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Natural history of cerebral visual impairment in children with cerebral palsy
Full text linkAim: To longitudinally evaluate the natural history of cerebral visual impairment (CVI) in children with cerebral palsy (CP) and identify which early visual signs or symptoms are associated with cognitive visual disorders (CVDs) at school age. Method: Fifty-one individuals with CP and CVI underwent an ophthalmological, oculomotor, and basic visual function evaluation at three time points: T0 (6–35 months old); T1 (3–5 years old); and T2 (≥6 years old). We also performed a cognitive visual evaluation at T2. Logistic regression fitted using a generalized estimation equation (binary) and cumulative link models (ordinal) were used to model the outcomes of interest. Results: Ophthalmological deficits were stable over time, except for ocular fundus abnormalities (T1–T0, p = 0.01; T2–T1, p = 0.02; T2–T0, p < 0.01) and strabismus, whose frequency increased with age (T2–T0, p= 0.02 with T2-T0, p = 0.05). Conversely, fixation (T1–T0, T2–T0, p < 0.01), smooth pursuit (T2–T1, T2–T0, p < 0.01), saccades (T1–T0, T2–T1, T2–T0, p < 0.01), as well as visual acuity, contrast sensitivity, and visual field (T1–T0, T2–T0, p < 0.01) all improved over time. Early oculomotor dysfunction was associated with CVD at T2. Interpretation: Although a diagnosis of CVI was confirmed in all children at each time point, several visual signs and symptoms improved over time; in some cases, they reached complete recovery at T1 and T2. These results emphasize the ‘permanent’ but ‘not unchanging’ nature of the CVI associated with CP during development
Consumer Credit in Early Modern Venice: the lending activity of innkeepers and bastioneri
No full textThis chapter challenges the general skepticism about pre-bank institutions, which are often considered small and fragmented, as well as risky and expensive. It opposes the common idea that banks are crucial for the development of an organized and inclusive credit market. To this end, the chapter focuses on the credit activity of Venetian innkeepers and bastioneri (wine sellers), who provided a unique pawnbroking service to their customers. They formed an efficient and dynamic network of market-makers that embraced all the city, providing essential support for the lower strata of the urban population. The chapter traces the origins of this pawnbroking activity and describes its main features. It focuses on the gradual bureaucratization of the relationships between borrowers and lenders. The Venetian case proves to be perfect to discuss how early modern public authorities could shape the structure of local credit markets, affecting their development. The last section focuses on the resilience of the Venetian credit system during a period of economic distress
Mitochondrial DNA (mtDNA) as fluid biomarker in neurodegenerative disorders: A systematic review
No full textBackground: Several studies evaluated peripheral and cerebrospinal fluid (CSF) mtDNA as a putative biomarker in neurodegenerative diseases, often yielding inconsistent findings. We systematically reviewed the current evidence assessing blood and CSF mtDNA levels and variant burden in Parkinson's disease (PD), Alzheimer's disease (AD) and amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Multiple sclerosis (MS) was also included as a paradigm of chronic neuroinflammation-driven neurodegeneration. Methods: Medline, Embase, Scopus and Web of Science were searched for articles published from inception until October 2023. Studies focused on mtDNA haplogroups or hereditary pathogenic variants were excluded. Critical appraisal was performed using the Quality Assessment for Diagnostic Accuracy Studies criteria. Results: Fifty-nine original studies met our a priori-defined inclusion criteria. The majority of CSF-focused studies showed (i) decreased mtDNA levels in PD and AD; (ii) increased levels in MS compared to controls. No studies evaluated CSF mtDNA in ALS. Results focused on blood cell-free and intracellular mtDNA were contradictory, even within studies evaluating the same disease. This poor reproducibility is likely due to the lack of consideration of the many factors known to affect mtDNA levels. mtDNA damage and methylation levels were increased and reduced in patients compared to controls, respectively. A few studies investigated the correlation between mtDNA and disease severity, with conflicting results. Conclusions: Additional well-designed studies are needed to evaluate CSF and blood mtDNA profiles as putative biomarkers in neurodegenerative diseases. The identification of “mitochondrial subtypes” of disease may enable novel precision medicine strategies to counteract neurodegeneration
Development of 3D Printed Sensor-Based Tools to Enhance Neurosurgical Learning Experience
Full text linkL'approccio endoscopico transsfenoidale (ETA) è un metodo innovativo utilizzato da neurochirurghi e da otorinolaringoiatri per trattare l'adenoma ipofisario, un tumore che cresce vicino alla ghiandola pituitaria. È ben noto che l'ETA ha una lunga curva di apprendimento, che richiede un training specifico. È stata condotta una revisione della letteratura condotta per investigare tutte le diverse soluzioni di training disponibili per i chirurghi per acquisire esperienza, oltre a entrare in sala operatoria e imparare sul campo. Dai risultati della revisione sono stati definiti gli obiettivi di questa tesi: sviluppare un sistema con sensori capace di riprodurre l’aracnoide e studiare le proprietà meccaniche dell'adenoma ipofisario, sviluppando un nuovo strumento chirurgico.
La prima parte della tesi descrive lo sviluppo del sistema sensorizzato stampato in 3D per riprodurre l'aracnoide, dal prototipo alla versione finale testata con chirurghi esperti. La versione finale, denominata tank, è stata stampata in 3D su una Stratasys Dimension BST1200es in ABS. Il tank è stato progettato per essere montato su un modello di training, al fine di aumentare il realismo. L'obiettivo di questo sistema innovativo è valutare la forza applicata dal chirurgo quando preme la membrana e trovare un valore soglia, oltre il quale la forza esercitata può essere pericolosa per il paziente. Per misurare la forza applicata alla membrana, un sensore di pressione è stato collegato al tank per registrare la variazione di pressione del liquido cerebrospinale indotta da una forza esterna sulla membrana aracnoidea polimerica. Il sistema è stato poi caratterizzato utilizzando un indentatore con una cella di carico montata, che registra la forza di contatto. Utilizzando una curette montata su un vetrino micrometrico, la membrana è stata premuta come in un intervento chirurgico reale. Successivamente, il modello con il tank equipaggiato è stato testato da undici chirurghi internazionali, e un primo valore soglia oltre il quale la forza esercitata dai chirurghi rompe l'aracnoide è stato determinato.
La seconda parte della tesi descrive la progettazione di un nuovo strumento per testare la durezza dell'adenoma ipofisario durante l'intervento. Lo strumento, denominato "sonda", è composto da tre parti: un guscio esterno rigido, stampata in 3D in PLA, un magnete con un magnetoresistore (TMR), ed una punta deformabile. L'idea è di misurare la durezza dei materiali attraverso la deformazione della punta quando viene applicato uno spostamento noto. Utilizzando un sensore TMR con un magnete fissato su una punta altamente deformabile, è possibile determinare la deformazione della punta in base al movimento del magnete. In particolare, più duro è il campione testato, maggiore sarà la deformazione della punta.
La principale sfida di questo progetto è sviluppare una sonda con un diametro massimo di 5 mm, capace di adattarsi alle cavità nasali per eseguire test intraoperatori. La sonda è stata fabbricata mediante la produzione additiva modellazione a deposizione fusa. Il guscio esterno è stato realizzato in PLA, mentre la punta è stata realizzata in TPU. Sono stati progettati e testati tre prototipi: il primo è stato sviluppato per determinare se il sistema è in grado di discernere diversi materiali morbidi, ma il diametro complessivo dello strumento non era adatto. Con il secondo prototipo, il design è stato migliorato per adattare la sonda alle cavità nasali e sono stati eseguiti test utilizzando un campione di albume d'uovo. Lo sviluppo del prototipo finale si è concentrato sul processo di fabbricazione della punta: in particolare, l'obiettivo era migliorare la sensibilità dello strumento senza perdere la sua stabilità. È stata trovata una combinazione ottimale dei parametri di stampa e del design della punta.The endoscopic transsphenoidal approach (ETA) is a novel approach used by both neurosurgeons and otolaryngologists to treat the pituitary adenoma, a tumor that grows near the pituitary gland. It is well recognized that ETA has a long learning curve, which requires integrated and specific training. A review of the literature was conducted to investigate all the different training solutions that are available to surgeons to gain experience, besides entering the operating room and learning on the field. From the results of the review the aims of this thesis were defined: to develop of a sensor-based system to overcome the lack of a proper representation of the arachnoid in a training solution and to study the mechanical properties of the pituitary adenoma, by developing a new surgical instrument, so to both help surgeons during the surgery and to find a more accurate representation of the tumor in future training models.
The first part of the thesis describes the development of the 3D printed sensorized system to reproduce the arachnoid, from the first prototype to the final version tested with experienced surgeons. The final version of such system, named “tank”, was designed and 3D-printed on a Stratasys Dimension BST1200es in ABS, to ensure better water tightness. The tank was designed to be mounted to the training model, in order to increase realism. The aim of this innovative system is to evaluate the force applied by the surgeon when pressing the membrane and to find a threshold value, above which the force exerted can be dangerous for the patient. To measure the force applied to the membrane, a pressure sensor was connected to the tank to register the variation of pressure of the cerebrospinal fluid induced by an external force on the polymeric arachnoid membrane. The system was then characterized using an indenter with a load cell mounted, which records the contact force. Using a curette mounted on a micrometric slide, the polymeric film was pressed as in real surgery. Then, the model with the tank equipped was tested by eleven international surgeons, and a first threshold value above which the force exerted by the surgeons breaks the arachnoid was determined. The second part of the thesis describes the design of a novel instrument to test the hardness of the pituitary adenoma intraoperatively. The instrument, named “probe”, consists of three parts: a rigid case, which was 3D printed in PLA, a magnet with a tunnelling magneto-resistive (TMR) sensor and a highly deformable tip.
The idea is to measure the hardness of materials through the deformation of the tip when a known displacement is applied. Using a TMR sensor with a magnet fixed on a highly deformable tip, it is possible to determine the deformation of the tip according to the movement of the magnet. In particular, the harder the sample tested, the greater the deformation of the tip.
The main challenge of this project is to develop a probe with a maximum diameter of 5 mm, capable of fitting within the nasal cavities to perform intraoperative tests. The probe was fabricated by Fused filament fabrication (FFF) additive manufacturing. The case was made in PLA, while the tip was made in flexible TPU. Three prototypes were designed and tested: the first was developed to determine whether the system is capable of discerning different soft materials, i.e. silicones, but the overall diameter of the instrument was not suitable. With the second prototype the design was improved to fit the probe within the nasal cavities, and tests were performed using an egg white sample. The development of the final prototype focused its attention on the fabrication process of the tip: in particular, the goal was to enhance the sensitivity of the instrument, without losing its stability. An optimal combination of the printing parameters and the design of the tip was found
Beyond Profits: Unraveling the Impact of ESG Initiatives on Firm Valuation
Full text linkQuesta tesi si propone di analizzare l'impatto delle attività ambientali, sociali e di governance (ESG) sul valore aziendale delle società quotate in Europa. Per questa analisi, i dati relativi al punteggio ESG e ad altre variabili finanziarie sono stati raccolti dal database Refinitiv nel periodo 2010-2024. Sono state utilizzate varie tecniche statistiche per esaminare la relazione, inclusi test diagnostici e di robustezza. I risultati di questo studio mostrano una relazione negativa significativa tra ESG e valore aziendale (misurato attraverso TobinQ), suggerendo che i costi delle attività ESG potrebbero superare i benefici finanziari immediati. Oltre al punteggio ESG complessivo, sono stati analizzati anche i singoli componenti sull'intero campione e tra le diverse regioni. Inoltre, è stata analizzata la relazione tra il costo del capitale, il valore aziendale e il punteggio ESG. I risultati mostrano che il costo del capitale è significativamente e negativamente correlato al valore aziendale, indicando che un costo del capitale più elevato riduce il valore aziendale. Contrariamente a ciò, la relazione positiva con ESG indica che le attività ESG potrebbero non avvantaggiare le aziende nell'ottenere finanziamenti a basso costo, sebbene l'R-quadro sia molto basso, suggerendo che solo una piccola variazione del costo del capitale potrebbe essere attribuibile al punteggio ESG.
La relazione tra le variabili è stata analizzata anche in diverse regioni (Est, Ovest, Nord e Sud) e i risultati mostrano che la relazione negativa esiste in queste regioni, ad eccezione del Sud, dove l'impatto è insignificante. Inoltre, questa tesi ha analizzato l'impatto delle direttive dell'Unione Europea, principalmente NFRD e CSRD. A tal fine, il campione è stato suddiviso in tre periodi temporali e i risultati mostrano che prima di NFRD la relazione era insignificante, mentre diventa significativa e negativa successivamente. Ciò potrebbe essere dovuto alla pressione di stakeholder e autorità per intraprendere attività ESG, ma i costi di queste attività superano i benefici finanziari o le aziende non le implementano in modo da migliorare anche i benefici finanziari.
Per garantire la robustezza, questa tesi utilizza la regressione quantile e i risultati mostrano che l'impatto di ESG e dei suoi sottocomponenti sul valore aziendale è significativamente negativo, in particolare nei quantili più alti, mentre l'impatto nei quantili più bassi varia. Inoltre, è stato utilizzato un altro proxy per il valore aziendale (ROA) e i risultati sono quantitativamente simili a quelli precedenti. Infine, questa tesi affronta il problema dell'endogeneità utilizzando la regressione a due stadi (two-stage least squares) e anticipando la variabile dipendente di un periodo. I risultati mostrano che l'impatto del punteggio ESG, dei sottocomponenti e delle altre variabili rimane quantitativamente invariato anche dopo aver controllato per l'endogeneThis thesis aims to analyze the impact of Environmental, Social, and Governance activities on the firm value of publicly listed companies in Europe. For this analysis, the data for ESG score and other financial variables is collected from the Refinitiv database from 2010 to 2024. Various statistical techniques are used to examine the relationship, including the diagnostic and robustness test. The findings of this study show a significant negative relationship between ESG and firm value (measured by TobinQ), suggesting that the cost of ESG activities might outweigh the immediate financial benefits. Along with the combined ESG score, the individual components are also analyzed in the whole sample and among the regions. Furthermore, the relationship between the cost of capital with firm value and ESG score is also analyzed. The results show that the cost of capital is significantly negatively related to firm value which shows that a higher cost of capital decreases the firm value. Contrary to this, the positive relationship with ESG shows that ESG activities might not benefit firms in obtaining funds at low cost, although the R-square is very low, suggesting a very small variation in the cost of capital might be caused by the ESG score. The relationship among the variables is also analyzed in different regions (Eastern, Western, Northern, and Southern) and the results show that the negative relationship exists in these regions except the Southern region where the impact is insignificant. Additionally, this thesis also analyzed the impact of the European Union’s directives, mainly NFRD and CSRD. For this, the sample is subdivided into three time periods and the results show that before NFRD, the relationship is insignificant whereas it becomes significant and negative afterwards. This could be due to pressure from stakeholders and authorities to engage in ESG activities but the cost of these activities is more than the financial benefits or companies are not implementing it in such a way that may also enhance financial benefits. To ensure robustness, this thesis employs Quantile regression and the results show that the impact of ESG and sub-components on firm value is significantly negative particularly in higher quantiles whereas the impact in lower quantiles varies. Other than this another proxy is used for firm value (ROA) and the results are quantitatively similar to previous findings. Furthermore, this thesis also addresses the issue of endogeneity by using two-stage least square regression and advancing the dependent variable by one period. The results show that the impact of ESG score, sub-components, and other variables remain quantitatively same even after controlling for endogeneity
Contribution of concurrent RB1 and p53 pathways alteration to the development of Glioblastoma with Primitive Neuronal Component
No full textIl glioblastoma è il tumore cerebrale primario più frequente negli adulti. Abbiamo studiato un sottotipo istologico raro e aggressivo: “Glioblastoma con Componente Primitiva Neuronale” (GBM-PNC). Secondo la OMS (2016), questa variante è una componente gliale mista (la parte GBM) con noduli di cellule immature a differenziazione neuronale precoce (la parte PNC). L’alterazione del pathway di “proteina 1 associata al retinoblastoma” (RB1), con inattivazione dell’oncosoppressore RB1, è stata di recente identificata come peculiarità dei GBM-PNC. I nostri dati (articolo in revisione) hanno dimostrato che, l’alterazione sia di RB1 che di p53 accomuna i tumori GBM-PNC. Abbiamo identificato il fattore di trascrizione EBF3 come marcatore di PNC e promotore del fenotipo neuronale precoce. Abbiamo generato un sistema in vitro per studiare gli effetti dell’alterazione di RB1 e p53 nelle cellule staminali di glioma (GSC) derivate da pazienti. Le sottopopolazioni di GSC sono la causa dell’eterogeneità dei GBM, delle recidive e della resistenza ai farmaci, quindi sono adatte per un approccio traslazionale. Abbiamo creato un modello CRISPR/Cas9 RB1 knockout con perdita o mantenimento della funzionalità di p53 e abbiamo trasdotto una linea di GBM-PNC, RB1 negativa e EBF3 positiva, per verificare se l’espressione ectopica di RB1 potesse farla regredire a un GBM convenzionale. In tutti i cloni è stato verificato il recupero dei livelli trascrizionali degli E2F, a valle di RB1 nel controllo della progressione del ciclo cellulare, nonché di MYCN/cMYC. Abbiamo eseguito saggi funzionali su neurosfere e organoidi derivanti da GSC, modello 3D capace di ricapitolare il fenotipo dei tumori dei pazienti. I nostri dati dimostrano che la perdita di RB1, non causa una proliferazione aberrante né l’attivazione di apoptosi, con o senza p53. La concomitante mutazione RB1-TP53 non influenza l’invasività, ma il knockout di RB1 con TP53 non mutato compromette la capacità invasiva degli sferoidi. L’analisi citogenetica e del ciclo cellulare hanno evidenziato un aumento di ploidia nei doppi mutanti rispetto ai cloni controllo e l’analisi trascrittomica ha confermato l’upregolazione dei pathway di transizione tra fasi del ciclo cellulare e del controllo del fuso mitotico. L’analisi immunopatologica sugli organoidi ha mostrato che i doppi mutanti riducono significativamente l’espressione del marcatore gliale GFAP, mantenendo un profilo trascrizionale neuroectodermico (Nestina,Vimentina,SOX2,CD133), e presentano cellule multinucleate con nuclei ipercromici, che riflettono le aberrazioni mitotiche comuni nella componente PNC dei tumori. Sorprendentemente, non c’era positività per EBF3 né in GSC né in organoidi dei doppi mutanti. Abbiamo attestato che il promotore di EBF3 è metilato, suggerendo uno stato epigenetico che potrebbe impedire il completo fenotipo bifasico. La mancata espressione ectopica di RB1 nel GBM-PNC potrebbe rafforzare questa ipotesi. Infine, i doppi mutanti irradiati (dati preliminari) sembrano più sensibili ai danni al DNA; data la refrattarietà dei GBM-PNC al convenzionale protocollo terapeutico per GBM (radio-chemioterapia), approfondiremo questo approccio traslazionale. Nel complesso, questi dati confermano che l’interruzione del controllo del ciclo cellulare, per assenza di RB1, sommata all’abolizione dell’apoptosi p53-dipendente potrebbero predisporre allo sviluppo del GBM-PNC, anche se non sufficienti a trasformare un GBM nel fenotipo bifasico.Glioblastoma (GBM) is the most frequent primary brain tumour in adults. We studied a rare, aggressive histological subtype: “Glioblastoma with Primitive Neuronal Component” (GBM-PNC). According to WHO (2016), this variant is a mixed glial component (the GBM part) with nodules of immature cells displaying early neuronal differentiation (the PNC part). Alterations in the Retinoblastoma-associated protein 1 (RB1) pathway, with inactivation of RB1 tumour suppressor, have been recently defined as the hallmark of GBM-PNCs. Our data (paper under review) showed that, along with RB1 pathway disruption, p53 pathway alteration are a consistent feature of GBM-PNC tumours. We identified EBF3 transcription factor as a PNC marker promoting an early neuronal phenotype. To better elucidate our findings, we set up an in vitro system to study the effects of RB1 and p53 pathways alteration in patient-derived glioma stem cells (GSCs) in driving the GBM-PNC development. Subpopulations of GSCs are the cause of GBM heterogeneity, tumour relapse and drug resistance, so they are a suitable model for a translational perspective. We created a CRISPR/Cas9 RB1 knockout model, with either loss or retention of p53 functionality, and we transduced an RB1-negative EBF3-positive GBM-PNC GSCs line to test if the ectopic RB1 expression could revert it into a conventional GBM. We characterised all clones by the recovery of the transcriptional levels of E2Fs, downstream RB1 in the control of cell cycle progression, as well as of MYCN/cMYC. We performed functional assays on neurospheres and 3D GSC-derived organoids model, that can recapitulate the features of the tumours. Our data show that the loss of RB1 does not mediate aberrant proliferation and apoptosis activation, with or without p53. The concomitant mutation TP53-RB1 does not influence the invasiveness, but RB1 knockout in a TP53 wildtype context impairs the invasive capacity of the spheroids. Both the cell cycle and the cytogenetic analysis highlighted an increased ploidy in the double-mutants as compared to the mocks and the transcriptomic data confirmed the upregulation of cell cycle phase transition pathways and of mitotic spindle assembly checkpoints. The immunopathological stainings of GSC-derived organoids showed that the double-mutants markedly reduced the expression of GFAP glial marker, while maintaining a neuroectodermal signature (Nestin, Vimentin, SOX2, CD133), and they presented multinucleated cells with hyperchromatic nuclei, mirroring the aberrant mitotic features of the PNC component of tumours. Surprisingly, we did not observe a EBF3 positivity in the double-mutants GSCs, nor in their organoids. We assessed that the EBF3 promoter was methylated, suggesting an epigenetic status that might prevent the gain of a full biphasic phenotype. The failed ectopic expression of RB1 in the GBM-PNC GSCs might reinforce this hypothesis. Finally, upon irradiation (preliminary data), double-mutants were more sensitive to DNA damages. Given the GBM-PNC refractoriness to the conventional GBM therapeutic protocol (radio-chemotherapy), we should further investigate this translational approach. All together, these findings confirm that the combination of cell cycle control disruption via RB1 loss and the p53-dependent apoptosis abolishment could be the predisposing features toward the GBM-PNC development, although this molecular setting is not enough to switch a conventional GBM into the biphasic phenotype
Evidence Based Recommendations in Sinonasal Tumors Involving Orbit: Preservation or Exenteration? An IHNSG Guidelines
No full textSinonasal tumors with orbital involvement present significant management challenges due to the complex anatomy of the orbital and sinonasal complex and the potential for severe tumor- and treatment-related morbidities. This comprehensive review examines evidence-based decision-making guidelines in the context of treating sinonasal malignancies involving the orbit. We evaluate pre-treatment assessment strategies, discuss the indications for orbital preservation versus its exenteration, explore the role of neo-adjuvant therapies, and analyze reconstruction techniques with ensuing rehabilitation approaches and quality of life. Our review underscores the need for a patient-centered multidisciplinary approach that optimizes treatment outcomes and quality of life for patients suffering from such advanced sinonasal malignancies with orbital involvement
Characterising alexithymia in individuals with functional motor disorders: a cross-sectional analysis of the Italian Registry of Functional Motor Disorders
Full text linkBackground Alexithymia, a personality trait characterised by difficulty in identifying and expressing emotions, may contribute to the onset and clinical presentation of functional motor disorders (FMDs), although this association remains underexplored. Methods From the Italian Registry of FMDs, we selected individuals recruited between November 2011 and January 2023, diagnosed with FMD according to Gupta and Lang criteria and assessed for various neurological and psychological features with validated rating scales. The main statistical analysis included regression models using the Toronto Alexithymia Scale 20 items as an explanatory variable for a set of clinical measures, adjusting for sociodemographic factors and correcting for multiple testing. Results In a cohort of 483 individuals, 20.7% had possible alexithymia and 31.5% had definite alexithymia. Higher levels of alexithymia were strongly associated with increased severity of depression (beta=0.31, p<0.001), anxiety (beta=0.32, p<0.001), general psychological distress (beta=-0.27, p<0.001), fatigue (beta=0.05, p<0.001) and pain (beta=0.32, p<0.001) and moderately associated with a slower onset of FMD (beta=0.02, p=0.003). Subscale analyses revealed that difficulties identifying feelings contributed most to these associations. No significant association was observed with motor symptom severity. Conclusions Emotional processing difficulties of individuals with FMD and alexithymia might increase their vulnerability to mental health problems, pain and fatigue, possibly aggravating the overall prognosis. Further research is needed to elucidate the underlying mechanisms linking alexithymia to FMD and to explore the efficacy of interventions targeting emotional awareness and regulation in this population and to prevent long-term mental health burdens
Functional impairment of human plasmacytoid dendritic cells in cutaneous melanoma
No full textIl successo clinico delle immunoterapie come gli inibitori dei checkpoint immunitari (ICB) ha incrementato la sopravvivenza dei pazienti con melanoma metastatico, anche se la metà di loro sviluppa una recidiva e non mostra una risposta durevole agli ICB suggerendo la necessità di nuove strategie terapeutiche che modulano la risposta immunitaria innata o adattativa.Tra le cellule immunitarie coinvolte nella risposta antitumorale le cellule dendritiche plasmacitoidi (pDC) giocano un ruolo cruciale collegando l’immunità innata e quella adattativa.Le pDC sono le principali cellule produttrici di interferone di tipo I (I-IFN) dopo riconoscimento di acidi nucleici da parte dei recettori TLR-7/9.Inoltre le pDC possono essere attivate tramite cGASSTING dopo il riconoscimento di DNA endogeno per una potente produzione di I-IFN indipendente dai TLR-7/9.I-IFN ha un ruolo nell’immunità antitumorale tramite meccanismi intrinseci (effetti citotossici e citostatici sulle cellule tumorali) ed estrinseci come la modulazione delle cellule dell’immunità innata ed adattativa stimolando la produzione di chemochine proinfiammatorie (es CXCL10).Inoltre le pDC sono in grado di eliminare direttamente le cellule tumorali in seguito ad attivazione.Questo processo è mediato dall’espressione di TRAIL che interagisce con i recettori TRAIL-R1/DR4 e TRAIL-R2/DR5 espressi dalle cellule tumorali.La lisi delle cellule tumorali può avvenire anche attraverso la serina proteasi granzima B (GrB) prodotta ad elevati livelli dalle pDC.Tuttavia i meccanismi di modulazione delle funzioni effettrici citotossiche delle pDC nel tumore sono stati scarsamente descritti.Un gran numero di studi ha documentato che le pDC nel microambiente tumorale possono essere inibite nelle loro funzioni antitumorali mediante citochine immunosoppressorie (PGE2, IL-10, TGF-β) e oncometaboliti (acido lattico) prodotti dalle cellule tumorali o acquisire un fenotipo tolerogenico promuovendo l’immunoevasione e la crescita del tumore.Dati preclinici suggeriscono che l’attivazione con agonisti di TLR-7/9 delle pDC nel tumore amplifica la risposta immunitaria antitumorale locale e sistemica promuovendo l’eliminazione delle cellule tumorali.Inoltre numerosi trials clinici hanno evidenziato che l’uso di agonisti di TLR-7/9 e STING singolarmente o insieme agli ICB può indurre una risposta antitumorale specifica dei linfociti T e una conseguente regressione tumorale in pazienti con melanoma metastatico.Infine i vaccini basati sull’utilizzo delle pDC hanno dimostrato di aumentare i linfociti T circolanti citotossici.Tuttavia l’impiego delle pDC come terapia cellulare nella pratica clinica è limitata dalla loro rarità nel sangue periferico.Nel mio progetto di tesi la funzione innata (espressione e produzione di IFNα e CXCL10) e la funzione effettrice citotossica (espressione di TRAIL e GrB) delle pDC sono state valutate mediante citofluorimetria ed ELISA in un sistema in vitro in cui le pDC sono state esposte a supernatanti di linee di melanoma.I risultati dimostrano che il secretoma del melanoma danneggia significativamente la capacità delle pDC di produrre di IFNα e CXCL10 tramite i TRL-7/9 e STING.Nello stesso sistema in vitro l’analisi RNA-Seq ha suggerito che l’esposizione ai supernatanti di melanoma induce una riprogrammazione delle pDC verso uno stato disfunzionale e tolerogenico.Ulteriori esperimenti hanno dimostrato che questo meccanismo inibitorio è in parte dipendente dalla lattacidosi e dalla deprivazione di glucosio ad opera delle cellule di melanoma che provocano l’inibizione della glicolisi nelle pDC.Inoltre l’espressione di TRAIL e di GrB nelle pDC sono inibite a seguito del condizionamento con i supernatanti a conferma di quanto suggerito dall’analisi RNA-Seq.La comprensione dei meccanismi effettori delle pDC potrebbe aprire nuove prospettive terapeutiche insieme allo sviluppo di nuove terapie basate sull’uso di agonisti di TLR-7/9 o STINGThe clinical success of immunotherapies such as immune checkpoint blockades (ICB) has significantly improved the outcome of patients with metastatic melanoma (MM).Unfortunately half of the surgically resected patients relapses and do not show a durable response to ICB suggesting the need for novel therapeutic strategies to modulate the innate or adaptive immune responses.Among immune cells involved in anti-tumor response plasmacytoid dendritic cells (pDCs) play a crucial role bridging the innate and adaptive immunity.pDCs are the major type I interferon (I-IFN) producing cells upon nucleic acids sensing through TLR-7/9 signaling pathways.Moreover pDCs can activate the cyclic GMP–AMP synthase (cGAS)-stimulator of interferon genes (STING) pathway upon endogenous DNA sensing eliciting a potent I-IFN production independently of TLR-7/9 pathways.I-IFN is involved in anti-cancer immunity via intrinsic (i.e. cytotoxic effects directly on tumor cells) and extrinsic mechanisms particularly by modulating innate and adaptive immune cells through the production of pro-inflammatory chemokines (e.g. CXCL10).In addition properly activated pDCs are able to directly kill tumor cells.This process is mediated by TNF-alpha related apoptosis inducing ligand (TRAIL) expressed on pDCs surface that interacts with TRAIL-R1/DR4 or TRAIL-R2/DR5 expressed on tumor cells.Furthermore lysis of tumor cells can occur through the serine protease granzyme B (GrB) which is strongly produced by human pDCs.However little is known about the modulation of these effector cytotoxic properties of pDCs in the tumor microenvironment (TME).A large set of studies have documented that tumor-associated pDCs (TA-pDCs) recruited to the TME could be hijacked in their functions by immunosuppressive cytokines (e.g. PGE2 IL-10 and TGF-β) and oncometabolites (e.g. lactic acid) produced by the tumor cells or could acquire a tolerogenic phenotype thus allowing tumors to evade the immune system.Preclinical data suggest that the activation of TA-pDCs by TLR-7/9 agonists administration amplifies the local and systemic anti-tumor immune response and promotes tumor cells killing.Accordingly numerous clinical trials highlighted that TLR-7/9 and STING agonists administration individually or in combination with ICB therapies has the potential to stimulate specific T cell response and subsequent tumor regression particularly for patients with MM.Finally pDCs-based cancer vaccines have been shown to increase the frequency of circulating cytotoxic T lymphocytes.However the pDC cell-based therapy for cancer in the clinic is limited due to the rarity of circulating pDCs compartment.In this PhD project the pDCs innate functionality (i.e. expression and production of IFN-α and CXCL10) and cytotoxic effector functionality (i.e. TRAIL and GrB expression) have been evaluated by flow cytometry and ELISA using an in vitro system of human peripheral blood pDCs exposed to CM cell lines supernatants (SN-mel).My findings demonstrated that melanoma secretome significantly impairs pDCs ability to produce IFN-α and CXCL10 via both TLR-7/9 and cGAS-STING signaling pathways.Moreover bulk RNA-seq analysis of SN-mel exposed pDCs suggested that melanoma secretome rewired the pDC transcriptomic profile towards an IFN-defective and tolerogenic state.Further in vitro experiments demonstrated the involvement of lactic acidosis and glucose deprivation by melanoma cells in the glycolytic impairment of pDC.Finally TRAIL and GrB expression in pDCs was reduced after the SN-mel conditioning confirming the RNA-seq data.In perspective these findings could enable to develop novel therapeutic approaches based on the administration of TLR-7/9 and STING agonists together with target therapies and immunotherapies particularly for CM patients in the early-stage in which the pDC compartment is still preserved.Moreover the comprehension of the pDCs effector mechanisms could open new therapeutic windows for cell-therap
Dialoghi im-possibili. Pedagogia e culture della pace
Full text linkIl contributo esplora le sfide della costruzione di una cultura della pace, muovendo dall’idea che essa non configuri semplicemente assenza di conflitto, ma un processo attivo di giustizia sociale e sviluppo umano integrale.
L’aumento delle guerre e il peggioramento delle condizioni di stabilità politica in molte nazioni, incluse quelle non coinvolte in azioni belliche dichiarate, fanno emergere una povertà di pace, alimentata da retoriche divisive
che escludono gruppi sociali ed ostacolano il dialogo autentico. La pedagogia è chiamata a delineare percorsi educativi atti a decostruire narrazioni d’odio e promuovere cittadinanza globale, inclusione e giustizia sociale. Occorre trasformare la comunità nel segno di un apprendimento diffuso e generativo, rafforzando il senso di appartenenza e la responsabilità collettiva.
Attraverso alleanze territoriali e progetti educativi partecipativi è possibile alimentare un ethos di fraternità e sostenibilità, sviluppando una cultura della pace che integri educazione, giustizia e cura del creato come prerequisiti per un futuro inclusivo e solidale