Jichi Medical University Institutional Repository

山﨑, 久隆

  
氏 名 山
やま
 﨑
さき
 久
ひさ
 隆
たか
 
学 位 の 種 類 博士 (医学) 
学 位 記 番 号 甲第 554 号 
学位授与年月日 平成 30 年 3 月 19 日 
学位授与の要件 自治医科大学学位規定第 4 条第 2 項該当 
学 位 論 文 名 動脈硬化形成におけるマクロファージのコレステロールエステルの生
成と水解の意義 
論 文 審 査 委 員 (委員長) 教 授 岡 崎 仁 昭   
 (委 員) 教 授 古 川 雄 祐 准教授 中 田 正 範 
      
 
論文内容の要旨 
1 研究目的 
マクロファージの泡沫化は動脈硬化の治療標的になりうる。アシル CoA：コレステロールアシ
ルトランスフェラーゼ 1(ACAT1)は遊離コレステロール(FC)をエステル化してコレステロールエ
ステル(CE)を生成し、逆に中性 CE 水解酵素 1(NCEH1)は CE を加水分解し FC を生成する。
ACAT1 の活性調整および NCEH1 の活性調整は動脈硬化病変の形成を阻止する可能性がある。
本研究では培地に修飾 LDL を添加すると、野生型マクロファージに比して NCEH1 欠損マクロ
ファージで CE を蓄積し、ACAT1 欠損マクロファージで CE の蓄積が抑制するか否か、in vivo
においても NCEH1 の欠損で悪化する動脈硬化病変が ACAT1 の欠損によって軽減するかどうか
を検証した。 
 
2 研究方法 
野生型、ACAT1、NCEH1 および ACAT1/NCEH1 二重欠損マウスのチオグリコール酸誘導腹
腔マクロファージ(MPM)を採取し、アセチル LDL 添加条件における 14C 標識オレイン酸から生
成される CE を定量し、CE 生成能を評価した。また、放射線照射した 8 週齢雌 LDL 受容体欠損
マウスに野生型、ACAT1、NCEH1 および ACAT1/NCEH1 二重欠損マウスの骨髄細胞を移植し
た。4 種類のマウスに高コレステロール食を 3 か月負荷し、体重・血漿脂質・動脈硬化を評価し
た。動脈硬化の横断面において Oil red O、HE、Movat’s pentachrome、Masson trichrome 染色
を行い組織学的評価を行った。 
 
3 研究成果 
NCEH1 欠損 MPM は野生型 MPM に比し CE 生成能の増加が認められた。一方、ACAT1 欠損
MPM と ACAT1/NCEH1 二重欠損 MPM は CE 生成能はほとんど認められなかった。In vivo で
は体重と血漿脂質は 4 群間に差は認められなかった。NCEH1 欠損骨髄移植マウスの動脈硬化病
巣面積は野生型骨髄移植マウスに比して増悪した。一方、ACAT1/NCEH1 二重欠損骨髄移植マウ
スは野生型や ACAT1 欠損骨髄移植マウスと同等レベルまで改善した。NCEH1 欠損骨髄移植マ
ウスの Oil red O 陽性割合、マクロファージ陽性割合、Necrotic core 陽性割合は野生型骨髄移植
マウスと比して有意に増加した。ACAT1 欠損骨髄移植マウスと ACAT1/NCEH1 二重欠損骨髄移
植マウスではムチン陽性割合やコラーゲンの陽性割合が増加した。 
 
4 考察 
NCEH1 欠損骨髄移植マウスで増悪した動脈硬化病巣面積は ACAT1/NCEH1 二重欠損骨髄移
植マウスで改善した。同様に NCEH1 欠損骨髄移植マウスで増悪を認めた Oil red O 陽性割合、
マクロファージ陽性割合、Necrotic core 陽性割合も ACAT1/NCEH1 二重欠損骨髄移植マウスで
改善した。これら動脈硬化病変の in vivo の変化は、NCEH1 欠損によって MPM で増加した CE
生成が ACAT1 欠損によって相殺されるという in vitro の結果とよく符合する。 
 一方、ACAT1 欠損骨髄移植マウスの動脈硬化病巣には、ムチンやコラーゲンの増加が認められ
た。この現象は血管平滑筋細胞からのそれぞれの物質の分泌の増加を示唆する。コラーゲンには
プラークの安定化作用が提唱されている。従って、ACAT1 の阻害は、泡沫細胞の形成が支配的で
ある NCEH1 欠損のような状態では、泡沫細胞数の減少やコラーゲン沈着の増加を介し、動脈硬
化抑制的に働く可能性が高いと考えられた。進展病変を有する患者を対象に実施されたこれまで
の臨床試験においては、ACAT1 阻害薬の有用性は証明されていない。しかし、泡沫細胞が病巣の
中心病理である早期病変に対しては ACAT1 阻害薬が有用である可能性が残されている。また、
NCEH1 の活性誘導も泡沫化抑制を介して早期動脈硬化病変の形成を阻止する可能性がある。今
後これらの仮説の臨床的な検証が期待される。 
 
5 結論 
骨髄由来細胞における ACAT1 の欠損は、NCEH1 欠損による CE 加水分解不全に起因する動
脈硬化病変の悪化を改善する可能性がある。 
 
論文審査の結果の要旨 
研究目的、研究方法ともに明確であった。すなわち野生型、ACAT1、NCEH1 および
ACAT1/NCEH1 二重欠損マウスを用いる実験系で、ACAT1、NCEH1 の in vivo での役割を明確
にするものである。 
 ACAT1 の阻害は、泡沫細胞の形成が支配的である NCEH1 欠損のような状態では、泡沫細胞
数の減少やコラーゲン沈着の増加を介し、動脈硬化抑制的に働く可能性を示した。進展病変を有
する患者を対象に実施されたこれまでの臨床試験においては、ACAT1 阻害薬の有効性は証明され
ていないが、泡沫細胞が病巣の中心病理である早期病変に対しては ACAT1 阻害薬が有効である
可能性が示唆された点は、高く評価される。 
 以上から、骨髄由来細胞における ACAT1 の欠損は、NCEH1 欠損による CE 加水分解不全に
起因する動脈硬化病変の悪化を改善する可能性を示した点は、独創性が高いと評価された。 
 
最終試験の結果の要旨 
プレゼンテーションは、明快で分かりやすかった。 
各委員からの基礎から臨床応用に関する質問にも適切に答えることができた。 
ノックアウトマウスを作成する過程、in vivo での実験系の困難さを克服し、結果を出した点も
評価された。 
臨床応用に関する指摘も、適切に修正された。 
以上から、最終試験の結果は合格と判定された。 


Japanese

動脈硬化形成におけるマクロファージのコレステロールエステルの生成と水解の意義

室崎, 貴勝

  
氏 名 室 E
む ろ
AAE﨑 E
さ き
A AE貴 E
た か
AAE勝 E
ま さ
 
学 位 の 種 類 博士 (医学) 
学 位 記 番 号 乙第  748 号 
学位授与年月日 平成  30 年 2 月 15 日 
学位授与の要件 自治医科大学学位規定第 4 条第 3 項該当 
学 位 論 文 名 関節リウマチにおける赤血球中 MTX-PG 濃度と MTX の有効性について
の検討 
論 文 審 査 委 員 (委員長) 教授 寺 井 千 尋 
 (委 員) 教授 山 田 俊 幸    准教授 相 澤 健 一 
  
 
論文内容の要旨 
1 研究目的 
メトトレキサート (MTX) を使用する関節リウマチ患者 (RA) において、赤血球中ポリグルタ
メート型メトトレキサート (MTX-PG) を用いて pharmacokinetics と pharmacodynamics を調
べ、治療効果との関連性を検討する。 
 
 
2 研究方法 
42人のMTXを新規導入したRAの患者において24週間、高速液体クロマトグラフ (HPLC) で
赤血球中MTX-PGの測定を行った。12週以上同じ用量でMTXを継続した 56人のRAの患者で、
MTX 用量と赤血球中 MTX-PG の関連性を調べた。MTX-PG は MTX と結合しているグルタミン
酸の数で MTX-PG1, MTX-PG2, MTX-PG3, MTX-PG4, MTX-PG5 と分けられる。臨床効果は、
DAS28CRP の変化量 (ΔDAS28CRP) で確認した。 
 
 
3 研究成果 
MTX の用量と MTX-PG3 と MTX-PG4 と MTX-PG5 で中等度の相関を認めた。24 週時点で、
MTX-PG2 と MTX-PG3 と MTX-PG4 と MTX-PG1-5 (MTX-PG1, 2, 3, 4, 5 の総和) は、
ΔDAS28CRP > 1.2 を達成した群の方が、≤ 1.2 の群よりも優位に高かった。24 週時点での
ΔDAS28CRP > 1.2 と≤ 1.2 を分ける MTX-PG1-5 の cutoff 値は 68.7 nM であった。開始 8 週時
点で MTX-PG1-5 > 50.6 nM の 20 例のうち、8 週の時点で 7 例は改善が得られており、24 週時
点で更に 11 例に改善が見られた (p < 0.001)。対照的に、開始 8 週時点で MTX-PG1-5 ≤ 50.6 nM 
の 9 例のうち、8 週時点で改善が見られた例はなく、24 週時点でもたった 1 例しか改善を認めな
かった (p = 0.500)。 
 
 
4 考察 
今回の検討で赤血球中 MTX-PG 濃度に MTX の用量が関与するが、中等度の相関であり、その
他の変数の影響について今後多変量解析で検討する必要がある。有効な MTX-PG1-5 濃度である
68.7 nM は、欧米での既報に近い値であった。開始 8 週時点で MTX-PG1-5 > 50.6 nM に達するか
で、24 週での臨床効果が予測できる。 
 
 
5 結論 
赤血球中 MTX-PG は MTX の効果の指標となり、将来の臨床効果の予測にも有用である。 
 
 
 
 
論文審査の結果の要旨 
 
関節リウマチ治療のキーになる薬剤であるメトトレキサート（MTX）の効果予測マーカーの候
補としての赤血球中のメトトレキサート・ポリグルタメート（MTX-PGs）濃度と臨床効果につい
ての研究である。研究は MTX 一定量を長期（12 週以上）使用している患者で MTX 投与量と
MTX-PGs の関連をみる横断的研究と、MTX 使用開始時から前向きに経時的に MTX-PGs を測定
し臨床効果との関連をみた縦断的研究の二つからなる。MTX-PGs の測定は HPLC を用い測定自
体は研究協力者によるもので、申請者は検体を収集し HPLC の測定結果と臨床効果などの関係を
統計的に解析した。 
同様の研究は海外ではいくつか報告されているが日本人を対象としたものでは最初である。本
法を日常臨床に応用するには設備・経費面で問題が多いと思われるが、MTX 投与量と MTX-PGs
濃度には関連がないこと、MTX 投与 8 週後の MTX-PGs により 24 週後の臨床効果を予測できる
とする結果は説得力があり意義のある研究と考えられる。 
すでに査読のある雑誌に掲載されており全体に大きな問題はないが、日本語化した論文では文
章の重複や説明不十分な点などがありその訂正を要請した。 
以上の点を含めて委員からの指摘部分が修正され、本論文を全員一致で合格と判定した。 
 
 
 
試問の結果の要旨 
 
研究内容のプレゼンテーションにおいて、まず関節リウマチの一般的な説明の後に、治療のキ
ーとなる MTX の作用機序・代謝を説明し、その後研究内容の解説となった。スライド図表は概
ね明瞭でわかりやすく、説明も過不足無く行えていた。質疑応答においては、臨床的部分につい
ては委員の質問に適切に回答することができたが、基礎的な質問には答えられないことがあり、
基礎的知識が不十分で十分に理解できていないと考えられた。すなわち赤血球内 MTX-PGs は数
ヶ月の間に徐々に増加しプラトーに到達するが、これは骨髄において有核赤血球の時にMTX-PGs
が作られるのであって成熟赤血球では作られないのではないか、そのため赤血球寿命との関係で
このような増加曲線になるのではないか、あるいは成熟赤血球も MTX や葉酸の取り込みや排出
を行うのかなどの質問には答えられなかった。そこでこれらの質問には論文修正時に回答するよ
うに申し渡し、実際に基礎的事項を調べ直して質問に答えることができた。 
事後の勉強で指摘された質問にも回答できており、論文の内容とあわせて、試験委員全員一致
で合格と判定した。 
 
 


関節リウマチにおける赤血球中MTX-PG濃度とMTXの有効性についての検討

富岡, 容子

  
氏 名 富岡 E
とみおか
A AE容子 E
よ う こ
 
学 位 の 種 類 博士 (医学) 
学 位 記 番 号 乙第  749 号 
学位授与年月日 平成  30 年 6 月 21 日 
学位授与の要件 自治医科大学学位規定第 4 条第 3 項該当 
学 位 論 文 名 フレキシブル多点モニターを用いた組織局所血流の評価 
論 文 審 査 委 員 (委員長) 教授 谷 口 信 行 
 (委 員) 教授 北 山 丈 二    教授 西 村  智 
  
 
論文内容の要旨 
１ 研究目的 
 今日、近代医学において組織移植は整容的や機能的再建のために欠かせない手技の一つとなっ
ている。遊離組織移植術の成功率は 90-99%と高い数値が報告されているものの、術後の血流障害
がゼロということはなく、組織救済と治療の成功のためには血流障害の早期発見と緊急の救済手
術が必要とされる。本研究ではウェアラブルな多点脈波センサーを開発し、その有用性、すなわ
ち組織血流の障害を検出できるかについて動物モデルとヒトモデルを用いて検証した。さらには
健常者において 24 時間 7 日間の連続測定に関しても検証した。 
 
 
２ 研究方法 
 薄膜の基盤に可視光を用いた脈波センサーを列状に配置することで、極軽量のモニターを実現
した。血流障害モデルとして、ラットの鼠径皮弁を作成しその責任動脈/静脈を結紮することで虚
血／鬱血状態を再現した。健常者においては手掌において橈骨動脈と尺骨動脈を圧迫することで
虚血状態を再現し、皮静脈の圧迫によって鬱血状態を再現した。得られた脈波は周波数解析した。 
 
 
３ 研究成果 
 動物モデルと健常者モデルの双方において有意差を持って脈波の出力が低下し、さらに健常者
においては 24 時間 7 日間の連続測定に成功した。 
 
 
４ 考察 
 これまでに術後の血流をモニターする手法として、SpO2 モニター、NIRS、レ ーザードップラ
ー、血糖測定、LSCI、サーモグラフィー等が近年報告されているが、これらは虚血あるいは鬱血
状態を検出するのに有用であるものの、両方を検出することはできない、あるいは検者が機器を
かざす必要があり持続モニタリングに適さない等の課題を抱えるために未だゴールドスタンダー
ドとなる機器はない。このためスタッフによる数時間置きの診察が必須であり、患者、医療者、
医療経済に負担を強いていた。本デバイスにおける測定素子は、フレキシブルな基盤の上に 1cm
間隔で置かれているため、多点性、多項目性、携帯性（ウェアラブルであり、小型であり、無線
通信を採用している）を満たす持続モニタリングである。さらに部分的な血流も可視化できる点
や全範囲における血流の分布表示ができる点において重要である。 
 
 
５ 結論 
 本研究ではフレキシブルであり、多点である脈波モニタリングデバイスを世界で初めて開発し
た。動物モデル、健常者においてそれぞれ虚血、鬱血モデルで血流障害の検出に成功し、その有
用性を実証した。また、健常者の 1 週間装着データも取得し、臨床応用の実現性を立証した。こ
の技術を応用すれば、患者の行動を制限せずに血流を可視化するモニタリングシステムが構築で
きる。 患者の行動を制限しないことは、術後の深部血栓やせん妄を予防する点においても重要で
ある。今後臨床研究によってその有用性を立証する予定である。 
 
 
 
論文審査の結果の要旨 
 
フレキシブルモニターを開発して局所血流の評価を行ったもので、形成外科での組織移植の際
に発生する虚血・うっ血を非侵襲的かつ迅速に評価可能であることを示した。これまでの手法に
比べ、迅速、非侵襲的、連続的であるだけでなく、虚血とうっ血の両者を評価できる点、センサ
ーが易変形性である長所と手法の新規性を有する。ただし、研究テーマが「可視化」となるよう
に将来的な方向を示しているが、今回の申請内容は「評価」であり題の変更が好ましいとの指導
を行った。 
本申請論文は、申請者が提案したフレキシブルモニターの機能、対象方法の説明、動物実験、
ヒトを対象としたデータ取得、それらの結果および考察について、いずれも適切になされており、
その内容は本学の学位論文として、十分なものとして、全員一致で合格と判定した。 
 
 
 
試問の結果の要旨 
 
指定時間内に、測定機器と結果、その長所と従来の手法との比較などについて分かりやすく説
明した、適切な発表であった。 
審査員から、測定機器について、直接どの部分の作製に関わったのかとの質問に、申請者が臨
床的有用性に基づきフレキシブルな形の提案を行い、それにもとに作製されたことを述べた。周
波数解析を行った 570nm を使用した根拠、特許との関連、他の手法と比較した臨床試験などの質
問があったが、いずれも明確に答え、研究領域に関連する知識が深いことがうかがわれた。 
本申請論文部に関する発表は、方法、内容とも学位論文とするに十分であることが、審査委員
の一致した意見であった。 


フレキシブル多点モニターを用いた組織局所血流の評価

浜端, 賢次

地域住民と多職種で取り組むフレイル対策

岡島, 美朗

精神腫瘍学②

Boonvisut, Supichaya

  
氏 名 Boonvisut
ブ ー ン ウ ィ ス ト
ESupichayaE 
ス ピ チ ャ ヤ ー
 
学 位 の 種 類 博士 (医学) 
学 位 記 番 号 甲第 513 号 
学位授与年月日 平成 28 年 3 月 22 日 
学位授与の要件 自治医科大学学位規程第 4 条第 2 項該当 
学 位 論 文 名 血清脂質と非アルコール性脂肪肝疾患関連染色体領域における遺伝的 
探索 
論 文 審 査 委 員 (委員長)  教 授 加 計 正 文 
 (委 員)  教 授 遠 藤 仁 司  教 授 長 嶺 伸 彦 
  
 
論文内容の要旨 
1 研究目的 
My initial study aimed to identify responsible gene(s) in NCAN-CILP2 region for lipid 
metabolism, in which rs16996148 near to CILP2 showed deep association with plasma cholesterol and 
triglyceride. However, during the study several papers were published suggesting responsible gene in 
this region with deep evidence, so the direction of this study was changed into further genetic study of 
the newly found responsible gene in NCAN-CILP2 region. This study consists of two parts. First part 
aimed to replicate the association between polymorphisms in NCAN-CILP2 region, including the 
robust target gene; TM6SF2, and serum lipid levels in Asian and Pacific population. The association 
between these polymorphisms and risk of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) was also studied 
in Japanese. The second part is to identify the rare variants in TM6SF2 and the other suggestive gene 
involved in very low density lipoprotein (VLDL) secretion in hepatocytes, PNPLA3 and MTTP, to 
know the effect sizes of the rare variants and possibility of those involvements in the development of 
NAFLD in Japanese. 
 
2 研究方法 
The first experiment was studied by single-nucleotide polymorphisms association analysis. 
Samples were collected from 3,013 Japanese, 119 Palauan, 947 Mongolian, 212 Thai and 401 Chinese 
people. Every sample were attached with participant data of age, sex, alcohol consumption (obtained 
by self-questionnaire), body mass index (BMI), and levels of plasma triglyceride (TG), total 
cholesterol, low-density lipoprotein cholesterol (LDL), and high-density lipoprotein cholesterol 
(HDL-c) (mg/dl) were collected. For Japanese sample, hepatic sonography data, bright liver or not, 
were simultaneously obtained for fatty liver evaluation. The five SNPs of the NCAN-CILP2 Linkage 
disequilibrium (LD) block; rs58542926 (most adjacent gene; TM6SF2), rs735273 (TM6SF2), 
rs1009136 (MAU2), rs1858999 (GATAD2A), and rs16996148 (CILP2), were chosen, and were 
genotyped by the TaqMan Genotyping Assay Systems (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). 
The effect and association between the studied minor alleles and four serum lipid levels; TG, total 
cholesterol, LDL, and HDL, in each Asian and Pacific population was calculated by multiple linear 
regression analysis separately in each ethnic group. Age, sex, and BMI were included for adjustment 
as covariant factors. The risk of developing NAFLD of the five variants in the Japanese population 
were evaluated by logistic regression analysis after excluding data of participants who had excessive 
alcohol consumption (>20g/day) history. Logistic regression analysis was applied with adjustments for 
age, sex, BMI, and type 2 diabetes mellitus (DM2). All statistical analyses were performed with SPSS 
software. Haplotype and allele frequency were calculated and the pairwise LD structures were drawn 
by Haploview software. 
In the second experiment, non-alcoholic abuse 950 males were chosen from the genome 
DNA panel of Japanese as a discovery panel. To identify rare variants in all around the exons of 
TM6SF2, MTTP, and PNPL3 in Japanese, deep re-sequencing was performed using a next generation 
sequencer. The next generation sequencing was designed to use two-set multiplex PCR targeting 34 
amplicons and tagging with MID for grouping each 48 samples as library to perform in one run. The 
sequencing was operated by 454 GS Junior system. Mapping and alignment was executed by CLC 
workbench software. Suspected mutated variants were confirmed by direct sequencing. Confirmed 
non-synonymous variants observed in over one person in the discovery panel were further genotyped 
using TaqMan probes in 3013 Japanese panels. Logistic regression analysis was applied with age, sex, 
BMI, rs738409, rs58542926 and diabetes mellitus type 2 (DM2) adjustments. Linear regression 
analysis was performed for correlation with log-transformed serum triglyceride (LogTG). All 
statistical analysis was calculated by SPSS software. 
 
3 研究成果 
Linear regression analysis revealed that rs58542926, which is a non-synonymous SNP in 
TM6SF2, had significant association with the plasma triglyceride (TG) level in Japanese and Thai 
studied population. In Mongolian population, there was a significant association of rs58542926 with 
total cholesterol level, but not with TG level. Weak association with TG levels was also found in 
Chinese population, although it didn’t reach the statistical significance threshold. In Palauan 
population, there was no significant association with the studied SNPs. Other polymorphisms showed 
some association with lipid levels in Asian and Pacific population also. However, overall, their effects 
were lesser than rs58542926. Minor Allele of rs58542926 also showed significant association with 
ultrasonographical bright liver in Japanese population. rs735273 and rs1009136 were also found 
related to risk of developing NAFLD, but the associations were weaker than that of rs58542926. 
Linkage disequilibrium structures of all studied ethnic population were similar to each other. The map 
showed strong linkage disequilibrium, high r P2 P values, among the middle three SNPs, rs735273, 
rs1009136, and rs1858999. Contrastingly, they showed weak LD with the most telomeric side SNP, 
rs58542926, even rs58542926 and rs735273 are only 5.8 kb away from each other. rs58542926 instead 
showed a moderate r P2P score with the most centromeric side SNP, rs16996148, which 289 kb distance 
lies between. 
From next generation sequencing and direct-sequencing confirmation of TM6SF2, MTTP 
and PNPL3 coding region in male Japanese without alcohol-abuse history, total number of discovered 
rare variants (allele frequency <0.01) were 29. Among them, a splicing acceptor site variant (ag>tg) in 
TM6SF2 and frame shift variant (Pro322Fsh) in PNPLA3 were estimated to be definitely damaging. 
Ten variants were synonymous, 16 were non-synonymous substitutions and one was a base 
substitution adjacent to splicing acceptor site. Eight variants in 16 non-synonymous substitutions and a 
variant adjacent to splicing acceptor site were detected in multiple samples and were already deposited 
in dbSNP. To evaluate the genetic association with NAFLD and plasma lipid levels, the nine SNPs and 
rs738409 (Ile148Met, PNPLA3) and rs58542926 were genotyped using TaqMan probes. Among the 
found rare variations, two missense SNPs, rs143392071 in MTTP and rs756998920 in PNPLA3 and 
rs148469440, a splicing acceptor site SNP in PNPLA3, were significantly associated with NAFLD. 
Rare missense variants of TM6SF2 showed no statistical significance with NAFLD. 
 
4 考察 
Rs58542926 of TM6SF2 was significantly associated with plasma lipid levels in different 
ethnic individuals. Despite the higher minor allele frequency in Palauan individuals, rs58542926 was 
not associated with lipid levels. Cause of the lack of association was probable a small population size, 
other ethnic-specific characteristic liked higher prevalence of type 2 diabetes, obesity, and differences 
in dietary fat intake. The other possibility is population-dependent preference to associated lipid 
fraction of this polymorphism, which was also observed in previous studies in European descendants. 
Further population genetic studies are required to determine if the higher prevalence of the Lys167 
allele in the Palauan population is a consequence of natural selection or simple genetic drift.  
Minor allele of rs58542926 also increased the risk of NAFLD. Although the exact 
biochemical function of TM6SF2 protein has not yet been revealed, it has been proposed that TM6SF2 
is expressed in hepatic endoplasmic reticulum membrane and involved in VLDL secretion. Knocking 
down of Tm6sf2 expression in mouse liver reduced cholesterol and TG levels in mouse plasma and 
increased hepatic lipid droplet content. The substitution of Glu167lys causes misfolded TM6SF2 
protein degradation and disturbs lipid transportation in hepatic cell. Our genetic results support the 
theory that the SNP induced a change of the physiological function of the TM6SF2 gene.  
Next generation sequencing followed by TaqMan genotyping revealed three rare SNPs, 
rs143392071 and rs148469440 (PNPLA3) and rs756998920 (MTTP), which associated with NAFLD 
in Japanese. Although minor allele of rs143392071 increased NAFLD risk, the minor allele of 
rs756998920 reduced NAFLD risk. The minor allele of rs756998920 also reduced plasma triglyceride 
level, same as rs5852926, suggesting the disturbance of VLDL secretion. If these rare SNPs are proved 
to be associated with NAFLD, the possible mechanism of enhancing lipid accumulation in hepatic 
cells will be suggested to be different. Comparing to the common SNP, rs738409 (odds ratio 
(OR)=1.66) and rs58542926 (OR=1.8), the discovered three SNPs showed higher impact on the 
development of NAFLD (OR=3.13-3.52). Although, the functional assessments of the rare alleles are 
not easy to complete, Functionally supported rare variants may provide a clue to resolve a genetic 
issue, ‘missing heritability in common disease’. 
 
 
5 結論 
I replicated the genetic association of NCAN-CILP2 region with serum lipid level in Asian 
and Pacific ethnic population and NAFLD in Japanese. A missense SNP in TM6SF2, rs58542926, was 
most significantly associated with plasma lipid levels and NAFLD instead of rs16996148. Through the 
survey of rare variants of NAFLD associated genes, three variants were identified to be involved in the 
disease. 
論文審査の結果の要旨 
非アルコール性脂肪肝の原因検索としての遺伝子検索と SNPs 解析を東アジアや西太平洋国の
住民を対象に解析し、日本人に見られる脂肪肝リスクとして rs58542926 の missense SNP が関
連因子として重要であることを報告した。更に 3 つの gene が NALFD と関連していることも報
告した。 
学位論文としての適正を各委員から質問を含めて評価し、学位論文として十分な内容であるこ
とを全員一致で賛成した。 
最終試験の結果の要旨 
審査委員から以下の質問が出された。 
１． サンプルボリュームにばらつきがあり特にそのタンパクには影響しないSNPs に Palau のｎ
が少ないが、これが統計結果に影響している可能性はないか。 
２． 集められたデータの人達の生活背景（例えば都市部にすんでいるのか、地方に住んでいるの
か等）によって脂質プロファイルは異なるがその背景の均一性はみているのか。 
３． タンパク質機能に影響のある rs58542926 が Palau グループで脂質に影響していないのはな
ぜか。 
４． 実験２でなぜこの３つの遺伝子を選んで、リシーケンス解析をしたのか。 
５． なぜ男性のみでリシーケンス解析したのか。また、得られた SNPs に性差があるのか。 
６． ３つの gene のタンパク質の domain structure を示した方がいい。 
７． 一般的に intron SNPs はタンパク構造には影響しないが、なぜこれらの SNPs が疾患表現に
影響するのか。 
８． これらの３つのタンパクの構造と機能についての論文等はあるのか。 
９． 日本人で脂肪肝の診断に超音波検査でブライトリバーの有無のみで診断してよいのか。 
１０． Abbreviation list を記載すべきである 
１１． Table 9 がない。 
１２． アミノ酸表記EはGlutamineではなく、glutamateかglutamic acidと書くべきである。 
 
以上の質問や指摘がされて、質問への回答は妥当であると判断され、審査委員の全員一致で合格
と判定した。 


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