1,720,970 research outputs found
Development of morphofunctional changes in the ovaries of Astyanax altiparanae Garutti and Britski 2000 (Teleostei, Characidae).
No full textEste estudo apresenta: (1) uma revisão atualizada sobre o desenvolvimento oocitário em teleósteos, as vias de involução no processo de regressão ovariana e a espécie modelo Astyanax altiparanae; (2) a descrição da morfologia ovariana e das células garminativas de A. altiparanae e a caracterização do seu ciclo reprodutivo; (3) a caracterização dos processos de involução de atresia folicular e complexos pós-ovulatórios de A. altiparanae e a localização de proteínas envolvidas nas vias de apoptose e autofagia ao longo desses processos. Foram apresentados neste estudo novos detalhes da oogênese para espécies de Astyanax, sendo que esses novos dados parecem ter aplicação na piscicultura. Além disso, A. altiparanae apresenta um período de desova longo, com pico reprodutivo de outubro a fevereiro, e desenvolvimento oocitário assíncrono. Por fim, parece haver uma interrelação entre as vias de autofagia e apoptose nos processos de involução ovarianos e as vias regulatórias desses processos parecem ser conservadas entre espécies de teleósteos com fertilização externa.This study presents: (1) an updated review on oocyte development in teleosts, the involution pathways during the process of ovarian regression, and the model species Astyanax altiparanae; (2) the description of the ovarian and germ cell morphology of A. altiparanae and the characterization of its reproductive cycle; (3) the characterization of the involution processes of follicular atresia and post-ovulatory complexes of A. altiparanae and the localization of proteins involved in the apoptosis and autophagy pathways throughout these processes. New details of the oogenesis for Astyanax species were presented in this study, and these new data seem to be applied in fish culture. In addition, A. altiparanae presents a long spawning period, with reproductive peak from October to February, and asynchronous oocyte development. Finally, there seems to be a crosstalk between autophagy and apoptosis pathways in ovarian involution processes and the regulatory pathways of these processes seem to be conserved among species of teleosts with external fertilization
Endocrine and paracrine regulation of the spermatogonial niche in Astyanax altiparanae (Teleostei, Characidae): the role of Amh
No full textA espermatogênese em peixes é regulada tanto pelas gonadotropinas Lh (hormônio luteinizante) e Fsh (hormônio folículo estimulante) (regulação endócrina), como, também, por fatores de crescimento (regulação parácrina). Dentre os fatores regulados pelo Fsh, está o hormônio Anti-Mülleriano (Amh), uma glicoproteína pertencente à família Fator de Crescimento Transformante do tipo Beta (TGFα6), secretado pelas células de Sertoli e que em algumas espécies está envolvido com a inibição da diferenciação espermatogonial. Para esclarecer a regulação endócrina e parácrina do nicho espermatogonial em espécies nativas, foi utilizado como espécie modelo o Characiforme Astyanax altiparanae, o qual tem sido considerado uma espécie modelo neotropical e de grande importância para aquicultura brasileira e com potenciais econômicos e ecológicos. Foi realizado o isolamento e caracterização molecular do cDNA para o Amh por meio de RT-PCR e RACE-PCR, o qual apresentou 2738 pares de bases (pb) de extensão e open reading frame (ORF) de 1629 pb. Apresenta, ainda, 5 UTR com 72 pb, 3 UTR com 1014 pb e cauda poli-A de 23 bases. A dedução desta sequência em aminoácidos resulta em uma proteína de 543 aminoácidos. De acordo com análise da árvore filogenética, o Amh de A. altiparanae apresentou forte relação com outras espécies de peixes ósseos, especialmente das ordens Characiformes, Cypriniformes, Cichliformes e Perciformes. Foi avaliada a possível alteração de expressão gênica de amh ao longo do ciclo reprodutivo de A. altiparanae em cativeiro e, os dados demonstraram que há diferença estatística quando comparamos as estações de verão com a de outono e, também, quando comparamos a de outono com a de inverno. Por meio de qPCR também foi avaliada a expressão de amh em diferentes órgãos e tecidos de machos e fêmeas de A. altiparanae e, embora haja níveis de transcritos nos órgãos como coração, músculo e cérebro de ambos os sexos, os testículos apresentaram níveis maiores de transcritos de amh. A localização celular específica de Amh foi analisada por meio das técnicas de imuno-histoquímica por peroxidase e imunoflorescência, utilizando-se o anticorpo policlonal anti-Amh produzido a partir da sequência previamente clonada. Em ambas as técnicas houve imunomarcações em células de Sertoli, as quais envolviam tanto espermatogônias indiferenciadas (Aund), quanto espermatogônias diferenciadas do tipo A (Adiff). O sinal tornava-se fraco ou ausente em células germinativas mais tardias como espermatogônias do tipo B, espermatócitos e espermátides. Por fim, foi realizada cultura de tecido com o objetivo de avaliar a liberação de andrógeno 11-cetotestosterona (11-KT) sob influência de Fsh e Lh, visto que este hormônio também está relacionado com a regulação da espermatogênese e expressão de Amh. Embora o Fsh tenha sido caracterizado como principal hormônio regulador de 11-KT, o Lh se mostrou mais efetivo. Os resultados obtidos trarão melhor compreensão da biologia reprodutiva de A. altiparanae, bem como da homeostase da espermatogênese. Além disso, os resultados sobre a regulação do nicho espermatogonial por meio do Amh, darão subsídios em como estes aspectos podem influenciar a autorrenovação e diferenciação das espermatogônias indiferenciadas, possíveis candidatas às espermatogônias-tronco.Spermatogenesis in fish is regulated by the gonadotropins Lh (luteinizing hormone) and Fsh (follicle-stimulating hormone) (endocrine regulation), as by growth factors (paracrine regulation). Anti-Müllerian Hormone (Amh), a glycoprotein belonging to the Transforming Growth Factor Beta (TGFβ) family, secreted by Sertoli cells and which in some species is involved in the inhibition of spermatogonial differentiation.To clarify the endocrine and paracrine regulation of the spermatogonial niche in native species, the Characiforme Astyanax altiparanae was used as a model species, which has been considered a neotropical experimental species and of great importance for Brazilian aquaculture with economic and ecological potential. The isolation and molecular characterization of Amh cDNA were performed by RT-PCR and RACE-PCR, encompassing 2738 base pairs (bp) in length and a 1629 bp open reading frame (ORF). It also features a 72 bp 5 UTR, a 1014 bp 3 UTR and a 23-base poly-A tail. The deduction of this sequence into amino acids results in a protein 543 amino acids. According to phylogenetic analysis, the Amh of A. altiparanae showed a strong relationship with other fish species, especially from the orders Characiformes, Cypriniformes, Cichliformes and Perciformes. The possible alteration of amh gene expression during the reproductive cycle of A. altiparanae in captivity was evaluated, and the data statistical difference when comparing the summer and autumn seasons, and when comparing the autumn with winter also. Using qPCR, the expression of amh was also evaluated in different organs and tissues males and females of A. altiparanae and, although transcripts levels were found in organs such as heart, muscle and brain of both sexes, the testes showed higher levels of transcripts from amh. The specific cell localization of Amh was analyzed by peroxidase immunohistochemistry and immunofluorescence techniques, using a anti-Amh polyclonal antibody produced from the previously cloned sequence. Immunostaining in Sertoli cells involving both undifferentiated spermatogonia (Aund) and differentiated type A spermatogonia (Adiff) was detected in both techniques. Staining faded and disappeared in later germ cells such as type B spermatogonia, spermatocytes, and spermatids. Finally, tissue culture was performed in order to evaluate the release of androgen 11-ketotestosterone (11-KT) under the influence of Fsh and Lh, since this hormone is also related to the regulation of spermatogenesis and Amh expression. Although Fsh has been characterized as the main 11-KT regulatory hormone, Lh was shown here to be more effective. The results obtained will bring a better understanding of the reproductive biology of A. altiparanae, as well as the spermatogenesis homeostasis. In addition, the results on the regulation of the spermatogonial niche through Amh will support how these aspects can influence self-renewal and differentiation of undifferentiated spermatogonia, possible candidates for stem cell spermatogonia
dentification of Chelonid alphaherpesvirus 5 (ChHV5) gene sequences in tumor tissues histologically characterized and secretions from green turtles Chelonia mydas captured off the coast of São Paulo State in the period 2001-2012.
No full textA fibropapilomatose é uma neoplasia caracterizada pela formação de múltiplos tumores que acomete, mais frequentemente, a espécie de tartaruga marinha Chelonia mydas. Estudos recentes apontam o Chelonid herpesvirus 5 (ChHV5) como o provável agente etiológico dessa doença, embora a associação com ambientes antropogenicamente alterados parecem contribuir para o desenvolvimento da doença. Nesse estudo, biópsias de tumores e secreções de tartarugas verdes capturadas no litoral do Estado de São Paulo, Brasil, foram submetidas a análises histológicas e moleculares visando detectar e caracterizar ChHV5. Em 45,5 % dos casos, os achados histopatológicos revelaram células epiteliais balonizantes com corpúsculos de inclusão intranucleares. ChHV5 foram detectados nas biópsias de pele e oculares dos animais e em secreções oculares e saliva por PCR. A análise das sequências parciais do gene da polimerase do ChHV5 detectadas revelou duas sequências gênicas distintas entre si. A análise filogenética indicou que as amostras brasileiras são similares às amostras de ChHV5 do grupo filogeográfico do Atlântico, compartilhando o mesmo clado que amostras provenientes do Golfo da Guiné e de Porto Rico, sugerindo um possível fluxo dos vírus entre essas três regiões.Fibropapillomatosis is a neoplastic disease characterized by the formation of multiple tumors affecting different species of sea turtles and, most often, Chelonia mydas. Recent studies indicate that Chelonid herpesvirus 5 (ChHV5) is the etiological agent of this disease, though its association with anthropogenically altered environments also appears to contribute to disease expression and tumor formation. In this study, tumor biopsy and secretions from green turtles captured off the coast of São Paulo State, Brazil, were used in histological and molecular analyses to detect and characterize ChHV5. In 45.5 % of cases, the tumor histopathological findings revealed ballooning degeneration with intranuclear inclusion bodies. ChHV5 was detected using polymerase chain reaction on the animals skin, ocular tumor biopsies, and ocular and oral secretions. The analysis of the detected ChHV5 sequences revealed two distinct genetic sequences together. Phylogenetic analysis indicated that Brazilian samples were similar to ChHV5 samples described for the Atlantic phylogeographic group and are therefore part of the same clade as the Gulf of Guinea and Puerto Rico samples. This similarity suggests a possible flow of the virus between these three regions
Characterization of undifferentiated spermatogonia and spermatogonial niche in Astyanax altiparanae GARUTTI and Britski 2000 (Teleostei, Characidae).
No full textAo se observar ao microscópio de luz e eletrônico de transmissão as espermatogônias indiferenciadas de lambari (Astyanax altiparanae), espécie de grande valor econômico e comercial, as mesmas se subdividem em Aund* e Aund. A do tipo Aund* apresentou núcleo irregular, excêntrico, cromatina descondensada e nuages próximas ao envoltório nuclear e/ou ainda, associadas às mitocôndrias e, a do tipo Aund, apresentou núcleo esférico, central, com cromatina levemente condensada e nuages. Análise por meio de morfometria demonstrou que o nicho espermatogonial das espermatogônias indiferenciadas do tipo Aund* é próximo ao interstício, enquanto as do tipo Aund, próximas às regiões entre dois túbulos (intertúbulo). Adicionalmente, de acordo com a técnica de incorporação e retenção de BrdU foi possível analisar a existência de possíveis candidatas às espermatogônias-tronco, chamadas de labeling-retaining cells, visto que estas células retiveram BrdU ao longo de todo período avaliado, demonstrando um longo ciclo celular, característica esta de célula-tronco.Observing by light and transmission electron microscope, undifferentiated spermatogonia of lambari (Astyanax altiparanae), species of great economic and commercial value, they are divided into Aund * and Aund. The type Aund* presents irregular nucleus, eccentric and decondensed chromatin, and nuages near the nuclear envelope and/or associated to mitochondria. The type Aund presents spherical central nucleus, with slightly condensed chromatin and nuages. Morphometric analysis showed that the niche of the type Aund* spermatogonia is near the interstitium, while the type Aund, next to the regions between two tubules (intertubule). Additionally, by the BrdU incorporation and retention technique, we found the possible candidates to spermatogonial stem cells, called \"labeling-retaining cells\", since these cells have retained BrdU over the entire study period (21 days), showing a long cell cycle, a stem cells characteristic
Evaluation of functional and histological parameters associated to beijupirá Rachycentrun canadum (Linnaeus, 1766) exposure to sublethal concentrations of policyclic aromatic hidrocarbons (PAHs).
No full textO petróleo é um dos xenobióticos mais utilizados pela humanidade e também um dos mais prejudiciais aos seres vivos. A formação do petróleo é composta em 97% por hidrocarbonetos, que são os maiores poluentes em potencial. Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs), os maiores constituintes do petróleo, são poluentes orgânicos de grande persistência ambiental, e seus compostos derivados são potenciais carcinogênicos que podem afetar toda biota em que estejam envolvidos. O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da exposição subletal aos HPAs na concentração de 0,4 ppm em peixes marinhos da espécie Rachycentron canadum por meio de parâmetros morfométricos, metabólicos e histológicos. Os HPAs foram obtidos através da extração da fração solúvel de petróleo em água (FSA) e avaliados qualitativamente por meio de espectrometria de fluorescência. Foram avaliados os índices hepato-somáticos (IHS), assim como as possíveis alterações histológicas do tecido hepático dos peixes, supostamente decorrentes da exposição ao xenobiótico. Os parâmetros metabólicos através de biomarcadores de estresse como o cortisol, a glicose e o lactato plasmáticos, assim como a análise complementar por meio das proteínas totais foram determinados. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que os espécimes de Rachycentron canadum não sofreram alterações nos parâmetros estressores quando submetidos à exposição aos HPAs. Quanto à análise histológica, os animais experimentais apresentaram alterações moderadas a graves no fígado decorrente da exposição aos HPAs. Os beijupirás demonstraram ser bons bioindicadores, por suas características comportamentais e respostas aos parâmetros analisados, o que pode viabilizá-lo como objeto de pesquisa. Cada vez mais, estudos que avaliam o impacto de xenobióticos como os HPAs, os quais em concentrações mínimas em organismos aquáticos podem afetar todo o equilíbrio da biota, evidenciam a importância do monitoramento ambiental, uma vez que a dispersão dos xenobióticos no ambiente pode resultar em mudanças em longo prazo.Oil is one of the humanity most used xenobiotics, and also one of the more dangerous to animals. Oil has about 97% of hydrocarbons in its constitution, which have the major pollutant potential. Polycyclic Aromatic Hidrocarbons (PAHs) are organic pollutants of high environmental persistence level, and its derivatives have carcinogenic potential and can affect all involved biota. The present study aimed to evaluate the sub lethal exposure effects do PAH in the marine fish Rachycentron canadum by morphometric, metabolic and histological parameters. PAHs were obtained by extraction of oil soluble fraction in water (WSA) and were quantitatively evaluated by fluorescence spectrometry. Bioassays were performed using the concentration of 0.4 ppm previously determined. We evaluated the hepatosomatic index (HSI) and the possible histological changes in the liver of the fish, supposedly obtained in consequence of the exposure to the xenobiotic. Metabolic parameters using biomarkers of stress such as cortisol, plasma glucose and lactate, as well as additional analysis by total protein, were determined. Our results showed that Rachycentron canadum did not show alterations on the parameters of stress. Regarding to the histological analysis, animals presented mild to severe changes in the liver, possibly as result of PAHs exposure. Rachycentron canadum resulted to be a good bioindicator, because of its behavioral characteristics and responses to analyzed parameters, which can make it viable as subject for researches. Studies that evaluate xenobiotic impacts like PAHs, in which minimal concentrations can affect the equilibrium of all biota, show the importance of environmental monitoring, once environmental xenobiotics dispersion can produce long term changes
Characterization of cell differentiation during morphogenesis in the pituitary gland Astyanax altiparanae (GARUTTI & BRITSKI, 2000).
No full textApós a reprodução de Astyanax altiparanae, foram obtidas larvas e juvenis da espécie, os quais foram coletados desde a eclosão até 120 dias após a eclosão (dpe). Por meio de métodos histoquímicos e imuno-histoquímica foram detectadas a neuro (NH) e adeno-hipófise (AH). Nas 3 regiões da AH, rostral (RPD) e proximal (PPD) pars distalis, e pars intermedia (PI), foram encontrados 8 tipos celulares produtores de hormônios, sendo, na RPD, as células produtoras de ACTH e PRL; na PPD, GTH (FSH e LH), GH e TSH; e na PI, MSH e SL. As prolactínicas foram as primeiras células identificadas com 1 dpe no início da formação da glândula. A NH foi diferenciada com 3 dpe junto com as células produtoras de ACTH, MSH, TSH e FSH. A identificação das células produtoras de LH, SL e GH ocorreu com 5 dpe. Com 20 dpe houve um grande aumento da hipófise e o aparecimento do pedúnculo. Com 60 dpe a hipófise apresentou-se semelhante à observada nos adultos. Os resultados desta pesquisa colaboram para o conhecimento do eixo hipotálamo-hipófise-gônada em teleósteos sul-americanos.After reproduction of A. altiparanae, was made larvae and juveniles of this specie, were collected from zero to 120 days post hatching (dph). By histochemical and immunohistochemical techniques were detected neuro (NH) and adenohypophysis (AH). In 3 regions of AH, rostral (RPD), proximal (PPD) pars distalis and in pars intermedia (PI), eight producing hormones cell types are distinguished, being, in the RPD, ACTH and PRL producing cells; in PPD, GTH (FSH and LH), GH and TSH; and in the PI, MSH and SL. The first cells identified were prolactins at 1dph, in the beginning of the formation of the gland. NH differentiated at 3dph along with identification of ACTH, MSH, TSH and FSH producing cells. The identification of LH, SL and GH producing cells was possible at 5dph. At 20dph, there was a large increase in the pituitary, and it was observed the presence of the pituitary stalk. At 60 dph the pituitary showed a similar morphology to that observed in adults. The results of this research collaborate to knowledge of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis in South American teleosts
Molecular characterization of GnRH of the Astyanax altiparanae (Garutti and Britski, 2000), its effect in vivo, and its temporal expression during the reproductive stimulus.
No full textSendo o GnRH a molécula capaz de iniciar a cascata hormonal reprodutiva, realizamos a clonagem, analisamos os efeitos da indução à reprodução e as funções dos GnRHs de A. altiparanae. Como resultados, obtivemos as sequências dos cDNAs do GnRH2 e GnRH3. Quando induzidos à reprodução, a desova foi às 20 h pós-estímulo (hpe) em fêmeas e às 16 hpe em machos, o aumento da expressão do mRNA de GnRH3 ocorreu às 8 hpe em fêmeas, e o aumento da expressão do mRNA de GnRH2 foi às 0 hpe em machos. Com relação ao efeito dos GnRHs, todos estimularam a expressão do mRNA de βLH, mas não de βFSH, e só o GnRH2 foi capaz de elevar o MIS e causar a desova. Como conclusão, temos que as sequências dos cDNAs dos GnRHs se mostraram conservadas; a indução à reprodução por redução do nível da água foi eficaz; em cativeiro, a espécie teve desenvolvimento assincrônico; o GnRH2 provavelmente está ligado ao comportamento reprodutivo, e o GnRH3 é a possível forma hipofisiotrópica. Por fim, só o GnRH2 desencadeou toda a cascata hormonal.The study on reproduction in fish has been acquired great importance in last years, mainly for the benefit of threatened species. During the reproductive process, the hypothalamic neurons synthesize and release GnRH that stimulates the pituitary cells to release FSH and LH, which, in turn, promote the gonadal maturation. In fact, the morphological changes in gonads are the result of the endocrine action of the reproductive axis, in which the GnRH is the key molecule to starting the reproductive axis control. Thus, the knowledge about the GnRH, as well as about the gonadal morphological changes in the spawning might contribute to effectiveness of reproduction. Therefore, in this work, with Astyanax altiparanae as a model, we made the molecular characterization of the GnRHs, and we analyzed the gonadal morphological changes during the reproductive stimulus. In addition, we evaluated the role of injected GnRHs in vivo. As results, we obtain the cDNA complete sequence of preproGnRH2 (612bp) and preproGnRH3 (407bp) of A. altiparanae. Regarding the induction of reproduction by water level drawdown, the released of gametes occurred at 20 hours after stimulus in female and at 16 hours after stimulus in males, the mRNA expression of GnRH3 increased at 8 hours after stimulus in female and the mRNA expression of GnRH2 increased at 0 hours in males. Regarding the effects of injected GnRH, all of them stimulated the βLH but not βFSH mRNA expression, and only the GnRH2 was able to rise the MIS and stimulate the released of gametes. We conclude that the cDNAs sequences of preproGnRH2 and preproGnRH3 were conserved, although there is a change in the amino acid at the position 8 of the GnRH3 decapeptide of A. altiparanae. Furthermore, the induced reproduction by water level drawdown was effective, and in captivity, the A. altiparanae has an asynchronous development with splitted spawning during the breeding season. The analysis of the animals submitted to the reproductive stimulus allowed us to suggest that in A. altiparanae, the GnRH2 probably has a role in sexual behavior and the GnRH3 possibly is the hypophysiotropic form. Finally, analyzing the GnRH effects, we observed that only the GnRH2 was able to start the entire reproductive hormonal cascade, leading the animal to spawning
Gonadotropins and their receptors in Astyanax altiparanae (Teleostei, Characiformes): molecular characterization and spatio-temporal expression during the reproductive cycle in captivity
No full textA partir da hipófise de Astyanax altiparanae foram clonados e caracterizados os cDNAs completos para fshb, lhb e gpha. Das gônadas, foram clonados os cDNAs para fshr e lhr. As análises filogenéticas destes genes demonstram uma proximidade com as sequências homólogas das ordens Siluriformes e Cypriniformes. Por meio de qPCR, detectamos que a expressão dos mRNAs para as gonadotropinas foi restrita à hipófise, ao passo que dos receptores foi restrita às gônadas. Foi detectado que os mRNAs/proteínas para subunidades beta são expressas por diferentes populações de células gonadotrópicas. Nas gônadas, ambos receptores foram localizados nas células de Sertoli e Leydig, bem como nas células foliculares e da teca de oócitos a partir de crescimento secundário. Então, os níveis de expressão gênica das subunidades das gonadotropinas e seus receptores, juntamente como os níveis plasmáticos de esteroides sexuais foram avaliados e relacionados com a cinética da gametogênese durante o ciclo reprodutivo anual de machos e fêmeas em cativeiro.From Astyanax altiparanae pituitaries, we cloned the full-leght cDNAs coding for fshb, lhb e gpha. From gonads, we cloned the full-length cDNAs for fshr and lhr. Phylogenetic analysis revealed that all five sequences showed the highest identity degree with homologous sequences from Siluriformes and Cypriniformes, respectively. Using qPCR, we observed that gonadotropin subunits expression were restricted to the pituitary gland, just like their receptors were restricted to the gonads. We also observed that both gonadotropin beta subunits mRNAs/proteins are expressed by distinct populations of gonadotropes at pituitary. In the gonads, both receptors were detected on Sertoli and Leydig cell, as well as on ovaries were located on follicular and theca cells, in oocytes starting from secondary growth. Then, gene expression levels of gonadotropins subunits mRNAs and their receptors were assessed, in parallel to plasma level of sex steroids, and evaluated according to gemetogenesis during the annual reproductive cycle of males and females kept in captivity
Going Beyond Counting First Authors in Author Co-citation Analysis
Get PDFThe present study examines one of the fundamental aspects of author co-citation analysis (ACA) - the way co-citation
counts are defined. Co-citation counting provides the data on which all subsequent statistical analyses and mappings
are based, and we compare ACA results based on two different types of co-citation counting - the traditional type that
only counts the first one among a cited work's authors on the one hand and a non-traditional type that takes into
account the first 5 authors of a cited work on the other hand. Results indicate that the picture produced through this non-traditional author co-citation counting contains more coherent author groups and is therefore considerably clearer. However, this picture represents fewer specialties in the research field being studied than that produced through the traditional first-author co-citation counting when the same number of top-ranked authors is selected and analyzed. Reasons for these effects are discussed
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