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Phenotypic and molecular consequences of a pathogenic mutation in MeCP2: characterization of a novel mouse model.
No full textRett syndrome (RTT) is a devastating genetic disease that affects predominantly girls. It is characterized by a host of neurological symptoms of variable severity and it is primarily caused by sporadic mutations in the X-linked Methyl-CpG binding protein 2 (MECP2) gene.
Over the years, different mouse models mutated in Mecp2 – well recapitulating the human disorder – have been instrumental for understanding some aspects of RTT pathogenesis and of MeCP2 biological activities. This protein appears as a multifunctional molecule involved in many different processes, such as transcriptional regulation and chromatin compaction.
However, several aspects regarding MeCP2 and the consequences of its alterations need further deeper investigation. In particular, new interest is rising on the post-translational modifications found along the protein, which are hypothesized to regulate its multiple biological functions. In this context, the Tyr-120 residue of MeCP2 appears worth of interest since it is both subjected to phosphorylation and associated with the development of Rett syndrome, with its substitution to aspartic acid resulting pathogenic in humans. Previous in vitro studies aimed at characterizing the Tyr-120 phospho-isoform permitted to reveal a novel localization of the protein at the centrosome and a functional association with this cellular organelle. To better investigate the relevance of this amino acid site and of its defective phosphorylation we generated a knock-in mouse model carrying the disease-causing Y120D mutation. Here we present the phenotypic, morphological and molecular characterization of this novel mouse line. We show that C57BL6J and CD1 Mecp2Y120D mice suffer from a host of RTT-like phenotypes, while the mutated neuronal cells and tissues do not present some of the abnormalities typically found in Mecp2-null models. Importantly, the Y120D alteration causes the subnuclear delocalization of the protein from pericentromeric heterochromatic foci.
Moreover, adult, but not immature, brains from knock-in animals are characterized by altered levels of Mecp2 and of one of its phospho-isoforms. They also show increased solubility of the mutated protein and reduced chromatin compaction. Overall, these molecular defects – together with other aspects that need to be better analysed – likely contribute to the pathogenic mechanisms leading to RTT-like phenotypes. We believe that the study of this new genetically engineered mouse model will help to shed light on the importance of MeCP2 post-translational modifications and on their relevance in RTT pathogenesis
A real-time framework for malicious behaviour discovery on android mobile devices.
No full textIn few years Android has become the most widespread operating system among mobile devices. Its extreme popularity combined with the personal information contained on smartphones - as financial account, private photos and other acquaintances’ data – has captured the attention of many criminal organizations and hackers. The consequence is the massive presence on the market of malwares targeting the Android architecture.
A great amount of research has focused on mechanisms to discovery such threads analyzing the application package before installing it, looking for common patterns and specific features while other approaches try to discover the infection during the attack but the required computation penalizes the device’s performance and battery autonomy.
In this thesis we present a novel framework for real-time monitoring the Android device’s behavior without compromising the user experience. Our approach, thanks to a client-server architecture, permits to know in time many information related to the system and the applications running on it. By defining appropriate rules through an ad-hoc language we are able to control the device’s behavior and understand if it is the result of an infection. Further, with the contribution of the server which collects data from many users, we are able to compare data from different devices and understand if an application is different from the “safe” version. During our tests we were able to discover if an application has been infected with the introduction of a malicious code and to understand if the device behavior deviates in time in respect to the user standard profile which was built dynamically over time
Alterazioni epigenetiche reversibili associate alla transizione epitelio mesenchimale (EMT) in cellule prostatiche tumorali.
No full textLa transizione epitelio mesenchimale (EMT) è un processo dinamico e regolato, fondamentale per lo sviluppo embrionale, per il mantenimento dell’omeostasi dei tessuti, per la fibrosi tissutale e per il cancro (Sanchez-Tillo et al, 2014). L’EMT induce un cambiamento reversibile dello stato fenotipico delle cellule che perdono le caratteristiche epiteliali e acquisiscono un fenotipo mesenchimale. Queste stesse cellule inoltre, possono revertire il loro stato fenotipico mesenchimale in epiteliale, durante il processo inverso di EMT, la transizione mesenchimale- epiteliale (MET) (Tam WL. & Weinberg RA., 2013).
Lo studio di un modello sperimentale di EMT- MET in cellule tumorali di prostata, mediante l’induzione con terreno condizionato da CAFs (fibroblasti associati al tumore), per 3 giorni, in cellule prostatiche PC3 e non in LN-CaP (linea cellulare di controllo) ha attivato l’EMT; mentre il trattamento con CM-HPFs (fibroblasti umani periferici) usato come controllo, non ha indotto il processo. La conferma dell’attivazione di EMT è stata ottenuta mediante l’analisi di espressione proteica e di RNA messaggero di marcatori chiave di tale processo, come E-caderina, N-caderina e Vimentina (Thiery J.P. et al, 2009). Inoltre, la riespressione di E-caderina e la diminuzione di N-caderina e Vimentina, nel trattamento di PC3 con terreno ottenuto da cellule PC3 mantenute in coltura in assenza di siero per 48 ore (CM-SS PC3 o recovery medium, RM), per ulteriori 3 giorni, ha dimostrato l’attivazione del processo di MET.
La riduzione di espressione delle sequenze LINE1, considerate come surrogato della metilazione globale del DNA, nelle cellule PC3 in EMT, è in accordo con la diminuzione dell’espressione di UHRF1 e di DNMT1, DNA metiltransferasi di mantenimento; inoltre il ripristino di espressione delle medesime, durante la MET, evidenzia lo stato dinamico e reversibile di tali processi.
L’aumento, seppur lieve, di espressione di DNMT3a (DNMTs “de novo) in EMT e il successivo ripristino di espressione della stessa, durante la MET, mostra la presenza di alterazioni degli enzimi implicati nella metilazione del DNA e riconferma la reversibilità del processo di EMT-MET.
La presenza del legame di DNMT3a e non di DNMT1, sul promotore del gene di CDH1, in cellule PC3 in EMT, mediante tecnica ChIP, e l’aumento dello stato di metilazione di una regione del promotore di CDH1, mediante pyrosequencing confermano una significativa variazione dello stato di metilazione di questo gene. Inoltre, i dati ottenuti mediante analisi di Illumina 450K su di oltre 485 mila isole CpGs distribuite all’interno dell’intero genoma, ha prodotto risultati importanti sulla reversibilità dello stato di metilazione di alcuni geni implicati nel processo di EMT, come CDH1, N-CAD, ZEB1 e VIMENTINA. Infatti, in questi geni lo stato di ipometilazione e/o di ipermetilazione durante il processo di EMT, è esattamente speculare al dato ottenuto, per gli stessi geni, durante il processo di MET. I risultati acquisiti da queste analisi hanno inoltre confermato lo stato di ipermetilazione di CDH1 durante la EMT che ne determina la sua repressione trascrizionale, come si osserva dalle analisi di qPCR e WB eseguite precedentemente.
Quindi, durante il processo di EMT-MET avvengono delle alterazioni epigenetiche reversibili a livello dello stato di metilazione del DNA di alcuni geni, in particolare di CDH1.
Inoltre, la presenza contemporanea di H3K4me3 e di H3K27me3 sul promotore di CDH1 in EMT, ha mostrato lo stato di gene ambiguo di E-caderina e l’acquisizione di uno stato “bivalente”, caratterizzato da plasticità e reversibilità (Ke X.S. et al, 2009).
Questi risultati ottenuti, però, non sono ancora in grado di spiegare se l’attivazione del processo di EMT richieda la presenza di variazioni dello stato di metilazione del DNA o se tali alterazioni sono solo la conseguenza del processo, tuttavia sono ancora in corso esperimenti ed analisi per rispondere a questa domanda
Gelectin-1 is a new potential therapeutic target in multiple myeloma
No full textGalectin-1 (Gal-1) is a lectin, involved in several processes related to cancer, including immunosuppression, angiogenesis, hypoxia, and metastases. Currently, the role of Gal-1 in multiple myeloma (MM) pathophysiology and in MM-induced angiogenesis is unknown. Firstly, we found that Gal-1 was expressed by malignant plasma cells in the bone marrow microenvironment. Moreover, our data demonstrated that Gal-1 expression was up-regulated in MM cells by hypoxia treatment (1% of O2).Furthermore, the stable knock-down of Hypoxia Inducible Factor-1α, the master regulator of oxygen homeostasis, in human myeloma cell lines (HMCLs) markedly down-regulated Gal-1 expression. Thereafter, we found that the stable inhibition of Gal-1 by lentiviral vector short hairpin RNA (shRNA) anti-Gal-1 did not affect the proliferation and survival of MM cells, but significantly modified their transcriptional profiles, both in normoxic and hypoxic conditions. Notably, Gal-1 inhibition in MM cells significantly down-regulated genes involved in promoting tumor angiogenesis such as CCL2 and MMP9, and up-regulated some putative anti-angiogenic genes, including SEMA3A and CXCL10. In line with these observations, we found that Gal-1 suppression significantly decreased the pro-angiogenic proprieties of HMCLs, assessed by in vitro angiogenesis assay. Finally, we found that NOD-SCID mice, injected subcutaneously with HMCLs carrying a stable infection with lentiviral vector shRNA anti-Gal-1, showed a reduction in tumor volume and a significant reduction in the plasmacytomas microvascular density, compared to mice inoculated with HMCLs carrying a stable infection with the control vector. In a different set of experiments, a HMCL JJN3 infected with shRNA anti-Gal-1 and with control vector were injected in NIH-III SCID mice, an intratibial mouse model. We found that the anti-Gal-1 group developed tumors reduced in length, thickness, width and volume size and, in addition, developed fewer and smaller lytic lesions on x-ray compared to the control group.
Overall, our data indicate that Gal-1 exerts a role in MM pathophysiology and in MM-induced angiogenesis and its inhibition in MM cells significantly reduced tumor growth in vivo, suggesting that Gal-1 is a new potential therapeutic target in MM
Farmacoterapia e qualità della vita nella sindrome di Gilles de la Tourette
No full textBACKGROUND: Few studies have used standardized and specific instruments to assess the Health-Related Quality of Life (HR-QoL) in Tourette Syndrome (TS). Moreover, there are no studies focusing on pharmacotherapy and HR-QoL.
AIMS: We compared the clinical characteristics and the HR-QoL in youth and adult TS patients with and without pharmacological treatment.
METHODS: We recruited 112 TS patients (94 males; age range 7-64 years). All patients were evaluated by a trained neuropsychiatrist in TS and completed the Gilles de la Tourette Syndrome-Quality of Life scale (GTS-QoL). Clinical features of TS and severity of tics were assessed by specific clinical rating such as the Yale Global Tic Severity Scale (YGTSS) and Tourette’s Syndrome Diagnostic Confidence Index (TSDCI).
Results were compared between patients with and without pharmacological treatment. We also divided the sample in two groups ( 18 years), and the same comparison was performed both between groups (young patients vs adult patients) and within each group.
RESULTS: Forty-four TS patients (39,3%) were on pharmacotherapy (23=monotheapy; 16=dualtherapy, 5=politherapy). Of note, 86 patients (76.8%) fulfilled diagnostic criteria for at leas one comorbid condition. No significant differences were found in HR-QOL between youth and adult TS patients with pharmacotherapy. However, young patients on pharmacotherapy showed higher mean scores on GTS-QoL Obsessive Scale (p=0,009) than peer without treatment.
As expected, comparing the mean scores of GTS-QoL with YGTSS and TS-DCI scores we found a significant correlation between HR-QoL and tic severity ratings.
Age-related analysis showed that in young patients the presence of OCS correlated with higher GTS-QoL Obsessive (p=0,043), whereas adults reported higher scores on the majority of GTS-QoL domains in correlation with the presence of OCD, ADHD and sleep problems.
DISCUSSION: The treatment for patients with TS is based on a broad diagnostic process. The use of drugs for treatment of TS, especially in children, must be done only when tic interfere with daily life, cause subjective discomfort and cause sustained social/emotional problems. Indeed, our results showed that adult TS patients for whom it was necessary a pharmacotherapy are those who had worse HR-QOL. Moreover, patients with pharmachoterapy showed higher severity of TS’ symptom
Trattamento del tromboembolismo venoso con anticoagulanti tradizionali e di nuova generazione.
No full textThe paradigm of treatment of acute venous thromboembolism (VTE) has been recently challenged by the new direct oral anticoagulants (DOACs).
The aim of the research project was to evaluate the impact of DOACs on the management of pulmonary embolism (PE), isolated distal deep vein thrombosis (IDDVT) and bleeding. The approval process of DOACs was delayed in Italy and did not include IDDVT and, until 2015, PE. Therefore, the projects underwent some changes, with the aim of building solid bases for subsequent studies that will adopt DOACs.
The project on PE was focused on the prognostic stratification, by applying the Pulmonary Embolism Severity Index (PESI). The results of the study showed a 2 days significant difference of the median duration of hospital stay between low risk vs. high risk patients, as identified retrospectively by PESI. However, this difference has little clinical significance and led to hypothesize that prospectively adopting PESI may have a significant impact.
With regards to IDDVT, a retrospective study was performed on 321 patients, who were treated with a short course of anticoagulation. The results showed a non negligible 15% rate of recurrent VTE events. Therefore, many cases of IDDVT should be considered in the context of major VTE and may benefit from an extended treatment.
Finally, the management of anticoagulant-associated bleeding was explored in a literature review and includes general resuscitation, diagnosis and local treatment of the bleeding source, as well as transfusion of red cells, clotting factor replacements and administration of antidotes and other prohaemostatic agents. Reversal strategies for the ‘conventional’ anticoagulants are based on clinical evidence, whereas evidence on DOACs is emergin
La nozione di giustizia nella filosofia politica di Ugo Grozio
No full textLa presente dissertazione ha ad oggetto lo studio di alcuni degli aspetti più rilevanti del giusnaturalismo di Ugo Grozio, come, ad esempio, il metodo, l’antropologia, la nozione di diritto naturale, nonché in particolare la giustizia e la proprietà, insieme alla connessa dialettica tra diritti e doveri. Tali temi sono stati analizzati sulla base di un costante parallelo tra le sue due principali opere di diritto naturale e delle genti – il De Jure praedae (1604-06) ed il De Jure belli ac pacis (1625) – al fine di tenere debitamente in conto l’evoluzione interna del pensiero dell’autore. In effetti, in entrambi questi scritti, redatti a più di un ventennio l’uno dall’altro, lo jus naturae assume un ruolo centrale nella risoluzione delle controversie internazionali, sicché una loro lettura comparata consente di cogliere a pieno quanto abbia inciso sulla riflessione groziana in merito al diritto naturale l’adesione dell’autore all’arminianesimo, a seguito della quale egli si è allontanato dal calvinismo ortodosso. Scegliendo di seguire l’insegnamento di Arminio, Grozio, difatti, rifiuterà le tesi più estreme di Calvino sulla predestinazione, che negavano ogni merito all’agire umano e indicavano come fonte della morale unicamente il volere del Signore espresso nelle Sacre Scritture. A seguito di ciò il giusnaturalista olandese nella sua maturità, facendosi assertore di un’ontologia razionalistica, individuerà l’origine del diritto naturale non più nella volontà creatrice divina, bensì nei parametri valorativi metafisici di bene e male, che costituiscono pure essenze razionali, indipendenti dalla voluntas Dei.
Prendendo le mosse appunto dalla diversa concezione ontologica su cui riposano i due trattati giuridico-politici groziani, nel primo capitolo si sono esaminate le differenze nelle classificazioni delle forme di diritto ivi presentate, mettendo in luce, soprattutto, come muti per Grozio il concetto di ragione, la quale, sebbene sia indicata quale fonte giuridica solo nel De Jure belli ac pacis, sembrerebbe però sostanzialmente essere considerata tale sin dallo scritto sul diritto di preda. Sicché, proprio in relazione al valore attribuito alla ratio dal giovane pensatore di Delft, si è cercato di evidenziare le particolarità del volontarismo groziano, rimarcando l’influenza stoica e tomistica già evidente nella costruzione filosofico-giuridica del De Jure praedae. Tanto è vero che già in questo trattato giuridico l’autore è chiaro nell’indicare nel ricorso alla ragione la prima via da seguire nell’attestazione della validità delle norme naturali, che troverebbe poi conferma nelle Sacre Scritture e nel consensus gentium, ossia in quanto ritenuto giusto dalle nazioni civili.
Ciò ci ha indotto a concludere nel secondo capitolo che nella commistione di elementi volontaristici e razionalistici, che da sempre caratterizza il pensiero groziano, sia che prevalgano i primi – come in gioventù – sia che prevalgano i secondi – come nella maturità – Grozio resterebbe costante nella convinzione che sia possibile seguire una doppia metodologia per dimostrare l’esistenza dello jus naturae.
In tal modo, l’autore si inserisce a pieno titolo nel dibattito seicentesco sul metodo con una proposta eclettica, secondo la quale si può provare la vigenza dell’ordinamento naturale o deduttivamente, mediante la conformità di una norma con la natura razionale dell’uomo (methodus a priori), oppure induttivamente, qualora essa sia ritenuta essere di diritto naturale ad opera di tutti i popoli, o almeno tutti quelli più civili (methodus a posteriori). In proposito, si è, tuttavia, voluto rilevare un aspetto della scelta di metodo groziana, che, a nostro avviso, sinora non è stato sufficientemente messo in rilievo dalla critica italiana e straniera. Il sincretismo metodologico, di cui Grozio si fa assertore, difatti, non sarebbe espressione della percezione da parte dell’autore dell’urgenza moderna di assicurare alle scienze morali la stessa certezza di quelle naturali. Da questo punto di vista egli sembrerebbe, piuttosto, rimanere ancora legato all’insegnamento aristotelico. Se, difatti, per il pensatore di Delft i princìpi delle leggi naturali, aventi in sé la loro verità, sono nozioni tanto certe che nessuno potrebbe negarle, lo stesso non può dirsi, invece, delle questioni morali, a cui, a suo avviso, giustamente lo Stagirita attribuiva il carattere della mera probabilità. Nel sostenere implicitamente la distinzione del diritto naturale dalla morale, l’autore pare mantenersi ancorato alla tradizione aristotelica. Ciò aiuta a comprendere la sua scelta di radicare i rapporti internazionali sul terreno certo e immutabile dello jus naturae, di cui, dunque, egli vuole assicurare la vigenza. Va osservato, però, che l’immutata importanza attribuita da Grozio nelle sue opere alla prova dell’esistenza dello jus naturae ha fondamento nelle diverse visioni antropologiche in esse descritte, le quali, pertanto, sono state analizzate nel terzo capitolo. Al di là della sostanziale differenza nell’idea di ratio – che da imago Dei diviene espressione, invece, di valori assiologici indipendenti nella loro esistenza dalla volontà divina – l’autore sin da giovane concorda nell’attribuire all’uomo, oltre alla razionalità, anche una spontanea tendenza a ricercare i suoi simili. Lo jus naturae propriamente inteso, difatti, è, a suo dire, preposto alla custodia societatis.
Giacché l’ordinamento naturale si presenta come un insieme di norme finalizzate a garantire la pacifica convivenza umana, nel quarto e ultimo capitolo di questa dissertazione si è, dunque, sottolineato come l’etica sociale groziana presupponga la concezione della giustizia, quale virtù volta a regolare i rapporti tra gli uomini. Più specificamente, tale etica sociale prende le mosse dal riconoscimento all’uomo di una sfera di diritti naturali alla nascita, potenzialmente ampliabili attraverso una manifestazione della propria volontà, la cui violazione legittima il giusto ricorso alla forza da parte dell’offeso. Pertanto, si è voluto dimostrare come nell’ambito del sistema filosofico-giuridico edificato dal giurista olandese rivesta un ruolo fondamentale l’istituto giuridico della proprietà, mediante il quale in maniera consensuale le parti si trasferiscono la facoltà di disporre di un bene, che entra così a far parte del suum del proprietario. In tal modo, al bene acquisito è estesa la stessa protezione riservata alla propria personalità morale.
Occorre, tuttavia, evidenziare sin d’ora che i due trattati giuridico-politici groziani di stampo internazionale, pur legando entrambi la giustizia alla garanzia del godimento di ognuno di ciò che è suo, muovono da una diversa definizione del giusto. In particolare, benché inizialmente l’autore mostri di condividere la concezione aristotelica del justum come medietà, nel De Jure belli ac pacis, invece, egli giunge ad una nozione prettamente negativa della giustizia, che, a suo avviso, consisterebbe nell’astensione dal suum altrui. Quest’opera, difatti, è scritta nel pieno della Guerra dei Trent’anni, quando la tensione bellica incominciava a divenire una costante nei rapporti tra gli Stati europei, sicché l’autore decide di attribuire al giurista un ruolo attivo, non speculativo, in quanto costui dovrà contribuire alla pace e all’ordine, piuttosto che limitarsi ad individuare la giusta parte, che spetta a ciascuno, ossia il giusto mezzo