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Infertilidade Masculina: avaliação Citomorfobioquímica de sémen, análise Citogenética e pesquisa de mutações no Gene AZF
Get PDFA Infertilidade é, segundo a Organização Mundial de Saúde, uma doença que afeta cerca de 15% dos casais em idade reprodutiva, a nível mundial, e é definida pela incapacidade de engravidar, após doze meses de relações sexuais desprotegidas e regulares. Alterações na concentração, na motilidade e morfologia dos espermatozoides podem estar relacionadas com diversos fatores, como alterações genéticas, sendo as mais frequentes a Síndrome de Klinefelter e microdeleções na região AZF do cromossoma Y, e exposição a determinados agentes ambientais ou relacionados com o estilo de vida, sendo que o stress oxidativo, pelo desequilíbrio entre níveis elevados de Espécies Reativas de Oxigénio (ROS) e capacidade antioxidante reduzida, tem sido igualmente associado à infertilidade masculina. A análise citomorfobioquímica do sémen é a primeira abordagem no estudo da infertilidade masculina. Neste trabalho foram avaliados 35 inquéritos, com o objetivo de compreender os hábitos relacionados com o estilo de vida dos indivíduos seguidos na consulta de Apoio à Fertilidade, sendo que o espermograma foi realizado nas amostras anonimizadas e excedentárias de sémen destes 35 indivíduos. Foram utilizadas 10 amostras de sémen, para avaliar os efeitos antioxidantes in vitro de um polivitamínico em sémen humano. O estudo citogenético foi realizado em 21 amostras de sangue periférico, com indicação de infertilidade ou abortos de repetição, e a pesquisa de mutações nos genes AZF foi efetuada em 2 amostras de sangue periférico com indicação de infertilidade e cariótipo normal. Da análise dos inquéritos, verificou-se que 47% dos indivíduos inqueridos apresentaram excesso de peso, aproximadamente 59% relatou hábitos não-saudáveis, como o consumo de álcool e tabaco, e 68% foram expostos a agentes tóxicos. Detetaram-se 9 amostras oligospérmicas, 14 astenozoospérmicas e 15 foram classificadas como oligozoospérmicas. Apenas 1 amostra apresentou azoospermia e 33 foram teratozoospérmicas. Com a aplicação do polivitamínico, o dano do DNA diminuiu 44.54% nos espermatozoides tratados com a concentração de 0.1 mg/mL. A análise citogenética não revelou alterações cromossómicas. Também, o estudo molecular do gene AZF não apresentou qualquer mutação. Os resultados indicam que as anomalias espermáticas detetadas estão, provavelmente, associadas a fatores ambientais e de estilo de vida. Este estudo enfatiza a importância de abordagens integradas, que combinem análises citomorfobioquímica, citogenéticas, molecular, e da integridade do DNA espermático, para um diagnóstico mais preciso da infertilidade masculina.Infertility is, according to the World Health Organization, a disease that affects about 15% of couples at reproductive age worldwide and is defined by the inability to get pregnant after twelve months of unprotected and regular sexual intercourse. Changes in sperm concentration, motility and morphology can be related to several factors, such as genetic changes, the most frequent being Klinefelter's Syndrome and microdeletions in the AZF region of the Y chromosome, and exposure to certain environmental or lifestyle-related agents, and oxidative stress, due to the imbalance between high levels of Reactive Oxygen Species (ROS) and reduced antioxidant capacity, it has also been linked to male infertility. Cytomorphobiochemical analysis of semen is the first approach in the study of male infertility. In this work, 35 surveys were evaluated, with the objective of understanding the habits related to the lifestyle of the individuals followed in the Fertility Support consultation, and the spermogram was performed in the anonymized and surplus semen samples of these 35 individuals. Ten semen samples were used to evaluate the in vitro antioxidant effects of a multivitamin in human semen. The cytogenetic study was performed in 21 peripheral blood samples, with indication of infertility or recurrent miscarriages, and the search for mutations in the AZF genes was performed in 2 peripheral blood samples with indication of infertility and normal karyotype. From the analysis of the surveys, it was found that 47% of the individuals surveyed were overweight, approximately 59% reported unhealthy habits, such as alcohol and tobacco consumption, and 68% were exposed to toxic agents. Nine oligospermic samples, 14 asthenozoospermic and 15 were classified as oligozoospermic. Only 1 sample had azoospermia and 33 were teratozoospermic. With the application of the multivitamin, DNA damage decreased by 44.54% in sperm treated with the concentration of 0.1 mg/mL. Cytogenetic analysis revealed no chromosomal alterations. Also, the molecular study of the AZF gene did not show any mutation. The results indicate that the detected sperm abnormalities are probably associated with environmental and lifestyle factors. This study emphasizes the importance of integrated approaches, which combine cytomorphobiochemical, cytogenetic, molecular, and sperm DNA integrity analyses, for a more accurate diagnosis of male infertility
Mastocitoma no cão: apresentação de casos clínicos
Get PDFO mastocitoma é uma neoplasia com origem nos mastócitos, células imunitárias produzidas na medula óssea que estão presentes em todo o corpo como parte do sistema imunitário e da resposta alérgica normal. O mastocitoma surge normalmente na pele (representando cerca de 16 a 21% dos tumores cutâneos caninos), no fígado ou baço. O mastocitoma em cães é, maioritariamente, de etiologia desconhecida, sendo este, na teoria, associado à inflamação crónica ou à exposição a compostos irritantes cutâneos. O meio de diagnóstico mais comumente utilizado na prática clínica é a citologia, tratando-se de uma análise simples, pouco invasiva e de baixo custo. No entanto, a avaliação histopatológica apresenta uma importância determinante na classificação do grau histológico, permitindo a obtenção de um diagnóstico definitivo e invasão de tecidular circundante. Apesar de existirem várias opções terapêuticas, as escolhas mais frequentemente implementadas são cirurgia e quimioterapia. Esta dissertação teve como objetivo apresentar casos clínicos documentados de mastocitoma em cães. Para este efeito, foram estudados 7 casos clínicos consultados no Hospital Veterinário Baixo Vouga, abordando-se diferentes modalidades de diagnóstico e tratamento. Todos os casos estudados foram diagnosticados por citologia e análise histopatológica. O tratamento mais empregue foi a excisão cirúrgica, excetuando um dos casos em que o mesmo não foi possível.Mastocytoma is a neoplasm that originates in mast cells, immune cells produced in the bone marrow that are present throughout the body as part of the immune system and the normal allergic response. Mastocytoma usually appears on the skin (accounting for around 16 to 21% of canine skin tumors), or internally, for example in the liver or spleen. Mastocytoma in dogs is mostly of unknown etiology, and is theoretically associated with chronic inflammation or exposure to skin irritants. The most commonly used diagnostic method in clinical practice is cytology, which is a simple analysis and the result is obtained within 24 hours. However, histopathological evaluation is of great importance in classifying the histological grade, allowing it to be classified into grades I, II and III depending on its degree and invasion of surrounding tissue. Although there are a number of therapeutic options, the most common choices are surgery and chemotherapy. The aim of this dissertation was to present documented clinical cases of mastocytomas in dogs. To this end, 7 clinical cases consulted at the Hospital Veterinário Baixo Vouga were studied, addressing different diagnostic and treatment modalities. All the cases studied were diagnosed by cytology and histopathological analysis. Surgical excision was the most commonly used treatment, with the exception of one case where this was not possible
Disclosing the FA-SAT ncRNA role in cancer cells
Get PDFThis master’s dissertation was specifically prepared to obtain the
MSc degree in Technologic, Comparative and Molecular Genetics
and it complies with the scientific and technical norms required by
the regulations of the University of Trás-os-Montes and Alto DouroAo longo dos anos, as sequências de DNA satélite (satDNA) têm atraído a atenção da comunidade científica, como importantes contribuintes para a função celular e doença. FA-SAT, o principal satDNA do genoma do gato doméstico, foi originalmente descoberto nesta espécie, mas sabe-se que está altamente conservado e é transcrito sob a forma de RNA nãocodificante (FA-SAT ncRNA) em várias espécies Bilateria, incluindo o Homem. Anteriormente, a caracterização do perfil deste ncRNA, em diferentes linhas celulares de gato, revelou a preservação da sua localização nuclear, existindo diferenças na sua distribuição ao longo do ciclo celular: a sua transcrição foi definida como dependente de ciclo em células não tumorais e a sua desregulação foi observada nas tumorais. Além disso, as funções deste ncRNA foram descritas em células de gato e humanas, tendo sido demonstrada a sua interação nuclear com a proteína PKM2, para regular a transição entre proliferação celular e apoptose. Com este trabalho, pretendemos efetuar a caracterização celular destes transcritos, pela primeira vez, no Homem. Para isso, examinámos o perfil do FA-SAT ncRNA em diferentes linhas celulares humanas, analisando e comparando a sua localização, quantidade e aparência. O seu comportamento ao longo do ciclo celular também foi avaliado numa dessas linhas celulares. Seguidamente, desenvolvemos ensaios funcionais para desvendar o mecanismo pelo qual o complexo FA-SAT ncRNA/PKM2 consegue efetuar a comunicação entre as vias mitogénica e apoptótica, particularmente, o envolvimento de P53 na determinação desses fenótipos (foram utilizadas células P53 wild-type-WT e nulas). Os nossos resultados revelaram uma localização nuclear semelhante do ncRNA em todas as linhas celulares humanas analisadas, existindo diferenças na sua quantidade e aparência, dependendo do tipo celular. Um olhar mais atento sobre a localização deste ncRNA nas células HeLa demostrou que este estava adicionalmente localizado no nucléolo (e na sua periferia). Acerca da análise do seu comportamento ao longo do processo de divisão celular das células HeLa, foi possível detetar transcritos FA-SAT em todas as fases do ciclo celular (com maior acumulação na fase G1 e transição G1/S). Relativamente aos ensaios funcionais do FA-SAT, o seu silenciamento resultou na diminuição da quantidade de proteína nuclear PKM2 (também do seu RNA) e na inibição da proliferação celular (com subexpressão de MYC), tanto em células P53 WT como nulas. Após o silenciamento do FA-SAT, verificou-se também a ocorrência de apoptose nas duas linhas celulares, mas a acumulação de P53 foi observada apenas nas células P53 WT. Assim, foi confirmada a associação FA-SAT ncRNA/PKM2 no núcleo dessas células humanas, para regular a transição entre proliferação celular e apoptose, e definiu-se que a determinação desses fenótipos era independente do estado de P53. Em suma, este trabalho representa um avanço de conhecimento, uma vez que contribui para melhor compreender como é que a expressão de FA-SAT (e a associação FA-SAT ncRNA/PKM2) pode modular a progressão do ciclo celular/morte celular, nas células humanas. Adicionalmente, promove a compreensão da maior fração dos nossos genomas (sequências repetitivas de DNA), como elementos funcionais importantes e responsáveis pela (des)regulação de diversos processos celulares e doenças, como o cancro.Over the last years, satellite DNA (satDNA) sequences have attracted some attention from the scientific community, as important contributors to cell function and disease. FA-SAT, the major satDNA of the domestic cat genome, was originally discovered in this species, but it is known it is highly conserved and transcribed into non-coding RNA (FA-SAT ncRNA) in several Bilateria species, including humans. Earlier, the characterization of the ncRNA profile, in distinct cat cell lines, revealed the preservation of its nuclear location, with some differences in its distribution throughout the cell cycle: its expression was defined as cell-cycle dependent in non-tumor cells and the dysregulation of it was observed in the tumor ones. Moreover, the functions of this ncRNA were described in cat and human cells, having been stated its nuclear interaction with the PKM2 protein, to regulate the shift from cell proliferation to apoptosis. With this work, we intended to perform the cellular characterization of these transcripts, for the first time, in humans. For that, we scrutinized the FA-SAT ncRNA profile in distinct human cell lines, analyzing and comparing its location, amount and appearance. Its behavior across the cell cycle was also evaluated in one of these cell lines. Then, we developed functional assays to unveil the mechanism by which the FA-SAT ncRNA/PKM2 complex can cross-talk between the mitogenic and apoptotic pathways, particularly, the P53 involvement in determining these phenotypes (both P53 wild-type-WT and null cells were used). Our results revealed a similar nuclear location for the ncRNA in all the human cell lines analyzed, with some differences in its amount and appearance, depending on the cell type. A closer look at this ncRNA location in the HeLa cells showed that it was additionally located at the nucleolus (and its periphery). Regarding the analysis of its behavior along the cell division process of the HeLa cells, it was possible to detect FA-SAT transcripts in all the phases of the cell cycle (with major enrichment in the G1 phase and G1/S transition). Concerning the FA-SAT functional assays, its knockdown resulted in decreased amounts of PKM2 nuclear protein (also its RNA) and in inhibition of cell proliferation (with MYC downregulation), both in P53 wild-type and null cells. Upon FA-SAT silencing, an apoptosis outcome was also verified in both cell lines, but the P53 accumulation was only observed in the P53 wild-type cells. Therefore, it was confirmed the FA-SAT ncRNA/PKM2 association at the nucleus of these human cells, to regulate the shift from cell proliferation to apoptosis, and it was stated the independence from the P53 status of these phenotypes. In brief, this work represents an advance in knowledge, so it contributes to better understanding how the FA-SAT expression (and the FA-SAT ncRNA/PKM2 association) can modulate the cell-cycle progression/cell death, in the human cells. Additionally, it supports the comprehension of the largest fraction of our genomes (DNA repetitive sequences), as important functional elements responsible for the (dys)regulation of several cellular processes and diseases, such as cancer
Provas de Agregação: Sumário Pormenorizado do Seminário: Análises Aerodinâmicas com recurso à Dinâmica Computacional de Fluidos no Desporto
Get PDFSeminário sobre o tema “Análises Aerodinâmicas com recurso à Dinâmica Computacional de Fluidos no Desporto: Atleta e ciclista”, no ramo do conhecimento de Ciências do Desporto, nos termos da alínea c) do artigo 5º do Decreto-Lei nº 239/2007 alterado pelo Decreto-Lei n.º 64/2023, de 31 de julho e da alínea e) do artigo 4º do Regulamento n.º 657/2016, Regulamento de Provas de Agregação da Universidade de Trás -os-Montes e Alto Douro
Avaliação do efeito da aplicação foliar de diferentes concentrações da mistura caulino + silício na fisiologia de vinhas sob stresse estival
Get PDFA Região Demarcada do Douro é caracterizada pelo seu clima tipicamente mediterrânico, com elevadas temperaturas e baixa precipitação durante o período estival. Nas últimas décadas, as alterações climáticas têm vindo a intensificar-se, manifestando-se com um aumento das ondas de calor, escassez de precipitação e eventos climáticos extremos. Estes fatores influenciam o ciclo de crescimento da videira, levando a colheitas mais precoces e alterações na maturação das uvas. Assim sendo, o sector vitivinícola deve implementar medidas de adaptação para mitigar os efeitos adversos, como o uso de variedades e portaenxertos mais tolerantes, bem como práticas mais sustentáveis e económicas, de forma que seja possível tolerar o stresse estival. Este estudo decorreu na Quinta do Bomfim, propriedade da Symington Family Estates, localizada no Pinhão, sub-região do Cima Corgo, da Região Demarcada do Douro, durante o ano de 2023. O principal objetivo desta dissertação é avaliar o efeito da aplicação foliar de uma mistura de Caulino a 2% com Silício em diferentes concentrações (2%, 4% e 6%) na performance da videira, na resistência ao stresse hídrico e térmico, e o seu impacte na qualidade das uvas, na casta Touriga Nacional. Foram realizados quatro tratamentos, o Controlo sem qualquer tratamento (água), o MiKS 1 – Caulino 2% + Silício 2%, o MiKS 2 – Caulino 2% + Silício 4%, e o MiKS 3- Caulino 2% + Silício 6%. Ao longo do ciclo vegetativo foram avaliados diversos parâmetros tais como potencial hídrico foliar (base e meio-dia solar), as trocas gasosas, a fluorescência da clorofila a, análise bioquímica da folha e do fruto, análise de bagos à maturação, produção, peso da lenha de poda e o Índice de Ravaz. A aplicação foliar dos MiKS beneficiou a acumulação dos pigmentos fotossintéticos, observou-se também na bioquímica do fruto que o MiKS 3 beneficiou a concentração de compostos fenólicos. O teor de álcool provável foi também influenciado pelos vários tratamentos MiKS, pois observou-se um aumento em todas as modalidades quando comparadas com o controlo. Ainda nos parâmetros enológicos verificou-se que o MiKS 1 e o MiKS 3 levaram a que houvesse uma menor degradação do ácido málico. Relativamente aos parâmetros fisiológicos, a mistura de caulino + silício nas concentrações de 4% (MiKS 2) e 6% (MiKS 3) apresentaram melhores resultados de potencial hídrico foliar base (Ѱb). Os MiKS não tiveram grande influência sobre os parâmetros vitivinícolas, contudo foi verificado que no parâmetro do índice de Ravaz, o MiKS 3 proporcionava à videira o nível ideal de equilíbrio que esta necessitava manter entre o ciclo reprodutor e o ciclo vegetativo.The Douro Demarcated Region is characterized by its typically Mediterranean climate, featuring high temperatures and low precipitation during the summer period. In recent decades, climate change has intensified, leading to increased heatwaves, scarce precipitation, and extreme weather events. These factors influence the grapevine growth cycle, resulting in earlier harvests and changes in grape maturation. As a result, the wine sector must adapt and resort to the use of adaptation measures to mitigate these adverse effects. This involves employing such as the use of grape varieties and rootstocks more tolerant, as well as embracing sustainable and economical practices to withstand summer stress. The field trial of the study was conducted at Quinta do Bomfim, owned by Symington Family Estates, located in Pinhão, in the Cima Corgo sub-region, Demarcated Douro Region, during the year of 2023. The main objective of this dissertation is to evaluate the effect of foliar application of a 2% Kaolin mixture with Silicon at different concentrations (2%, 4%, and 6%) on the vine's performance in resisting water and heat stress and its impact on grape quality in the Touriga Nacional variety. Four treatments were carried out: the Control without any treatment (water), MiKS 1 – 2% Kaolin + 2% Silicon, MiKS 2 – 2% Kaolin + 4% Silicon, and MiKS 3 – 2% Kaolin + 6% Silicon. Throughout the vegetative cycle, various parameters were evaluated such as leaf water potential (base and midday), gas exchange, chlorophyll a fluorescence, biochemical analysis of the leaf and fruit, analysis of berries at maturation, yield, pruning wood weight, and the Ravaz Index. The foliar application of MiKS benefited the accumulation of photosynthetic pigments, and it was also observed in the fruit's biochemistry that MiKS 3 increased the concentration of phenolic compounds. The probable alcohol content was also influenced by the various MiKS treatments, as an increase was observed in all modalities compared to the control. Additionally, in the enological parameters, it was found that MiKS 1 and MiKS 3 led to less degradation of malic acid. Regarding physiological parameters, the mixture of kaolin + silicon at concentrations of 4% (MiKS 2) and 6% (MiKS 3) showed better results for base leaf water potential (Ѱb). The MiKS did not have a significant influence on viticultural parameters, but it was noted that, for the Ravaz index parameter, MiKS 3 provided the vine with the ideal level of balance needed to maintain between the reproductive cycle and the vegetative cycle
Interaction between microplastics and copper: toxicity assessment in zebrafish (Danio rerio) and blackspot seabream (Pagellus bogaraveo)
Get PDFDissertation presented to obtain the Ph.D. degree in Science, Technology and Management of the Sea (Do*Mar), at the Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, under the supervision of Sandra Mariza Veiga Monteiro, Ph.D. and Assistant Professor at the Departamento de Biologia e Ambiente (DeBA) in the Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro; and Juan Bellas Bereijo, Ph.D and Research Professor at the Instituto Espanhol de Oceanografia (IEO, CSIC), in the Centro Oceanográfico de Vigo.Nas últimas décadas, os resíduos de plástico têm sido globalmente reconhecidos como um poluente emergente, com potenciais efeitos negativos sobre os organismos aquáticos e na saúde humana. Embora o tamanho dos plásticos no ambiente aquático varie de pequenas partículas a fragmentos de maiores dimensões ou macroplásticos, atualmente, os microplásticos (MPs) que têm despertado mais atenção. Os MPs, ou seja, partículas sintéticas com formato regular ou irregular e tamanho compreendido entre 1 μm e 5 mm, têm sido reconhecidos como ubíquos nos ecossistemas, persistentes e potencialmente tóxicos para os organismos aquáticos. Devido ao seu pequeno tamanho, elevada área de superfície e hidrofobicidade, os MPs podem adsorver e acumular outros poluentes, como o cobre (Cu), um metal pesado que representa um risco significativo para o ambiente aquático. Por sua vez, quando os MPs interagem com os organismos aquáticos, a biodisponibilidade e toxicidade dos metais pesados adsorvidos pode ser modulada. No entanto, a investigação sobre os efeitos combinados de MPs e metais pesados, nos organismos aquáticos ainda é limitada.
Neste contexto, o trabalho desenvolvido nesta TESE tem como principal objetivo avaliar os efeitos toxicológicos de MPs e Cu, isolados ou combinados, em duas espécies de peixes, nomeadamente o peixe-zebra (Danio rerio) e o goraz (Pagellus bogaraveo), contribuindo com novas evidências sobre os impactos ambientais dos MPs nos organismos aquáticos de água doce e marinha. Considerando as limitações atuais de conhecimento sobre os efeitos dos MPs e do Cu em diferentes estágios de vida dos peixes, ou após exposições prolongadas, várias abordagens experimentais foram selecionadas. Peixes-zebra foram expostos a MPs (2 mg/L) e Cu (15 – 125 μg/L, diferentes concentrações de acordo com o bioensaio), isolados ou combinados, desde as 2 horas pós-fertilização (hpf) até às 96 hpf (exposição aguda) ou aos 14 dias pós-fertilização (dpf) (exposição subcrónica), para avaliar, respectivamente, os efeitos independentes ou dependentes da ingestão destes poluentes no desenvolvimento embrionário dos peixes. Similarmente, uma exposição crónica de 30 dias, a MPs (2 mg/L) e Cu (25 μg/L), isoladamente ou combinados, foi realizada em peixes-zebra adultos para avaliar os efeitos de uma exposição prolongada em idade adulta. Adicionalmente, foi realizada uma exposição aguda e subcrónica (3 e 9 dias), a MPs (0,3 mg/L) e Cu (10 – 810 μg/L), isoladamente ou combinados, de larvas recém-eclodidas de goraz, uma espécie marinha, para avaliar o seu efeito nos estágios finais do desenvolvimento larvar.
A exposição aguda induziu, em embriões de peixe-zebra, alguns efeitos tóxicos, nomeadamente a diminuição da sobrevivência e da eclosão, stress oxidativo, modulação do sistema antioxidante, inibição da acetilcolinesterase (AChE) e disrupção de comportamentos de aversão e sociais. No entanto, estes efeitos foram observados particularmente nos grupos expostos ao Cu e às misturas (Cu+MPs), não tendo a exposição isolada a MPs produzido efeitos significativos no peixe-zebra. Estes resultados mostram que a ação tóxica da exposição aguda aos MPs, durante o período embrionário, pode ser limitada, possivelmente devido à presença do córion que atua como uma barreira protetora contra os poluentes. Quando expostos subcronicamente, durante 14 dias, observou-se que os MPs e as misturas Cu+MPs tiveram maior efeito tóxico nas larvas de peixe-zebra, em comparação com a exposição aguda, sugerindo que a toxicidade das partículas de plástico pode surgir após exposições mais longas e estar ainda relacionada com a sua ingestão. Em resumo, os resultados da exposição subcrónica mostraram que os MPs e Cu, isolados ou combinados, causaram uma elevada mortalidade, stress oxidativo e neurotoxicidade nas larvas de peixe-zebra. Em relação aos efeitos associados à neurotoxicidade, foi observada uma inibição da atividade da AChE e uma diminuição da expressão de genes relacionados com a proliferação neuronal (sox2, pcna), neurogénese (neuroD, olig2), desenvolvimento dos neurónios motores (islet) e DNA metiltransferases. Por sua vez, estes efeitos tóxicos podem ter contribuído para as alterações comportamentais observadas ao nível da competência locomotora e escape a predadores, nas larvas de peixe-zebra expostas a MPs, Cu e Cu+MPs.
Adicionalmente, foram avaliados os efeitos crónicos dos MPs e Cu em peixes-zebra adultos, particularmente em dois principais órgãos-alvo – brânquias e cérebro. Nas brânquias, foi observado um aumento dos níveis de espécies reativas de oxigénio (ROS), com a consequente a indução de stress oxidativo, bem como um aumento da expressão de genes relacionados com a síntese de serotonina e apoptose. Em relação aos efeitos no cérebro do peixe-zebra, não foram observados sinais de indução de stress oxidativo. Porém, notou-se um aumento da atividade da AChE em todos os grupos expostos, alterações na expressão génica relacionada com a neurogénese adulta, sistema dopaminérgico e apoptose, bem como alterações no comportamento locomotor e social dos peixes. Estes resultados, por sua vez, destacam as diferentes interações dos MPs e Cu em diferentes órgãos.
Por fim, a exposição aguda e subcrónica do goraz a MPs e Cu, provocou stress oxidativo, dano celular e modulação do sistema antioxidante. À semelhança do observado em peixe-zebra, uma espécie de água doce, os resultados demonstraram também no goraz, uma espécie marinha, que
a toxicidade dos MPs em fases embrionárias e larvares surge principalmente após exposições mais longas. No entanto, ao contrário do peixe-zebra onde os MPs e Cu, isolados ou combinados, desregularam a atividade da AChE e a proliferação neuronal, no goraz não foram observados tais efeitos neurotóxicos. Isto, por sua vez, indica que a resposta dos peixes aos MPs e Cu é também dependente da espécie.
De uma forma geral, os resultados evidenciam que a exposição a MPs e Cu, isoladamente ou combinados, pode promover toxicidade no desenvolvimento, stress oxidativo e dano celular, alterações em termos de atividade metabólica, neurotoxicidade e comportamental. Os dados aqui apresentados proporcionam um conhecimento mais aprofundado sobre as interações toxicológicas dos MPs e metais pesados em peixes, principalmente em fases iniciais de vida.
Esta TESE enfatiza que novas pesquisas sobre os efeitos dos MPs, isolados ou combinados com outros poluentes, devem incluir exposições mais prolongadas para avaliar adequadamente o potencial risco das partículas de plástico na saúde dos organismos.In the last decades, plastic litter has gained global recognition as an emerging pollution problem with putative harmful effects on aquatic biota and human health. Although the size of plastic litter in the aquatic environment ranges from small particles to large fragments or macroplastics, it is now microplastics (MPs) that receive more attention. MPs, i.e. synthetic particles with regular or irregular shape and size between 1 μm and 5 mm, have been recognized as ubiquitous in ecosystems worldwide, persistent, and potentially toxic to aquatic organisms. Due to its small size, high surface area, and hydrophobicity, MPs can easily adsorb and accumulate other waterborne pollutants, such as copper (Cu), which is a heavy metal of great concern. In turn, when MPs interact with aquatic biota, the bioavailability of heavy metals adsorbed to their surface can be altered, and their toxicity can be modulated. Nevertheless, the research regarding the effects of MPs and heavy metals in aquatic biota is still limited.
In this context, this THESIS aimed to assess the toxicological effects of MPs and Cu, alone or combined, in two fish species, the zebrafish (Danio rerio) and the blackspot seabream (Pagellus bogaraveo), and provide novel insights regarding the environmental impacts of MPs in freshwater and marine biota. Considering the knowledge gap regarding the MPs and Cu effects in different fish life stages, especially after longer exposures, several experimental approaches were chosen. Zebrafish were exposed to MPs (2 mg/L) and Cu (15 – 125 μg/L, different concentrations depending on the type of bioassay used), alone or combined, from 2 hours post-fertilization (hpf) until 96 hpf (acute exposure) or 14 days post-fertilization (dpf) (subchronic exposure), to evaluate, respectively, the non-feeding or the feeding effects of these pollutants on fish development. Likewise, chronic 30-day exposure, to MPs (2 mg/L) and Cu (25 μg/L), alone or combined, was performed in zebrafish adults to evaluate the long-term effects at later ages. Additionally, in the marine species blackspot seabream, acute and subchronic exposure (3 and 9 days) to MPs (0.3 mg/L) and Cu (10 – 810 μg/L), alone or combined, was performed in newly hatched larvae to cover the late stages of larval development.
In the acute bioassay, performed on zebrafish embryos, toxic effects such as decreased survival and hatching, oxidative stress, modulation of the antioxidant system, inhibition of acetylcholinesterase (AChE), and disruption of avoidance and social behaviors, were observed. Nevertheless, these effects were mostly noticed in Cu and mixture (Cu+MPs) exposed groups, with MPs alone not producing significant effects on zebrafish. These results show that the toxic effects of acute exposure to MPs, during the embryonic period, can be limited, possibly due to the presence of the chorion which acts as a protective barrier against pollutants. When exposed subchronically, during 14 days, it was observed that MPs alone and Cu+MPs had a higher toxic effect on zebrafish larvae, compared to the acute exposure, highlighting that the toxicity of plastic particles may arise after longer exposures and could also be related to the ingestion of the plastic particles. Briefly, the subchronic exposure data showed that MPs and Cu, alone or combined, caused high mortality, oxidative stress, and neurotoxicity in zebrafish larvae. Regarding the specific effects related to neurotoxicity, inhibition of AChE and downregulation of neuronal proliferation (sox2, pcna), neurogenesis (neuroD, olig2), motor neurons development (islet), and DNA methyltransferases-related genes, were observed. In turn, these toxic effects may have contributed to the behavioral alterations, such as disruption of locomotor competence and avoidance behavior, observed in zebrafish larvae exposed to MPs, Cu and Cu+MPs. Additionally, the chronic effects of MPs and Cu were evaluated on adult zebrafish, particularly on two main target organs – gills and brain. In gills, there was an increase of reactive oxygen species (ROS) and, consequently, the induction of oxidative stress, as well an upregulation of serotonin and apoptosis-related genes. Regarding the effects on zebrafish brain, the induction of oxidative stress was not observed; however, an increase in AChE activity was noticed in all exposed groups, as well as alterations in adult neurogenesis, dopaminergic system and apoptosis-related genes, and, consequently, changes in the locomotor and social behavior of fish. These effects, in turn, highlight the different interactions of MPs and Cu with different organs.
Finally, in the acute and subchronic exposure of blackspot seabream to MPs and Cu, where oxidative stress, cellular damage, and modulation of the antioxidant system were observed, the results showed again that MPs toxicity in early life stages arises mostly after longer exposures. Nevertheless, contrarily to zebrafish where MPs and Cu, alone or combined, induced disruption of AChE activity and neuronal proliferation, no such neurotoxic effects were observed in blackspot seabream. This indicates that the response of fish to MPs and Cu is also species-dependent.
Overall, the results provide evidence that exposure to MPs and Cu, alone or combined, can promote developmental toxicity, oxidative stress and cellular damage, alterations in terms of metabolic activity, neurotoxicity, and disruption of fish behavior, crucial for their survival in the environment. The data presented herein provide deeper insights into MPs and heavy metals toxicological interactions in fish, particularly in early life stages.
This THESIS emphasizes that further research on the effects of MPs, alone or combined with other pollutants, should include longer exposures to properly evaluate the potential risk of plastic particles to the organisms' health condition.The work presented in this thesis was funded by an individual fellowship attributed to Dércia Santos by Fundação para a Ciência e Tecnologia (PD/BD/127992/2016), by the UIDB/04033/2020 project, and by the ATLANTIDA project (ref. NORTE-01-0145-FEDER-000 040), supported by the Norte Portugal Regional Operational Programme (NORTE 2020), under the PORTUGAL 2020 Partnership Agreement and through the European Regional Development Fund (ERDF) and Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT). The access to Aquaculture Facility IEO-Vigo (AquaCOV) was funded by the European Union‘s Horizon 2020 research and innovation program under grant agreement No 652831 AQUAEXCEL2020 (TNA project: AE120003-COPPLAST
Efeito de exploração selectiva de madeira em uma floresta de Miombo no Distrito de Mocuba, Província da Zambézia
No full textDissertação submetida à Faculdade de Engenharia Agronómica e Florestal da Universidade Zambeze, Mocuba, em parcial cumprimento dos requisitos para a obtenção do Grau de Mestre.
Reconhecimento de grau e diploma estrangeiroO presente estudo teve como objectivo avaliar a dinâmica da estrutura de uma floresta submetida a cortes selectivos em uma floresta de Miombo no Distrito de Mocuba, Província da Zambézia. Os dados foram obtidos de dois levantamentos consecutivos nos períodos 2012 e 2014, usando o processo de amostragem sistemática. Caracterizou-se a estrutura antes e após aplicação de cortes selectivos avaliando-se os seus efeitos na composição florística, diversidade de espécies, estrutura diamétrica, área basal e no incremento da floresta. Resultados mostraram que a exploração teve efeitos significativos na composição florística, reflectida na redução de número de indivíduos, de 1093 para 613, espécies de 34 para 22, género de 29 para 19 e o número de famílias botânicas de 12 para 7 respectivamente. Constatou-se também alteração de valor de importância de espécie Brachystegia spiciformis Benth., para Cordyla africana Lour., do primeiro para o segundo inventário, respectivamente. A diversidade de espécie reduziu de 1.86 para 1.83 e a equabilidade de 0.89 para 0.83, respectivamente. Porém, o teste t (a = 5%) mostrou que a exploração não teve efeitos significativos para estes parâmetros. A distribuição diamétrica ajustada pela função de Meyer demonstrou que o número de indivíduos reduziu nas classes 17.5 cm, 27.5 cm, 37.5 cm e 47.5 cm, respectivamente. Todavia, apresentaram capacidade de resiliência. Situação contrária verificou-se para a área basal que apresentou dificuldades de recuperação nas mesmas classes, e consequentemente os incrementos reduziram. Desta forma a floresta deve ser conduzida usando diretrizes de maneio para о alcance de incrementos
Relatório da Prática de Ensino Supervisionada na Escola Secundária São Pedro, Vila Real
No full textO presente documento foi realizado com o intuito de expor o trabalho elaborado ao longo do ano letivo 2022/2023, no âmbito da unidade curricular de Estágio no 2º Ciclo do Mestrado em Ensino de Educação Física nos Ensinos Básico e Secundário, na Universidade de Trás-osMontes e Alto Douro. Esta etapa assume um papel de elevada importância na formação académica, concedendo habilitação profissional para a docência, sendo aqui que se consolida as aprendizagens desenvolvidas nos últimos anos, exercendo as funções pedagógicas. O documento encontra-se organizado em 8 capítulos abordando as diferentes dimensões envolvidas na prática pedagógica, desde a dimensão pessoal, o enquadramento institucional, a prática pedagógica, as atividades meio-escola, entre outros. Este relatório pretende reunir, analisar e descrever todo o processo ensino-aprendizagem e será também possível verificar todo o processo ao longo deste ano, assim como todo o envolvimento, como Professora Estagiária no meio escolar. Para a consolidação do meu desenvolvimento académico, este relatório contempla um estudo sobre o nível de coordenação motora de alunos do 7ºano. Participaram neste estudo 23 alunos, tendo recorrido á bateria de testes KTK para recolha de dados, a mesma foi realizada através das tarefas de pontuação do KTK. As conclusões do estudo indicaram que a turma apresenta valores normais de CM, existindo sete casos com pontuações mais levados (alta e boa), mas verificamos que existem dois casos de perturbação da mesma e também com dificuldades na EF.This document was carried out in order to expose the work developed throughout the academic year 2022/2023, within the scope of the curricular unit of Internship in the 2nd Cycle of the Master's Degree in Physical Education Teaching in Basic and Secondary Education, at the University of Trás-os-Montes and Alto Douro. This stage assumes a very important role in academic training, granting professional qualification for teaching, and it is here that the learning developed in recent years is consolidated, exercising pedagogical functions. The document is organized and has 8 chapters addressing the different dimensions involved in pedagogical practice, from the personal dimension, the institutional framework, the pedagogical practice, the half-school activities, among others. This report aims to gather, analyse and describe the entire teaching-learning process and it will also be possible to verify the entire process throughout this year, as well as all the involvement, as a Trainee Teacher in the school environment. For the consolidation of my academic development, this report includes a study on the level of motor coordination of 7th grade students. 23 students participated in this study, having used the KTK test battery for data collection, which was carried out through the KTK scoring tasks. The conclusions of the study indicated that the class has normal MC values, with seven cases with higher scores (high and good), but we found that there are two cases of disturbance of the same and also with difficulties in PE
17th-century descriptions of Japanese and Vietnamese and their relevance to the modern politeness principle
Get PDFThe “politeness principle” was coined even before Stephen Curtis Levinson established pragmatics as a linguistic academic field in the early 1980s. However, other relevant works concerning pragmatics were published as early as the 1930s, for example, by Charles Sanders Peirce (1839-1914), Charles William Morris (1901-1979) and Yehoshua Bar-Hillel (1915-1975). On the other hand, there is a common knowledge that Brown & Levinson (1978; 1987) originated the idea of the politeness principle because of the importance of their linguistic politeness studies. Though the 1973 paper by Robin Tolmach Lakoff, “The logic of politeness: Or, minding your p’s and q’s,” can be considered the “birth certificate” of the politeness principle as a linguistic domain, it is often ignored even in specialized papers or books. Based on a 1967 work by Herbert Paul Grice (1913-1988) on the rules of conversation, an as yet unpublished manuscript, Lakoff (1973) summed up the politeness expressions into three rules. Nevertheless, the grammarians and linguists of Asian languages were always particularly interested in describing their relevant expressions and address forms. In 1944, Hsien Chin Hu (Columbia University, New York City) published a pioneering paper concerning “The Chinese Concepts of ‘Face’,” anticipating by 11 years the theory of face in Erving Goffman’s paper “On Face-Work; An Analysis of Ritual Elements in Social Interaction”. 17th-century European grammarians and lexicographers of the Japanese and Vietnamese languages had also aimed to describe the linguistic social relationships’ regulations. In this paper, we study the approaches which three early European grammarians and lexicographers developed to account for the politeness principle in Japanese and Vietnamese in the 17th century, namely João Rodrigues ‘Tçuzu’, S. J. (1562-1633), Diego Collado, O.P. (late 16th century-1638) and Alexandre de Rhodes, S. J. (1593-1660), and their contribution to present-day linguistics
Transferência de embriões: influência da idade das éguas dadoras e do tipo de sémen na taxa de sucesso da técnica
Get PDFO sucesso de um programa de transferência de embriões depende de vários fatores, tais como a idade da égua dadora, o tipo de sémen utilizado na inseminação, a técnica de recolha utilizada, a idade e a qualidade do embrião, entre outros. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da idade da égua dadora e do tipo de sémen nas taxas de sucesso desta biotecnologia reprodutiva. O presente estudo foi realizado durante os meses de março, abril e maio de 2023 na Embriovet, uma Clínica de Reprodução Equina. Foram realizadas 113 transferências de embriões em 69 éguas dadoras, maioritariamente da raça Puro-Sangue Lusitano. Para proceder à avaliação da influência no número de embriões recolhidos e no número de gestações obtidas (variáveis dependentes) de éguas recetoras foram consideradas as seguintes variáveis independentes: (a) idade da égua dadora, (b) tipo de sémen, e (c) número de tratamentos médicos realizados. As éguas foram divididas em dois grupos: éguas com menos de 15 anos (grupo 1) e éguas com 15 anos ou mais (grupo 2). O tipo de sémen também foi dividido em dois grupos (congelado e fresco/refrigerado). O impacto das variáveis foi avaliado através de uma análise Univariada de Variância com recurso ao teste Post-Hoc de Bonferroni. A associação entre os parâmetros estudados era considerada estatisticamente significativa quando p < 0,05. Nenhuma das variáveis teve uma associação estatisticamente significativa com nenhuma das outras, podendo este resultado estar relacionado com uma amostra populacional limitada e enviesada. Assim, a idade da égua dadora e o tipo de sémen não influenciaram a taxa de recuperação embrionária, apesar de se ter observado uma taxa de recolha de embriões ligeiramente superior em éguas com idades inferiores a 15 anos e inseminadas com sémen fresco ou refrigerado.The success of an embryo transfer program depends on several factors, such as the age of the donor mare, the type of semen used in insemination, the collection technique used, the age and quality of the embryo, among others. The main purpose of this work was to evaluate the influence of the age of the donor mare and the type of semen on the success rates of this reproductive biotechnology. The present study was carried out during the months of March, April and May of 2023 at Embriovet, an Equine Reproduction Clinic. 113 embryo collections were carried out with 69 donor mares, mostly of the Lusitano Purebred breed. To assess the influence on the number of embryos collected and the number of pregnancies obtained (dependent variables) from recipient mares, the following independent variables were considered: (a) age of the donor mare, (b) type of semen, and (c) number of medical treatments performed. The mares were divided into two groups: mares under 15 years old (group 1) and mares aged 15 years or over (group 2). The type of semen was also divided into two groups (frozen and fresh/cooled). The impact of the variables was evaluated through a Univariate Analysis of Variance using the Bonferroni Post-Hoc test. The association between the studied parameters was considered statistically significant when p < 0.05. None of the variables had a statistical significant association with any of the others, which may be related to a limited and non-random population sample. Therefore, the age of the donor mare and the type of semen did not influence the embryo recovery rate, although a slightly higher embryo collection rate was observed in mares aged less than 15 years and inseminated with fresh or cooled semen