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Perceção estudantil de competência académica em contexto de avaliação : a distância entre a expectativa e a realidade e os seus determinantes
No full textTrabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2024Introdução/Contextualização: O modelo de self-regulated learning, particularmente relevante no Ensino Superior, destaca a importância da preparação prévia e reflexão posterior à aprendizagem para a autorregulação e consequente eficácia do processo de ensino-aprendizagem. A metacognição, reflexão do indivíduo sobre o seu próprio conhecimento, é uma ferramenta fundamental para esta autorregulação. Objetivos: Propusemo-nos a caracterizar uma amostra de alunos de 5º ano do Mestrado Integrado em Medicina da Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa quanto à sua capacidade metacognitiva e quanto a fatores demográficos e académicos, apurando a influência destes na metacognição. Metodologia: Após os Testes de Escolha Múltipla dos Blocos Rotativos (A e B) de 5º ano, todos os candidatos a exame foram convidados a preencher um questionário recolhendo os seguintes dados: classificação que esperavam obter no exame antes e depois da realização do mesmo, género, idade, frequência prévia do Ensino Superior, média de curso, horas de estudo, classificação satisfatória e esclarecimento quanto aos objetivos avaliativos da prova. Estes dados, juntamente com a classificação obtida pelos estudantes no exame, foram analisados caracterizando a relação entre estas variáveis. Resultados: 55,5% dos candidatos a exame participou no estudo. A previsão de classificação dos participantes antes do exame é inferior à classificação real (diferença média de -0,411 e de -0,630 valores no TEM A e TEM B respetivamente) e mantém-se semelhante ou decresce após a realização do exame. Estudantes que frequentaram outro curso do Ensino Superior durante mais de três anos, bem como estudantes mais esclarecidos quanto aos objetivos avaliativos da prova erram menos nas suas previsões. Os restantes aspetos não demonstraram influenciar este. Conclusão: Os estudantes subestimam as suas capacidades académicas e não têm ganhos metacognitivos com a realização de exames. A frequência prévia do Ensino Superior e o esclarecimento adequado quanto aos objetivos avaliativos da prova contribuem para ganhos metacognitivos.Introduction: The self-regulated learning model, which is particularly relevant in higher education, emphasizes the importance of preparation before and reflection after learning for self-regulation and the consequent effectiveness of the teaching-learning process. Metacognition, the individual's reflection on their own knowledge, is a fundamental tool for this self-regulation. Objectives: We set out to characterize a sample of 5th year students on the Integrated Master's Degree in Medicine at the Faculty of Medicine of the University of Lisbon in terms of their metacognitive ability and demographic and academic factors, determining their influence on metacognition. Methodology: After the Multiple Choice Tests of the 5th year Rotating Blocks (A and B), all the students taking the exam were asked to fill in a questionnaire collecting the following data: the grade they expected to obtain in the exam before and after taking it, gender, age, previous higher education attendance, course average, study hours, satisfactory grade and clarification on the exam's assessment objectives. These data, together with the marks obtained by the students in the exam, were analyzed to determine the relationship between these variables. Results: 55.5% of exam candidates took part in the study. Participants' predicted marks before the exam were lower than their actual marks (average difference of -0.411 and -0.630 for TEM A and TEM B respectively) and remained the same or decreased after the exam. Students who have previously attended higher education for more than three years, as well as students who are clearer about the assessment objectives of the exam, err less in their grade predictions. The other aspects have not been shown to influence the prediction error. Conclusion: Students underestimate their academic abilities and make no metacognitive gains from taking exams. Previous attendance of higher education and adequate clarification of the test's evaluative objectives contribute to metacognitive gains
Innovative contributions towards therapeutic strategies for metastatic breast cancer treatment
No full textBreast cancer is the most frequently diagnosed cancer worldwide and is the leading cause of cancer-related death among women. Despite the vast therapeutic arsenal available to fight this heterogenous and complex disease, it still poses a challenge in the clinic. In fact, even though the extensive screening programs combined with improvements in the therapeutic management have been resulting in an increase of the median overall survival in women with metastatic breast cancer (MBC), this specific disease remains incurable. Moreover, as the incidence of MBC is increasing, more patients will die from this disease. The therapeutic approach for MBC relies on chemotherapy, which is associated with insufficient selectivity, that ultimately leads to drastic side-effects, and resistance to treatment. Additionally, while this type of therapy can be partially effective regarding metastases development in bones, soft tissue and viscera, MBC tends to spread to lungs, liver, bones and brain. Therefore, brain metastases represent a major clinical concern when treating and managing MBC, since the majority of the chemotherapeutic drugs present very poor penetration in the central nervous system (CNS) due to the impermeability of the blood-brain barrier (BBB). Therefore, there is the urgent need for more effective and innovative strategies for MBC treatment.
In this work, our goal was to develop a new therapeutic strategy for the treatment of MBC that would selectively target breast cancer cells and interfere with the development of brain metastases. Considering the vast level of complexity of breast cancer, we decided that our approach would have to focus on molecular features that are widely found in cancer cells and tend to remain constant throughout time. Cancer cells exhibit a cell membrane with a net negative charge. Therefore, we decided to focus on the use of peptides with anticancer activity, because since these are generally cationic, their mode of action relies on the inevitable electrostatic interaction with cancer cells. In the first part of this work, we studied the anticancer activity of PvD1 – a plant defensin isolated from Phaseolus vulgaris, the common bean – and vCPP2319 – a cellpenetrating peptide (CPP) obtained from the capsid protein of the Torque teno douroucouli virus. The results showed that both peptides exhibited selective anticancer activity. The mode of action was also studied for both peptides and the results suggested that both peptides could potentially hinder the formation of metastases. Therefore, we concluded that these are promising molecules that can work as templates for the design of innovative approaches for MBC treatment.
Nevertheless, peptides are still associated with some disadvantages as instability, immunogenicity, or limited ability to cross biological barriers such as the BBB. Hence, the second part of this work focused on the study of the interaction between extracellular vesicles (EVs) and vCPP2319. The goal was to use EVs as a potential drug delivery system (DDS) for vCPP2319. We isolated EVs from breast cancer cells MDA-MB-231 and studied the interaction between these and vCPP2319. As the results revealed the establishment of a strong interaction, we decided to test the ability of these EVs to deliver vCPP2319 across an in vitro model of the human BBB. The results revealed that, in contrast to what was observed for the peptide alone, vCPP2319 was able to transmigrate through the BBB model when combined with EVs. In line with these results, EVs did show the ability to transmigrate through the BBB, even without the peptide.
In parallel with the present work, there were contributions that crossed roads with collaborations with other labs. One of those works was a literature review on the use of biophysical techniques to investigate the potential of bacteriocins as anticancer peptides (ACPs). Additionally, the anticancer activity of a peptide found in the venom glands of three different wasps, the protonectin (PTN), was studied. Aiming to explore alternative approaches for the use on EVs in breast cancer treatment, these vesicles were evaluated as a possible target for breast cancer treatment using the PvD1. Finally, there was also the participation in a project where several conditions were evaluated for the optimization of the production of EVs from mesenchymal stem cell cultures in bioreactors. All these works are in line with the main project that supports this thesis, adding on its contribution for new therapeutic strategies for metastatic breast cancer treatment.
Overall, this thesis shows that ACPs are a very promising source of templates for the development of new molecules for MBC treatment and that EVs have the potential to work as a DDS with the ability to deliver its cargo across the BBB
Novel genetic strategies for the characterization of Familial Hypercholesterolemia phenotype
No full textFamilial Hypercholesterolemia (FH) is the most common genetic lipid disorder with increased risk of atherosclerotic cardiovascular disease due to lifelong elevated low density lipoprotein cholesterol (LDL-C). FH is known to be caused by pathogenic/likely pathogenic (P/LP) variants in LDLR, APOB, PCSK9 genes, but remains underdiagnosed worldwide due to lack of clinical identification. In 40-70% of the clinical FH cases, depending on clinical criteria applied, no P/LP variants are found in FH genes.
An extended next generation sequencing (NGS) panel was developed and divided in three genetic strategies to characterize the FH phenotype in individuals of the Portuguese FH cohort. In a first approach, a virtual FH panel was analysed, covering 8 genes and a polygenic risk score (PRS). FH was genetically confirmed in 42% of the cohort. In the FH-negative individuals, other causes were identified, as hyper-lipoprotein(a) (30%), high PRS (16%), other monogenic lipid metabolism disorders (1%) and heterozygous pathogenic variants in FH-phenocopy genes (2%).
In a second approach, SNPs within 3’-UTR sequence of FH genes (LDLR and PCSK9) were analysed in FH-negative individuals. These SNPs were predicted to disturb miRNA:mRNA interactions, potentially affecting the post-transcriptional regulatory effect of miRNAs, and possibly contributing to hypercholesterolemia in 6,4% of FH-negative individuals. These individuals had a higher frequency of SNPs within miRNA-binding sites in PCSK9 3’-UTR (4.2%), which can lead to an increase in PCSK9 expression.
In a third approach, a virtual NGS panel covering 27 candidate lipid genes associated to hyperlipidemia was explored. An accumulation of rare variants was identified in 51% of the FH-negative individuals, suggesting top 5 relevant genes that could potentially disrupt lipoprotein metabolism.
This work unravels other genetic causes of the FH phenotype. Understanding the genetic background of FH-negative cases is crucial for an accurate disease diagnosis and to tailor the treatment for the specific affected pathway
Dichotic listening tests : laterality index of verbal and non-verbal stimuli in a Portuguese healthy sample
No full textTrabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2024Introdução: A audição dicótica consiste na apresentação simultânea de dois estímulos auditivos distintos, cada um dirigido a um ouvido, possibilitando o estudo da assimetria entre hemisférios cerebrais no processamento da linguagem. Aplicando um teste de audição dicótica, este estudo teve como objetivos: 1) definição do índice de lateralidade dos estímulos verbais; 2) definição do índice de lateralidade dos estímulos não-verbais; 3) comparação entre os índices de lateralidade dos estímulos verbais e não-verbais. Colocámos como hipóteses que seria observada uma dominância do estímulo do ouvido direito na audição dicótica verbal e que a dominância direita seria maior na audição dicótica verbal do que na audição dicótica não-verbal.
Métodos: O teste foi aplicado a uma amostra de adultos portugueses, sem doença neurológica ou auditiva. Compreendeu a realização de quatro tarefas: 1) Repetição de Palavras; 2) Nomeação de Sons Não-Verbais; 3) Audição Dicótica Verbal; 4) Audição Dicótica Não-Verbal. Após a aplicação do teste, foi calculado o índice de lateralidade dos sons verbais e não-verbais.
Resultados: Foram incluídos 96 participantes. Obtivemos medianas dos índices de lateralidade de 48 e 0, na tarefa verbal e não-verbal, respetivamente (o índice varia de -100 a 100; valores positivos representam lateralidade para o ouvido direito). Foi observado que a mediana dos índices de lateralidade da tarefa verbal foi estatisticamente diferente de zero (Z=7,977, p<0,001), enquanto que a mediana dos índices de lateralidade da tarefa não-verbal não foi diferente de zero (Z=-0,899, p=0,369). Observou-se uma diferença estatisticamente significativa (Z=-7,681, p<0,001) entre o índice de lateralidade dos sons verbais e não-verbais.
Discussão: Observámos uma dominância do estímulo do ouvido direito na tarefa verbal e a ausência de dominância na tarefa não-verbal. Estes resultados refletem uma dominância do hemisfério esquerdo para o processamento de estímulos verbais e sugerem que o processamento de estímulos não-verbais é uma função não-lateralizada.Introduction: Dichotic listening consists in the presentation of two distinct simultaneous stimuli, each one directed to a different ear, via headphones. This non-invasive test allows the investigation of cerebral hemisphere asymmetry in language processing. We applied dichotic listening tests with the following objectives: 1) definition of verbal stimuli laterality index; 2) definition of non-verbal stimuli laterality index; and 3) comparison between verbal and non-verbal stimuli laterality indexes. We hypothesized that a right ear advantage would be observed in the verbal dichotic listening task and that a greater right ear advantage would be observed in the verbal dichotic listening task when compared to the non-verbal dichotic listening task.
Methods: The Dichotic Listening Test was applied to a sample of Portuguese-speaking adults without neurological or hearing disorders. The Dichotic Listening Test comprises four tasks: 1) Word Repetition; 2) Non-Verbal Sound Naming; 3) Verbal Dichotic Listening; 4) Non-Verbal Dichotic Listening. After the test was conducted, laterality indexes for verbal and non-verbal stimuli were calculated.
Results: Ninety-six participants were included. In the verbal and non-verbal tasks, we obtained median laterality indexes of 48 and 0, respectively (index values range from -100 to 100; positive values indicate right ear lateralization). We found that the median verbal stimuli laterality index was statistically different from zero (Z = 7,977, p < 0,001). In contrast, the median non-verbal stimuli laterality index was not different from zero (Z = - 0,899, p = 0,369). We also found a statistically significant difference between verbal and non-verbal stimuli laterality indexes (Z = -7,681, p < 0,001).
Discussion: In the present study, we observed a right ear advantage for verbal sounds and no laterality advantage for non-verbal sounds. These results reflect a predominant left hemisphere dominance for verbal stimuli auditory processing and a non-lateralized brain function of non-verbal stimuli auditory processing
RANK signaling pathway as a mediator of resistance to targeted therapies in breast cancer
No full textDespite the efficacy of local treatments to control early breast cancer (BC) and great advances in the development of target therapies, relapse and progression rates are still high, mostly due to (neo)adjuvant systemic therapy resistance. Therefore, it is extremely important to unravel drivers of therapeutic resistance and devise strategies to overcome it. The receptor activator of nuclear factor-kB (RANK)-RANK ligand (RANKL) signaling pathway is a key regulator of several physiopathological processes, including osteoclastogenesis, breast carcinogenesis and BC progression. In this work, we provide the first characterization of RANK overexpressing (RANK OE) luminal BC, including its effect in response to standard of care therapies. We found that RANK OE luminal BC is characterized by a staminal and mesenchymal phenotype and decreased proliferation rate. Moreover, RANK OE cells were more invasive and less sensitive to chemo, endocrine and cyclin dependent kinase 4 and 6 inhibitors (CDK4/6i) therapy. Additionally, we disclose the mechanism(s) involved in RANK-mediated resistance to CDK4/6i and demonstrate that the pharmacological inhibition of RANK-RANKL pathway may improve the efficacy of this class of drugs. Major RANK-associated intrinsic or acquired resistance drivers were the decreased proliferation rate and chronic interferon γ-response activation, characteristic of luminal RANK OE cells and tumors. Importantly, RANKL inhibitors (RANKLi) restored sensitivity and prevented acquired resistance to CDK4/6i. Stemming from these findings, we also demonstrate that the genetic or pharmacologic inhibition of RANK-pathway improves the response to CDK4/6i of Rb-proficient TNBC, where current therapeutic options are mostly limited to chemotherapy. Overall, our results advanced the current knowledge about the role of RANK pathway in BC, clearly implicated in luminal BC biology. Moreover, this work has a strong translational value, showing that the use of RANKLi may span far beyond its current use in the clinics as a bone target therapy, and be repurposed as a new add-on to CDK4/6i in the treatment of metastatic luminal and TNBC patients
Influência do envelhecimento na resistência à flexão de resinas CAD-CAM impressas
No full textObjetivo: Avaliar a resistência à flexão e módulo de flexão de resinas à base de metacrilato, convencionais e impressas em 3D, após envelhecimento.
Materiais e Métodos: Foram utilizadas três resinas, Enamel Plus Temp (autopolimerizável), NextDent Crown&Bridge MFH e VarseoSmile Crown Plus (impressas) para confecionar 225 espécimes que foram distribuídos por 5 grupos experimentais: sem envelhecimento, envelhecimento em água, envelhecimento térmico (1000 ciclos, 5-55ºC), envelhecimento em saliva artificial com pH=7 e envelhecimento químico em saliva artificial com pH=3 (8h/dia) e pH=7 (16h/dia). O envelhecimento teve a duração de 30 dias. Posteriormente os espécimes foram submetidos ao teste de resistência de flexão de 3 pontos. Os dados foram analisados utilizando testes Kruskal- Wallis seguidos de comparações múltiplas com teste de Mann-Whitney com correção de Bonferroni (α=0,05).
Resultados: A resistência à flexão foi significativamente influenciada pelo tipo de material (p0,05). Para a NextDent Crown&Bridge MFH, não existiram diferenças na resistência (p=1,000), porém os grupos com envelhecimento em saliva e químico obtiveram um módulo inferior (p<0,001) ao grupo de controlo e com envelhecimento em água.
Conclusão: As resinas impressas apresentaram uma resistência à flexão superior à Enamel Plus Temp. Existiram diferenças no módulo de flexão das resinas, sendo que a VarseoSmile Crown Plus apresentou os valores mais elevados. O envelhecimento não influenciou a resistência à flexão dos materiais, mas resultou em alterações no módulo de flexão da resina NextDent Crown&Bridge MFH.Objective: Evaluate the flexural strength and flexural modulus of methacrylate-based resins, conventional and 3D-printed, after aging.
Materials and Methods: Three resins, Enamel Plus Temp (self-curing), NextDent Crown&Bridge MFH, and VarseoSmile Crown Plus (3D-printed), were used to fabricate 225 specimens which were distributed into 5 experimental groups: no aging, water aging, thermal aging (1000 cycles, 5-55ºC), aging in artificial saliva with pH=7, and chemical aging in artificial saliva with pH=3 (8h/day) and pH=7 (16h/day). The aging lasted for 30 days. Subsequently, the specimens were subjected to a three-point flexural strength test. Data were analyzed using Kruskal-Wallis tests followed by multiple comparisons with Mann-Whitney tests with Bonferroni correction (α=0.05).
Results: Flexural strength was significantly influenced by the type of material (p0.05). For the NextDent Crown&Bridge MFH, there were no differences in strength (p=1.000), but the groups with saliva and chemical aging had a lower modulus (p<0.001) compared to the control and water aging groups.
Conclusion: The 3D-printed resins showed higher flexural strength than Enamel Plus Temp. There were differences in the flexural modulus of the resins, with VarseoSmile Crown Plus showing the highest values. Aging did not affect the flexural strength of the materials but resulted in changes in the flexural modulus of the NextDent Crown&Bridge MFH resin
Estudo da atividade de lisinas fágicas em Acinetobacter baumannii
No full textTese de mestrado, Microbiologia Aplicada, 2024, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasAcinetobacter baumannii é um agente patogénico oportunista, responsável por várias infeções
nosocomiais, com impacto na morbilidade e mortalidade. Esta bactéria Gram-negativa expressa diversos
fatores de virulência e desenvolveu estratégias de evasão aos antibióticos. O surgimento de estirpes
resistentes é um desafio terapêutico e uma ameaça à saúde pública. A Organização_Mundial da Saúde
(OMS) incluiu A. baumannii resistente a carbapenemos (CRAB) na lista de agentes patogénicos
prioritários para a pesquisa e desenvolvimento de novos antimicrobianos. Neste contexto, bacteriófagos
e proteínas derivadas surgem como alternativas aos antibióticos tradicionais. Particularmente, as lisinas
degradam a camada de peptidoglicano, levando à lise bacteriana.
No presente projeto, investigou-se o potencial antibacteriano de três lisinas - AbLyso, AbProte e AbTail
– previamente identificadas em profagos de A. baumannii. Cada gene codificante destas lisinas encontrase clonado num vetor de expressão, utilizado para transformar Escherichia coli. Após a indução da
expressão génica e a purificação das lisinas, a sua_atividade hidrolítica foi confirmada em Micrococcus
luteus. Os resultados do zimograma e das curvas de crescimento demonstraram que AbLyso e AbTail
apresentam atividade antibacteriana contra A. baumannii Ac127. AbTail a 12,5 µg/mL reduziu a
viabilidade celular de várias estirpes de A. baumannii em aproximadamente 50%, após 24 h de
incubação. Observou-se que AbTail apresenta especificidade para A. baumannii. Paralelamente, testes
in vitro demonstraram que AbLyso diminui a taxa de crescimento bacteriano no início da fase
exponencial, sendo o efeito dependente da concentração e reprodutível em diferentes estirpes de A.
baumannii. Nos testes in vivo em larvas de Galleria mellonella, verificou-se que a endolisina AbLyso
não apresenta toxicidade. Todas as larvas infetadas com A. baumannii Ac127 pereceram, contudo, a
administração de 30 µg de AbLyso resultou na sobrevivência de 50% das larvas ao fim de 120 h. Com
este trabalho pretende-se contribuir para a validação das lisinas fágicas enquanto compostos
antimicrobianos.Acinetobacter baumannii is an opportunistic pathogen responsible for a wide range of nosocomial
infections, thereby increasing morbidity and mortality rates. This Gram-negative expresses several
virulence factors and has developed multiple strategies to evade antibiotic action. The emergence of
antibiotic-resistant A. baumannii strains poses a therapeutic challenge and a public health threat. The
World Health Organization has included carbapenem-resistant A. baumannii (CRAB) in its list of
priority pathogens for the research and development of new antimicrobials. In this context,
bacteriophages and derived proteins emerge as alternatives to traditional antibiotics. Specifically, lysins
degrade the bacterial peptidoglycan layer, leading to cell lysis.
The aim of this project was to investigate the antibacterial potential of three lysins - AbLyso, AbProte,
and AbTail - previously identified in A. baumannii prophages. Each gene encoding these lysins was
cloned into an expression vector, used to transform Escherichia coli. Following the successful induction
of gene expression and purification of the lysins, their hydrolytic activity was confirmed in Micrococcus
luteus, a Gram-positive species. Results from zymogram and growth curves assays demonstrated that
AbLyso and AbTail exhibit antibacterial activity against A. baumannii Ac127. Applying AbTail at 12.5
µg/mL reduced the cell viability of various A. baumannii strains by approximately 50% after 24 h of
incubation. This lysin demonstrated specificity for A. baumannii. Moreover, in vitro tests revealed that
AbLyso decreases the bacterial growth rate at the onset of the exponential phase in a concentrationdependent manner, with reproducible effects throughout different A. baumannii strains. In vivo tests
using Galleria mellonella larvae showed that the endolysin AbLyso is non-toxic. Although all larvae
infected with A. baumannii Ac127 died, treatment with 30 µg of AbLyso led to a survival rate of 50%
after 120 h. The present work aims to contribute to the development and validation of phage lysins as
effective antimicrobial compounds
Unraveling the role of dose and 5-HT2A receptor activation in the long-lasting effects of psilocybin
No full textTese de mestrado, Neurociências, Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina, 2024A psilocibina é um agonista dos recetores de serotonina (5-HT) do tipo 2A (5-HT2AR), encontrado em algumas espécies de cogumelos psicadélicos. Estudos recentes avaliaram o potencial terapêutico da psilocibina para várias condições, de entre as quais a ansiedade de fim de vida, perturbação depressiva major, transtorno obsessivo-compulsivo, tabagismo e alcoolismo. Foi demonstrado que o bloqueio dos recetores 5-HT2AR anula os efeitos das substâncias psicadélicas no comportamento de roedores e humanos. No entanto, embora a ativação dos 5- HT2AR seja uma propriedade partilhada entre substâncias psicadélicas, e seja necessária para os seus efeitos, nem todos os agonistas dos 5-HT2AR induzem atividade psicadélica. De facto, os agonistas não psicadélicos dos 5-HT2AR, como a lisurida, têm semelhanças estruturais significativas e atividade agonística comparável à da psilocibina ao nível dos 5-HT2AR, mas carecem das propriedades psicoativas. Este trabalho baseia-se em duas questões-chave a serem respondidas. Em primeiro lugar, ainda não foi determinado se e/ou como os efeitos a longo prazo da psilocibina são dependentes da dose. Devido à falta de investigação sobre este tópico, este trabalho procura dar uma resposta, através da elaboração de uma curva de dose-resposta para as ações da psilocibina a nível comportamental após 7 dias. A segunda questão diz respeito aos mecanismos subjacentes aos efeitos da psilocibina. Há alguma controvérsia sobre este assunto, uma vez que estudos recentes afirmam que as ações comportamentais e funcionais da psilocibina são independentes da ativação dos 5-HT2AR. Foi então sugerido que a ativação de 5-HT2AR só estaria envolvida no efeito psicadélico, e este efeito poderia ser eliminado pela coadministração de um antagonista de 5- HT2AR, sem afetar a ação terapêutica. No entanto, devido a limitações destes estudos, bem como à existência de evidência contrária, o presente estudo visa testar se a ativação dos 5-HT2AR é necessária e/ou suficiente para os efeitos a longo prazo da psilocibina. Para tal, testámos se os efeitos da psilocibina são bloqueados pela administração de um antagonista seletivo 5-HT2AR, o MDL100907. Além disso, caso a ativação do 5-HT2AR se demonstrar necessária para os efeitos da psilocibina, resta saber se agonistas não psicoativos do 5-HT2AR, como a lisurida, preservam as mesmas propriedades terapêuticas sem os efeitos alucinógenos e, se não, quais são as diferenças que podem explicar esta disparidade. Assim, as hipóteses deste projeto são: 1) Os efeitos duradouros da psilocibina no comportamento são dependentes da dose. 2) A ativação dos 5-HT2AR é necessária para os efeitos duradouros da psilocibina, sendo abolidos por um pré-tratamento com MDL100907. 3) A ativação dos 5-HT2AR não é suficiente para estes efeitos, não sendo replicados pela administração de lisurida. Para testar a hipótese 1, a amostra foi dividida em 4 grupos experimentais de 12 murganhos C57BL6/J macho (10-12 semanas) e foram administrados, através de injeção intraperitoneal (i.p.), veículo (salino) ou uma de 3 doses de psilocibina (1, 5, ou 10 mg/kg). Imediatamente após a injeção, foi quantificada a resposta de head-twitch (HTR) durante 20 min. Passados 7 dias, foram avaliados os efeitos da psilocibina no comportamento dos tipos ansioso e depressivo através de uma bateria de 5 testes comportamentais – NSFT, OFT, MBT, ST, FST. Os três primeiros testes são usados para avaliar comportamento do tipo ansioso. Especificamente, o NSFT explora o conflito entre a fome e a apreensão dos animais para se alimentar em ambientes desconhecidos, sendo que é medida a latência de alimentação num novo ambiente após 24 horas de privação de comida. O OFT serve como controlo para avaliação da atividade locomotora, através da medição da distância total percorrida, além de também constituir uma medida de comportamento do tipo ansioso, pois fornece o tempo que cada animal passa em zonas mais ou menos expostas da arena de teste. O MBT é baseado num comportamento defensivo exibido pelos roedores quando são expostos a corpos estranhos. Neste teste, o número de berlindes enterrados pelos murganhos é usado como medida de comportamento do tipo ansioso. Por sua vez, o ST e FST são testes de comportamento do tipo depressivo, sendo que o ST avalia a vertente de “autocuidado”, fornecendo o tempo passado a fazer grooming após pulverização de uma solução de sacarose no dorso dos animais; e o FST consiste na medição do tempo passado em imobilidade numa situação em que os animais são colocados dentro de água e não conseguem escapar, avaliando uma vertente de motivação ou desamparo relacionada com o comportamento do tipo depressivo. Nesta primeira tarefa, a administração aguda de psilocibina induziu aumentos significativos na frequência de HTR em todas as doses, sendo o efeito máximo observado na dose de 5 mg/kg. Em relação ao comportamento do tipo ansioso após 7 dias, embora nenhum efeito tenha sido observado no tempo passado na zona central ou no número de bolos fecais no OFT, foi observada uma diminuição significativa na latência para comer no NSFT em todos os grupos tratados com psilocibina. Além disso, no MBT, observou-se uma diminuição significativa no número de berlindes enterrados para os grupos 5 e 10, mas não 1 mg/kg, em relação ao grupo controlo. Por outro lado, não foram observadas diferenças significativas no ST nem no FST. Os Z-Scores compostos de emocionalidade negativa mostraram que, enquanto os grupos de 5 e 10 mg/kg apresentaram reduções significativas a longo prazo neste parâmetro, tal efeito não foi observado para o grupo de 1 mg/kg. Os resultados sugerem que uma única dose de psilocibina é suficiente para induzir mudanças significativas de longo prazo no comportamento de animais saudáveis, o que está em linha com os efeitos duradouros relatados em indivíduos saudáveis. Além disso, os dados sugerem que esses efeitos são dependentes da dose, com um efeito máximo observado para 5 mg/kg e estão restritos a mudanças nos comportamentos de tipo ansioso, e não depressivo. Para testar as hipóteses 2 e 3, foi desenvolvida uma experiência dividida em duas partes: uma para análise comportamental, e a segunda para análise epigenética. Para a primeira parte, foram usados 6 grupos de 20 murganhos C57BL6/J macho (10-12 semanas), definidos por um prétratamento com veículo ou antagonista (MDL100907, 0.5 mg/kg i.p.) e um tratamento subsequente com veículo, psilocibina (5 mg/kg) ou lisurida (0.8 mg/kg i.p.), 30 minutos após o pré-tratamento. Imediatamente após a segunda injeção, os animais foram colocados numa nova gaiola durante 20 minutos para quantificação de HTR. Após 7 dias, a bateria comportamental foi realizada da mesma maneira que na tarefa 1. Na segunda parte, foram usados 6 grupos de 6-7 murganhos C57BL6/J macho (10-12 semanas), definidos pelas mesmas condições. Estes animais foram tratados da mesma forma que os animais na primeira parte da experiência, sendo sacrificados após 7 dias, e os cérebros foram recolhidos para análise de alterações epigenéticas ao nível do hipocampo e do córtex pré-frontal medial (mPFC). A nível comportamental, a administração de psilocibina, mas não de lisurida, aumentou significativamente a frequência de HTR, e o pré-tratamento com MDL100907 bloqueou esse efeito. Em relação ao comportamento do tipo ansioso, tanto a latência para comer no NSFT como o número de berlindes enterrados no MBT diminuíram com o tratamento com psilocibina. Este efeito não foi observado em animais tratados com lisurida e foi bloqueado pelo prétratamento com MDL100907. No FST, que avalia comportamento do tipo depressivo, houve um aumento significativo na latência para o primeiro episódio de imobilidade nos animais tratados com psilocibina, sendo que este efeito não foi observado em animais tratados com lisurida e foi bloqueado pelo pré-tratamento com MDL100907. Nenhuma diferença induzida pelo tratamento foi observada no OFT ou ST. Em relação ao Z-Score, foi observada uma redução significativa da emocionalidade negativa no grupo tratado com psilocibina, que foi bloqueada pela administração de MDL100907. O resultado do Z-Score foi significativamente mais baixo no grupo tratado com psilocibina comparativamente à lisurida, o que indica que a lisurida não replicou o efeito geral da psilocibina. No que respeita às alterações epigenéticas, foi observada uma diminuição na acetilação de histonas no hipocampo no grupo tratado com psilocibina, mas nenhuma diferença foi observada no mPFC. Não foram observadas diferenças relativas à metilação de DNA, tanto no hipocampo como no mPFC. Os resultados mostram que uma dose de psilocibina induz alterações comportamentais e epigenéticas significativas e duradouras em murganhos saudáveis. Além disso, esses efeitos são bloqueados por MDL100907 e não são replicados por lisurida, sugerindo que a ativação de 5- HT2AR é necessária, mas não suficiente, para os efeitos a longo prazo da psilocibina. Estes resultados indicam que ainda não foi possível bloquear os efeitos psicadélicos da psilocibina sem anular o seu potencial terapêutico, e que é necessária mais investigação sobre os mecanismos associados a estas ações para poder desenvolver um fármaco que ative o mesmo recetor sem induzir alucinações.Psilocybin is a 5-HT2AR agonist, responsible for the psychoactive effects of psychedelic mushrooms. Recent studies have assessed the therapeutic potential of psilocybin for various conditions, including end-of-life anxiety and major depressive disorder. This work aims to assess the dose-dependency of the long-lasting actions of psilocybin and to determine if 5-HT2AR activation is necessary and/or sufficient for the actions of psilocybin. For the first task, C57BL6/J mice (n=12) received a single injection (saline, psilocybin 1, 5, or 10 mg/kg; i.p.) before being placed into a cage for a period of 20 minutes for HTR quantification. 7- days after injection, behavioral tests were performed to assess anxiety-like (NSFT, OFT, and MBT) and depressive-like behaviors (ST and FST). Z-Score normalization was used to generate a general index of emotional behavior. In the second task, mice (n=20) received two injections: an antagonist pretreatment (vehicle or MDL100907 [0.5 mg/kg], i.p.) and subsequent drug treatment (vehicle, psilocybin [5 mg/kg] or lisuride [0.8 mg/kg], i.p.), after 30 minutes. The same behavioral tests were performed, and the Z-Score was calculated. To assess the effects of psilocybin on epigenetic modifications, a separate cohort of mice (n=6/7) was treated as above and sacrificed after 7 days. DNA methylation and histone acetylation assays were performed on hippocampus and mPFC tissue. In Task 1, psilocybin administration increased HTR frequency at all doses, with a maximum effect at 5 mg/kg. There was a decreased latency to feed in the NSFT, at all doses, and fewer buried marbles in the MBT for the 5 and 10 mg/kg groups only. There were no significant differences in the OFT, ST or FST. At 5 and 10 mg/kg, there was a significant decrease in negative emotionality. In Task 2, psilocybin administration significantly increased HTR frequency. The latency to feed in the NSFT and the number of buried marbles in the MBT were decreased by psilocybin. In the FST, psilocybin significantly increased the latency to immobility. Psilocybin induced a significant decrease in negative emotionality, as well as on histone acetylation in the hippocampus. All the observed effects were not observed in lisuride- and MDL-treated animals. There were no significant treatment-induced differences in the OFT or ST, nor in DNA methylation. Results suggest that a single acute dose of psilocybin is enough to induce significant long-term behavioral and epigenetic changes in healthy mice, being largely restricted to changes in anxietylike behaviors. Moreover, these effects are blocked by MDL100907 and not replicated by lisuride, suggesting that 5-HT2AR activation is necessary, but not sufficient, for the long-term effects of psilocybin, which are reliant on a specific downstream pathway. More work is required to analyze the molecular and genetic consequences of psilocybin administration
Influência do envelhecimento na microdureza e resistência à flexão de resinas acrílicas de impressão 3D incorporadas com clorexidina
No full textObjetivo: Avaliar a influência de processos de envelhecimento químico e físico na microdureza, resistência à flexão e módulo de flexão de uma resina acrílica impressa em 3D com e sem incorporação de clorexidina (CHX).
Materiais e Métodos: Um total de 64 espécimes com forma de paralelepípedo (64 x 10 x 3,3 mm) foram fabricados utilizando uma resina para impressão 3D (Denture 3D+, NextDent®), com 0% e 2,5% de CHX (grupo experimental). Os espécimes de cada grupo foram divididos em 4 grupos: sem envelhecimento (controlo), envelhecimento físico, envelhecimento químico e envelhecimento químico e físico (n=8). O envelhecimento físico consistiu em 1700 ciclos de flutuações térmicas (5-55ºC). O envelhecimento químico envolveu a imersão dos espécimes em saliva artificial com pH=3 (8h/dia) e pH=7 (16h/dia) durante 60 dias. A microdureza foi avaliada mediante uma ponta diamantada Knoop e as propriedades de flexão através de um teste de resistência à flexão em 3 pontos.
Os resultados obtidos foram analisados através de testes não paramétricos de Kruskal-Wallis e testes de Mann-Whitney com correção de Bonferroni, e, mediante testes ANOVA de 2 dimensões, ANOVA de 1 dimensão seguida de testes post-hoc segundo Tukey e T-test. Considerou-se um nível de significância de 5%.
Resultados: O envelhecimento químico afetou a microdureza das resinas 0% (p=0,005) e 2,5% CHX (p=0,014), e em combinação com o físico a microdureza (p<0,001) e módulo de flexão (p=0,014) da resina 0% CHX, comparativamente aos grupos controlo.
A incorporação de 2,5% de CHX reduziu a microdureza dos controlos (p=0,010), e afetou a resistência à flexão, aumentando o módulo de flexão, para todos os tipos de envelhecimento (p<0,001).
Conclusões: O envelhecimento químico tanto isoladamente como combinado com o físico, afetou as propriedades analisadas. A incorporação de CHX (2,5%) reduziu a microdureza e a resistência à flexão da resina, aumentando o seu módulo de flexão.Objective: To evaluate the influence of chemical and physical aging processes on the microhardness, flexural strength and flexural modulus of a 3D printed acrylic resin with and without chlorhexidine (CHX) loading.
Materials and Methods: A total of 64 parallelepiped-shaped specimens (64 x 10 x 3,3 mm) were fabricated using a 3D printing resin (Denture 3D+, NextDent®) with 0% and 2,5% CHX (experimental group). The specimens in each group were divided into 4 groups: no ageing (control), physical ageing, chemical ageing and chemical and physical ageing (n=8). Physical ageing consisted of 1700 cycles of thermal fluctuations (5-55ºC). Chemical ageing involved immersing the specimens in artificial saliva at pH=3 (8h/day) and pH=7 (16h/day) for 60 days. Microhardness was assessed using a Knoop diamond tip and flexural properties using a 3-point flexural strength test.
The results obtained were analyzed using non-parametric Kruskal-Wallis tests and Mann- Whitney tests with Bonferroni correction, as well as 2-dimensional ANOVA, 1-dimensional ANOVA followed by Tukey post-hoc tests and T-test. A significance level of 5% was considered.
Results: Chemical ageing affected the microhardness of the 0% (p=0,005) and 2,5% CHX resins (p=0,014), and in combination with physical ageing the microhardness (p<0,001) and flexural modulus (p=0,014) of the 0% CHX resin, compared to the control groups.
The incorporation of 2,5% CHX reduced the microhardness of the controls (p=0,010), and decreased the flexural strength, increasing the flexural modulus, for all types of ageing (p<0,001).
Conclusions: Chemical ageing, both isolated and in combination with physical ageing, affected the properties analyzed. The incorporation of CHX (2,5%) reduced the microhardness and flexural strength of the resin, increasing its flexural modulus
Exposição: A Aleg(o)ria das Plantas
No full textTrabalho de projeto de mestrado, Cultura Científica e Divulgação das Ciências, 2025, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasAs plantas são organismos vivos que constituem um recurso natural e material inestimável
que deve ser cuidado e utilizado nas suas múltiplas potencialidades. É possível aprender a dialéticanatural das plantas e as estratégias que desenvolveram para se adaptarem às adversidades, de modoareproduzi-las, posteriormente, em modelos de produção. Assim, neste projeto de mestrado propõe-seo desenvolvimento de uma exposição denominada A Aleg(o)ria das Plantas que procura transmitir, através da arte e da tecnologia, um conjunto de características e estratégias desenvolvidas pelasplantas com potencialidades biomiméticas. Alguns dos elementos deste projeto resultamde estudosdesenvolvidos previamente por equipas de investigação que aplicaram modelos bioinspirados paraacriação de produtos. Por outro lado, existem elementos que podem servir como molde para a criaçãode tecnologias, materiais, e novos modos de pensar e relacionar-se com a natureza. Neste seguimento, tomou-se partido da arte e da tecnologia como formas de proporcionar uma experiência estéticasensitiva, reflexiva, de aprendizagem e exploração. A motivação deste projeto está enraizada na ideia de que podemos aprender comosorganismos à nossa volta. O objetivo principal da exposição é incentivar uma reflexão profunda sobreos organismos vegetais, apresentando-os como seres complexos e dinâmicos. A exposição de casos debioinspiração, biomimetismo e bio-utilização vegetal pretende valorizar o conhecimento adquiridoatravés da observação das plantas e convidar os visitantes a participar ativamente nesse processodeobservação e questionamento da natureza.Plants are an invaluable material resource that should be cared for and used to their full
potential. It is possible to learn about the natural dialectic of plants and the strategies theyhavedeveloped to adapt to adversity, in order to reproduce them later in production models. Thus, thismaster's project proposes the development of an exhibition called A Aleg(o)ria das Plantas (Plant’sAllegory), which seeks to convey, through art and technology, a set of characteristics and strategiesdeveloped by plants with biomimetic potential. Some of the elements of this project are the result of
studies previously carried out by research teams that applied bio-inspired models to create products. On the other hand, there are elements that can serve as a template for the creation of technologies, materials and new ways of thinking and relating to nature. In this context, art and technologyhavebeen used to provide an aesthetic experience that is sensitive, reflective, learning and exploratory. The motivation for this project is rooted in the idea that we can learn fromthe organismsaround us. The main aim of the exhibition is to encourage deep reflection on plant organisms, presenting them as complex and dynamic beings. The exhibition of cases of bio-inspiration, biomimicry and plant bio-utilization aims to enhance the knowledge acquired through observingplants and to invite visitors to actively participate in this process of observing and questioning nature