Journal of Patan Academy of Health Sciences
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Grant Proposals and Current Grant Funding
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National Longitudinal Study of Adolescent to Adult Health, Public Use Family Health History (Spouse-Parent), Parents (2015-2017)
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ADN mitocondrial asociado a la infertilidad por varicocele.(Tesis)
No full textAnálisis de la fragmentación del ADN mitocondrial asociado a la infertilidad por varicocele.
"El diagnóstico temprano de estas enfermedades es un desafío muy importante. Por otra parte, desde finales de los años 90, se ha observado que la variación genética del mtDNA es un factor relevante en el desarrollo de las enfermedades multifactoriales asociadas a la edad y en la longevidad y se están acumulando evidencias acerca del papel de las mutaciones en el mtDNA y el desarrollo del cáncer.
Es muy difícil resumir el reto que supone el tratamiento terapéutico de las enfermedades mitocondriales puesto que están compuestas por un grupo heterogéneo de fenotipos que abarcan todos los tipos de especialidades médicas.
Por ello, las estrategias terapéuticas son diversas y específicas, siendo inconcebible un "tratamiento mágico" para tratar todas las enfermedades.
La mayoría de los tratamientos disponibles son sintomáticos y de apoyo.
Los tratamientos sintomáticos se basan fundamentalmente en fármacos, transfusiones de sangre, cirugía, medidas dietéticas y fisioterapia.
El tratamiento farmacológico puede ser específico (por ejemplo en el tratamiento de la epilepsia), no específico (antioxidantes, aceptores y donadores de electrones, cofactores, etc.), o restringido (evitar fármacos de conocida toxicidad para la mitocondria).
A pesar de las posibilidades tan limitadas, se deben de ofrecer tratamientos sintomáticos pues pueden tener un impacto sobre el curso y resultado de la enfermedad”.
(Julio Montoya. Departamento de Bioquímica, Biología Molecular y Celular. Universidad de Zaragoza).
El varicocele se diagnosticó mediante la palpación del cordón espermático con el paciente de pie, tumbado y durante la maniobra de Valsalva. El reflujo de sangre venosa se confirmó mediante una ecografía Doppler dúplex (Toshyba Nemio SSA-550A Diagnostic Ultrasound System). Los sujetos fueron incluidos para la realización de una varicocelectomía mediante la técnica subinguinal microquirúrgica, ligando todas las venas dilatadas, conservando las arterias y glándulas linfáticas. Simultáneamente, se hizo una biopsia testicular (TESE) homolateral para la obtención de una muestra para anatomía patológica y el análisis de FADN en espermatozoides intratesticulares.
Análisis de la fragmentación del ADN
La FAD se realizó en muestras frescas de semen previo a la cirugía y testiculares obtenidas por extracción de espermatozoides del testículo, mediante el test de dispersión de la cromatina descrito por Fernández et al en 200314. Se trata de un método de desnaturalización y lisis de las proteínas nucleares, basado en el principio de que los espermatozoides cuyo ADN está intacto producirán un halo de dispersión que corresponde a la cromatina liberada de proteínas, pudiendo ser fácilmente analizado por microscopía óptica de fluorescencia (fig. 1). Para ello, utilizamos el kit comercial Halosperm® de Halotech Dna15. Valores de hasta el 27 ± 11% en el índice FADN se suelen considerar dentro de la normalidad en varones fértiles y normozoospérmicos. La muestra de semen se recolectó por masturbación tras 2-3 días de abstinencia. Las muestras frescas se procesaron siguiendo el protocolo que se describe en el kit Halosperm®. En testículo, extrajimos los espermatozoides de pequeñas cantidades del tejido biopsiado. Para ello, presionamos varias veces sobre la muestra utilizando unas pinzas, y resuspendimos con una pipeta de 1 ml. Retiramos el tejido y centrifugamos a 600 g durante 5 minutos. Desechamos el sobrenadante y resuspendimos en 50 μl debuffer fosfato salino estéril. Tomamos 10 μl y observamos la presencia de espermatozoides al microscopio. A partir de este punto, seguimos el protocolo descrito por el kit comercial