3,602 research outputs found
Information on the merits and services of Pedro Gerónimo
No full textInformation on the merits and services of Pedro Gerónimo, one of those that went to discover new lands in 1539 with Francisco Vázquez de Coronado
Appeals on the Merits
No full textThis article deals with the limitations of judicial review and the possibilities of its augmentation or replacement by a regime of appeals on the merits. The author questions some assumptions that are commonly made about appellate structures. He criticizes the broad-brush approach and warns that there is no panacea. The article explains why any broad regime of appeals on the merits from tribunals to courts of general jurisdiction is not an available option, and it discusses alternative structures of appeals to tribunals. Finally, it explains why it would be irresponsible to propose any appellate structure covering any substantive subject except in the context of a comprehensive study of that subject
Alphavirus nsP2: A Multifunctional Regulator of Viral Replication and Promising Target for Anti-Alphavirus Therapies
No full textAlphaviruses are re-emerging vector-born pathogens that cause arthralgia or encephalitic diseases on a global scale. While a vaccine against chikungunya virus was recently approved, no vaccines currently exist for other alphaviruses, nor are there antiviral drugs for the treatment of alphavirus infections. Alphaviruses have positive-strand RNA genomes, and their RNA replication is coordinated by activities of the multifunctional nonstructural protein 2 (nsP2), a helicase-protease and a subunit of viral RNA replicase. We provide a comprehensive overview of nsP2 functions and inhibitors of its activities for their potential as effective antivirals. Furthermore, analysis of nsP2 activities suggests that it could be targeted to develop advanced live attenuated vaccines and strategies for controlling alphavirus transmission by mosquito vectors.Full Tex
Evidence on the merits and services of Juan de Zaldivar in Nueva Galicia
No full textEvidence on the merits and services of Juan de Zaldivar in Nueva Galicia after the discovery of Culiacán with the governor Francisco Vázquez de Coronado, and recently in the pacification of Nueva Galicia, Guadalajara
Preliminary Injunctions: In Defense of the Merits
No full textA recent article by Richard Brooks and Warren Schwartz contends that the goal of preliminary injunctions should be to promote efficient conduct during a lawsuit. It would do this by granting injunctions to all plaintiffs who post a bond covering the defendant\u27s damages provided that the plaintiff has some claim on the merits. This reply defends the more traditional approach theorized in a past article by this author and in an opinion of Judge Richard Posner. Under that approach, courts should continue to consider the merits of the plaintiff\u27s claim and the irreparable injury to the parties\u27 rights that an erroneous grant or denial of preliminary relief would inflict
Capital structure and possibilities of raising liable capital for SIA "Merits"
No full textBakalaura darba tēma ir ‘’Kapitāla struktūra un aizņemtā kapitāla piesaistīšanas iespējas SIA ‘’Merits’’ ‘’. Darba mērķis ir izpētīt uzņēmuma SIA ‘’Merits’’ kapitāla struktūru un aizņemtā kapitāla piesaistīšanas iespējas, kā arī izstrādāt priekšlikumus uzņēmuma kapitāla struktūras uzlabošanai un izdevīgākam aizņemtā kapitāla piesaistes veidam.
Teorētiskajā daļā tiek izanalizēta ekonomiskā literatūra par uzņēmumu kapitāla struktūru, to teorētisko novērtēšanu un aktuālākie aizņemtā kapitāla piesaistīšanas veidi.
Praktiskā daļa sastāv no divām nodaļām. Pirmajā praktiskās daļas nodaļā autore izanalizē uzņēmuma SIA ‘’Merits’’ kapitāla struktūru. Otrā praktiskā daļa sastāv no aizņemtā kapitāla piesaistīšanas iespēju analīzes, kas atsaucās uz teorijā izanalizētajiem aizņemtā kapitāla piesaistīšanas veidiem.
Bakalaura darba noslēgumā tiek izstrādāti secinājumi par SIA ‘’Merits’’ kapitāla struktūru un aizņemtā kapitāla piesaistīšanas iespējām, kā arī priekšlikumi uzņēmuma tālākajai darbībai.The title of the bachelor thesis is “Capital structure and possibilities of rising liable capital for SIA “Merits” ”. The purpose of this study is to investigate SIA “Merits” capital stricter and options to attract liable capital, in addition to conducts proposts for improving capital structure and to carry out beneficial possibilities of rising liable capital.
The theoretical part is to analyzes economical literature involving guidelines of capital structure, its theoretical evaluation and current options of rising liabilities.
The empirical part consists of two chapters. In the first part the author analyzes the structure of SIA “Merits” capital. Furthmore the author investigates different options of rising capital, that were explore at theoretical part.
In conclusion of Bachelor theses are highlighted suggestions for SIA “Merits” and its capital structure are highlighted improvement outlining future activities
Alfaviiruste RNA replikaasi keerukas loomus ning selle käsitlus
No full textVäitekirja elektrooniline versioon ei sisalda publikatsiooneAlfaviirused on RNA genoomiga viiruste perekond, mille hulka kuulub olulisi inimeste haigustekitajaid. Imetajaid, linde ja roomajaid nakatavad alfaviirused võib jagada kaheks, millest esimesed põhjustavad artriidi-tüüpi sümptomeid ning teised neuroloogilisi haiguseid. Meditsiiniliselt on üks olulisemaid alfaviiruseid chikungunya viirus, mis põhjustab inimestes palavikku, löövet ning liigesevaegusi. Liigesevaegused võivad areneda kuude või isegi aastate pikkuseks artriidiks. Iga RNA genoomiga viiruse elutsükli keskne osa on RNA genoomi replikatsioon. Replikatsioon ehk viiruse genoomi paljundamine on seetõttu ka üks põhilisi elemente, mille vastu on suunatud vaktsiinide ning viirusvastaste vahendite loomine. Hoolimata alfaviiruste laiast levikust inimeste seas ei ole tänini saadaval heakskiidetud vaktsiine või viirusvastaseid vahendeid. Seetõttu on oluline uurida erinevate alfaviiruste RNA replikatsiooni toimumise põhimõtteid ning nõudeid. Alfaviiruste genoomi replikatsiooni viivad läbi neli spetsiaalset valku, mida kutsutakse replikaasi valkudeks. Nendest replikaasi valkudest moodustatakse rakkudes kompleksid, millesse koondatakse viiruse uute genoomide tootmine. Selles doktoritöös uuriti kümne erineva alfaviiruse näitel kõnealuste replikatsioonikomplekside moodustumist. Aktiivsete replikatsioonikomplekside moodustumise eelduseks on, et alfaviiruste replikaasid tunnevad rakus ära enda genoomi, seonduvad sellega ning alles siis on võimelised seda paljundama. Me näitasime, et mõnede alfaviiruste replikaasid suudavad inimese rakkudes ära tunda võõraste viiruste genoomidele omaseid järjestusi ning replitseerivad neid efektiivselt, samas kui osade viiruste replikaasid näitasid üles tugevat spetsiifilisust enda genoomi suhtes. Lisaks näitasime, et funktsionaalseid alfaviiruste replikatsioonikomplekse on võimalik moodustada replikaasi valkudest, mis pärinevad erinevatelt alfaviirustelt (st, moodustatakse hübriidsed replikaasid). Kasutades selliseid hübriidseid replikaase tuvastasime, millised replikaasi valgud oma genoomile spetsiifilisi elemente enne replikatsiooni alustamist ära tunnevad ning määravad, kas seda genoomi replitseerida või mitte. Samuti näitasime, et matriits-järjestusi, mis sisaldavad alfaviiruste genoomidele spetsiifilisi elemente ning ekspresseerivad reportereid, on võimalik aktiveerida reaalse viirusnakkuse korral. Selliseid biosensoreid hakatakse viirusnakkuse korral rakkudes tootma, mille tagajärjel on nakatunud rakke võimalik visuaalselt tuvastada rohelise värvuse järgi. Siin töös kogutud informatsiooni abil õnnestus viimaks määrata alfaviiruste replikaasi keskse osa, nsP4 valgu aktiivse subühiku 3D struktuur ning uurida selle struktuursete elementide olulisust mutageneesi abil.
Selle doktoritöö raames läbi viidud uurimused annavad uut informatsiooni alfaviiruste replikatsiooni kohta. Hübriidsete replikatsioonikomplekside moodustumine annab aimu, mis võib toimuda alfaviiruste replikatsioonil juhul, kui ühte rakku on nakatanud mitu erinevat alfaviirust. Alfaviiruste replikaaside võime ära tunda võõrastele viirusgenoomidele spetsiifilisi elemente aitab pilgu heita ka alfaviiruste genoomide võimalikule rekombinatsioonile ning evolutsioonile.Alphaviruses are a genus of viruses with a positive-strand RNA genome and include multiple important human pathogens. Alphaviruses that infect mammals, birds and reptiles can be largely divided into two groups. First, viruses that cause illness characterized by arthralgia and second, viruses that cause neurological diseases. One of the most important alphaviruses medically is chikungunya virus, which can be characterized in humans by symptoms like fever, rash and joint pain with the possibility of persisting into months- or even years-long arthritis. The central part in the life cycle of every virus with an RNA genome is the RNA replication. Thus, the RNA replication, i.e., the propagation of the RNA genome, is one of the main targets for the generation of vaccines and antivirals. Despite the wide distribution of alphaviruses among humans, no licenced vaccines or antiviral drugs are available. This emphasizes the importance of acquiring detailed information on the fundamental principles of the RNA replication. The replication of alphavirus genomes is performed by four specific proteins, called the replicase proteins. These replicase proteins assemble into functional replication complexes that carry out the propagation of the RNA genome. In this thesis, the formation of the replication complexes was studied on the example of 10 different alphaviruses. The prerequisite for the formation of active replication complexes is the replicase proteins recognizing their genome, binding it and only then they can initiate the replication. Here, we discovered that some alphavirus replicases can recognize and replicate RNA sequences originating from different alphaviruses, whereas some replicases demonstrated high specificity toward their own genome. Furthermore, we found that functional replication complexes can be formed from replicase proteins which originate from different viruses (i.e., hybrid replicases). Using these hybrid replicases we demonstrated which replicase proteins account for recognizing the virus genome specific elements and determine whether to replicate the genome or not. In addition, we showed that template constructs which include alphavirus genome specific elements and encode for reporter proteins are activated in cells that are infected with relevant alphaviruses. Thus, such biosensors are expressed in cells upon alphavirus infection and the infection of cells can be confirmed by visually observing the infected cells turning green. Finally, using the information obtained in this thesis, we participated in a study which resulted in acquiring the 3D structure of the central part of the alphavirus replicase, the catalytic subunit of the nsP4, and studied the importance of some structurally key elements using structure guided mutagenesis.
Studies included in this thesis offer new information on the RNA replication of alphaviruses. The possibility of forming active hybrid replication complexes sheds light on alphavirus replication in cases where multiple viruses have infected a single cell. The ability of the alphavirus replicases to recognize RNA elements of different viruses offers insights into the possible recombination of the alphavirus genomes and, more generally, the evolution of alphaviruses
Alfaviiruste nsP2 proteaas: nõuetest funktsionaalsuseks inhibitsioonini
No full textVäitekirja elektrooniline versioon ei sisalda publikatsiooneAlfaviirused on umbes 70 nm diameetriga RNA genoomiga viirused (perekond Alphavirus, sugukond Togaviridae). Üks alfaviirustest on Chikungunya viirus (CHIKV), mis põhjustab haigust, millega kaasnevad piinavad liigesevalud kestavad sageli kuid peale haigestumist. Leevendamaks CHIKV haigusest põhjustatud kannatusi on oluline leida viirusvastaseid ühendeid, mis takistaksid CHIKV paljunemist rakkudes. Selleks on vaja mõista, kuidas kulgeb CHIKV elütsükkel rakkudes. nsP2 on üks CHIKV valkudest, millel on CHIKV infektsiooni ajal mitu funktsiooni. nsP2 on viiruse proteaas ja RNA helikaas, nsP2 osaleb ka raku viirusvastase immunvastuse maha surumises. Proteaasina on nsP2 see viirusvalk, mis lõikab viiruse mittestruktuurse liitvalgu individuaalseteks valkudeks. See protsess on kesksel kohal viiruse elutsükli regulatsioonis. Selle doktoritöö raames uuriti, mis on CHIKV nsP2 proteaasi nõuded funktsionaalsuseks. Leiti, et CHIKV nsP2 on tsüsteiin-proteaas, mis sarnaneb varemuuritud teiste alfaviiruste nsP2 proteaasidega. CHIKV nsP2 aminohappelises järjestuses on tsüsteiin 478 vältimatult vajalik proteaasi aktiivsuse olemasoluks ning kui see tsüsteiin või selle kõrval asuv trüptofaan 479 asendada alaniiniga, siis kaotab CHIKV nsP2 oma proteaasi aktiivsuse. Alfaviiruste mittestruktuurse liitvalgu lõikamine on ajaliselt reguleeritud protsess. Uurisime kuidas mõjutab viiruse mittestruktuursete valkude vaheliste lõikamiste toimumise kiiruse muutmine Semliki Forest viirust (SFV) ning Sindbis viirust (SINV). Leidsime, et SFV ning SINV jaoks on oluline, et viirusvalkude nsP1 ja nsP2 vaheline lõikamine ei toimuks liiga kiiresti. Kiirendatud lõikamine kahandas nende viiruste nakatamisvõimet ning vähendas viiruse RNA-de sünteesi. Viimasena osa doktoritööst moodustab ühe varem-tuntud CHIKV-inhibeeriva ühendi põhjal sünteesitud uudsete potentsiaalsete CHIKV inhibiitorite analüüs, mille tulemusena leiti ühend, mille CHIKV-vastane toime on umbes kümme korda parem kui lähteühendil.Alphaviruses (genus Alphavirus, family Togaviridae) have an RNA genome and the virions are approximately 70 nm in size. One of alphaviruses is Chikungunya virus (CHIKV), which causes a disease with debilitating joint pains that can last for months. It is important to find antiviral compounds to alleviate suffering caused by CHIKV. For that, we need to understand how the viral life cycle occurs in the cells. nsP2 is a multifunctional CHIKV protein, it is the viral protease and the RNA helicase, nsP2 also participates in the suppression of cellular immune response. As a protease, nsP2 is the viral protein, that cleaves the viral nonstructural polyprotein into individual proteins. This process plays a central role in the regulation of the viral life cycle. Within this thesis, we studied the requirements of CHIKV nsP2 for its protease activity. We found, that CHIKV nsP2 is a cysteine-protease, which is similar to previously studied alphaviral nsP2 proteases. In amino acid sequence CHIKV nsP2 must have intact cysteine 478 for its protease activity. If this cysteine or nearby tryptophan 479 is substituted with alanine, then CHIKV nsP2 loses its protease activity. Cleavage of alphaviral nonstructural polyprotein is a temporally regulated process. We studied how Semliki Forest virus (SFV) and Sindbis virus (SINV) are affected by changes in the speed of cleavages of the nonstructural polyprotein. We found, that it is important for SFV and SINV to prevent premature cleavage between viral nsP1 and nsP2. Accelerated processing of SFV or SINV nonstructural polyprotein caused decrease in infectivities and reduced viral RNA synthesis. The final part of the thesis is the analysis of novel CHIKV inhibitors. The structure of a previously known CHIKV inhibitor was modified in several ways and the anti-CHIKV properties of the novel compounds were evaluated. We identified a compound, that had approximately 10-fold increased anti-CHIKV activity in cell culture.https://www.ester.ee/record=b555640
Analysis of Functional Virus-generated PAMP RNAs Using IFN alpha/beta ELISA Assay
No full textNo Full Tex
Uudsed vaated alfaviiruste poolt kodeeritud nsP2 valgu funktsioonide kohta
No full textVäitekirja elektrooniline versioon ei sisalda publikatsiooneAlfaviirused (sugukond Togaviridae) on sfäärilise ümbrisega virionide ja positiivse polaarsusega RNA genoomiga viirused, mis enamasti levivad lülijalgsete vektorite vahendusel. Paljud alfaviirused on olulised inimeste patogeenid, sealhulgas ulatuslikke puhanguid põhjustav Chikungunya viirus (CHIKV), Austraalias leviv Ross River viirus (RRV), Ameerikas leviv ida hobuste entsefaliidi viirus (EEEV) ja ka Eestis leiduv Sindbis viirus (SINV). Alfaviiruste põhjustatud haigused sõltuvad viiruse liigist ja selle päritolust,kus üldistatult põhjustavad Vana Maailma alfaviirused palaviku, löövet ja artriiti, samal ajal kui Uue Maailma alfaviirused on sageli kõrge patogeensusega põhjustades neuroloogilisi haiguseid, sealhulgas entsefaliiti.
Alfaviiruste RNA genoom kodeerib nelja viiruse RNA replikaasi allühikut, mis toodetakse liitvalgust eellase (polüproteiini) kujul. Liitvalk lõigatakse neljaks valmis replikaasi valguks viiruse nsP2 proteaasi abil. Viimastel aastakümnetel läbiviidud uurimistööd on võimaldanud välja selgitada viiruse replikaasi kompleksi kui ka selle komponentide peamised funktsioonid ning meie arusaamine viiruse valkude struktuuridest on oluliselt täienenud. Ka need uurimised on näidanud, et alfaviiruse infektsiooni üks esimesi ja kõige olulisemaid sündmusi on replikaasi valkude eellase lõikamine valmis valkudeks. Eelvalgu lõikamised toimuvad kindlas järjekorras ja onkindlalt ajastatud, mis määrab ära selle, kas vabanevad valgud moodustavad toimiva RNA replikaasi või mitte. Seega kujutab eelvalgu lõikamise protsessi läbi viiv nsP2 endast RNA replikatsiooni käivitamise ja efektiivsuse regulaatorit. Samas on tegemist multifunktsionaalse valguga, mis on lisaks RNA sünteesi reguleerimisele oluline nii raku viirusvastaste kaitsereaktsioonide aktiveerimisel kui ka nende mahasurumiseks. Sellest tulenevat mõjutavad muudatused nsP2 valgus, sealhulgas punktmutatsioonid valgu funktsionaalselt olulistes regioonides, oluliselt viiruse bioloogilisi omadusi. Seejuures ei ole mitmete nsP2 aktiivsuste taga seisvad molekulaarsed mehhanismid lõpuni selged. Küll aga on selgunud, et nsP2 funktsioone mõjutavad interaktsioonid alfaviiruse ülejäänute replikaasi valkude nsP1, nsP3 ja nsP4-ga.
Käesoleva uurimistöö raames selgitati välja ja analüüsiti mitmeid nsP2 valgu ja RNA replikaasi seni tundmatuid funktsioone. Töö peamised tulemused saab kokku võtta järgnevalt:
1. alfaviiruste genoomide alusel konstrueeritud trans-replikatsiooni süsteemid võimaldavad uurida nsP2 valgu funktsioone, mis on seotud viiruse RNA replikaasi kompleksi moodustamisega, aga ka selle moodustamise blokeerimise ja/või selle aktiivsuse mahasurumisega. Viimati nimetatud aktiivsused on olulised viiruste superinfektsiooni blokeerimisel ja tõenäoliselt ka viiruse replikatsiooni ajalisel reguleerimisel. CHIKV ja SINV trans-replikatsiooni süsteeme kasutades tehti kindlaks, et superinfektsiooni blokeerimise puhul on võtmesündmuseks ühe viiruse replikaasi eellase lõikamine teise viiruse nsP2 poolt ja et seda mõjutavad mutatsioonid nii sihtmärk-liitvalgus kui ka nsP2 valgus;
2. leiti, et individuaalse nsP2 süntees sääse (vektorputuka) rakkudes surub maha alfaviiruse replikatsiooni aktiivsust. Seda nähtust ei põhjusta ainult nsP2 proteaasne aktiivsus – olulised on ka nsP2 proteaassest aktiivsusest sõltumatud mehhanismid. See, milline on konkreetsete mehhanismide osakaal, sõltub nii viiruse RNA replikaasi kui ka selle moodustamist inhibeeriva nsP2 valgu päritolust. Homoloogse viiruse replikatsiooni mahasurumisel domineerib nsP2 proteaassest aktiivsustest sõltuv mehhanism, kus nsP2 poolt teostatud replikaasi eelvalgu lõikamine 2/3 saidist välistab funktsionaalse RNA replikaasi moodustumise. Mõne alfaviiruse (SINV) puhul on nsP2 proteaassest aktiivsusest sõltuv mehhanism ka peamiseks mehhanismiks millega surutakse alla heteroloogsete alfaviiruste replikaaside moodustamist;
3. nii SINV kui ka CHIKV nsP2 valk takistab heteroloogsete alfaviiruste RNA replikatsiooni ka proteaassest aktiivsusest sõltumatute mehhanismide abil, kus CHIKV nsP2 puhul on need peamisteks meetoditeks heteroloogsete alfaviiruste replikatsiooni mahasurumisel. Selle inhibeerimise täpne põhjus on hetkel teadmata, küll aga näitasime, et erinevad mutatsioonid nsP2 valgus mõjutavad taolise inhibeerimise efektiivsust. Need andmed viitavad sellele, et proteaassest aktiivsusest sõltumatu replikatsiooni inhibeerimine saavutatakse tõenäoliselt mitmete paralleelsete mehhanismide abil;
4. väga patogeensele ja seetõttu vähe uuritud EEEV-le konstrueeritud trans-replikastiooni süsteem osutus kõrgelt efektiivseks nii inimese kui ka sääse rakkudes. Samuti osutus võimalikuks EEEV replikaasi eelvalku (P1234) kodeeriva järjestuse jagamine kaheks (P123 + nsP4) ja kolmeks (nsP1+P23+nsP4) komponendiks. See võimaldas uurida kas ja kuidas replikaasi komponentide vahekord mõjutab EEEV RNA replikaasi aktiivsust. Läbiviidud katsed näitasid, et erinevalt seni uuritud alfaviirustest sõltub EEEV RNA replikaasi aktiivsus teda moodustavate komponentide optimaalsest vahekorrast ja et RNA replikaasi katalüütilise allühiku (nsP4) ülehulk vähendab EEEV RNA replikaasi aktiivsust. Selline aktiivsuse langus tuleneb sellest, et väheneb nii rakkude hulk milles RNA replikatsioon aktiveeritakse, kuid ka RNA replikatsiooni aktiivsus nendes rakkudes. Hetkel pole veel selge kas tegemist on EEEV RNA replikaasi unikaalse omadusega või leidub ka teisi sarnaste omadustega alfaviiruste replikaase;
5. uuriti RRV loodusliku isolaadi RRV 2528 omadusi. Leiti, et see viiruse isolaat põhjustab väga tugevat tüüp-I interferoonide vastust. Viiruse genoomi analüüs tõi välja, et RRV 2528 erineb teistest vähemal määral interferoonide tootmist indutseerivatest RRV isolaatidest mitmete mutatsioonide poolest, millest paljud paiknevad just nsP2 valgus Näitasime, et need mutatsioonid mõjutavad RRV nakkuse käigus toimuvat interferoonide tootmist, kuid ei mõjuta viiruse replikaasi eelvalgu protsessimist valmis valkudeks, viiruse võimet suruda maha raku valgusünteesi ega viiruse struktuurvalkude sünteesi. Seega ei tulene suurenenud tüüp-I interferoonide vastus defektist RRV 2528 RNA replikatsioonikomplekside moodustamisel või võimetusest maha suruda raku üldist geeniekspressiooni.Over the last decades, the intensive studies of factors/activities responsible for multiple aspects of alphavirus infection have been performed. In particular, our understanding about structures and functions of viral RNA replicase and its components has significantly increased. Novel findings emphasize that one of the first and most essential event in alphavirus infection is processing of the ns polyprotein carried out by its nsP2 region and an individual nsP2; this process not only ensures the release of functional replicase subunits but also determines would these proteins form the active RCs or not. Thus, it is increasingly evident that nsP2 is one of the “main driving forces” of successful RNA replication. Furthermore, due to its versatile functions and various activities nsP2 is involved in other aspects of infection. It is one of the key determinants associated with activation as well as counteracting of antiviral response in infected cells. Therefore, different modifications of the protein, including point mutations, often have drastic impact on alphavirus infection. However, much of the precise mechanisms of P2 action remain enigmatic. What is clear is that nsP2 does not act alone, its activities are modulated by other components of viral replicase.
The current study allowed us to identify and confirm new functions and properties of nsP2 and alphavirus RNA replicase. The general conclusions of this study can be presented as follows:
1. Alphavirus trans-replicase systems can be applied as a tool for studies of functions of nsP2 associated with inhibition of RC formation/activity. These functions are essential for SIE and are likely related to these used to regulate RNA replication in the alphavirus infected cells. Using trans-replicase systems of CHIKV and SINV, it was found that the key event in SIE is targeting of replicase precursor (P1234) by an individual nsP2 protein and that this ability of nsP2 can be altered by mutations present in its functionally important regions.
2. It was found that synthesis of an individual (free) nsP2 in mosquito cells has an inhibitory effect on the alphavirus RC formation/functionality. This is not, however, a result of a single mechanism but results from combination of nsP2 protease-activity dependent mechanism and protease-activity independent mechanisms. The level and dominant mode of inhibition of alphavirus RNA replication depends form the virus, source of free nsP2 and substitutions present in this protein. The protease-activity mediated mechanism is important for suppression of replication of matching virus and relies mostly on ability of nsP2 to cleave 2/3 site in ns polyprotein. For some viruses such as SINV it is also dominant mechanism used to suppress formation of RNA replicases of heterologous alphaviruses.
3. nsP2 of SINV and CHIKV can inhibit formation/activity of RNA replicase of heterologous alphavirus using protease-activity independent mechanisms; for nsP2 of CHIKV this is the dominant mechanism to suppress activity of RNA replicases of heterologous alphaviruses. The precise details of protease-activity independent mode of action of nsP2 remain unknown; however, it is clear that this property can be enhanced by introduction of certain mutations into nsP2. It is likely that the protease-activity independent inhibitory effect originates not from a single mechanism but from several mechanisms.
4. Trans-replicase of highly pathogenic EEEV was found to be highly active in human and mosquito cells. Splitting of construct of EEEV P1234 expression into two (P123 and nsP4) or three (nsP1, P23 and nsP4) expression construct allowed analysis of requirements of active RC formation. It was found that activity of EEEV RNA replicase depends from correct ratio of P123 (or nsP1+P23) component to nsP4 component and that in contrast to previously studied alphaviruses an excess of nsP4 reduced activity of EEEV RNA replicase. The reduction was due to the decrease of a number of cells were RNA replication was initiated as well as to the reduced RNA replicase activity in such cells. It remains unclear, is this property unique for EEEV RNA replicase.
5. Natural isolate RRV 2528 was found to be a prominent inducer of type-I IFN expression. This property was associated with specific amino acid substitutions in the nsP2 encoded by this isolate. None of these substitutions or their combination affected ability of RRV to induce shutdown of cellular protein synthesis or level of viral structural proteins expression. Similarly, no effect on the processing of P1234 was detected. Combined, these findings indicate that the excessive type-I IFN induction was not due to the lack of the ability to induce general shutdown of cellular gene expression or due to the defects in RC formation.https://www.ester.ee/record=b553517
- …
