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Stunning and slaughter methods in gilthead seabream: animal welfare and muscle quality
No full textEuropean Union directives and international guidelines emphasise the need for humane slaughter practices, with particular attention to the proper stunning of fish prior to slaughter. This study investigates the impact of various combinations of stunning and slaughter methods on the welfare of gilthead seabream (Sparus aurata), a widely farmed species in the Mediterranean and Black Sea regions. Specifically, the study explores electrical stunning, anaesthesia, and no stunning, followed by slaughter using either ice-slurry or the ikejime (hand-held spike tool) technique. Fish were monitored for visual signs of consciousness, heart rate, internal temperature, plasma stress and osmotic parameters, and muscle quality parameters. The findings revealed that electrical stunning, although inducing brief unconsciousness, did not sustain it long enough to be effectively combined with ice-slurry, resulting in stress responses and muscle quality parameters comparable to those observed in unstunned fish. In contrast, anaesthesia effectively reduced stress and improved meat quality. The ikejime technique, despite its labour-intensive nature, demonstrated significant advantages, including reduced physiological stress and superior muscle quality outcomes. These results suggest that the viability of electrical stunning as a humane option for industry implementation has important limitations, while ikejime, with further refinement and automation, could offer a humane and effective solution to optimise both animal welfare and meat quality in industrial settings.EMBRC.PT ALG-01-0145-FEDER022121, and project INOVAQUA (MAR-021.1.3-FEAMPA-00004
A review of research into lifestyle mobilities and digital nomadism
No full textLifestyle mobilities refers to ways of life oriented around ongoing geographic mobility. This article first provides a history of lifestyle mobilities and how it is analytically distinct. We turn to the state-of-the-art in lifestyle mobilities research through a focus on digital nomadism. Our emphasis is on lifestyle mobilities’ relevance for tourism, its infrastructure and politicisation – via geopolitics, geoarbitrage and gentrification, and the need for greater research diversity. We map a future research agenda centred on tensions of transitioning out, precarity and emplacement. The article also launches the Annals of Tourism Research Curated Collection on lifestyle mobilities. The Collection contains all past articles published in Annals of Tourism Research on the topic, and continues to grow as new articles are added
A Santacrucian record of Acarechimys minutus (Octodontoidea) from Laguna del Laja (Cura-Mallín Formation, Chile; late Early Miocene) and its biogeographic implications
No full textThe fossil record of pre-Quaternary continental mammals from Chile remains less well-documented than that of neighboring Argentina and Bolivia. Among the most promising successions is the Miocene Cura-Mallin Formation at Laguna del Laja (37.5 degrees S), which preserves diverse mammalian assemblages spanning nearly 10 million years. One of the rodents previously reported from this locality is Acarechimys, a small octodontoid widely documented in Late Oligocene to Late Miocene continental deposits of South America. However, records from Laguna del Laja were based exclusively on fragmentary and undescribed material, leaving their taxonomic identity uncertain. Here, we describe a Santacrucian (late Early Miocene) occurrence of a caviomorph rodent from Laguna del Laja, represented by a partial mandible preserving m1-m3 and a fragment of the dp4. Dental traits, including a laterally compressed lower incisor and a developed posterior arm of the metaconid, support referral to Acarechimys minutus. This well-dated record provides a stratigraphically constrained occurrence of the species in south-central Chile and narrows the geographic gap between Chilean localities of Chucal in the north and Aysen in the south. The new evidence supports the hypothesis that the Laguna del Laja assemblage was not fully endemic, but rather integrated into the broader Santacrucian biogeographic continuum, reinforcing its value as a key reference point for Neogene faunal and biogeographic studies in the south-central Andes.1151146, 3220078, 3240196, 561
Spatiotemporal patterns and environmental drivers of Physalia physalis strandings along mainland Portugal (northeastern Atlantic)
No full textPhysalia physalis is a cosmopolitan colonial organism frequently observed in Portuguese waters. The species has long tentacles, provided with cnidocytes, which release a strong poison when in contact with other organisms, and cause skin reactions and severe pain in humans. Events of rapid reproduction, common in these species, may have important economic and social consequences. This study explores for the first time, the relationships between long-term assessment of P. physalis strandings, using data from the GelAvista citizen science project, and environmental variables - Sea Surface Temperature (SST), wind direction and intensity, the North Atlantic Oscillation (NAO), and upwelling indices - along the Portuguese coast, using a Generalized Linear Mixed-Effects Model. Strandings of P. physalis were concentrated along the western coast and were rare in the south. More than 54 % of the records corresponded to a single individual. Sightings peaked from November through May (winter and spring), mirroring the negative correlation with SST. Wind patterns strongly influenced stranding events: winds likely pushed colonies toward the shore, while calm conditions facilitated their arrival on beaches. In March 2018, an upwelling event in the south coast combined with a series of storms likely underlay the high stranding numbers observed in the southern area, with more than 50 individuals of P. physalis per record. A positive trend in sightings over the study period suggests that P. physalis occurrences may be rising, even after accounting for wind and SST, which might be linked to climate change. Our findings underscore the value of ongoing jellyfish monitoring via citizen science platforms like GelAvista and highlight the need for expanded high-resolution environmental datasets. Moreover, this work establishes a foundation for experimental studies to elucidate the mechanisms behind P. physalis strandings. For future research, time series techniques for imputing missing values may be utilized to enhance the completeness of environmental datasets and strengthen analytical robustness in subsequent studies focused on time series analysis.UID/PRR/04106/202
LINA: an augmented reality social game enhancing sense of belonging among classmates: an uncontrolled pre-post evaluation study
No full textSupportive peer relationships are fundamental in the development of well-being. Since early adolescents spend a lot of time at school, especially in their classroom, a sense of belonging among classmates plays a pivotal role for mental health and academic functioning. Programs that enhance sense of belonging among classmates through improving peer relationships in classrooms are rare. Given that early adolescents increasingly use digital media to establish and maintain relationships with classmates, there is potential in digital social games that enhance social connectivity and collaboration, especially during the difficult transition from primary to secondary school. LINA ('Lina Is Not Alone') is a novel social augmented reality game for classrooms that is designed to enhance sense of belonging among classmates through improving their relationships with classmates. We conducted an uncontrolled pre-post evaluation study to evaluate (a) player experience, (b) translation of the theory-led LINA design into user experience and (c) increases in sense of belonging after engagement with LINA. In total, data from 99 participants (Mage = 10.94; range = 10-12; 51 girls, 48 boys) were included in this study. Our results provided evidence for (a) high satisfaction and acceptability of LINA, (b) a successful translation of theory-led design features into user experiences, and (c) increases in sense of belonging. We discuss practical implications and future development of LINA
Researching global, national and local adult education policies and actors
No full textToday’s global phenomena, such as climate change, health and biodiversity threats, and environmental degradation, intertwine with new and long-standing societal challenges. These include migration movements, conflicts, wars, hate crimes, as well as the deepening of old inequalities (e.g. class, gender, age, ethnic identities, among others) (Benavot et al., 2022), and new social and economic cleavages, such as the digital or energy divide. These trends have deepened the complexity of inequality both within communities and between the Global North and the Global South (Stanistreet et al., 2021).
Moreover, the technologisation of societies through the fast-growing power of artificial intelligence, as well as ill-working labour markets and outdated welfare models exerts additional pressure on policy-makers in democratic contexts. This pressure contributes to shaping policy agendas while providing room for populist and right-wing actors to raise their voices and gain political power, with potential long-lasting effects of social policies, including adult education policies
Trophic group responses to marine reserve protection in temperate and tropical reefs: a systematic review and meta-analysis
No full textMarine reserves impact not only exploited species but also other groups, highlighting broader ecological effects within marine communities. While some of these effects are well documented, comprehensive assessments of overall reserve impacts on functional guilds and community structure remain limited. Our systematic review and meta-analyses used structural metrics to test global patterns across 138 tropical and temperate reef reserves, covering seven fish and invertebrate trophic groups and 11 macroalgae and coral morphological groups (99 studies, 679 response-ratio values). In tropical reserves, herbivorous fish presented the highest positive response, followed by carnivores. Potential indirect negative effects may result from predatory fish reducing herbivorous invertebrates and herbivorous fish decreasing macroalgae. Coral cover was higher inside reserves, while algal cover declined. In temperate reserves, herbivorous invertebrate declines did not appear to consistently affect macroalgae, indicating context-dependent outcomes. These results suggest both direct and indirect effects of protection, contributing to valuable insights for ecosystem-based management.UID/04326/2025; UID/PRR/04326/2025; UID/04106/2025; UID/PRR/4106/202
The portuguese version of the self-regulation scale: psychometrics, measurement invariance, and associations with antisocial variables among youth
No full textSelf-regulation is the basic capacity to regulate one’s thoughts, emotions, and behaviors. The aim of the present study is to examine the psychometric properties of the Self-Regulation Scale (SRS) among male and female Portuguese youth participants (N = 559 youth, M = 16.51 years, SD = 1.07, range = 14–20 years). The three-factor model composed of the Emotional, Cognitive, and Behavioral regulation subscales obtained adequate fit, although the fit of the second-order model was also acceptable. Internal consistency as measured by the alpha and omega reliability estimators was good. Significant associations were found with psychometric measures of relevant constructs (e.g., self-control, psychopathic traits, criminogenic cognitions), and external criterion-related variables (e.g., engaging in activities against the law, alcohol and drug abuse). Cross-gender measurement invariance was supported, with females scoring significantly higher on the Cognitive regulation subscale, and males scoring significantly higher on the Emotional regulation subscale. The findings support the use of the SRS to validly and reliably measure self-regulation in Portuguese youth.CEECIND/CP1714/CT002
Action mechanisms of deflamin in the treatment of colorectal cancer
No full textCRC is the third most common cancer in the world and the second leading cause of death worldwide, being its mortality associated with the dissemination to distant organs. For cancer to become invasive and metastatic it is necessary that a remodeling of the extracellular matrix occurs being the matrix metalloproteases (MMPs) the main molecules involved in this process. Since MMPs have major implications for migratory and angiogenic processes, promoting greater tumor malignancy, they are strong candidates to targeted therapies in order to delay malignant progression.
Deflamin is a 17 kDa oligomeric protein extracted from the white lupine seeds (Lupinus albus) with anti-inflammatory and MMP-2 and 9 inhibitory functions. Deflamin has been shown to induce an improvement of the colonic mucosa and inhibit the migratory activity in CRC cell lines. In in vivo studies previously developed in our lab, deflamin was shown to exert an anti-tumor and pro-apoptotic activity. In this context, my work aimed to clarify the mechanism of deflamin action using 3D and in vivo zebrafish xenotransplant models.
Overall, my results demonstrate that deflamin has an inhibitory role of the tumoral invasive process without significantly affecting proliferation of CRC cell lines. Regarding in vivo analysis, I found a trend towards less vessel infiltration in deflamin treated groups. Deflamin has also shown to be effective in reducing collagen degradation in the tumor microenvironment of zebrafish treated animals, indicating less extracellular matrix remodeling.
These results agree with results obtained previously in CRC lines and in vivo assays. Therefore, increasing our knowledge on the role of deflamin for CRC development has the potential to reveal a new nutritional therapeutic approach, with major implications for the health and well-being of CRC patients.O cancro colorretal (CRC) é a terceira neoplasia maligna mais comumente diagnosticada e a segunda causa de morte por cancro a nível mundial. O prognóstico dos pacientes é essencialmente estimado com base no estadio no qual a doença é detetada, sendo que em estadios iniciais a taxa de sobrevivência pode chegar até 90% e em estadios metastáticos apenas a 12%. Neste sentido, a mortalidade por CRC está amplamente associada à sua disseminação a órgãos distantes.
O CRC resulta de uma acumulação progressiva de alterações genéticas e epigenéticas em oncogenes e/ou genes supressores tumorais. Deste modo, e devido à elevada taxa mutacional, o epitélio normal transforma-se numa mucosa hiper-proliferativa e, subsequentemente, dá origem a um adenoma benigno que evolui para carcinoma e posteriormente metástase. Para que o cancro se torne invasivo e metastático, é necessário que ocorra, dentro dos principais mecanismos, uma reconfiguração da matriz extracelular por degradação dos seus substratos, sendo a principal molécula com ação degradadora da matriz as metaloproteases de matriz (MMPs).
As MMPs compreendem uma grande família de endopeptídases capazes de degradar praticamente todos os componentes presentes na matriz extracelular, desempenhando um papel crucial na manutenção da homeostasia da matriz, bem como para o crescimento tumoral, invasão e metástase. Estas enzimas proteolíticas estão amplamente associadas com o desenvolvimento invasivo e metastático do CRC, sendo que a sua atividade é crucial para a remodelação do microambiente tumoral. Consequentemente, apresentam grandes implicações nos processos inflamatórios, migratórios e angiogénicos, promovendo uma maior malignidade do tumor, associada, por sua vez, a um pior prognóstico e a uma pior taxa de sobrevivência. Assim, devida a sua importância na progressão tumoral, as MMPs são fortes candidatas a estratégias terapêuticas voltadas para a sua inibição na tentativa de alcançar retardamento da progressão maligna, ou até mesmo para a prevenção do desenvolvimento displásico. Estas estratégias terapêuticas de inibição da atividade das MMPs têm sido estudadas desde o início dos anos 90, com um grande investimento da indústria farmacêutica. A doxiciclina é, por enquanto, a única molécula sintética aprovada no mercado com propriedades inibidoras das MMPs. Atualmente a medicina tem permitido uma abordagem diferente para doenças inflamatórias que, ou não respondem ao tratamento tradicional, ou para doentes que não querem receber a terapia padrão. Neste sentido existem estudos que apontam que o uso de moléculas exógenas naturais é uma abordagem terapêutica a ser considerada. Vários estudos relativos a polipéptidos bioativos provenientes de leguminosas têm revelado ação anti-inflamatória, anti-migratória e ainda ação inibitória de MMPs, sendo considerados uma estratégia tanto na prevenção como na progressão de CRC.
Apesar de estudos sobre o tremoço branco ainda serem insuficientes e limitados em testes clínicos e laboratoriais, a literatura disponível demonstra que fatores nutricionais do tremoço, como Pis (inibidores de protéases), têm apresentado resultados quando se trata de doenças intestinais inflamatórias e no cancro colorretal. Análises utilizando apenas extratos proteicos demonstram que são capazes de diminuir significativamente a atividade enzimática da MMP-9, proliferação e migração em linhas de células de CRC (HT29).
A deflamina é uma proteína oligomérica de 17kDa, considerada inibidora de metaloproteases (MMPI), encontrada nas sementes de tremoço branco (Lupinus albus) com um grande potencial anti-inflamatório e de ação inibitória tanto da MMP-9 como da MMP-2. Foi demonstrado que é capaz de induzir uma melhoria do perfil da mucosa colónica em processos de colites ulcerativas e, mais recentemente, promover a inibição da atividade migratória em linhas celulares de cancro colorretal, bem como inibição da atividade gelanolítica da MMP-2 e MMP-9. Em estudos in vivo desenvolvidos no nosso laboratório, a deflamina exerceu também uma atividade anti-tumoral e pró-apoptótica, diminuindo o tamanho de tumores xenotransplantados em modelos de zebrafish e aumentando a taxa apoptótica dos mesmos sem afetar a divisão celular. Neste sentido este trabalho teve como principal objetivo verificar a atividade da deflamina sobre linhas celulares de CRC, recorrendo a modelos celulares 3D, com o intuito de perceber se a sua atividade era replicável. Do mesmo modo, verificou-se a sua atividade anti tumoral em modelos in vivo com peixe-zebra (Danio rerio) através da análise de processos angiogénicos e de degradação da matriz extracelular Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que a deflamina não exerce uma ação direta no ciclo celular nem induz apoptose em linhas de CRC tratadas com este agente, sugerindo assim a sua segurança como potencial estratégia terapêutica contra o CRC. Para as análises in vitro com modelos 3D de esferoides, a deflamina apresentou uma atividade inibitória do processo invasivo em matriz de colagénio para as linhas celulares HT29, HCT116 e SW480 (p=0,0464; p=0,0482 e p=0,0130, respetivamente), apesar de não ter afetado significativamente a proliferação celular das linhas HCT116 e SW480 (p=0,8571 e p=0,1850, respetivamente), o que reforça a sua atividade inibitória de invasão, previamente descrita em culturas celulares 2D.
Relativamente às análises com modelos in vivo em modelos de peixe-zebra, apesar da deflamina não afetar a formação de novos vasos sanguíneos, existe uma tendência observada para uma menor infiltração de vasos sanguíneos no centro da massa tumoral em peixes do grupo tratado (100μg/mL) quando comparados com o grupo controlo (p=0,1093). Além desta tendência, a deflamina mostrou-se eficaz na redução de degradação de colagénio no nicho tumoral em indivíduos tratados em relação aos controlos (p=0,0168), indicando assim uma menor remodelação da matriz extracelular.
Os nossos resultados mostraram-se de acordo com resultados obtidos anteriormente por o grupo de investigadores do ISA, bem como por experiências anteriores desenvolvidas pelo grupo LCosta do iMM. Deste modo, esta dissertação complementa os estudos previamente elaborados e explora mecanisticamente a ação que a deflamina exerce sobre o desenvolvimento e progressão de CRC.
Em estudos futuros, seria interessante investigar o papel que a deflamina exerce na atividade de metaloproteases, nomeadamente da MMP-9, em ensaios com modelos celulares 3D, bem como em ensaios in vivo. É também de extrema importância investigar os efeitos relativos à cito- e genotoxicidade da deflamina. Por atuar in situ e, aparentemente, não ser absorvida no sistema digestivo, a deflamina potencialmente contorna a maioria dos problemas relacionados aos MMPIs apresentados anteriormente em ensaios clínicos, associados a alta toxicidade e efeitos secundários sistémicos. Aprofundar os conhecimentos já existentes sobre o papel desta proteína poderia revelar uma nova abordagem terapêutica nutricional, com importantes implicações para a saúde e o bem-estar dos pacientes com CRC. Além disso, foi proposto um enriquecimento nutricional de alimentos com deflamina, o que poderia ser uma estratégia para prevenir as doenças intestinais inflamatórias associadas ao cancro colorretal
From pluripotency to early events leading to cardiogenesis
No full textHeart diseases are the leading cause of death worldwide, which includes acquired cardiovascular diseases and congenital heart diseases. The Cited2 gene is important for proper heart development and cardiac cell differentiation from pluripotent stem cells. Previous studies suggested that the role of Cited2 in cardiac differentiation could begin during the early events that occur in pluripotent cells that undergo differentiation. In mouse embryonic stem cells, Cited2 is important for self-renewal maintenance, as cells die or differentiate under Cited2-depleted conditions. In differentiation, embryonic stem cells depleted of Cited2 at the onset of differentiation show an impairment of cardiac cell differentiation. However, the mechanisms behind these observed phenotypes of Cited2-depletion are not well established. In this work, differentially expressed genes were identified in undifferentiated mouse embryonic stem cells and differentiated cells on day-4 of differentiation. Thus, using mouse embryonic stem cells that can be conditionally depleted of Cited2, after 16 hours of incubation it was observed that Cited2-depleted cells under undifferentiation conditions tend to show increased levels of the DNA damage marker γH2AX, concomitant with decreased expression of DNA repair genes (Rad51c, Rad9b, and Mdc1) and increased expression of pro-apoptotic genes (p21, Ptges, Plk2). In differentiation conditions using the hanging drop method, on day-4 of differentiation, epigenetic mark H3K27ac showed a decrease in the promoter region of cardiopoietic genes concordant with their downregulation (Brachyury, Cdx2, Dkk1, Isl1, Kdr, Mesp1, Wnt5a). However, the results of the H3K27me3 marks, showed higher variability and did not match the reciprocal marks of H3K27ac. Moreover, the increase in H3K27ac mark in undifferentiated Cited2-depleted cells corresponded, as expected, to an upregulation of the same genes. Lastly, histone acetyltransferase activity assay using the whole cell extract showed a tendency to increase acetylation in Cited2-depleted cells. In conclusion, the role of Cited2 in DNA repair and the cause of increased cell death remains to be established, while delayed expression of mesoderm/cardiac genes could be associated with misregulation of epigenetic H3K27(me3/ac) marks at the promoters of cardiopoietic genes.As doenças cardíacas são responsáveis pela maioria das mortes a nível mundial de acordo com a Organização Mundial de Saúde. Este grupo de doenças inclui as doenças congénitas cardíacas e as doenças cardiovasculares. Embora as doenças cardiovasculares possam ser mitigadas pela adoção de estilos de vida saudáveis, as doenças congénitas cardíacas não podem ser tão facilmente evitadas. Isto, porque estas doenças têm uma componente genética que leva à malformação do coração, e apesar de em alguns casos ser possível operar os recém-nascidos, ainda não há terapias génicas que resolvam a totalidade destes casos. Portanto, é assim necessário perceber melhor o desenvolvimento cardíaco e o papel que alguns genes têm neste complexo processo. Esta complexidade reflete-se na coordenação de expressão de diferentes fatores de transcrição (e.g. Brachyury, Nkx2.5, Mesp1, Isl1), e ativação de diferentes vias de sinalização (e.g. FGF, TGF, BMP, NODAL, e a WNT). Estas vias atuam em sincronia tendo um efeito de ativação ou inibição de fatores de transcrição dependendo do tecido do embrião e do estádio de desenvolvimento (ou seja, também depende do tempo decorrido).
Este trabalho foca-se na compreensão dos diferentes papeis do gene Cited2 em condições de pluripotência e de diferenciação. Foi demonstrado que mutações neste gene em humanos estão associadas a doenças congénitas cardíacas. Em laboratório, a deleção deste gene em ratinho (Mus musculus) leva à sua morte in utero, principalmente por malformações do coração. Estudos em células estaminais embrionárias de ratinho mostraram que Cited2 é também importante para a manutenção da pluripotência uma vez que Cited2 promove a expressão de Nanog, que por sua vez leva à expressão de outros genes importantes para a manutenção da pluripotência. Contudo, quando Cited2 é depletado (ou seja, a expressão é diminuída), verifica-se um aumento da morte celular e da diferenciação espontânea; mesmo em células mantidas em condições de pluripotência, usando meio suplementado com LIF. Em contexto de diferenciação verificou-se, usando também células estaminais de ratinho, que a depleção de Cited2 no início do protocolo da gota suspensa levou a uma diminuição na capacidade de diferenciação cardíaca. Trabalhos anteriores do laboratório mostraram que existe um atraso na expressão de genes importantes para a especificação da mesoderme e de diferenciação cardíaca, nomeadamente: Brachyury, Mixl1 e Mesp1.
Este trabalho partiu da análise de dados de “microarrays” (Affymetrix) de um trabalho anterior no laboratório, que tinha como alvo identificar os genes diferencialmente expressos entre dois grupos de células: as células controlo (com expressão de Cited2) vs as células tratadas (sem expressão de Cited2); e em duas condições experimentais: pluripotência e diferenciação. Deste modo, o trabalho foi separado em duas partes, uma dedicada ao papel do Cited2 em pluripotência e outra em diferenciação. Para compreender o papel de Cited2 na pluripotência, foram feitas experiências com células de ratinho que permitem a depleção condicional de Cited2 quando se adiciona o composto 4HT ao meio de cultura (usando como controlo etanol). Assim, após análise dos “microarrays” verificou-se que existiam alguns genes de reparação do ADN que estavam regulados negativamente (Rad51c, Rad9b e Mdc1), enquanto alguns genes que promovem a morte celular por apoptose estavam regulados positivamente (p21, Ptges, Plk2). Portanto, estes resultados sugeriram que um possível mecanismo que leva ao aumento de morte celular quando Cited2 é depletado que pode estar associado com dano do ADN. Deste modo, a quantidade de dano nas células foi avaliada por “Western Blot” e por microscopia de confocal, onde foi usado como marcador de dano no ADN a histona H2AX. Na presença de dano no ADN esta histona é fosforilada, e passa a denominar-se por γH2AX. Assim, verificou-se que apesar de existir um aumento dos níveis de γH2AX depois de 16 horas de tratamento, os resultados não foram estatisticamente significativos. Portanto, não foi possível estabelecer com certeza que a causa de morte celular devido à depleção de Cited2 é causada pelo aumento de dano no ADN. Contudo, os resultados de “microarray” sugerem que genes associados ao p53 possam estar envolvidos (referidos acima). Como perspetivas futuras é proposto que se estude a possível modelação por CITED2 da atividade do p53 através da acetilação por p300/CBP.
Relativamente ao papel de Cited2 na diferenciação, a análise dos “microarrays” sugeriu que alguns genes que estavam regulados negativamente são controlados por um complexo repressor de expressão (PRC2). Portanto levantou-se a hipótese de que o atraso na expressão dos genes marcadores da mesoderme e de diferenciação cardíaca possam estar bloqueados quando Cited2 está pouco expresso. Deste modo, realizaram-se experiências de immunoprecipitação de cromatina tendo como alvo duas modificações pós-traducionais: H3K27me3 e H3K27ac. Estas modificações são recíprocas, onde a tri-metilação (me3) está associada a repressão dos genes, e a acetilação (ac) está associada a ativação de expressão dos genes. Os resultados mostraram que, de facto, embora não estatisticamente significativos, existe uma tendência para uma diminuição da marcação H3K27ac ao dia-4 de diferenciação nos promotores dos genes Brachyury, Cdx2, Dkk1, Isl1, Kdr, Mesp1 e Wtn5a. Concordante com estes resultados, e como seria de esperar, estes genes encontraram-se negativamente regulados. O inverso foi observado para as condições de pluripotência, ou seja, a baixa expressão de Cited2 levou a uma tendência para aumento de acetilação, que foi seguida pelo também esperado aumento de expressão desses mesmos genes. Contudo, a marcação de metilação mostrou ter um erro maior, e não seguia a esperada reciprocidade com os resultados da acetilação. Por fim, de modo a perceber a influência de Cited2 na capacidade de acetilação das células foi realizado um ensaio in vitro para comparar os níveis de acetilação de extratos proteicos totais de células expressando e não-expressando Cited2. Os resultados mostram que as células depletadas de Cited2 têm um aumento de acetilação. Contudo, não foi possível demonstrar que a acetilação de histonas por p300/CBP é diretamente modulado por CITED2.
Em suma, este trabalho não permitiu de forma clara demonstrar que o aumento da morte e diferenciação espontânea seja causado por dano no DNA aquando da depleção de Cited2. No entanto, este trabalho propõe que o atraso da expressão de genes importantes para a diferenciação cardíaca tenha uma componente associada à desregulação de mecanismos epigenéticos, nomeadamente regulação de H3K27me3/ac