Kawasaki University of Medical Welfare Institutional Repository

CONTENTS
Original Paper
The Effect of a Film Viewing Intervention Added to Lectures to 
Improve University Students’ Attitudes toward Sexual and Gender Minorities ……………  71
Arata SASAKI, lori OHMORI and Shawna M. CARROLL
Material
Status and Influencing Factors of High School Students’ Family 
Formation Willingness ………………………………………………………………………………………  87
Junko KAWAHARA and Kinuko SUGIURA
Reviewer Acknowledgements ………………………………………………………………………… 103
Instructions to Authors …………………………………………………………………………………… 105


Japanese

表紙

P(論文)短報departmental bulletin pape

西脇, 藍

岡山藩主を取り巻く医者たち ―池田家文庫資料「曹源寺様御病中 午十月朔日ゟ同十一月廿一日迄覚」より―

榊原, 佳奈枝

通山, 薫

69
川崎医療福祉学会誌　Vol.  33　No.  1　2023　69－73
＊1 川崎医療福祉大学　医療技術学部　臨床検査学科
＊2 川崎医科大学　検査診断学
（連絡先）榊原佳奈枝　〒701-0193　倉敷市松島288　川崎医療福祉大学
　　　　　E-mail : ksakakibara@jc.kawasaki-m.ac.jp
１．緒言
１．１　はじめに
　RAS 遺伝子の突然変異は，さまざまな種類の悪
性腫瘍で広く認められる．造血器腫瘍においても
NRAS 変異を高率に認めることがすでに判明して
おり，急性白血病の約15%，骨髄異形成症候群の約
6%，骨髄増殖性疾患や多発性骨髄腫では，およそ
30% もの患者が保有している1）．これまで本研究室
では，ヒト造血器腫瘍細胞株に対する binimetinib
の増殖抑制効果を検討してきた．その結果，計10
株のヒト造血器腫瘍細胞株を感受性4株（HL-60，
TF-1，MDS-L，F36P）， 非 感 受 性4株（Jurkat，
MOLM13，U937，MOLT4），その他2株（THP-1，
K562）に分けることができた．binimetinib 感受性
の4株では，培養初日に薬剤を1回投与するだけで一
定の増殖抑制効果を認めたが，非感受性の4株では
全く効果を認めなかった．そこで本研究では，薬剤
の連日投与が binimetinib の増殖抑制効果に影響を
及ぼすかどうかを調べるために検討を行った．
１．２　binimetinib の作用点
　RAS 活性は GEF と GAP という2種類のシグナ
ルタンパクにより調節されている．GEF は GDP/
GTP 交換反応を促進し，RAS を活性化させる．
GAP は内在性 GTPase により，RAS-GTP から
RAS-GDP に戻る反応を促進し，RAS を不活性化
させる．RAS 遺伝子の突然変異によりアミノ酸置
換が生じると，GTPase の機能が低下し，RAS は
恒常的な活性化状態となって下流にシグナルを送
り続ける．これにより MAPK（RAS/RAF/MEK/
ERK）回路が活性化する2）．binimetimib は MEK
を阻害することで異常に活性化された MAPK 回路
を止める役割がある．
２．方法
２．１　細胞と培養条件
　検討には急性骨髄性白血病細胞株（HL-60，TF-1，
THP-1，MOLM13，U937，F36P），急性リンパ性
白血病細胞株（MOLT4，Jurkat），慢性骨髄性白
血病細胞株（K562）および骨髄異形成症候群細胞
株（MDS-L）を使用した．各細胞株を RPMI1640 
medium（ウシ胎児血清8% ペニシリン/ストレプト
マイシン）で37℃，CO2 5% の条件下で培養した．
２．２　MTT assay3）
　細胞の生存率を測定するために利用した．生細胞
が多いほど呈色を有し，アポトーシスを含めた細
胞死が起こるにつれて吸光度が低くなる．2.5×104 
ヒト造血器腫瘍細胞株における新規MEK1/2阻害薬
binimetinibの効果的投与方法の探索
榊原佳奈枝＊1　通山薫＊2
要　　　約
　われわれは以前，ヒト造血器腫瘍細胞株における binimetinib の増殖抑制効果を確認したが，
その際は培養初日の薬剤1回添加のみで検討していた．そこで今回，連日添加の効果を検討したと
ころ，F36P を除くすべての細胞株において増殖抑制効果の増強は認められなかった．したがっ
て，binimetinib の添加は基本的に初日の1回添加で十分であり，それで増殖抑制効果の乏しい細胞
には複数回の添加を行ってもほとんど効果はないと考えられる．ただし，将来臨床応用に向けて
binimetinib の適正な投与方法を確立するためには，高濃度での連日添加などさらなる検討が必要で
ある．
短　報
70 榊原佳奈枝・通山薫
/mL の濃度に調整した各細胞に binimetinib（0，
10，100，1000nM）を連日投与しながら1～4日間
培養し，96well マイクロプレートに100µL ずつ分
注した．MTT 標識溶液を20µL ずつ加え，6時間反
応後，可溶化溶液（0.04 M HCl/ イソプロピルアル
コール）を200µL ずつ分注した．その後，マイク
ロプレートリーダーで590nm における各サンプル
の吸光度を測定した．
２．３　AnnexinV/PI 染色4）
　初期および後期アポトーシスを測定するために利
用した．アポトーシス初期の細胞は AnnexinV の
み陽性，アポトーシス後期の細胞は AnnexinV/PI
陽性となる．2.5×104/mL の濃度に調整した F36P
に binimetinib 1000nM を連日投与しながら1～4
日間培養し，Annexin V Binding Buffer 50µL，
Annexin V-FITC 1µL，PI 1µL を加え，室温・遮
光で15分間反応させた．その後，フローサイトメー
ターで各サンプルの蛍光強度を測定した．
２．４　PI 染色5）
　細胞周期各相における細胞割合を測定するため
day1 day2 day3 day4
control 8.0×104 5.0×104 4.0×104 3.0×104
binimetinib
1000nM
10.0×104 20.0×104 30.0×104 40.0×104
表１　PI 染色時の F36P 濃度（個/10mL）
図１　各細胞株における MTT assay の結果
71ヒト造血器腫瘍細胞株におけるビニメチニブの効果的投与方法
に利用した．PI 色素は DNA 二重鎖への高い親
和性を有し，DNA 染色量は細胞中の DNA 含量
に比例する．F36P の濃度を表1のように調整し，
binimetinib 1000nM を連日投与しながら1～4日間
培養した．70% メタノールで室温30分間固定後，
RNase溶液（RNase：1%アルブミン含有PBS＝1：4）
を500µL 分注し，37℃30分間反応させた．PI 溶液
（PI 1mg/mL：1% アルブミン含有 PBS ＝1：19）
を500µL 分注し，室温・遮光で20分間反応後，フロー
サイトメーターで各サンプルの蛍光強度を測定した．
３．結果
　全ての細胞において，binimetinib の培養初日1回
投与と連日投与の増殖曲線に大きな変化は認められ
なかった．ただし，F36P では1000nM においての
み，明らかな増殖抑制効果を認めた（図1）．また，
F36P に対して binimetinib の連日投与を行うと，
薬剤投与回数に伴いアポトーシスの増加とセルサイ
クルの停止を認めた（図2，3）．
４．考察
　今回，binimetinib のヒト造血器腫瘍細胞株に対
する増殖抑制効果が薬剤投与方法によって違いが
あるかどうかを培養初日の薬剤1回投与と連日投与
で比較した．検討に使用した10株のうち，薬剤1回
投与で非感受性であった4株（Jurkat，MOLM13，
U937，MOLT4）においては連日投与による若干
の増殖抑制効果を，感受性であった4株（HL-60，
図２　F36P のアポトーシス結果 図３　F36P のセルサイクル結果
72 榊原佳奈枝・通山薫
TF-1，MDS-L，F36P）においては連日投与による
更なる効果を期待していたが，F36P を除く全ての
細胞において明らかな増殖抑制効果の増強は認めら
れなかった．したがって，binimetinib の投与は基
本的に初日のみの1回投与で十分であり，この投与
で増殖抑制効果の乏しい細胞には複数回の投与を
行ってもほとんど効果は望めないと考えられる．
唯一，連日投与で効果を認めた F36P においても
100nM 以下の低濃度域では増殖抑制効果の増強は
認められず，1000nM 以上という比較的高濃度での
連日投与が必須であることが示唆された．しかし，
binimetinib の安全血中濃度がおよそ1000nM であ
ることより6），これ以上の高濃度域で連日投与する
ことは実際には不可能であると考えられる．また今
回，binimetinib 1000nM 連日投与による F36P の
増殖抑制効果がどのメカニズムで起こるのかを確認
するために，フローサイトを用いて経時的なアポ
トーシス細胞の増減とセルサイクル解析を行った．
どちらも薬剤投与回数が増える毎に細胞増殖が抑制
されるという結果を支持するものであったが，アポ
トーシス細胞の増加は3回以上の連日投与から顕著
であった．一方，セルサイクルの停止は2回の連日
投与で効果が頭打ちとなり，その後，いくら薬剤投
与回数を増やしてもほとんど変化は認められなかっ
た．4回以上の binimetinib 連日投与でアポトーシ
ス細胞がどれほど増加するかは不明だが，セルサイ
クル同様，増殖抑制効果が頭打ちする可能性は否定
できない．今後は血中半減期を考慮した培養上清の
wash out なども行いながら，binimetinib の適正な
投与方法のための実験を継続する必要がある．
５． まとめ
　binimetinib 連日投与による増殖抑制効果の
増強は一部の細胞を除いて認められなかった．
binimetinib の効果的な投与方法については，今後
の詳細な検討が必要である．
利益相反
　本研究は申告すべき利益相反はありません．
謝　　辞
　本研究は川崎医療福祉大学の医療福祉研究費（2019年度）の助成を受け実施したものです．
文　　　　献
1） Ward AF, Braun BS and Shannon KM：Targeting oncogenic Ras signaling in hematologic malignancies. Blood，
120，3397-3406，2012．
2） 東北大学：The RAS/MAPK Syndromes Homepage．
　　http://www.medgen.med.tohoku.ac.jp/rasmapk_j/pathway/，2012．（2023.2.6確認）
3） 西方敬人，川上純司，藤井敏司，長濱宏治，川内敬子：細胞毒性試験（MTTアッセイ）．中村友子編，ゼロからは
じめるバイオ実験マスターコース3，学研メディカル秀潤社，東京，117-120，2015．
4） 沖田康孝，中山敬一：形態学的・生化学的変化を用いたアポトーシスの解析．清田純編，直伝！フローサイトメト 
リー　面白いほど使いこなせる！―実践編　アナリシス（個々の細胞の状態を調べる）―，羊土社，東京，72-83，
2014．
5） 武石昭一郎，中山敬一：DNA 量の変化などを利用した細胞周期の解析．清田純編，直伝！フローサイトメト 
リー　面白いほど使いこなせる！―実践編　アナリシス（個々の細胞の状態を調べる）―，羊土社，東京，46-57，
2014．
6） Watanabe K, Otsu S, Hirashima Y, Morinaga R, Nishikawa K, Hisamatsu Y, Shimokata T, Inada-Inoue M, Shibata 
T, ...Ando Y：A phase I study of binimetinib (MEK162) in Japanese patients with advanced solid tumors. Cancer 
Chemotherapy and Pharmacology，77，1157-1164，2016．
（2023年4月17日受理）
73ヒト造血器腫瘍細胞株におけるビニメチニブの効果的投与方法
Investigation of Effective in vitro  Addition of a Novel MEK1/2
Inhibitor Binimetinib in Human Hematopoietic Tumor Cell Lines
Kanae SAKAKIBARA and Kaoru TOHYAMA
（Accepted Apr. 17，2023）
Key words : binimetinib，cell line，MTT assay，flow cytometry
Abstract
　We previously confirmed the growth inhibitory effect of binimetinib in human hematopoietic tumor cell lines in 
vitro , but only a single addition of the drug on the first day of culture was investigated. In this study, we examined 
the effect of daily addition of binimetinib and found no increase in growth inhibition in all cell lines except F36P. This 
result suggests that a single addition of binimetinib on the first day is basically sufficient, and multiple additions to 
the cells showing resistance to the drug have little effect. Further in vitro  studies are needed for aiming at future 
clinical use.
   Correspondence to : Kanae SAKAKIBARA　　　Department of Medical Technology
Faculty of Health Science and Technology
Kawasaki University of Medical Welfare
288 Matsushima， Kurashiki， 701-0193， Japan
E-mail ：ksakakibara@jc.kawasaki-m.ac.jp
（Kawasaki Medical Welfare Journal Vol.33， No.1， 2023 69－73）


ヒト造血器腫瘍細胞株における新規 MEK1/2阻害薬binimetinibの効果的投与方法の探索

川崎医療福祉学会誌編集委員会　
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副委員長
副委員長
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委　員
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委　員
委　員
委　員
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委　員
委　員
石　田　　　弘
細　川　貴　之
髙　尾　堅　司
山　内　泰　子
森　本　寛　訓
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徳　地　　　亮
八　田　徳　高
上　野　浩　司
竹　井　泰　孝
福　原　真　一
奥　　　和　之
松　生　香　里
坂　本　　　圭
谷　川　智　宏
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Michael Kremenik
掛　屋　純　子
（理学療法学科）
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（臨床工学科）
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（医療情報学科）
（医療秘書学科）
（医療福祉デザイン学科）
　　（健康体育学科）
（看護学科）
川崎医療福祉学会事務局　
田　中　寧　乃
佐　藤　奈津恵
33 巻　補冊号　特別編集委員会
編集委員長
副委員長
委　員
委　員
委　員
委　員
委　員
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宮　川　　　健
松　本　麻友子
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西　田　裕　明
森　　　訓　子
須　谷　弥　生
（健康体育学科）
（総合教育センター）
（総合教育センター教職課程部門）
（医療秘書学科）
（総合教育センター教職課程部門）
（総合教育センター教職課程部門）
（総合教育センター教職課程部門）


[Others]

川崎医療福祉学会誌
　　　令和 5年 10 月 23 日発行
発行者　椿　　原　　彰　　夫
発行所　川　崎　医　療　福　祉　学　会
　　　　〒 701-0193　倉敷市松島 288
印刷者　中　　田　　秀　　哉
印刷所　山陽印刷株式会社
　　　　〒 700-0986　岡山市北区新屋敷町 1-1-18
　　　　 　山陽新聞新屋敷町ビル
連絡先　川崎医療福祉大学　中央教員秘書室
　　　　〒 701-0193　倉敷市松島 288
　　　　TEL　086-462-1111　内線 54995
　　　　　　　086-464-1009　（直通）
　　　　FAX　086-464-1109


奥付

KAWASAKI  MEDICAL  WELFARE  JOURNAL
Vol.33
2023
V
ol. 3
3
  補
冊
号
　
2
0
2
3
ISSN 0917－4605
川崎医療福祉学会誌
川
崎
医
療
福
祉
学
会
誌
川崎医療福祉学会
川
崎
医
療
福
祉
学
会
川崎医療福祉学会
補冊号


裏表紙

P(論文)各教科departmental bulletin pape

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表紙

岡山藩主を取り巻く医者たち ―池田家文庫資料「曹源寺様御病中午十月朔日ゟ同十一月廿一日迄覚」より―

ヒト造血器腫瘍細胞株における新規 MEK1/2阻害薬binimetinibの効果的投与方法の探索

[Others]

奥付

裏表紙

視覚情報を用いた和歌教材の開発 ―古今集 169 番歌を題材として―

時空間的推移現象を理解するためのタイムラプス動画を活用した教材の提案 ―小学校第 5 学年「メダカのたんじょう」を例に―

自閉スペクトラム症児がいる小学校通常級を想定したマット運動教材の提案―TEACCH の視点に焦点を当てて―

3,587

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