University of Beira Interior
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Mitochondrial Gene Therapy: Development of a mitochondrial targeted peptide/plasmid DNA vector
No full textMitochondria are cellular organelles measuring approximately 1 micron that can be found in large numbers in eukaryotic cells. These small organelles play a crucial role in cellular activity, being essential in intracellular signaling processes, apoptosis mechanisms, and energy production, among others. Mitochondria generate 90% of all energy consumed in cells, through the oxidative phosphorylation system that produces energy in the form of adenosine triphosphate (ATP) molecules. Mitochondria, similar to the nucleus, have their own genome, called mitochondrial DNA (mtDNA). Human mtDNA is composed of double-stranded circular DNA molecules, with each strand having its own composition and encoding different ribonucleic acids (RNA). The guanine-rich strand encodes 14 tRNAs, 2 rRNAs, and 12 polypeptides, while the lighter strand has information to transcribe only 8 tRNAs and one polypeptide. In total, mtDNA consists of just 37 genes that encode 13 mRNA, giving rise to 13 proteins that are part of the electron transport system and the ATPase complex. The oxidative phosphorylation system is composed of 5 complexes (NADH-ubiquinone reductase complex (complex I); succinate dehydrogenase complex (complex II); ubiquinol-cytochrome c oxidoreductase (complex III); cytochrome-C oxidase complex (complex IV) and ATP synthase (complex V)), which form the respiratory chain. mtDNA is much more susceptible to mutations when compared to the nuclear genome. Changes in mtDNA compromise the normal functioning of cells, mainly affecting neuronal and muscle tissues. The higher frequency of mutations in mtDNA can be explained by the fact that it does not have telomeres or introns in its constitution. Mitochondrial dysfunctions lead to the emergence of multisystem diseases, which can affect the normal functioning of the immune response, motor and brain function, and metabolic regulation and lead to aging. The vast majority of pathologies originating from mitochondria are inherited from maternal mtDNA. However, environmental factors such as stress and the consequent presence of reactive oxygen species, also contribute to the emergence of mutations in mtDNA. The most common mitochondrial diseases are Leber's hereditary optic neuropathy (LHON), mitochondrial encephalomyopathy, Pearson's syndrome, Parkinson's, Huntington's disease, Alzheimer's, and some types of cancer (breast, kidney, and colorectal). Complex I of the mitochondrial respiratory chain is the main entry point for electrons into the electron transport chain. Due to this fact, this complex is very important in the normal functioning of mitochondria. It is in complex I that the transfer of electrons from Nicotinamide Adenine Dinucleotide + Hydrogen (NADH) to ubiquinone occurs, the transport of protons across the inner mitochondrial membrane and is the main source of reactive oxygen species (ROS). Mutations in mitochondrial genes responsible for structural and assembly proteins of this complex lead to increased ROS production and loss of functions. One of these genes is the mitochondrial gene ND1 (NADH dehydrogenase 1). The mt-ND1 protein plays a crucial role in the structure of complex I. Mutations in mt-ND1 are associated with the emergence of LHON; Mitochondrial myopathy, encephalopathy, lactic acidosis, and stroke-like episodes (MELAS); progressive cardiomyopathy, and some types of cancer. Data from 2020 revealed that 1 in every 250 people have mutations in mtDNA and that 1 in every 5,000 have serious pathologies associated with mitochondrial dysfunction. However, currently, the medications available on the market only serve to mitigate the symptoms. No drug approved by the FDA or in development has been able to cure or slow the progression of mitochondrial diseases. Although there are approaches such as the use of antioxidant agents and other drugs to alleviate symptoms, the ineffectiveness of current medications highlights the urgent need for more effective treatments. Mitochondrial gene therapy is a promising approach that can focus its action directly on the cause of mitochondrial diseases and develop therapies tailored to the type of mutation. Gene therapy consists of the application of recombinant DNA techniques in which functional genes are used to replace defective genes and restore their normal functioning. As most mitochondrial diseases originate from mutations in mtDNA, mitochondrial gene therapy appears as a very promising strategy for treating this type of disease. Mitochondrial gene therapy makes it possible to attack the problem at its source and restore normal function to the affected mitochondrial gene. However, this type of therapy needs delivery systems that are effective in protecting and delivering genetic material to target cells/organelles. The greatest difficulty in applying gene therapy has been the development of nanocarriers that can effectively deliver genetic material. For mitochondrial gene therapy, the difficulty has been even greater, as the systems need to cross more barriers and be able to deliver only to that organelle. Thus, the main objective of this thesis is to develop delivery systems that have an affinity for mitochondria and can effectively deliver mitochondrial genes for the treatment of mitochondria-associated pathologies. The work carried out consisted of the development of delivery systems based on peptides (cell-penetrating peptides (CPP)) and polymers (polyethylenimine (PEI)), to deliver the mitochondrially encoded NADH dehydrogenase 1 protein (ND1) gene. To achieve this, these delivery systems were functionalized with ligands that allow specific targeting of mitochondria. The ligands used were triphenylphosphonium (TPP) and dequalinium chloride (DQA) to functionalize PEI and for CPP a mitochondrial targeting sequence (MTS) was used. The first step for the PEI-TPP/pND1 polymeric systems was to evaluate, through an experimental design, the optimal conditions for the formulation of nanoparticles. These systems were then characterized in terms of size, surface charge, and morphology. These delivery systems demonstrated the ability to internalize into cells and, through confocal microscopy, their preferential accumulation in mitochondria was demonstrated. Furthermore, these systems have demonstrated the ability to deliver the ND1 gene to mitochondria and lead to its transcription. The PEI-DQA/pND1 polymeric systems developed also demonstrated excellent physicochemical properties, showing the ability to transfect and internalize into cells. These nanocarriers delivered the ND1 gene directly into the mitochondria, leading to transcription of the gene of interest and production of the ND1 protein. However, the peptide-based systems (MTS-CPP) exhibited superior performance in terms of cellular internalization and targeting to mitochondria. Its greater ability to complex pND1 led to the formulation of nanoparticles with smaller sizes and consequently greater delivery of the gene of interest and protein expression. Showing better in vitro results, the MTS-CPP systems were tested in in vivo models (zebrafish embryos (ZF)). The peptide systems demonstrate the ability to internalize and distribute throughout the ZF organism, without causing any toxicity in these in vivo models. In short, the work carried out during this doctoral thesis sought to find solutions to the lack of effective delivery systems in mitochondrial gene therapy, to make this therapy viable for the treatment of mitochondrial diseases. The results obtained during the thesis demonstrate that the delivery systems developed are very promising for the development of mitochondrial gene therapy protocols. This work contributed to progress and innovation in an area of research that is still little explored, such as mitochondrial gene therapy. In the case of peptide-based systems, these systems have the potential to be considered in future investigations, to evaluate their translation to the clinic. The nanocarriers developed during this thesis were optimized for the delivery of the mitochondrial ND1 gene, however, these systems can be easily adapted for the delivery of any mitochondrial genes that are involved in pathologies associated with mtDNA mutations.As mitocôndrias são organelos celulares com tamanhos de 1 micrómetro, aproximadamente, que podem ser encontradas em grande número nas células eucarióticas. Estes pequenos organelos têm um papel crucial na atividade celular, sendo essenciais em processos de sinalização intracelular, mecanismos de apoptose e produção de energia, entre outros. As mitocôndrias geram 90% de toda a energia consumida nas células, através do sistema de fosforilação oxidativa que produz energia sob a forma de moléculas de adenosina trifosfato (ATP). As mitocôndrias, à semelhança do núcleo, possuem o seu próprio genoma, designado ácido desoxirribonucleico mitocondrial (ADNmt). O ADNmt humano é composto por moléculas de ADN circular de dupla cadeia, sendo que cada cadeia tem a sua própria composição e codificam diferentes ácidos ribonucleicos (ARN). A cadeia rica em guanina codifica 14 ARNt, 2 ARNr e 12 polipeptídeos, enquanto que a cadeia mais leve tem informação para transcrever apenas 8 ARNt e um polipeptídeo. No total, o ADNmt é constituído apenas por 37 genes que codificam 13 ARNm, dando origem a 13 proteínas que fazem parte do sistema de transporte de eletrões e do complexo ATPase. O sistema de fosforilação oxidativa é composto por 5 complexos (Complexo NADH-ubiquinona redutase (complexo I); complexo succinato desidrogenase (complexo II); ubiquinol-citocromo c oxidoredutase (complexo III); complexo citocromo-c oxidase (complexo IV) e complexo ATP sintase (complexo V)), que formam a cadeia respiratória. O ADNmt é muito mais suscetível a mutações quando comparado com o genoma nuclear. As alterações no ADNmt comprometem o normal funcionamento das células, afetando principalmente tecidos neuronais e musculares. A maior frequência de mutações no ADNmt pode ser explicada pelo facto de este não possuir telómeros nem intrões na sua constituição. As disfunções mitocondriais levam ao aparecimento de doenças multissistémicas, podendo afetar o normal funcionamento da resposta imunológica, função motora e cerebral, regulação metabólica e levar ao envelhecimento. A grande maioria das patologias com origem nas mitocôndrias são herdadas do ADNmt materno. No entanto, fatores ambientais como o stress e a consequente presença de espécies reativas de oxigénio contribuem também para o aparecimento de mutações no ADNmt. As doenças mitocondriais mais comuns são a neuropatia ótica hereditária de Leber (NOHL), encefalomiopatia mitocondrial, Síndrome de Pearson, Parkinson, doença de Huntington, Alzheimer e alguns tipos de cancro (mamário, renal e colorretal). O complexo I da cadeia respiratória mitocondrial é o principal ponto de entrada de eletrões na cadeia de transporte de eletrões. Devido a este facto, este complexo é muito importante no normal funcionamento da mitocôndria. É no complexo I que ocorre a transferência de eletrões do Dinucleótido de nicotinamida e adenina + Hidrogénio (DNAH) para a ubiquinona, o transporte de protões através da membrana mitocondrial interna e é a principal fonte de espécies reativas de oxigénio (ERO). Mutações nos genes mitocondriais responsáveis por proteínas estruturais e de montagem deste complexo levam ao aumento da produção de ERO e à perda de funções. Um desses genes é o gene mitocondrial ND1 (DNAH desidrogenase 1). A proteína mt-ND1 desempenha um papel crucial na estrutura do complexo I. Mutações no mt-ND1 estão associadas ao aparecimento de NOHL; miopatia mitocondrial, encefalopatia, acidose lática e episódios semelhantes a acidente vascular cerebral (“MELAS”); cardiomiopatia progressiva e alguns tipos de cancro. Dados de 2020 revelaram que 1 em cada 250 pessoas apresentam mutações no ADNmt e que 1 em cada 5000 apresentam patologias graves associadas a disfunções mitocondriais. Atualmente os fármacos disponíveis no mercado servem apenas para mitigar os sintomas. Nenhum medicamento aprovado, pela Administração Federal de Alimentos e Medicamentos dos Estados Unidos da América, ou em desenvolvimento conseguiu curar ou retardar a progressão das doenças mitocondriais. Embora existam agentes antioxidantes e outras drogas para aliviar os sintomas, a ineficácia dos medicamentos atuais ressalta a necessidade urgente de tratamentos mais eficientes. A terapia génica mitocondrial é uma abordagem promissora que pode focar a sua ação diretamente na causa das doenças mitocondriais e desenvolver terapias ajustadas ao tipo de mutação. A terapia génica consiste na aplicação de técnicas de ADN recombinante em que são utilizados genes funcionais para substituir genes defeituosos e repor o seu funcionamento normal. Uma vez que a maioria das doenças mitocondriais têm origem em mutações no ADNmt, a terapia génica mitocondrial aparece como uma estratégia muito promissora para o tratamento deste tipo de doenças. A terapia génica mitocondrial foca-se na origem da patologia e permite repor o gene mitocondrial afetado, reestabelecendo a função mitocondrial normal. Este tipo de terapia necessita de sistemas de entrega que sejam eficazes na proteção e entrega do material genético às células/organelos alvo. A principal dificuldade na implementação da terapia génica tem sido precisamente desenvolver nanotransportadores eficientes. Para a terapia génica mitocondrial a dificuldade tem sido ainda maior, uma vez que os sistemas precisam de atravessar mais barreiras e terem a capacidade de entregar o gene terapêutico especificamente naquele organelo. Assim, o principal objetivo desta tese é desenvolver sistemas de entrega que tenham afinidade pela mitocôndria e que consigam entregar eficazmente genes mitocondriais como abordagem terapêutica de patologias associadas à mitocôndria. O trabalho realizado consistiu no desenvolvimento de sistemas de entrega à base de péptidos (péptidos de penetração celular (PPC)) e de polímeros (polietilenimina (PEI)), com o objetivo de entregar o gene mitocondrial ND1. Para isso, estes biomateriais foram funcionalizados com ligandos que permitem o direcionamento específico para as mitocôndrias. Os ligandos utilizados foram o trifenilfosfónio (TPP) e cloreto de dequalínio (DQA) para funcionalizar o PEI e para os PPC foi utilizada uma sequência de direcionamento para a mitocôndria (MTS). O primeiro passo para o desenvolvimento dos sistemas poliméricos PEI-TPP/pND1 foi determinar, através de um desenho experimental, as condições ótimas para a formulação das nanopartículas. De seguida, esses sistemas foram caracterizados em termos de tamanho, carga superficial e morfologia. Estes sistemas de entrega demonstraram capacidade de internalizar em fibroblastos e células HeLa, e através da microscopia de confocal foi demonstrada a sua acumulação preferencial nas mitocôndrias. Para além disso, estes sistemas demonstraram capacidade de entregar o gene ND1 nas mitocôndrias e levar à sua transcrição. Os sistemas poliméricos PEI-DQA/pND1 desenvolvidos demonstraram igualmente excelentes propriedades físico-químicas, evidenciando a capacidade de transfetar e internalizar em células HeLa e fibroblastos. Estes nanotransportadores entregaram o gene ND1 diretamente nas mitocôndrias, levando à transcrição do gene de interesse e produção da proteína ND1. No entanto, os sistemas à base de péptidos que foram desenvolvidos (MTS-PPC), exibiram um desempenho superior em termos de internalização celular e direcionamento para a mitocôndria. A sua maior capacidade de complexar o plasmídeo (pND1) levou à formulação de nanopartículas com menores tamanhos e consequentemente uma maior entrega do gene de interesse e da expressão proteica. Os sistemas MTS-PPC que apresentaram melhores resultados in vitro, foram testados em modelos in vivo (embriões de peixe-zebra (PZ)). Os sistemas peptídicos demonstraram capacidade de internalizar e distribuir-se por todo o organismo dos PZ, sem causar nenhuma toxicidade nestes modelos in vivo. Em suma, o trabalho desenvolvido durante esta tese de doutoramento procurou encontrar sistemas de entrega eficazes para aplicação em terapia génica mitocondrial, com o intuito de poder tornar esta terapia viável para o tratamento de doenças mitocondriais. Os resultados obtidos durante a tese demonstram que os sistemas de entrega desenvolvidos são muito promissores para desenvolvimento de protocolos de terapia génica mitocondrial. Este trabalho contribuiu para o progresso e inovação numa área de investigação ainda pouco explorada como é a terapia génica mitocondrial. Os sistemas à base de péptidos apresentam potencial para serem considerados em futuras investigações, com o intuito de poder ser avaliada a sua translação para a clínica. Os nanotransportadores desenvolvidos durante esta tese foram otimizados para a entrega do gene mitocondrial ND1, no entanto estes sistemas podem ser facilmente adaptados para a entrega de quaisquer genes mitocondriais que estejam envolvidos em patologias associadas a mutações no ADNmt
Estratégias de Marketing Digital no Turismo: Um Estudo sobre a Perspetiva do Consumidor Turístico
No full textQue o turismo é uma das principais atividades que mais contribui para o
crescimento e desenvolvimento de um país ou região, já não é novidade nos dias de
hoje. Este é um setor que possibilita o progresso socioeconómico de determinado
destino e que envolve os esforços de diversos operadores representativos de diversos
outros setores, que entre si constroem relações negociais e contribuem mutuamente
para o sucesso de ambas as áreas. O setor turístico é caracterizado pela sua forte
conexão entre os seus operadores e os seus consumidores e esta ligação tem vindo a ser
adaptada consoante as melhorias tecnológicas que se têm desenvolvido, sendo hoje em
dia bastante influenciada por todo o meio digital que envolve a sociedade atual.
Com as mais recentes transformações digitais, não só os setores se adaptaram
como também os seus consumidores, que por sua vez se tornaram mais informados,
exigentes e com um comportamento de compra mais digital, passando a utilizar meios
digitais com mais frequências em todas as fases do seu processo de tomada de decisão e
compra. Desta forma, o turismo reconheceu a oportunidade e começou cada vez mais a
integrar as diversas plataformas digitais nas suas estratégias de negócio,
nomeadamente nas suas estratégias de marketing. Através destas plataformas, os
operadores turísticos conseguem se destacar da sua concorrência e conseguem obter
um contacto mais direto com o seu público-alvo, o que lhes permite arrecadar
informações sobre o perfil e comportamento deste, que serão essenciais para a
definição de estratégias futuras.
Perante este cenário, este estudo propõe-se a alcançar o objetivo geral de
compreender qual a perspetiva dos consumidores turísticos, em relação às ferramentas
e processos digitais que são utilizados pelos operadores turísticos. Para tal, a
metodologia aplicada consistiu na difusão online de inquéritos, a indivíduos
pertencentes às gerações Y e Z, residentes em território nacional, e através dos quais se
obteve uma amostra de 251 respondentes. Através dos resultados obtidos foi possível
concluir que o consumidor de turismo apresenta uma frequência de uso significativa de
meios digitais e que se assistiu a um reconhecimento positivo do aumento das
estratégias de marketing digital no setor do turismo, evidenciando deste modo a
eficiência das ferramentas digitais aplicadas pelos operadores turísticos.That tourism is one of the main activities that contributes most to the growth
and development of a country or region, is no longer something new these days. This is
a sector that enables the socioeconomic progress of a given destination and that
involves the efforts of several operators representing several other sectors, who build
business relationships with each other and mutually contribute to the success of both
areas. The tourism sector is characterized by its strong connection between its
operators and its consumers and this connection has been adapted according to the
technological improvements that have been developed, being nowadays greatly
influenced by all the digital media that surround today's society.
With the most recent digital transformations, not only the sectors have adapted
but also their consumers, who in turn have become more informed, demanding and
with a more digital purchasing behavior, starting to use digital media more frequently
at all stages of their decision-making and purchasing process. In this way, tourism
recognized the opportunity and increasingly began to integrate the various digital
platforms into its business strategies, particularly its marketing strategies. Through
these platforms, tour operators are able to stand out from their competition and gain
more direct contact with their target audience, which allows them to gather information
about their profile and behavior, which will be essential for defining future strategies.
Given this scenario, this study aims to achieve the general objective of
understanding what is the perspective of portuguese tourism consumers, regarding the
digital tools and processes used by tourism operators. To this end, the methodology
applied consisted of online dissemination of surveys to individuals belonging to
generations Y and Z, residing in the national territory, and through which a sample of
251 respondents was obtained. Through the results obtained, it was possible to
conclude that the tourist consumer has a significant frequency of use of digital media
and that there has been a positive recognition of the increase in digital marketing
strategies in the tourism sector, thus highlighting the efficiency of the digital tools
applied by the tourism operators
Relatório de Estágio em Futsal: Sporting Clube de Portugal
No full textO presente relatório teve como objetivo descrever o trabalho desenvolvido ao longo do
estágio curricular na modalidade de Futsal, no Sporting Clube de Portugal. Ao longo do
mesmo foi descrita a entidade de acolhimento e a intervenção realizada na mesma, com
base em metodologias de trabalho. O estágio teve a duração de uma época desportiva,
no âmbito da equipa principal feminina, na qual tive diversas funções, nomeadamente
direcionadas ao scouting. No treino tive a função de o tornar harmonioso, eliminando
tempos mortos e fornecendo feedbacks individuais às jogadoras.
A segunda parte deste documento é focada na investigação realizada neste âmbito. Este
projeto teve como objetivo responder a diversas perguntas focadas na influência do
local e status do jogo sobre o jogo ofensivo. Foram analisadas as equipas inseridas na
Liga Placard Feminina. A análise forneceu dados que ajudam a equipa técnica no que
toca ao controlo do desempenho da equipa e por sua vez no planeamento dos treinos
para preparar os jogos, perante uma análise do adversário.The aim of this report is to describe the work carried out during my internship in Futsal
at Sporting Clube de Portugal. It describes the host organization and the intervention
carried out there, based on working methodologies. The internship lasted one season
with the women's first team, in which I had various roles, including scouting. In
training I had the task of making it harmonious, eliminating downtime and providing
individual feedback to the players.
The second part of this document focuses on the research carried out in this area. The
aim of this project was to answer several questions focused on the influence of the
venue and status of the game on attacking play. The teams in the Women's Placard
League were analyzed. The analysis provided data that helps the coaching staff to
control the team's performance and in turn to plan training sessions to prepare for
matches, given an analysis of the opponent
Poly(2-ethyl-2-oxazoline)–IR780 conjugate nanoparticles for breast cancer phototherapy
No full textConventional anticancer approaches are often associated with severe side
effects. Herein, the authors assembled a novel nanoparticle whose therapeutic effect is triggered by laser
light. In in vitro assays, the produced nanomaterial was able to, after interacting with laser light, reduce
the viability of classic and advanced cancer models. In these conditions, but in the absence of laser light,
no cytotoxicity was observed. In this way, the on-demand effect (triggered by laser light) may contribute
to reduced side effects. Moreover, the produced nanoparticle revealed good stability, which is important
for its future translation.info:eu-repo/semantics/publishedVersio
Purification of pre-miRNA-29 with ionic liquids-based supports
No full textMicroRNAs (miRNAs) have been studied regarding their biological role in gene
expression regulation at post-transcriptional level, envisioning the establishment of new
treatment strategies. Pre-miRNA-29 is the precursor form of microRNA-29, a small noncoding RNA that plays an important role in gene silencing, and proved to be involved in
several cellular mechanisms, namely in neurodegenerative diseases. To consider the
therapeutic application, efficient, and economically feasible manufacturing processes are
required for obtaining these biopharmaceuticals, assuring their integrity, purity,
stability, and bioactivity. Thus, in this work it is proposed an alternative purification
method using Ionic Liquids (ILs)-based chromatographic supports. ILs are described as
ionic compounds that present a melting point below 100 °C and are normally composed
of large and asymmetric organic cations and organic or inorganic anions. These types of
compounds can be tailored in terms of their properties, such as polarity, density, and
viscosity to achieve their effectiveness regarding the purification and stabilization of
nucleic acids. The application of Supported ILs (SILs) in RNA purification is highly
innovative and can lead to the establishment of advantageous purification methods.
Herein, the SIL under study resulted from the functionalization of silica with the 1-(3-
aminopropyl)imidazole chloride, which was named as SilPrImPrACl. First, a screening
of the best experimental conditions, in terms of pH and ionic strength, to promote
binding and elution of RNA was carried out. Moreover, in order to develop an
Experimental Design, key factors were optimized at 3 levels, using the Central Composite
Design (CCD) as model. The statistical analysis of the results showed that this model was
not the best fit for the optimization of the purification of pre-miRNA-29b, however
further analysis was carried out in order to understand the influence of the factors
studied in the recovery, purification factor and removal of impurities. Thus, it was
possible to establish some conditions conducting to a recovery and purification factor of
35.1% and 1.55, respectively. Furthermore, it was verified that the process was able to
remove 78% of proteins and 70% of gDNA present in the initial sample, proving the
effectiveness of this SIL for the purification of RNA and particularly the pre-miRNA-29b.Os microRNAs (miRNAs) têm sido estudados relativamente à sua função de regulação
da expressão génica a nível pós-transcricional, pensando na possibilidade de estabelecer
novas estratégias de tratamento. O pré-miRNA-29 é a forma precursora do microRNA29, um pequeno RNA não codificante que desempenha um papel importante no
silenciamento génico, e que está envolvido em vários mecanismos celulares,
nomeadamente nas doenças neurodegenerativas. Para considerar a aplicação
terapêutica, são necessários processos de produção eficientes e economicamente viáveis
para obter estes biofármacos, assegurando a sua integridade, pureza, estabilidade e
bioatividade. Assim, neste trabalho é proposto um método de purificação utilizando
suportes cromatográficos à base de Líquidos Iónicos (ILs). Os ILs são descritos como
compostos iónicos que apresentam um ponto de fusão inferior a 100 °C, e são
normalmente compostos por catiões orgânicos e assimétricos e de aniões orgânicos ou
inorgânicos. Estes compostos podem ser selecionados e desenhados de acordo com as
suas propriedades, tais como polaridade, densidade e viscosidade para alcançar uma
maior eficácia no que diz respeito à sua aplicação na purificação e estabilização dos
ácidos nucleicos. A aplicação de líquidos iónicos suportados (SILs) na purificação do
RNA é altamente inovadora e pode levar ao estabelecimento de métodos de purificação
vantajosos.
Neste trabalho, o SIL estudado resultou da modificação de sílica com o cloreto de 1-(3-
aminopropil)imidazol, sendo denominado SilPrImPrACl. Inicialmente, foi realizado um
estudo das melhores condições experimentais, em termos de pH e força iónica, para
promover a ligação e eluição do RNA. Além disso, com o objetivo de desenvolver um
desenho experimental, foram otimizados fatores-chave a 3 níveis, sendo eles a massa
injetada de RNA, a concentração de NaCl no passo de ligação, e a concentração de NaCl
no passo de eluição, utilizando o Central Composite Design (CCD) como modelo. A
análise estatística dos resultados mostrou que este modelo não era o mais adequado para
a otimização da purificação do pré-miRNA-29b, no entanto, foram efetuadas análises
adicionais para compreender a influência dos fatores estudados na recuperação, fator de
purificação e remoção de impurezas. Assim, foi possível estabelecer algumas condições
que levaram a uma recuperação relativa de 35,1% e um fator de purificação de 1,55. Além
disso, relativamente aos níveis de impurezas, verificou-se que o processo foi capaz de
remover 78% das proteínas e 70% do gDNA presente na amostra inicial, provando a
eficácia deste SIL para a purificação do RNA e particularmente do pré-miRNA-29b
MicroRNAs-enriched exosomes as a new therapy for Parkinson’s disease
No full textParkinson’s disease (PD), a progressive and chronic neurological disorder characterized
by the selective degeneration of the nigrostriatal dopaminergic pathway, has a huge
socioeconomic impact in modern society. Alterations in alpha (α)-synuclein protein
expression and aggregation have been regarded as a primary cause of dopaminergic
neurons death in the substantia nigra (SN) pars compacta. So far, there are no
treatments that halt or reverse the progression of PD. Recent evidence showed that
microRNAs (miRNA), small non-coding RNAs that negatively regulate gene expression,
are dysregulated in PD patients. In particular, miR-124 levels were found decreased in
plasma and postmortem brain parenchyma of PD patients. Thus, miR-124 has become a
relevant molecular therapeutic target for PD. Increasing intracellular levels of miR-124
enhances neurogenesis and neuroprotection in PD models. However, the effect of miR-
124 on α-synuclein dynamics has not yet been reported.
One of the main goals of this thesis was to evaluate the role of miR-124-3p in the
expression and aggregation of α-synuclein protein using the rat model of PD based on
the acute administration of paraquat (PQ). The first research work showed that
intranigral administration of miR-124-3p significantly reduces the protein levels of α-
synuclein and α-synuclein phosphorylated at serine 129 (present in large amounts in
Lewy bodies) in the SN of rats exposed to PQ. Moreover, the protein levels of NADPH
oxidase 1 (Nox1), responsible for the oxidative stress production and eventually involved
in the development of α-synuclein toxicity, and its activator GTPase Rac1, decreased in
SN after miR-124-3p administration in PQ-treated rats. Additionally, the reduced levels
of Pitx3 in the SN caused by the administration of PQ were found to increase after the
administration of miR-124-3p. This work demonstrates for the first time the role of miR-
124-3p in the regulation of α-synuclein toxicity, possibly through the modulation of the
Nox1/Rac1 signaling pathway and in the regulation of Pitx3 expression important for the
survival and maintenance of dopaminergic neurons.
The efficient delivery of miRNA at the intracellular and intracerebral levels has several
limitations since they are highly susceptible to degradation by nucleases and are difficult
to take up by cells due to their negative charge. Recently, several approaches capable of
guaranteeing an efficient delivery of miRNA have been developed. In particular, small
extracellular vesicles (sEV), also referred to as exosomes, have been highlighted as
efficient delivery systems for miRNA due to their intrinsic ability to interact with cells and tissues. The second main goal of this thesis was to use sEV isolated from human
umbilical cord blood-derived mononuclear cells as a biological vehicle of miR-124 and to
evaluate the efficiency of these sEV transfected with miR-124-3p (miR-124-3p sEV) in
inducing neurogenesis and neuroprotection in 6-hydroxydopamine (6-OHDA) PD
model. The second research work showed that in vitro, sEV efficiently deliver miR-124-
3p to subventricular zone (SVZ) neural stem cells (NSC) and to N27 dopaminergic cells.
Treatment of NSC with miR-124-3p sEV induced neuronal differentiation of SVZ NSC
under physiological conditions and protected N27 dopaminergic cells against 6-OHDAinduced
toxicity. In vivo, sEV intracerebroventricularly injected in mice were detected in
SVZ lining the lateral ventricles and in striatum and midbrain sections, the brain regions
most affected by the disease. Although miR-124-3p sEV did not increase the number of
new neurons in the 6-OHDA-lesioned striatum, the formulation protected dopaminergic
neurons in the SN and striatal fibers, which fully counteracted motor behavior symptoms
in mice administered with 6-OHDA.
In conclusion, the results obtained during this thesis provide new evidence on the role of
miR-124-3p in α-synuclein protein pathology and evidence supporting the application of
sEV as biologic delivery agents for miR-124-3p to promote neuroprotection of
dopaminergic neurons. In short, the enrichment of sEV with miR-124-3p may configure
a promising therapeutic strategy able to halt or slow-down dopaminergic neuronal death
in PD.A doença de Parkinson (DP) é uma doença neurodegenerativa caracterizada
principalmente por sintomas e complicações motoras. Dados epidemiológicos indicam
que a prevalência da DP na população aumenta de cerca de 1% aos 60 anos para 4% aos
80 anos, sendo considerada uma das doenças neurodegenerativas mais prevalente. Ao
nível fisiopatológico, esta doença é caracterizada pela degeneração progressiva e
acentuada de neurónios dopaminérgicos na substantia nigra (SN) pars compacta. Esta
subpopulação neuronal dopaminérgica é responsável pela produção de dopamina,
neurotransmissor envolvido na coordenação motora. A presença de corpos de Lewy nos
neurónios dopaminérgicos, agregados citoplasmáticos constituídos principalmente pela
proteína alfa (α)-sinucleína, é uma característica patológica da doença. Na DP, a redução
nos níveis de dopamina no cérebro leva ao aparecimento dos primeiros sintomas
motores que incluem tremor, rigidez e dificuldades de locomoção e de sintomas nãomotores
que incluem fadiga, distúrbios do sono e alterações cognitivas. Devido à
natureza complexa e multifatorial desta doença, os mecanismos subjacentes à sua
patogénese permanecem por elucidar, e por isso ainda não existem tratamentos eficazes
que parem ou desacelerem a sua progressão, embora tratamentos como o procedimento
cirúrgico de estimulação cerebral profunda (DBS) permitam aliviar os sintomas motores
de alguns pacientes.
Os microRNA (miRNA) são pequenos ácidos ribonucleicos não codificantes que
desempenham um papel importante em diversos processos fisiológicos e patológicos
através da regulação da expressão génica após a transcrição. Em particular, os níveis de
miR-124, um miRNA expresso abundantemente no cérebro, encontram-se diminuídos
em amostras humanas de cérebros post mortem e no plasma de pacientes com a DP e
em modelos experimentais in vitro e in vivo da DP. Neste sentido, aumentar os níveis
intracelulares de miR-124 no cérebro surge como uma estratégia terapêutica atrativa
para a DP. Ao longo dos últimos anos têm sido descritos os efeitos neuroprotetores,
neurogénicos e anti-inflamatórios do miR-124 em modelos experimentais da DP.
Contudo, desconhece-se o efeito do miR-124 na acumulação e agregação da proteína α-
sinucleína, uma das principais características patológicas da DP.
Neste seguimento, um dos principais objetivos desta tese de doutoramento foi avaliar o
efeito do miR-124-3p na expressão e sinalização associada à proteína α-sinucleína num
modelo animal da DP induzido pela administração de paraquat (PQ). No primeiro trabalho apresentado nesta tese, verificou-se que a administração intraperitoneal de PQ
aumenta os níveis proteicos da α-sinucleína e da α-sinucleína fosforilada na serina 129,
forma modificada envolvida na agregação da α-sinucleína e presente em maior
quantidade nos corpos de Lewy. Os resultados obtidos demonstraram que a
administração intranigral do miR-124-3p diminui os níveis proteicos totais da α-
sinucleína e da α-sinucleína fosforilada na serina 129 na SN de ratos tratados com PQ.
Evidências prévias sugerem que a enzima NADPH oxidase 1 (Nox1), responsável pela
produção de espécies reativas de oxigénio, favorece a acumulação e agregação da α-
sinucleína. Neste sentido, verificou-se que o tratamento com o miR-124-3p promoveu
uma diminuição dos níveis proteicos da Nox1 e do seu regulador, a GTPase Rac1, que se
encontram aumentados na SN de ratos tratados com o PQ. Adicionalmente, verificou-se
que os níveis reduzidos de Pitx3 na SN, fator de transcrição responsável pela regulação
da expressão da enzima tirosina hidroxilase e por manter o fenótipo dopaminérgico,
provocados pela administração de PQ, aumentaram após a administração de miR-124-
3p. Este estudo demonstra pela primeira vez o papel do miR-124-3p na regulação da
toxicidade da α-sinucleína possivelmente através da modulação da via de sinalização
Nox-1/Rac1 e na regulação da expressão de Pitx3, importante para a sobrevivência e
manutenção dos neurónios dopaminérgicos. Em suma, estes resultados evidenciam a
potencial aplicação terapêutica de miR-124 na DP e α-sinucleinopatias relacionadas.
Embora os miRNA estejam a ser propostos como possíveis alvos terapêuticos em várias
doenças, existem limitações associadas à sua capacidade de internalização nas células ou
alcançar os tecidos lesados devido às suas características moleculares (molécula
hidrofílica com carga negativa). Neste sentido, várias têm sido as abordagens descritas
capazes de potenciar a sua entrega intracelular através de veículos de entrega.
Recentemente, a utilização de veículos biológicos, nomeadamente pequenas vesiculas
extracelulares (pVE) ou exossomas, como também são comumente designadas, tem
atraído a atenção da comunidade científica devido à sua natureza biológica e capacidade
eficiente de se incorporarem em células e tecidos. Neste seguimento, o segundo objetivo
principal desta tese de doutoramento foi utilizar pVE isoladas de células mononucleares
derivadas do sangue do cordão umbilical humano como veículo biológico para a entrega
intracelular do miR-124 e avaliar a eficiência das pVE moduladas na neurogénese da
zona subventricular e na neuroprotecção de neurónios dopaminérgicos. O segundo
trabalho de investigação mostrou que as pVE são capazes de internalizar e entregar
eficientemente o miR-124-3p nas células estaminais neurais da zona subventricular e em
células dopaminérgicas da linha celular N27, in vitro. O tratamento de células estaminais
neurais da zona subventricular com pEV moduladas com miR-124-3p (miR-124-3p pVE) induziu a diferenciação neuronal e protegeu as células dopaminérgicas N27 contra a
toxicidade induzida pela toxina 6-hidroxidopamina (6-OHDA). In vivo, as pEV injetadas
no ventrículo lateral de murganhos foram detetadas na zona subventricular, que reveste
os ventrículos laterais, e em seções cerebrais de estriado e SN, as regiões do cérebro mais
afetadas pela doença. Verificou-se que a administração intracerebroventricular de miR-
124-3p pVE não aumentou o número de novos neurónios no corpo estriado de
murganhos lesados com a 6-OHDA. Contudo, a formulação foi capaz de proteger os
neurónios dopaminérgicos na SN e as fibras estriatais, melhorando significativamente
os déficits motores dos murganhos lesados com a 6-OHDA.
Em conclusão, os resultados obtidos durante o desenvolvimento desta tese fornecem
numa primeira fase, novos dados sobre o papel neuroprotetor do miR-124-3p num
contexto da DP, especificamente na modulação da proteína α-sinucleína. Numa segunda
fase, os resultados suportam a utilização das pVE como agentes biológicos de entrega de
miR-124-3p e o seu enriquecimento com miR-124-3p como uma estratégia promissora
capaz de parar ou retardar a morte neuronal dopaminérgica na DP
Das razões, experiências e consequências do uso de tecnologias de self-tracking: Perceções de utilizadores
Get PDFNos anos mais recentes, as tecnologias de self-tracking têm feito parte da vida de
indivíduos, como um mecanismo de autoconhecimento e/ou autorreflexão e/ou
autoaperfeiçoamento de aspetos das suas vidas. Esta pesquisa tem como objetivo geral
analisar as perceções de utilizadores sobre o uso das tecnologias de self-tracking, sendo
os objetivos específicos: entender os motivos que levam os utilizadores a usarem tais
tecnologias, captar o modo como as experienciam e mapear as consequências do seu
uso. A presente investigação tem um carácter exploratório, dado o escasso
desenvolvimento teórico e empírico desta temática. Desse modo, a metodologia
utilizada foi de natureza qualitativa, com recurso a entrevistas semidiretivas. Na
pesquisa identificou-se não só alguma desigualdade, mas também diversidade na
escolha das tecnologias e das funções usadas, embora longe do número das atualmente
disponíveis, e usos diferentes em relação ao objetivo para o qual as tecnologias foram
desenhadas. Nem todos enunciaram benefícios em relação ao bem-estar alcançado e
também se dividiram em relação às consequências negativas como a vigilância,
ameaças à privacidade, ansiedade e frustração. Tais constatações mais uma vez
reforçam a ideia de que as tecnologias não predeterminam a vida social.In recent years, self-tracking technologies have become part of an individual’s life, as a
mechanism of self-knowledge and/or self-reflection and/or self-improvement in
various aspects of their lives. The general objective of this research is to analyze users’
perceptions of the use of self-tracking technologies, with the specific objectives as
follows: understand the reasons that lead users to use such technologies, to capture
how they experience them and to map the consequences of their use. This research is
exploratory in nature, due to the limited theoretical and empirical development of this
topic. Thus, the methodology used was qualitative, relying on semi-structured
interviews. The investigation not only identified some inequality but also diversity in
the choice of technologies and functions used, although far from the number currently
available, as well as different uses compared to the purposes for which the technologies
were designed. Not everyone reported benefits in terms of well-being achieved and
opinions were also divided on negative consequences such as surveillance, privacy
threats, anxiety and frustration. These findings once again reinforce the idea that
technologies do not predetermine social life
Analysis of the influence of the tip clearance on the performance of transonic compressors
Get PDFIn aviation, compressor efficiency is essential for reducing operating costs and improving engine performance. More efficient compressors consume less fuel, which reduces airlines' expenses. It is with this goal in mind that this study was carried out, focusing on the analysis of a transonic compressor. This study explores the performance of the NASA Rotor 67 axial compressor in two configurations: with and without tip clearance. Computational fluid dynamics simulations were carried out to evaluate the effects of tip clearance on the flow characteristics and overall efficiency of the compressor. Tip clearance refers to the small gap between the blade tips of a rotor and the surrounding casing in turbomachinery. This gap is necessary and intentionally designed to allow for thermal expansion, mechanical tolerances, and structural deformation during operation to ensure that the blades do not come into direct contact with the casing. In this study, Ansys CFX software was used as a tool to analyze the aerodynamic performance of the transonic compressor under steady-state conditions, and the model used for the simulations was the SST k-? turbulence model. Ansys CFX makes it possible to accurately simulate the complex flow phenomena present in turbomachinery, including the effects of compressibility. The analysis focused on critical performance metrics such as pressure ratio and efficiency, comparing the two models to understand the impact of the gap on flow characteristics. Contours of the relative Mach number and pressure distributions were used to study the flow behavior in different sections of the rotor, highlighting the main differences between the two cases. The results showed that the absence of spacing improves performance, achieving higher pressure ratios and more uniform flow patterns near the blade tips, where the irregularities induced by spacing were mitigated. This was expected, as tip clearance is associated with leaked losses, which can reduce overall efficiency.Na aviação, a eficiência dos compressores é essencial para reduzir custos operacionais e melhorar o desempenho dos motores. Compressores mais eficientes consomem menos combustível, o que diminui as despesas das companhias aéreas. É com esse objetivo em mente que foi realizado este estudo, focando-se na análise de um compressor transónico. Este estudo explora o desempenho do compressor axial NASA Rotor 67 em duas configurações: com e sem espaçamento na ponta das pás (tip clearance). Foram realizadas simulações de dinâmica de fluidos computacional para avaliar os efeitos do espaçamento na ponta nas características do escoamento e na eficiência global do compressor. O espaçamento na ponta das pás refere-se ao pequeno espaço entre as pontas das pás de um rotor e o invólucro circundante nas turbomáquinas. Esta folga é necessária e intencionalmente concebida para permitir a expansão térmica, as tolerâncias mecânicas e a deformação estrutural durante o funcionamento, de modo a garantir que as pás não entrem em contacto direto com a carcaça. Neste estudo, o software Ansys CFX foi utilizado para analisar o desempenho aerodinâmico do compressor transónico em condição estacionária, tendo sido utilizado o modelo SST k-? para as simulações. O Ansys CFX permite simular com precisão os fenómenos de escoamento complexos presentes nas turbomáquinas, incluindo os efeitos da compressibilidade. A análise focou-se em métricas de desempenho críticas, como a razão de pressão e a eficiência, comparando os dois modelos para compreender o impacto do espaçamento nas características do escoamento. Foram utilizadas isolinhas do número de Mach relativo e das distribuições de pressão para estudar o comportamento do escoamento em diferentes secções do rotor, destacando as principais diferenças entre os dois casos. Os resultados demonstraram que a ausência de espaçamento melhora o desempenho, alcançando razões de pressão mais elevadas e padrões de escoamento mais uniformes junto às pontas das pás, onde as irregularidades induzidas pelo espaçamento foram mitigadas. Isto era esperado, uma vez que o espaçamento está associado a perdas que reduzem a eficiência global
Serum calprotectin as a biomarker for diagnosis and monitoring of juvenile idiopathic arthritis - a systematic review
Get PDFIntroduction: Juvenile idiopathic arthritis (JIA) is the most common chronic rheumatic
disease in children and is characterized by clinical, pathophysiological, and prognostic
heterogeneity. Its etiology remains unclear and, according to the International League of
Associations for Rheumatology (ILAR) criteria, encompasses seven distinct subtypes,
defined by clinical manifestations. The lack of specific biomarkers hinders early diagnosis,
subtype stratification, and monitoring of inflammatory activity, which is often subclinical.
Serum calprotectin (sCal), a protein of the calgranulin family produced by activated
neutrophils and monocytes, has emerged as a direct marker of synovial inflammation,
demonstrating superiority over classic parameters such as C-reactive protein (CRP) and
sedimentation rate (ESR).
Objective: To carry out a systematic review of the literature, aiming to clarify the role of
sCal as a biomarker in the diagnosis and monitoring of JIA, exploring its value in clinical
practice and follow-up of these patients.
Methods: A systematic search of the PubMed and EMBASE databases was conducted until
January 2025, according to the PRISMA 2020 recommendations. Observational studies
and clinical trials that analysed sCal in patients with JIA were included, excluding case
reports/series, experimental studies in animals, and articles with fewer than 20
participants. Selection was performed by independent reviewers, with discrepancies
resolved by consensus. Risk of bias was assessed using tools from the National Heart, Lung,
and Blood Institute (NHLB). Data extracted included population characteristics, laboratory
parameters, and main outcomes related to diagnosis and monitoring.
Results: A total of 639 publications were identified, of which 38 met the inclusion criteria.
Overall, sCal levels were significantly higher in children with JIA compared with healthy
controls, with better performance in differentiating the systemic form. There was a
consistent correlation with clinical activity scores (e.g., JADAS, DAS28), confirming its
usefulness in disease monitoring. Several studies have demonstrated the predictive value of
sCal in response to different therapies and in predicting relapses after treatment
discontinuation. However, the lack of uniform cutoffs and methodological heterogeneity
limited comparability between studies.
Conclusions: This review confirms the role of sCal as a biomarker with the potential to
complement the clinical evaluation of JIA, both in diagnosis and monitoring. The results
suggest advantages over traditional markers, particularly in correlation with inflammatory
activity and in supporting therapeutic decision-making. However, its integration into routine clinical practice requires validation in robust studies that establish standardized
cut-offs and laboratory protocols.Introdução: As artrites idiopáticas juvenis (AIJs) são a doença reumática crónica mais
frequente em idade pediátrica e caracteriza-se por heterogeneidade clínica, fisiopatológica
e prognóstica. A etiologia permanece pouco esclarecida e, segundo os critérios da
International League of Associations for Rheumatology (ILAR), engloba sete subtipos
distintos, de acordo com as manifestações clínicas. A ausência de biomarcadores específicos
dificulta o diagnóstico precoce, a estratificação dos subtipos e a monitorização da atividade
inflamatória, frequentemente subclínica. A calprotectina sérica (sCal), é uma proteína da
família das calgranulinas, produzida por neutrófilos e monócitos ativados, tem emergido
como um marcador direto da inflamação sinovial, mostrando superioridade relativamente
a parâmetros clássicos como a proteína C reativa (PCR) e a velocidade de sedimentação
(VS).
Objetivo: Realizar uma revisão sistemática da literatura, visando esclarecer o papel da sCal
como biomarcador no diagnóstico e monitorização das AIJs, explorando o seu valor na
prática clínica e follow-up destes doentes.
Métodos: Foi realizada uma pesquisa sistemática nas bases de dados PubMed e EMBASE
até janeiro de 2025, de acordo com as recomendações PRISMA 2020. Incluíram-se estudos
observacionais e ensaios clínicos que analisaram a sCal em doentes com AIJ, excluindo
relatos/séries de casos, estudos experimentais em animais e artigos com menos de 20
participantes. A seleção foi efetuada por revisores independentes, com resolução de
discrepâncias por consenso. O risco de viés foi avaliado com as ferramentas da National
Heart, Lung, and Blood Institute (NHLB). Os dados extraídos incluíram características
populacionais, parâmetros laboratoriais e resultados principais relativos ao diagnóstico e
monitorização.
Resultados: Foram identificadas 639 publicações, das quais 38 preencheram os critérios
de inclusão. Globalmente, a sCal apresentou níveis significativamente mais elevados em
crianças com AIJs em comparação com controlos saudáveis, com melhor desempenho na
diferenciação da forma sistémica. Verificou-se uma correlação consistente com scores de
atividade clínica (ex.: JADAS, DAS28), confirmando a sua utilidade na monitorização da
doença. Vários estudos evidenciaram valor preditivo da sCal na resposta a diferentes
terapêuticas e na previsão de recidivas após suspensão do tratamento. Contudo, a ausência
de cut-offs uniformes e a heterogeneidade metodológica na sua determinação limitaram a
comparabilidade entre estudos. Conclusão: Esta revisão confirma o papel da sCal como um biomarcador com potencial
para complementar a avaliação clínica das AIJs, tanto no diagnóstico como na
monitorização. Os resultados sugerem vantagens face a marcadores tradicionais, sobretudo
na correlação com atividade inflamatória e no suporte à decisão terapêutica. Contudo, a sua
integração na prática clínica de rotina exige validação em estudos robustos, que estabeleçam
cut-offs e protocolos laboratoriais uniformizados
O Instagram como Ferramenta Estratégica de Comunicação Turística: Análise das ERT’s de Portugal Continental
Get PDFA imagem do destino turístico exerce um papel determinante no processo de decisão dos turistas, influenciando desde a escolha do destino até à decisão de viajar, revisitar e recomendar, sendo fundamental para a satisfação, fidelização e construção de uma ligação emocional com o destino. Neste contexto, as redes sociais e, em particular, o Instagram, afirmaram-se como canais estratégicos para a comunicação e promoção de destinos turísticos, permitindo às entidades responsáveis gerir e projetar a imagem dos territórios junto de potenciais turistas, comunicando através das suas páginas oficiais. O presente estudo visa analisar a forma como as Entidades Regionais de Turismo (ERT’s) de Portugal Continental utilizam o Instagram para promover a imagem dos seus destinos e experiências turísticas, explorando os atributos mais frequentemente comunicados e os tipos de experiências associados. Partindo de uma investigação de natureza exploratória e de um estudo de casos múltiplos, foi aplicada uma metodologia mista, combinando a análise quantitativa do engagement (likes e comentários), com a análise qualitativa dos conteúdos presentes nas descrições dos posts realizados pelas ERT’s na rede social. A análise incidiu sobre 1023 publicações, recolhidas entre 5 maio e 31 de dezembro de 2023, nos perfis oficiais das cinco ERT’s de Portugal Continental. Os resultados evidenciaram que as ERT’s comunicam predominantemente atributos ligados a elementos históricos e culturais, e a recursos naturais, promovendo, sobretudo, experiências de caráter estético e, com menor expressão, de entretenimento. Em termos de engagement, destacaram-se as regiões do Centro de Portugal e Alentejo.The image of a tourist destination plays a decisive role in tourists’ decision-making processes, influencing not only the choice of destination but also the decision to travel, revisit, and recommend it, being essential for satisfaction, loyalty, and the creation of an emotional bond with the place. In this context, social media — particularly Instagram — has established itself as a strategic communication and promotional channel for tourist destinations, allowing the responsible entities to manage and project the image of their territories to potential tourists through their official pages. This study aims to analyse how the Regional Tourism Entities (ERT’s) of mainland Portugal use Instagram to promote the image of their destinations and associated tourist experiences, exploring the most frequently communicated destination attributes and the types of experiences promoted. Based on an exploratory investigation and a multiple case study, a mixed-method approach was adopted, combining quantitative analysis of engagement metrics (likes and comments) with qualitative content analysis of the captions published by the ERT’s on Instagram. The analysis covered 1023 posts published between May 5 and December 31, 2023, on the official profiles of the five ERT’s of mainland Portugal. The results showed that the ERT’s predominantly communicated attributes related to historical and cultural elements, as well as natural resources, mainly promoting aesthetic experiences and, to a lesser extent, entertainment experiences. In terms of engagement, the regions of Centro de Portugal and Alentejo recorded the highest performance