el SDS-PAGE se observó
que el CS presenta un patrón de bandas análogo al descripto para el colágeno tipo I, compuesto por cadenas por cadenas alfa y
beta. La cuantificación de hidroxipolina y contenido de colágeno determinó que las soluciones reconstituidas de CS de 5,71mg/mL
contenían 0,20±0,01 mg/mL y 1,62±0,07mg/mL de hidroxiprolina y colágeno. Demostrando que el 28,4% del CS corresponde
efectivamente a colágeno y la muestra está acompañada de impurezas no detectables mediante SDS-PAGE. El CS fue capaz de
formar geles a las 24h en condiciones de pH y temperatura estándares utilizadas en cultivo celular. La adición de medio de cultivo
(DMEM) no alteró la estabilidad de la matriz y los geles se mantuvieron intactos en la parte inferior de cada well. La observación
macroscópica no evidenció diferencias entre los geles formados con CS y el CB. En la microscopía de contraste de fases se observó
una menor densidad de entrecruzamiento en el gel formado por el CS. Al emplear pepsina es posible que ésta digiera el colágeno
hasta cierto punto, conduciendo a una disminución significativa de la actividad de reticulación de las fibras nativas. Si bien estos
resultados son preliminares, la utilización del colágeno de surubí para la formación de geles y matrices en condiciones adecuadas de
esterilidad resulta una línea de gran interés para las técnicas de cultivos celulares. Además, la utilización de un subproducto
abundante como la piel del surubí para la obtención de una molécula de alta demanda como el colágeno mediante una metodología
sencilla podría potenciar la producción ictícola de la región y generar nuevas cadenas de valor
Efecto del veneno de Bothrops diporus sobre el sistema vascular de embriones de Gallus gallus domesticus
No full textEn el nordeste argentino la gran mayoría de los envenenamientos por mordedura de serpiente son causados por Bothrops diporus
"yarará chica". Es un vipérido distribuido desde el suroeste de Brasil a través de Paraguay hasta el centro de Argentina. Su veneno
está compuesto principalmente por metaloproteasas de tipo PI y PIII (SVMP), fosfolipasas A2 (PLA2s), serinoproteasas (SVSP),
L-aminoácido-oxidasas (LAOs) y péptidos vasoactivos responsables de sus efectos proteolíticos, hemorrágicos y miotóxicos. El
sistema vascular del embrión de pollo (G. g. domesticus), está formado por el corazón y los vasos sanguíneos intraembrionarios y
extraembrionarios (membranas corioalantoideas (CAM) y del saco vitelino). Tanto los ensayos realizados en CAM como las pruebas
de detección de embriotoxicidad, utilizan este modelo animal. Se ha demostrado que las vías responsables de la receptividad del
dolor no se forman por completo hasta el día 13 del desarrollo, por lo que el uso de embriones de pollo desde el día embrionario 0
hasta el día 9 previenen el sufrimiento de los animales en este modelo. Así, este modelo embrionario aplicado a la investigación
toxicológica, es un modelo alternativo apropiado en relación con los principios de las 3R (reemplazo, reducción y refinamiento). El
objetivo de este trabajo fue revelar los cambios a nivel microscópico inducidos por el veneno de B. diporus en el sistema vascular de
embriones de pollo, corazón y membranas corioalantoideas. Se trabajó con un pool de venenos desecados, homogeneizados y
conservado en a –20oC hasta el momento de ser utilizado en los ensayos. Los huevos de G. g. domesticus se limpiaron con etanol
70% y se incubaron durante cinco días a 37 °C y 60% de humedad. Se realizó rotación periódica de los huevos para prevenir la
adhesión de los embriones a las membranas. La fertilidad de los huevos se corroboró mediante el método de inspección a trasluz en
ovoscopio. Únicamente los óvulos fecundados con embriones vivos y en desarrollo se seleccionaron como modelo animal. En el día
5 de incubación los huevos fueron retirados de la incubadora y los extremos se limpiaron nuevamente con etanol 70% luego se les
practicó un orificio de 0,5 x 0,5 cm en el extremo romo de la cáscara del huevo directamente por encima del embrión, se les inyectó 1
mL de una solución de veneno de B. diporus (1mg/mL) y se cubrió el orificio con papel Parafilm. Este procedimiento se realizó por
triplicado (n=3 huevos). A los huevos utilizados como controles se les inyectó solución fisiológica estéril y se los colocaron
nuevamente en incubadora. A las 48 h posteriores a la inoculación del veneno se quitó el papel parafilm, se agrandaron los orificios y
los embriones fueron retirados de los huevos. La embriotoxicidad del veneno en embriones de pollo se analizó mediante evaluación
histológica. Para ello, se realizaron preparados con los embriones de G. g. domesticus y sus membranas extraembrionarias,
siguiendo las técnicas convencionales de deshidratación, inclusión de cortes y coloración. Se realizó la inclusión en butilo-parafina y
las secciones fueron obtenidas con micrótomo, se observó por microscopía y se registraron imágenes. El veneno de Bothrops
diporus es altamente proteolítico, hemorrágico y miotóxico. Estos efectos se deben principalmente a las metaloproteasas (SVMPs) y
las fosfolipasas A2 (PLA2s). Las SVMPs inducen hemorragia, ampollas, dermonecrosis y degradación de los componentes de la
matriz extracelular y proteínas de las membranas celulares. Las PLA2s inducen mionecrosis y también afectan los vasos linfáticos.
Esta alteración tan importante del sistema vascular contribuye a la isquemia y posterior necrosis del tejido. En este sentido,
específicamente en el tejido cardiaco de la región auricular se apreció desorganización y espacios de pérdida de las fibras
musculares. Los capilares se observaron con abundantes prolongaciones y la luz parcialmente ocluida, el grosor de la pared
endotelial es variable con núcleos picnóticos. En la región ventricular se observaron áreas de necrosis de las fibras musculares e
infiltrado. A nivel de las membranas corioalantoideas se pudo observar un aumento en el grosor del capilar, acompañado por una
acidofília citoplasmática. El daño vascular endotelial ocasionó un intenso edema, los cuales pueden asociarse a fenómenos
hipóxicos, y estos a su vez, a procesos isquémicos que generarían la muerte celular. En conclusión, el veneno de Bothrops diporus
induce alteraciones en el sistema vascular del embrión de Gallus gallus domesticus que contribuyen en la intoxicación a la isquemia
y necrosis del tejido
Efectos inflamatorios de isoformas de fosfolipasas A2 aisladas del veneno de Bothrops diporus
No full textBothrops diporus también conocida como “yarará chica” es una serpiente distribuida desde el suroeste de Brasil, a través de
Paraguay hasta el centro de Argentina. Además de sus efectos sistémicos, el veneno de esta especie induce un importante daño
tisular local caracterizado por mionecrosis, hemorragia, ampollas y edema. El proteoma de este veneno ha demostrado la presencia
mayoritaria de fosfolipasas A2 (PLA2s) (24.1% del total de proteínas). Estas toxinas son clave en los efectos inflamatorios inducidos
en el envenenamiento botrópico, caracterizados por la activación de células inmunes innatas y células endoteliales y la liberación de
varios mediadores inflamatorios que interfieren en la dinámica vascular. Estos mediadores inflamatorios, incluyen citoquinas,
quimiocinas, aminas vasoactivas y eicosanoides producidos por componentes plasmáticos o liberados en las proximidades de la
lesión por células endoteliales, leucocitos del tejido (mastocitos), macrófagos y leucocitos infiltrados. Si bien se ha demostrado
previamente la actividad inflamatoria de otras PLA2s de venenos botrópicos , no se ha evaluado previamente el efecto de estas
toxinas aisladas del veneno de yarará chica en la secreción de mediadores inflamatorios. Es por ello que el objetivo del presente
trabajo fue evaluar por primera vez, el perfil de citoquinas secretadas por células mononucleares de sangre periférica (PBMC)
incubadas con un pool de isoformas de PLA2s aisladas del veneno de B. diporus. La importancia de estos estudios radica en
comprender los mecanismos inflamatorios locales desencadenados que podrían conducir al descubrimiento de nuevas dianas
terapéuticas para un tratamiento más eficaz en el envenenamiento por serpientes botrópicas. Se trabajó con un pool de venenos de
especímenes adultos de ambos sexos de B. diporus proporcionado por el Centro de Producción de Suero Antiofídico (CEPSAN) del
Ministerio de Producción de la Provincia de Corrientes. El mismo fue desecado, homogeneizado y conservado en freezer a –20oC.
Para el aislamiento de fosfolipasas A2, se disolvieron alícuotas de veneno (1,8–2,0 mg) en ácido trifluoroacético (TFA) al 0,1 %
(solvente A), se centrifugaron para eliminar los desechos y se separaron mediante RP-HPLC en una columna C18 (4,6 × 250 mm,
partículas de 5 um), utilizando un cromatógrafo de líquidos de alta resolución Agilent 1220 con detección a 215 nm. La elución se
realizó utilizando un gradiente de disolvente B (acetonitrilo con TFA al 0,1%) de 0 a 70 % en un caudal de a 1 ml/min. Las fracciones
de interés (en la región de elución de las PLA2) se recolectaron, se liofilizaron y se almacenaron a -20 °C hasta su análisis. Las
concentraciones de proteína se estimaron midiendo la absorbancia a 280 nm. Su masa molecular se determinó por espectrometría
de masas (MALDI-TOF MS, Shimadzu). Las Células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se obtuvieron de tres donantes
sanos. Las PBMC se cultivaron en medio RPMI suplementado con suero fetal bovino (SFB) al 10 % y se incubaron a 37 °C con 5%
de CO2. Para la detección de Citoquinas se utilizó la tecnología IsoPlexis-CodePlex. Brevemente, se pre-incubaron 1x106 PBMC
con 25 ug de un pool de las isoformas de PLA2 aisladas del veneno de B. diporus. Luego de 4, 10 y 24h a 37°C y 5% de CO2, se
centrifugó y se recolectaron los sobrenadantes para la medición de citoquinas secretadas. Para ello, se seleccionó el panel “Human
Adaptive Immune” que evaluó: GM-CSF, Granzyme B, IFN-gamma, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-13, IL-15, IL-17A,
IP-10, MCP-1, MIP-alfa, MIP-beta, Perforin, sCD137, TNF-alfa, TNF-beta. Se sembraron 11 uL de los sobrenadantes en los chips
CodePlex y se insertaron en el sistema IsoLight para luego analizar los datos con el software IsoSpeak. Los ensayos se realizaron
por duplicado. El perfil de HPLC del veneno de B. diporus presentó picos proteicos significativos a los 51–56 min de elución, región
cromatográfica donde comúnmente se encuentran las PLA2 de los venenos ofídicos. Se seleccionaron y recolectaron estas
fracciones que se denominaron picos 1, 2, 3, 4, y 5, Se terminó por espectrometría de masas, una masa molecular promedio de
13-14 kDa correspondientes a isoformas de PLA2. Utilizando la tecnología de Isoplexis-Codeplex se pudo determinar que las PBMC
humanas incubadas con 25 ug/mL de un pool de las isoformas de PLA2 aisladas mostraron principalmente incrementos en los
niveles de citoquinas pro-inflamatorias, en comparación al control sin estimular, a los tres tiempos evaluados. Sin embargo, la mayor
expresión se evidenció luego de 4h de incubación con una mayor intensidad de señal esencialmente de los mediadores
pro-inflamatorios TNF-alfa, TNF-beta, IL-2, IL-7, IL-17, INFgamma, Granzyma B, MIP1-alfa, MIP1-beta, MCP1 y únicamente
detectándose una sobreexpresión de IL-13, GM-CSF y de IL-5 como mediadores anti-inflamatorios posiblemente como un
mecanismo de contrarregulación. Resultados similares se obtuvieron por ejemplo con una PLA2 aislada del veneno de Bothrops
leucurus que indujo la secreción de citoquinas pro-inflamatorias en PBMC sin ninguna variación en los niveles de citoquinas
anti-inflamatorias. Como así también, isoformas de PLA2 (Lys-49 y Asp-49) aisladas del veneno de Bothrops asper y Bothrops
pauloensis, que incrementaron los niveles de citoquinas proinflamatorias como IL-6 y TNF-alfa. Estos resultados preliminares,
sientan base en el estudio y comprensión de los eventos inflamatorios desencadenados en el accidente ofídico causado por B.
diporus para el potencial descubrimiento de nuevos blancos terapéuticos
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