Publicaciones seriadas del CENSA (E-Journals)
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Desarrollo de PCR especie-específicos para la detección de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares
Get PDFMollicute contamination in cell cultures is common. Species such as Mycoplasma arginini, Mycoplasma salivarium, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma orale, and Acholeplasma laidlawii are identified as causing 95 % of the contaminations. The present work is aimed at developing species-specific PCRs for the identification of the most frequent contaminating mycoplasma species in cell cultures. The critical parameters of PCR were optimized and the analytical sensitivity and specificity were determined. The optimum temperature for hybridization was set at 55ºC; magnesium concentration at 1,5 mM. A range of 0,3-0,5 µM was selected for the primers. The analytical sensitivity of PCR was 1 pg/µL, while its analytical specificity was 100 %. Species-specific PCR was performed on 58 cell culture samples where the presence of Mollicutes was previously detected. As a result, Mycoplasma orale was detected as the most frequent species, followed by Mycoplasma fermentans, Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma hyorhinis, and Mycoplasma salivarium. The results of this study confirm that the species-specific PCR assays developed are feasible to use for the identification of mycoplasma species in cell cultures.La contaminación por Mollicutes en los cultivos celulares es frecuente. Especies como Mycoplasma arginini, Mycoplasma salivarium, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma orale y Acholeplasma laidlawii se identifican como causantes del 95 % de las contaminaciones. El presente trabajo tuvo como objetivo desarrollar PCR especie-específicos para la identificación de las especies de micoplasmas contaminantes más frecuentes en cultivos celulares. Se optimizaron los parámetros críticos de la PCR y se determinaron la sensibilidad y especificidad analítica. Se estableció como valor óptimo de temperatura de hibridación 55ºC; concentración de magnesio 1,5 mM y de cebadores se seleccionó un rango 0,3-0,5 µM. La sensibilidad analítica de la PCR fue de 1 pg/µL, mientras que su especificidad analítica fue 100 %. Se realizó la PCR especie-específico a 58 muestras de cultivo celulares donde previamente se detectó la presencia de Mollicutes. Como resultado se detectó Mycoplasma orale como la especie más frecuente, seguida de Mycoplasma fermentans, Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma hyorhinis y Mycoplasma salivarium. Los resultados de este estudio confirman que los ensayos PCR especie-específicos desarrollados son factibles de emplear para la identificación de especies de micoplasmas en cultivos celulares
La introducción de cilindros de vidrio y mallas plásticas en olfatómetro facilita ensayos de comportamiento de nematodos entomopatógenos
Get PDFIt was evaluated the adequacy of an olfactometer, to which a glass cylinder and a plastic net were introduced to avoid displacement of the target insect larvae, allowing determining displacement and infection capacity of infective juveniles (IJ) of entomopathogenic nematodes in laboratories trials. For these assays, recently emerged IJ with 100 % viability of the strain HC1 of Heterorhabditis amazonensis Andaló et al. were used. For the assembly of the two branches device, some parts of a six arms olfactometer, glass cylinders, plastic meshes, and, as substrate, sterile silica sand with 10 % of humidity were used. The last instar larvae of Galleria mellonella (L.) use as the target insect came from a laboratory rearing and weighed about 200 mg. A 2000 IJ suspension was applied to the substrate on the end opposing to the PVC tube in which the G. mellonella larvae were kept in a glass cylinder protected with a plastic net to avoid their movement. Three replicas were kept at 27°C. Larval mortality was recorded at 24, 48, and 72 hours after nematode application. With the olfactometer assay, e it was checked mobility of IJ, which moved along 19.5 cm in 60 hours. Mortality of G. mellonella larvae reached 84.7 %. The two-branch olfactometer with the introduction of a glass cylinder and a plastic net, was useful for laboratory studies related to the effect of abiotic factor on entomopathogenic nematodes.Se evaluó la adecuación de un olfatómetro, al que se le introdujeron un cilindro de vidrio y mallas plásticas para evitar el desplazamiento de las larvas del insecto diana a evaluar, permitiendo determinar la capacidad de desplazamiento e infección de los juveniles infectivos (JI) de nematodos entomopatógenos en experimentos en laboratorios. Para estos ensayos se utilizaron JI de la cepa HC1 de Heterorhabditis amazonensis Andaló et al., recién emergidos y con 100 % de viabilidad. Para el montaje del dispositivo de dos cámaras, se utilizaron partes de un olfatómetro de seis brazos, cilindros de vidrio, mallas plásticas y arena sílice esterilizada al vapor como sustrato con 10 % de humedad. Las larvas de último instar de Galleria mellonella (L.), utilizadas como insectos diana, procedían de una cría de laboratorio y tenían 200 mg de peso, aproximadamente. Al sustrato se le aplicó una suspensión que contenía 2000 JI en el extremo opuesto al tubo de PVC donde se situaron las larvas de G. mellonella; estas se mantuvieron en cilindros protegidos con malla plástica para evitar su desplazamiento. Se prepararon tres réplicas que se mantuvieron a 27°C. Se realizaron observaciones a las 24, 48 y 72 horas posteriores a la aplicación de los nematodos y se registró la mortalidad de las larvas. Con el ensayo del olfatómetro se comprobó la movilidad de los JI, los cuales recorrieron 19,5 cm en 60 horas. La mortalidad de las larvas de G. mellonella fue de 84,7 %. El olfatómetro de dos cámaras, con la introducción de cilindro de vidrio y malla plástica, resultó útil para los estudios del efecto de factores abióticos sobre el comportamiento de los nematodos entomopatógenos en el laboratorio
Susceptibilidad de adultos de Cosmopolites sordidus (Germar) a Heterorhabditis amazonensis Andaló et al. Cepa HC1
Get PDFThe objective of this study was to determine the in vitro susceptibility of weevil adults (Cosmopolites sordicus Germar) to infective juveniles (IJ) of Heterorhabditis amazonenesis Andaló et al. (Cuban strain HC1). The adults were collected in the field with sandwich and modified disc traps and kept in quarantine in the laboratory until their use in the tests. The insects were inoculated with suspensions of infective juveniles at the dosage of 125, 250, 500, 2500, and 5000 JI.ml-1. Controls without inoculation were included. Mortality was evaluated from 12 hours to 21 days after inoculation. Lethal dose values (LD50, DL90) and lethal times (LT50 and LT90) were determined through Probit Analysis and the percentage of mortality by performing an Variance Analysis. The weevil adults killed by the effect of the nematodes became stiff and hard, maintained coloration and shrank their legs. The LD 50 and LD 90 determined were 1872 and 6061 IJ / ml-1, respectively. The LT values estimated using the concentration of 5000 IJ / ml-1 for the control of 50 and 90 % of a population of C. sordidus were 17 and 28 days, respectively. The highest percentage of mortality was 86.7 using the highest dose at 21 days.El objetivo de este estudio fue determinar la susceptibilidad in vitro de adultos del picudo negro (Cosmopolites sordidus Germar) a los juveniles infectivos (JI) de Heterorhabditis amazonenesis Andaló et al. (Cepa HC1). Los adultos colectados en campo con trampas Sándwich y de Disco Modificada, se mantuvieron en cuarentena en el laboratorio hasta su uso en los ensayos. Se prepararon suspensiones de juveniles infectivos (125, 250, 500, 2500, 5000 JI.ml-1) con las que se inocularon los insectos y se mantuvieron testigos sin inocular. Se evaluó la mortalidad desde las 12 horas hasta 21 días posteriores a la inoculación. Se determinaron los valores de Dosis letales (DL50, DL90) y Tiempos letales (DL50 y DL90) a través de Análisis Probi y el porcentaje de mortalidad a través del Análisis de Varianza. Por el efecto de los nematodos, los adultos de picudos muertos se ponen rígidos y duros, mantienen la coloración y encogen las patas. Las DL50 y DL90 determinadas fueron 1 872 y 6 061 JI/ml-1, respectivamente. Con la dosis de 5000 JI/ml-1 para el control del 50 y 90 % de una población de C. sordidus, los TLs estimados fueron 17 y 28 días, respectivamente. El mayor porcentaje de mortalidad fue 86,7 y a la dosis más alta, a los 21 días
Bioactividad de iridoides de Genipa americana contra el ácaro del cocotero Aceria guerreronis Keifer (Acari: Eriophyidae)
Get PDFGenipap (Genipa americana L.) is a medicinal tree native to South America and the Amazon regions, where it is used as a popular traditional medicine. It is also highly consumed by people in the form of jams, juices, preserves, and wines. The aim of this study was to evaluate the toxicity, persistence, and the repellence properties of leaf methanolic extracts of genipap (LME) and its major iridoids (genipin and geniposide), against the key coconut pest mite Aceria guerreronis Keifer. The concentration-mortality bioassays revealed a strong acaricidal activity of LME against the coconut mite (LC50 = 0.60 mg.ml-1; and LC90 = 16.69 mg.ml-1). In addition, standard concentrations (0.6 mg.ml-1) of either genipin or geniposide killed 50 % and 62 % of the A. guerreronis, respectively, after 24 hours of exposure, highlighting the role of these iridoids in the acaricidal activity of LME. The persistence bioassays of LME revealed toxicity towards A. guerreronis for up to 36 hours after spraying. Furthermore, LC50 and LC90 of LME repelled the coconut mite after 1, 24, and 48 hours of exposure. Therefore, LME can be considered an alternative to assist in the integrated control of the coconut mite in coconut plantations.La planta de jagua (Genipa americana L.) es un árbol medicinal nativo de América del Sur y de la región Amazónica, donde se utiliza en la medicina popular y sus frutos son consumidos en forma de dulces, jugos, mermeladas y vinos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la toxicidad, persistencia y repelencia del extracto metanólico de las hojas de Genipa americana (LME) y sus principales iridoides (genipina y geniposideo), contra la plaga clave de la palma de coco Aceria guerreronis Keifer. Los bioensayos de concentración-mortalidad revelaron una fuerte actividad acaricida de LME de G. americana al ácaro de la necrosis del cocotero (CL50 = 0,60 mg.ml-1 e CL90 = 16,69 mg.ml-1). Además, las concentraciones padrones (0,6 mg/ml-1) de extracto de genipina y geniposideo mataron 48 % y 52 %, respectivamente, de A. guerreronis después de 24 horas de exposición y se destacó la función de estos iridoides en la bioactividad de LME. Los bioensayos de persistencia de LME de G. americana revelaron toxicidad para A. guerreronis hasta 36 horas después de la pulverización. Además, las CL50 y CL90 del LME de G. americana repelieron el ácaro de la necrosis del cocotero después de 1, 24 y 48 horas de exposición. Así, el LME de esta planta puede ser considerado como una alternativa para auxiliar en el control integrado del ácaro de la necrosis A. gerreronis en plantaciones de coco
Cucurbita pepo L., un nuevo hospedante de saltahojas en Cuba
Get PDFDear Editor;Leafhoppers are polyphagous insects of great economic importance. They are distributed worldwide with a wide range of hosts among cucurbits. Leafhoppers cause considerable damage by the effect they produce during their direct feeding. Many of their species are considered pests of economic importance due to their ability to transmit different pathogens, including phytoplasmas. These pathogens are prokaryotic organisms of the class Mollicutes that cause a large number of emerging diseases in economically important crops around the world. In Cuba, leafhopper species have been identified in plants infected with phytoplasmas from Fabaceae, Solanaceae and Gramineae families, among others. However, its presence has not been reported in pumpkin crops (Cucurbita pepo L).For this purpose, samples were taken from pumpkin plants with symptoms similar to phytoplasma diseases. Leafhoppers were sampled in October 2017 in Madruga town, Mayabeque province, Cuba. The collected insects were observed, then rinsed and mounted on slides under stereoscopic microscope and observations were made with an Axiolab microscope. Leafhopper colonies developed on the underside of the symptomatic C. pepo leaves. One colony presented adults and nymphs of different ages, the youngest were light green and the oldest had a more intense green color. The leaves showed symptoms of wrinkling, yellowing and deformations, similar to those leaves of plants infected by phytoplasmas. The leafhoppers detected belonged to the genus Empoasca. The presence of these leafhopper species in pumpkin is the first report in Cuba.However, considering the impact caused by leafhoppers as pests and in the transmission of phytoplasmas, the results suggest the need to identify leafhopper species associated with symptomatic pumpkin plants and the detection of phytoplasmas in such plants and leafhoppers to confirm this relationship.Sincerely;
Taller Nacional: Propuesta de una red piloto para la vigilancia de resistencia antimicrobiana en cepas patógenas y comensales de Escherichia coli de origen porcino
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Seguridad biológica de Lactobacillus plantarum 22 LMC con potencialidad probiótica
Get PDFThis work was aimed at evaluating the biological safety of a Lactobacillus plantarum 22 LMC strain with probiotic potential, isolated from the caecum mucosa of Creole pigs. A pre-clinical study was conducted to evaluate the effect of the probiotic candidate in an acute oral single-dose model 1012 CFU mL-1. Female and male Sprague Dawley rats were used divided into a group of five animals of each sex per treatment (3): viable L. plantarum cells (1), heat-inactivated cells of the same microorganism (2) and saline solution as a negative control (3) for 14 days; subsequently proceeded to euthanasia. Pathological and microbiological studies of the main organs were carried out. Some hematological and biochemical indices were determined. No toxic effects attributable to the administration of the probiotic were found; body weight was shown to be characteristic for the species and there were no alterations in organ weight. No macroscopic, histopathological and bacterial translocation variations were observed in the organs evaluated. The hematological and blood biochemical studies showed normal values for the species. It is concluded that the L. plantarum 22 CML strain was shown to be biologically safe at the single evaluated dose.El objetivo del presente trabajo fue evaluar la seguridad biológica de una cepa de Lactobacillus plantarum 22 LMC con potencialidades probióticas, aislada de la mucosa del ciego de cerdos criollos. Se realizó un estudio preclínico para evaluar el efecto del candidato a probiótico en un modelo agudo oral a dosis única 1012 UFC mL-1. Se emplearon ratas Sprague Dawley hembras y machos divididas en grupos de cinco animales de cada sexo por tratamiento durante 14 días: (1) células viables de L. plantarum, (2) células inactivadas por calor del mismo microorganismo y (3) solución salina como control negativo. Posteriormente, se procedió a la eutanasia. Se realizaron los estudios anatomopatológicos y microbiológicos de los principales órganos. Se determinaron algunos índices hemáticos y de la bioquímica sanguínea. No se encontraron efectos tóxicos atribuibles a la administración del probiótico; el peso corporal se mostró característico para la especie y no hubo alteraciones en el peso de los órganos. No se observaron variaciones macroscópicas, histopatológico y de translocación bacteriana en los órganos evaluados. Los estudios hematológicos y de la bioquímica sanguínea mostraron valores normales para la especie. Se concluye que la cepa de L. plantarum 22 LMC demostró su seguridad biológica en la dosis única evaluada
Reacción de cultivares de caña de azúcar ante Puccinia kuehnii durante siete años en Mayabeque
Get PDFThe objective of this work was to determine the reaction of sugarcane cultivars to orange rust at the Mayabeque-Artemisa Sugarcane Territorial Research Station in the 2012-2018 period. The disease evaluation was visually performed on the leaves every six months and diagnosed by optical microscopy. Uredospores were characterized by their color, shape and size. The individuals were grouped according to the presence of pustules on leaves 0 and +1, as well as the percentage of surface occupied by them. The reaction of the individuals to the fungus was determined on the leaf + 3 in ten plants. The commercial cultivars and sugarcane clones infected with the fungus had a slight tendency to increase. The disease manifestation was more severe in 2015 and 2016. Resistance to the disease was shown by 13 commercial cultivars (C86-56, C132-81, C334-64, C137-81, C88-380, B80250, B78503, C98-128, C98- 129, C86-251, C90-469, C1051-73, and C90-317). Six cultivars (C85-1, C88-523, C95-416, PR980, C89-559, and C89-147) displayed symptoms, whereas three of them (Co997, CP52-43, and C87-51) manifested instability in their behavior. Differences in the behavior of Puccinia kuehnii in the seven years of study indicate a differential expression in the host-pathogen-environment interaction.El objetivo de este trabajo fue determinar la reacción de cultivares de caña de azúcar ante la roya naranja en la Estación Territorial de Investigaciones de la Caña de Azúcar Mayabeque-Artemisa, en el periodo 2012-2018. La evaluación de la enfermedad se realizó de forma, visual en las hojas, cada seis meses y se diagnosticó por microscopia óptica. Las uredosporas se caracterizaron en cuanto a color, forma y tamaño. Los individuos se agruparon según la presencia de pústulas en las hojas 0 y +1, así como el porcentaje de superficie ocupada por esta. La reacción de los individuos ante el hongo se determinó en la hoja + 3 en diez plantas. Existe una ligera tendencia al aumento de los cultivares comerciales y clones de caña de azúcar infectados con el hongo. La enfermedad se manifestó con mayor severidad en los años 2015 y 2016. Mostraron resistencia 13 cultivares comerciales (C86-56, C132-81, C334-64, C137-81, C88-380, B80250, B78503, C98-128, C98-129, C86-251, C90-469, C1051-73 y C90-317). Seis presentaron síntomas (C85-1, C88-523, C95-416, PR980, C89-559 y C89-147); mientras que, tres (Co997, CP52-43 y C87-51) manifestaron inestabilidad en su comportamiento. Las diferencias en el comportamiento de Puccinia kuehnii en los siete años de estudio indican una expresión diferencial en la interacción hospedante-patógeno-ambiente
Evaluación de la hibridación de ácidos nucleicos no radiactivo dot-blot como herramienta de detección para citrus leaf blotch virus en Cuba
Get PDFA non-radioactive dot-blot nucleic acid hybridization method was evaluated for detecting citrus leaf blotch virus (CLBV, Flexiviridae: Citrivirus) in total RNA extracts from kumquat trees. DNA fragments partially encompassing the open reading frames encoding the polymerase (RdRp) and the movement (MP coat (CP) proteins of CLBV were used to generate digoxigenin (DIG-11-dUTP) probes by PCR. Probes were individually generated using cloned DNA fragments of the Cuban CLBV isolate as templates. In the assays, several working conditions, including the use of different membranes, hybridization and washing buffers were tested. The method detected up to 40 pg of a plasmid containing the complete CLBV genome, as well as viral genomic sequences in RNA extracts of naturally infected trees of \u27Nagami\u27 kumquat (Fortunella margarita) and \u27Round\u27 kumquat (F. japonica). Results support considering the method developed an appropriated tool to be used after its validation by the programs of sanitation, quarantine, and certification of citrus propagation materials in Cuba.Se evaluó un método de hibridación de ácidos nucleicos no radioactivo en formato dot-blot para la detección precisa de citrus leaf blotch virus (CLBV: Citrivirus) en extractos de ARN totales de árboles de cítricos. Los fragmentos de ADN que conforman parcialmente los marcos de lectura abiertos que codifican la polimerasa (RdRp), la proteína de movimiento (MP) y la proteína de la cubierta (CP) de CLBV se utilizaron para generar sondas marcadas con digoxigenina (DIG-11-dUTP) mediante PCR. Para generar las sondas se utilizaron fragmentos de ADN clonados a partir del aislado de CLBV de Cuba. Se evaluaron varias condiciones de trabajo que incluyeron el uso de diferentes membranas, soluciones de hibridación y tampones de lavado. Con el método evaluado fue posible detectar hasta 40 pg de un plasmidio que contiene el genoma completo de CLBV, así como material genómico del virus en extractos de ARN de plantas de kumquat \u27Nagami\u27 (Fortunella margarita) y kumquat \u27Round\u27 (F. japonica) infectadas de forma natural con el virus. Los resultados evidenciaron que el método desarrollado es una herramienta útil y altamente recomendable, una vez sea validado, para su uso en los programas de saneamiento, cuarentena y certificación del material de propagación de cítricos en Cuba
Caracterización de la cadena de producción láctea en cuatro provincias de Cuba. Generalidades y descripción del contexto externo (I.)
Get PDFThe production chain approach constitutes a new working philosophy in the agri-food sector in Cuba, aimed at seeking a better horizontal integration among the actors of this sector of the national economy. The objective of this research was focused on characterizing the environmental aspects that slow down and/or favor the performance of all the links in the milk production chain, as well as the competitive advantages that enhance it among the main actors involved in the Cuban provinces of Mayabeque, Matanzas, Villa Clara, and Cienfuegos, within the framework of the international project “Vía Láctea”. The methodological tools used were based on the participatory approach, aimed at the analysis of the milk chain from a technical-normative, socio-cultural, economic-financial, and environmental point of view. It is concluded that the context of the dairy chain in Cuba is favorable for a better performance; however, there are threats that limit it.El enfoque de cadena productiva constituye una nueva filosofía de trabajo en el ámbito agroalimentario en Cuba, dirigido a buscar una mejor integración horizontal entre los actores de este sector de la economía nacional. El objetivo de la presente investigación estuvo enfocado a caracterizar los aspectos del entorno que frenan y/o favorecen el desempeño de todos los eslabones de la cadena de producción láctea, así como las ventajas competitivas que la potencian entre los principales actores involucrados en las provincias cubanas Mayabeque, Matanzas, Villa Clara y Cienfuegos, en el marco del proyecto internacional “Vía Láctea”. Las herramientas metodológicas empleadas se basaron en el enfoque participativo y estuvieron dirigidas al análisis de la cadena de la leche desde el punto de vista técnico-normativo, sociocultural, económico-financiero y medioambiental. Se concluye que el contexto de la cadena láctea en Cuba es propicio para lograr un mejor desempeño, aunque se presentan amenazas que limitan a la misma