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Fungos de solos da Antártica: prospecção de L-asparaginase e protease e caracterização taxonômica
No full textAmbientes extremos são fontes potenciais para a descoberta de novos produtos naturais com propriedades específicas para aplicação biotecnológica, devido ao pouco conhecimento sobre a diversidade e os recursos genéticos dos micro-organismos que habitam esses locais. Micro-organismos do ambiente Antártico têm demonstrado potencial para produção de enzimas ativas em temperaturas brandas com aplicação em diversos setores de importância econômica. Neste contexto, o presente trabalho avaliou a produção de L-asparaginase e proteases produzidas por fungos filamentosos (n=161) e leveduras (n=137), isolados de oito diferentes amostras de solos da Antártica (coletados na expedição Antártica de nov/dez de 2013 no âmbito do INCT Criosfera). Os fungos filamentosos e as leveduras encontram-se preservados na coleção de pesquisa vinculada à Central de Recursos Microbianos da UNESP (CRM-UNESP). Um total de 101 (62,7%) fungos filamentosos apresentou potencial para produção da enzima L-asparaginase em meio sólido (triagem qualitativa), porém nos testes quantitativos em meio líquido a enzima não foi produzida nas condições utilizadas. Com relação às proteases, 121 (75,1%) fungos apresentaram halo de degradação em meio sólido e 30 (18.6%) isolados apresentaram resultados de atividade de proteases acima de 45,0 U/mL. Dentre eles, 13 (8,7%) foram capazes de produzir proteases acima 100,0 U/mL: sete isolados apresentaram atividade de proteases alcalina e seis de proteases ácidas. Os isolados 5BI (Aspergillus sp.) e 6 MP (Thelebolus sp.) se destacaram na produção de proteases ácidas e alcalinas, respectivamente, e foram submetidos ao planejamento experimental. Os resultados indicaram um aumento significativo na produção de proteases a 10ºC e 150 rpm: 7,41 vezes para a produção de proteases ácidas pelo fungo 5BI (1.810,0 U/mL) e 5,38 vezes (1.542,5 U/mL) para a produção de proteases alcalinas pelo fungo 6MP. Para ambos os isolados as condições aplicadas que resultaram nos valores máximos de produção de proteases foram validadas. Os resultados da avaliação da diversidade das 137 leveduras (MSP-PCR) revelaram a ocorrência de 22 táxons distintos distribuídos em 8 gêneros, com predominância de Cryptococcus (21,1%), Rhodotorula e Candida (20,4%). Outros gêneros menos predominantes encontrados foram: Cystofilobasidium (13,8%), Rhodosporidium (13,1%), Leucosporidium (8,7%), Guehomyces (6,5%), Debaryomyces (3,6%), Bulleromyces (2,9%) e Malassezia (2,1%). Com base nos índices de Simpson,
Shannon e Chao o solo BI (solo de biofilme, Deception) foi o mais diverso e o que apresentou a maior riqueza. Análises dos parâmetros físico-quimicos dos solos e de diversidade revelaram proximidade entre os solos MP (solo embaixo de madeira podre, Deception), FE (solo embaixo de barra de ferro, Deception) e CG 4.0 (solo embaixo de camada de gelo, Rei George). O presente trabalho apresenta uma visão geral da diversidade de leveduras nos diferentes tipos de solos de Ilhas Antárticas e revela o potencial biotecnológico de fungos filamentosos para produção de proteases ácidas e alcalinas.Extreme environments are potential sources for the discovery of new natural products with specific properties for biotechnological applications due to little knowledge about the diversity and genetic resources of microorganisms that inhabit these places. Microorganisms from the Antarctic environment have shown potential for producing active enzymes in mild temperatures with application in various sectors of economic importance. In this context, the present study evaluated the production of proteases and L-asparaginase by filamentous fungi (n= 161) and yeasts (n= 137) isolated from seven different samples of the Antarctic soils (collected in the Antarctic expedition Nov/Dec 2013 - INCT Cryosphere Project). The isolates are being maintained in the research collection linked to the Microbial Resource Center of UNESP (CRM-UNESP). A total of 101 (62.7%) filamentous fungi showed potential for production of L-asparaginase on solid medium (qualitative screening), but in the quantitative screening in liquid medium the enzyme was not produced. Concerning proteases production, 121 (75.1%) filamentous fungi presented halo of degradation on solid medium and 30 (18.6%) isolates showed protease activity above 45.0 U/mL Among them, thirteen (8.7%) isolates were able to produce protease above 100.0 U/mL: seven isolates produced alkaline proteases and six acid proteases. The isolates 5BI (Aspergillus sp.) and 6 MP (Thelebolus sp.) showed the best results in the production of acid and alkaline proteases, respectively, and were submitted to the experimental design. Results indicated a significant increase in protease production at 10 °C and 150 rpm: 7.41 times for the production of acid proteases by the fungus 5BI (1,810.0 U/mL) and 5.38 times (1,542.5 U/mL) for the production of alkaline proteases by the fungus 6MP. For both isolates the conditions applied for the maximum production of proteases were validated. Results related to the assessment of the diversity of the 137 yeasts (MSP-PCR) revealed the presence of 22 different taxa, especially the genera Cryptococcus (21.1%), Rhodotorula e Candida (20.4%). Other less prevalent genera found were: Cystofilobasidium (13.8%), Rhodosporidium (13.1%), Leucosporidium (8.7%), Guehomyces (6.5%), Debaryomyces (3.6%), Bulleromyces (2.9%), and Malassezia (2.1%). Based on the Simpson, Shannon and Chao indexes, the soil BI (biofilm soil, Deception Island) was the most diverse and presented the greatest richness. Analysis of physicochemical parameters of the soils and their diversity revealed that MP (soil under rotten wood, Deception), FE (soil under iron bar, Deception), and GC 4.0 (soil under layer ice, King George) are closed related. The present work presents an overview of the diversity of yeast in different types of soils from Antarctic Islands and reveals the biotechnological potential of filamentous fungi for the production of acid and alkaline proteases.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP
Influência do condicionamento higrotérmico no comportamento mecânico de compósitos soldados de PEI/fibras de carbono
No full textApesar da grande utilização dos compósitos termoplásticos na indústria aeronáutica, ainda existem diversos desafios relacionados à integração das partes constituintes de uma aeronave. Como alternativa para união destas peças, dentre os principais métodos de união disponíveis em compósitos termoplásticos, a soldagem vem sendo considerada a mais vantajosa. A soldagem por resistência elétrica aplicada a compósitos termoplásticos apresenta como principal característica um tempo menor de processamento em relação às outras técnicas de soldagem. No entanto, componentes que requerem exigências estruturais, quando expostos a ambientes agressivos como a umidade associada à temperatura, podem ter suas propriedades mecânicas reduzidas. Desta forma, este trabalho tem como principal objetivo avaliar a influência do condicionamento higrotérmico em amostras de compósito polimérico PEI/fibras de carbono soldados. Os parâmetros de soldagem (corrente, tempo e pressão) foram determinados realizando-se ensaios baseados na literatura. Para o desenvolvimento deste trabalho foi também empregado um método de soldagem por partes, cujo objetivo foi produzir juntas soldadas que pudessem se adequar aos ensaios realizados no estudo. A análise do processo de soldagem foi realizada a partir dos ensaios Double Cantilever Beam (DCB), Análise Termomecânica (TMA), Lap Shear e End-Notched Flexure (ENF), sendo realizada a análise da fratura após a realização dos ensaios mecânicos. Amostras soldadas foram também condicionadas em câmara higrotérmica. A partir deste condicionamento, foi observado que a absorção de umidade, tanto para amostras não soldadas como para as soldadas, apresenta o comportamento Fickiano. Quando considerados os resultados mecânicos obtidos das amostras condicionadas, como esperado, foi observada uma diminuição de algumas propriedades em até 40% devido, provavelmente, ao efeito da plasticização da matriz polimérica. Ainda, de acordo com os resultados de DCB, a adesão da malha metálica na região soldada é satisfatória, não havendo defeitos ou delaminações na junta soldada realizada pelo método de soldagem por partes.Despite widespread use of thermoplastic composite materials in the aerospace industry, there is a constant concern about the integration of the constituent parts of an aircraft. As an alternative to joining these parts, among the main union methods in thermoplastic composites, welding has been considered the most advantageous. The electrical resistance welding applied to thermoplastic composites has as its main characteristic a shorter processing time compared to other welding techniques. However, components requiring structural requirements, when exposed to aggressive environments such as moisture associated with temperature can have their reduced mechanical properties. Thus, this study has as main objective to evaluate the influence of hygrothermal conditioning in PEI/carbon fiber welded composite welded samples. Welding parameters (current, time and pressure) were determined by performing assays based on the literature. For the development of this work was also employed a welding method by parts, whose aim was to produce welded joints that could fit the tests performed in the study. The analysis of the welding process was performed from the Double Cantilever Beam (DCB), Thermomechanical Analysis (TMA), Lap Shear and End-Notched Flexure (ENF) tests, the analysis of the fracture being performed after completion of the mechanical tests. Welded samples were also conditioned on hygrothermal chamber. From this conditioning, it was observed that the moisture absorption, of welded and not welded samples, presented Fickian. When considering the mechanical results obtained from the conditioned samples, as expected, was observed a decrease in some properties by up to 40% due probably to the plasticizing effect of the polymer matrix. Also, according to the results of DCB, adhesion of the metal mesh in the welded area is satisfactory, with no defects or delamination in the welded joint welding method performed by parts.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES
Determinação da diversidade bacteriana em culturas de caldo Macconkey de materiais clínicos de portadores de doença de Crohn e análise de propriedades de isolados de Escherichia coli identificados
No full textDesequilíbrio na composição de espécies bacterianas (disbiose) do intestino é uma característica da doença de Crohn (DC), a mais grave das doenças inflamatórias intestinais (DII). Na disbiose da DII, há um aumento de certos grupos de bactérias, tais como as Proteobacteria, em alguns pacientes. Acredita-se que o aumento destas bactérias deve contribuir para as reações inflamatórias responsáveis pelas lesões observadas no intestino de portadores de DC e retocolite ulcerativa, ao estimular a produção de citocinas por células locais do sistema imune. Proteobacteria, um dos filos predominantes da microbiota intestinal compreende bacilos gram-negativos, dos quais Escherichia coli (E. coli) é o mais conhecido. Dada a importância de Proteobacteria como patógeno ou membro da microbiota intestinal residente humana, este trabalho teve dois objetivos: 1) Investigar a ocorrência de variação numérica na população de Proteobacteria na DC e 2) Caracterizar amostras de E. coli encontradas nesta população, em relação a propriedades de virulência. Visando o primeiro objetivo, DNA de culturas em caldo MacConkey de diferentes materiais clínicos (fezes e biópsias intestinais) de 8 controles e 9 pacientes com DC foram amplificados com primers para as regiões V6-V8 do gene que codifica a fração 16S do rRNA (16S V6-V8 rDNA) e, em seguida, sequências específicas (representando táxons bacterianos particulares) contidas nos amplicons foram separadas por temperature gradient gel electrophoresis (TGGE), definindo perfis de banda que refletem a diversidade bacteriana. O segundo objetivo compreendeu a tipagem dos isolados de E. coli destas culturas através da classificação em filogrupos (A, B1, B2 e D) da coleção de referência de E. coli (EcoR), a pesquisa de sorogrupos O25 e O83, determinação das propriedades de aderência e capacidade de produzir biofilme. Análise de 32 culturas de 9 portadores de DC e 24 culturas de 8 controles mostrou uma clara diferença no número de bandas nos perfis de TGGE dos amplicons de 16S V6-V8 rDNA. Amplicons de 8 culturas de 9 portadores de DC tinham no máximo 2 bandas, ao passo que o número de bandas em amplicons de controles tinham pelo menos 3 bandas. Uma das bandas dos casos em que havia duas bandas ou a banda única dos perfis de cultura de casos teve a mesma mobilidade do amplicon de E. coli, colocado no gel como referência da corrida. PCR para detecção de genes de O25 e O83 demonstraram que estes sorogrupos foram dominantes tanto na população de E. coli de portadores de DC como de controles (apenas um paciente controle deu resultado negativo na PCR para ambos sorogrupos). Também, a maioria das cepas de E. coli, tanto de casos como de controles pertenceu ao filogrupo B2. Resultados parciais de testes de adesão em células Hep-2 revelaram que todos os pacientes (controles ou não) apresentaram E. coli aderentes, expressando o padrão agregativo. Testes para avaliar a capacidade de formação de biofilme indicaram que isolados de E. coli das regiões proximais encontrados em controles produzem biofilme de forma mais intensa do que isolados equivalentes de portadores de DC. Como conclusão, os dados apresentados sugerem que a população intestinal de Proteobacteria em portadores de CD apresenta disbiose, associada com um aumento do número de E. coli, uma propriedade que foi determinada por TGGE e confirmada com seqüenciamento de amplicons da região V6, pela técnica Ion Torrent. Por fim, com base nos resultados de tipagem e caracterização bacteriana foi possível observar que amostras tanto de caso como de controles, não houve uma prevalência dos sorogrupos e com base nesse resultado podemos associar que ambos os grupos de estudos freqüentam de forma rotineira o mesmo ambiente hospitalar, podendo indicar um favorecimento na aquisição desses tipos bacterianos. Resultados semelhantes ocorreram com as análises dos sorogrupos, onde apenas o filogrupo D teve prevalência significativa em indivíduos controle. Em relação à produção de biofilme, as amostras encontradas na região proximal do intestino de pacientes controles produzem mais biofilmes do que amostras de portadores de DC da mesma região intestinal, indicando que a parede da mucosa intestinal serve como substrato pode influenciar na formação do biofilme.Imbalance in intestinal bacterial composition (dysbiosis) is a hallmark of Crohn’s disease (CD), the most severe of inflammatory bowel diseases (IBD). A characteristic of IBD dysbiosis is the elevation of certain groups of bacteria such as Proteobacteria in some patients. It is believed that the augmented bacteria may contribute for the inflammatory reactions underlying the typical lesions observed in the gut of CD and ulcerative colitis patients, by stimulating the production of cytokines by local cells of the immune system. Proteobacteria, one the most prevalent bacterial phyla of the gut microbiota are Gram negative rods of which Escherichia coli (E. coli) is the most well-known member. Given the significance of Proteobacteria as pathogens or member of resident gut microbiota, this work had two purposes: 1) to investigate the occurrence of numerical variation in the population of these bacteria in CD and 2) Characterizing E. coli isolates found in this population, in search for some virulence associated properties. For the first purpose, DNA from MacConkey broth cultures of distinct clinical materials (stools and gut mucosal biopsies) of 9 CD and 8 control patients were amplified with primers for the V6 and V8 regions of the 16S ribosomal RNA gene (16S V6-V8 rDNA) and distinct gene sequences (representing particular bacterial taxa) within the amplicons were resolved by temperature gradient gel electrophoresis (TGGE), defining band profiles, which reflect the bacterial diversity. The second objective consisted in phylotyping (determining A, B1, B2 and D phylogroups), serotyping (search for O25 and O83 genes), analyzing the E. coli isolates of the cultures for adherence properties and competence to produce biofilm. Analysis of 32 cultures from the 9 CD patients and 24 cultures from 8 control subjects showed a clear case-control difference in the number of bands in the TGGE profiles of the 16S V6-V8 rDNA amplicons. Cultures from 8 of 9 CD patients had at most 2 bands, while the number of bands in the cultures from 7 of the 8 controls subjects had at least 3 bands. One of the two bands found in the cultures from CD patients had the same mobility as E. coli, put in the gelas reference for the run. PCR screening for O25 and O83 demonstrated that these serogroups were dominant among the E. coli population from both controls and CD patients (only one control subject was negative for each of these O groups). Also, most of E. coli isolates from both control and CD patients belonged to the B2 phylogroup. Partial results of bacterial adherence to Hep-2 cells revealed that all patients (controls and CD) had aggregative adherent E. coli isolates. Tests to determine the ability to produce biofilm indicated that isolates from the proximal, but not from distal region of the gut or the stools, found in controls were stronger biofilm formers than isolates from equivalent sites of CD patients. In conclusion, the data presented here reveal that intestinal population of Proteobacteria of CD patients show dysbiosis associated with the elevation of Escherichia coli and that this variation can be assessed by TGGE and confirmed by sequencing of amplicons V6 region, the technique Ion Torrent. Finally, on the basis of the bacterial typing and characterization results, was observed that samples of both the case and controls, there was a prevalence of serogroups, based on this result we can associate both study groups frequent routinely the same hospital environment and may indicate a favoring the acquisition of these bacterial types. Similar results occurred with the analysis of serogroups, where only the filogrupo D had a significant prevalence in control subjects. For biofilm production, the samples found in the proximal region of the control patients intestine produce more biofilm than DC bearing samples of the same intestinal region, indicating that the intestinal mucosa serves as a substrate may influence the formation of biofilms.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP
Desenvolvimento ontogenético larval e variabilidade populacional de Pimelodus britskii em um reservatório neotropical
No full textPimelodus britskii, uma espécie endêmica da bacia do rio Iguaçu, apresenta poucos estudos que envolvam desenvolvimento ontogenético e parâmetros populacionais, deste modo, trabalhos que envolvam esses caracteres são de suma importância, para tomada de medidas de uso e conservação da espécie. Neste trabalho abordamos, no primeiro artigo, o desenvolvimento larval, proporções corporais e subsídios para diferenciar a larva nas fases iniciais de desenvolvimento das suas congenéricas. No segundo artigo avaliamos as modificações, ao longo do espaço e do tempo, com relação à abundância, proporção sexual, tamanho de primeira maturação, comprimento médio, relação peso/comprimento, e atividade reprodutiva. Em relação às larvas, inicialmente a pigmentação era escassa e intensificou-se com o desenvolvimento. O comprimento padrão variou de 2,6 a 13,11mm e os miômeros de 34-50. A espécie apresentou alometria negativa do comprimento da cabeça, altura do corpo, distância pré-dorsal e distância pré-anal em relação ao comprimento padrão e altura da cabeça, comprimento do focinho e diâmetro do olho em relação a comprimento da cabeça, e as estruturas corporais em todas as fases larvais de desenvolvimento são cartilaginosas. Foram capturados na totalidade 9.204 indivíduos, em quatros locais diferentes de coletas em 9 (nove) etapas. Evidenciou que a população de P.britskii, por diferentes etapas e locais, apresentou diferença significativa em seus parâmetros populacionais. A maior abundância (CPUE) ocorreu na etapa I e na estação de coleta Cavernoso (Cav). O comprimento médio da população variaram 15,5±6,2 cm, sendo os indivíduos maiores capturados na Etapa III e na estação de coleta Iate Clube Candói (Iat). O crescimento foi alométrico negativo, como o melhor fator de condição (K), encontrado na etapa III e na estação Iat, como ocorreu também para o comprimento médio. O índice de atividade reprodutiva (IAR), na escala temporal foram mais intenso na etapa I e no espaço na estação Cav. E em relação a diferentes estações de coleta, foram mais intenso nas estações quente (verão) e praticamente nulo na estações mais frias (outono). Considerando estes resultados podemos inferir que a população apresenta tendência à estabilização.Pimelodus britskii, an endemic species of Iguaçu River basin, has scarce studies involving ontogenetic development and population parameters. So studies involving these characters are of great importance to take protection e conservation measures. This study presents, in the first paper, body proportions and subsidies to differ larval initial developing phases larval of its congenerics. The second paper evaluated changes, over space and time, related to abundancy , sexual proportion, first maturation size, medium lengh , weight /size relation and productive activity. The larvae initially pigmentation was scarce and intensified with the development, the standard length ranged from 2.6 to 13.11mm and myomeres from 34-50. The findings showed negative head length allometry, body height, predorsal length and pre-anal distance from the standard length and head height, snout length and diameter of the eye in relation to head length and structures in all larval stages of development are cartilaginous. 9.204 individuals were captured in nine years in four different collection places. It showed that the population of P.britskii, through different stages and places significant difference in their population parameters. The highest abundance (CPUE), occurred in stage I and Cavernous collection station (Cav). The average length of the population ranged 15.5 ± 6.2 cm, with the largest individuals caught in Stage III and gathering station Candói Yacht Club (Iat). The allometric growth was negative as the best condition factor (K) found in step III and Iat station as also observed for the mean length. The reproductive activity index (IAR), the temporal scale were more intense in stage I and space in Cav station. And in relation to different collection stations were more intense in the warm seasons (summer) and virtually nil in colder seasons (autumn). Considering these results we can conclude that the population has a tendency to stabilize.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES
Efeito de um programa educacional promovendo a prática regular de exercício físico em indivíduos com osteoartrite de joelho
No full textO objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos de um programa educacional promovendo a prática regular de exercícios físicos sobre a capacidade física, capacidade funcional e nível de atividade física diária de indivíduos com osteoartrite (OA) de joelho. Duzentos e trinta e nove pacientes da rede pública, de ambos os sexos, com diagnóstico de OA primária ou secundária de joelho, classificados como Grau I a IV de Kelgreen e Lawrence, e com indicação de tratamento clínico da OA foram distribuídos aleatoriamente em grupo intervenção (GI; n = 112) e controle (GC; n = 127). Todos os voluntários do GI e GC foram submetidos à avaliação da capacidade física (teste isocinético e teste de caminhada de 6 min - TC6), capacidade funcional (teste de subir e descer escadas, teste de sentar e levantar 5 vezes e Time Up and Go) e nível de atividade física diária (IPAQ versão curta), antes (pré), durante (6 meses) e após (12 meses) o período de seguimento. Após 6 meses de seguimento, o GI demonstrou melhora significativa (P < 0,05) na performance dos testes de subir e descer escadas (19%), sentar e levantar da cadeira (30%) e Time Up and Go (32,5%), bem como redução no índice de massa corpórea (P < 0,05), as quais se mantiveram após 12 meses seguimento. Também houve aumento no percentual de indivíduos muito ativos e ativos, bem como redução no percentual de indivíduos sedentários no GI ao longo do seguimento (P < 0,05). Dentre os testes funcionais, o GC melhorou apenas a performance para subir e descer escadas (12%, P < 0,05) após 6 meses de seguimento, mas a mesma não se manteve após 12 meses de seguimento. Também foi observado aumento no percentual de indivíduos muito ativos no GC ao longo do seguimento, porém este aumento foi de menor magnitude à observada no GI. Não foi observada alteração na capacidade muscular, capacidade aeróbia e flexibilidade após 12 meses de seguimento em ambos os grupos. Estes resultados sugerem que um programa educacional promovendo a prática regular de exercícios físicos pode ser efetivo para melhora da capacidade funcional de indivíduos com OA de joelho.The purpose of present study was to investigate the effects of an educational program emphasizing the regular practice of physical exercise on physical fitness, functional capacity and daily living physical activity levels in patients with knee osteoarthritis (OA). Two hundred and thirty-nine patients of the public health system (male and female), with primary or secondary knee OA (degree I to IV in the Kelgreen and Lawrence scale), and with indication for OA clinical treatment was randomly allocated in intervention (IG; n = 112) and control group (CG; n = 127). All subjects of both groups underwent assessment of physical fitness (isokinetic and six minute walking tests), functional capacity (seat-to-stand, stair climbing and Time Up and Go tests) and daily living physical activity (IPAQ short version), before (pre), during (6 month) and after (12 month) the follow-up. During 6 month of follow-up, the IG showed significant improvements (P < 0,05) on stair climbing (19%), seat-to-stand (30%) and Time Up and Go (32,5%) tests, as well as reduction on body mass index (P < 0,05), which were maintained during the 12 month of follow-up. There was also an increase in the percentage of actives and very actives subjects, as well as a reduction in the percentage of sedentary subjects in the IG during follow-up (P < 0,05). The CG improved only the stair climbing tests during the 6 month follow-up (12%, P < 0,05), but the improvement was not maintained during the 12 month of follow-up. There was also an increase in the percentage of very actives subjects in GC during follow-up; however, this increase was lower than the observed in the IG. There was no significant improvements on muscular capacity, aerobic capacity and flexibility during the 2 month follow-up in both groups. These results suggest that an educational program promoting the regular practice of physical exercise may be an effective tool for improving functional capacity in patients with knee OA
Diagnóstico microbiológico e molecular de Campylobacter spp., Salmonella spp. e Escherichia coli em carcaças de frango
No full textAs doenças de transmissão alimentar (DTA) por bactérias constituem um problema de saúde pública no mundo. O objetivo do trabalho foi identificar por métodos microbiológicos e moleculares a presença de Campylobacter spp., Salmonella spp. e Escherichia coli em frangos de Botucatu-SP, Brasil. Sessenta (60) amostras de frangos resfriados de diferentes marcas foram coletadas aleatoriamente em diferentes estabelecimentos localizados tanto na periferia, quanto no centro da cidade de Botucatu, SP, no período de julho a outubro de 2015. Posteriormente, Campylobacter spp, Salmonella spp e E. coli foram isolados através de métodos microbiológicos convencionais. A confirmação das bactérias isoladas se realizou por provas bioquímicas e PCR. Além disso, as provas para determinar a resistência antimicrobiana e a existência de gene integron classe 1 foram realizadas. Os resultados demostraram a presença de três das principais bactérias que causam doenças de origem alimentar em carcaças de frango provenientes de supermercados e casas de carne de Botucatu. A prevalência de Campylobacter, Salmonella, e E. coli foi 38,3%, 13,3% e 60%, respectivamente. A resistência antimicrobiana dos isolados foi elevada e presença do gene íntegron classe 1 foi identificada em alguns agentes patogénicos.The transmission of Foodborne Diseases (FBD) by bacteria constitutes a public health problem in the world. The objective of this study was to identify by microbiological and molecular methods the presence of Campylobacter spp., Salmonella spp. and Escherichia coli in broiler chickens at Botucatu, SP, Brazil. Sixty samples of chilled chickens of different brands were randomly collected from supermarkets and meat houses located in both the periphery and the center of the city, in the period from July to October 2015. Later, Campylobacter spp., Salmonella spp., and E. coli were isolated by conventional microbiological methods. Confirmation of the isolated bacteria was performed by biochemical and PCR tests. In addition, proofs to determine antimicrobial resistance and the existence of class 1 integron gene were carried out. Results confirmed the presence of the three assessed bacteria in poultry carcasses from selected establishments. The prevalence was 38.3%, 13.3% and 60% to Campylobacter, Salmonella and E. coli, respectively. Antimicrobial resistance of the isolates was high and the presence of integron class 1 gene has been identified in some pathogens
Avaliação da qualidade de óleos de fritura utilizados na cantina no IBILCE/UNESP
No full textIn this work, the frying oils used by the cafeteria located at IBILCE/UNESP in São José do Rio Preto-SP were evaluated. The goals were to determine the levels of alteration of the oils and to inform the establishment about good manufacturing practices, in order to provide higher quality food for the customers. The following methodologies were used: determination of total polar compounds, percentage of free fatty acids, Oil Test method, conjugated dienes, peroxide indices, and fatty acids profile. The limits adopted for the evaluation of the possible alterations were based on the legislation adopted by some countries: 25% for total polar compounds, 1% for the presence of free fatty acids, and 10 meq/kg for peroxide indices. The results obtained indicated that 53.2% of the 47 samples analyzed for total polar compounds were above the limit; 77.8% of the 9 samples whose contents of free fatty acids were analyzed exceeded the 1% limit; and 33.3% of the 9 samples evaluated for peroxide indices showed values higher than 10 meq/kg, exceeding the established limit. The contents of conjugated dienes varied between 0.36% and 2.43%, with an average value of 1.57%. Application of the Oil Test method showed that oil changes would be recommended for 66.7% of the samples analyzed, with the results obtained using the colorimetric scale indicating the alteration level “change”. In the evaluation of the fatty acids profiles of the oils, the polyunsaturated fatty acids were predominant, with a percentage decrease after each cycle of frying. Consequently, the saturated fatty acids and monounsaturated fatty acids increased. The results of the analytical determinations reinforce the importance of evaluation and monitoring of the changes undergone by the oil during the time interval in which the same oil is used for differing frying processes, so that the establishment can offer a higher quality of fried foods to the customer.En el presente trabajo fueron evaluados aceites de fritura utilizados por la cantina ubicada en el IBILCE/UNESP, en la ciudad de São José do Rio Preto-SP. Los objetivos fueron determinar sus niveles de alteración y concientizar el establecimiento sobre las buenas prácticas de fabricación, con vistas al fornecimiento de alimentos de mejor calidad a la población. Para ello, las siguientes metodologías fueron utilizadas: determinación de compuestos polares totales, porcentaje de ácidos grasos libres, Oil Test, ácidos dienoicos conjugados, índice de peróxidos y perfil de ácidos grasos. Los límites de alteración establecidos fueron basados en la legislación adoptada por algunos países: 25% para compuestos polares totales, 1% para ácidos grasos libres y 10 meq/kg para índice de peróxidos. Los resultados obtenidos indicaron que 53,2% de las 47 muestras analizadas para compuestos polares totales estaban encima del límite; 77,8% de las 9 muestras cuyo tenor de ácidos grasos libres fue analizado que excedió el límite de 1%; y 33,3% de las 9 muestras evaluadas respecto al índice de peróxidos obtuvieron un valor mayor que 10 meq/kg, sobrepasando el límite establecido. Los tenores de ácidos dienoicos conjugados oscilaron entre 0,36 y 2,43%, con valor medio de 1,57%. Sobre el Oil Test, se verificó que sería recomendado el cambio del aceite para 66,7% de las muestras analizadas, pues los resultados obtenidos en la escala calorimétrica indicaron el nivel de alteración “cambiar”. En la evaluación del perfil de ácidos grasos de los aceites, los ácidos grasos poliinsaturados fueron los que, predominantemente, presentaron disminución en el porcentaje a lo largo de cada ciclo de fritura. Diferentemente, los ácidos grasos saturados y monoinsaturados presentaron aumento. Los resultados de las determinaciones analíticas reforzaron la importancia de evaluar y controlar las alteraciones sufridas por el aceite durante el proceso de fritura, para que el establecimiento pueda ofrecer al consumidor alimentos freídos de calidad.No presente trabalho foram avaliados óleos de fritura utilizados pela cantina localizada no IBILCE/UNESP em São José do Rio Preto-SP. Os objetivos foram determinar os níveis de alteração dos mesmos e conscientizar o estabelecimento quanto às boas práticas de fabricação, tendo em vista o fornecimento de alimentos de melhor qualidade à população. Para isso, as seguintes metodologias foram usadas: determinação de compostos polares totais, porcentagem de ácidos graxos livres, ensaio Oil Test, ácidos dienóicos conjugados, índice de peróxidos e perfil de ácidos graxos. Os limites de alteração estabelecidos foram baseados na legislação adotada por alguns países: 25% para compostos polares totais, 1% para ácidos graxos livres e 10 meq/kg para índice de peróxidos. Os resultados obtidos indicaram que 53,2% das 47 amostras analisadas para compostos polares totais se encontraram acima do limite; 77,8% das 9 amostras cujo teor de ácidos graxos livres foi analisado excederam o limite de 1% e; 33,3% das 9 amostras avaliadas quanto ao índice de peróxidos obtiveram valor maior que 10 meq/kg, ultrapassando o limite estabelecido. Os teores de ácidos dienóicos conjugados oscilaram entre 0,36 e 2,43%, com valor médio de 1,57%. Quanto ao ensaio Oil Test, verificou-se que seria recomendada a troca do óleo para 66,7% das amostras analisadas, pois os resultados obtidos na escala colorimétrica indicaram o nível de alteração ‘trocar’. Na avaliação do perfil de ácidos graxos dos óleos, foram predominantes os ácidos graxos poli-insaturados, que apresentaram diminuição na porcentagem ao longo de cada ciclo de fritura. Diferentemente, os ácidos graxos saturados e monoinsaturados apresentaram aumento. Os resultados das determinações analíticas reforçam a importância de se avaliar e controlar as alterações sofridas pelo óleo durante o processo de fritura, para que o estabelecimento possa oferecer alimentos fritos de qualidade ao consumidor
CD279 (PD-1) e seus ligantes CD273 (PD-L1) e CD274 (PD-L2) regulam a linfoproliferação, a produção de il-10 e do óxido nítrico na leishmaniose visceral canina
No full textPD-1 ligado a PD-L1 ou PD-L2, desencadeia sinais incapacitantes às células T, podendo estar envolvidos na supressão das respostas imunes na LVC. Investigamos a expressão de PD-1 e seus ligantes no baço na LVC, e sua correlação com a carga parasitária. Para confirmar o seu papel regulador na leishmaniose, estes receptores foram avaliados após infecção in vitro por L. infantum. Em cães infectados, foi avaliado o bloqueio destes receptores na produção de citocinas e seus efeitos no sobrenadante da cultura, de linfoproliferação com antígeno solúvel (AtgS) de L. infantum. Foram selecionados 23 cães saudáveis e 54 com LV. PD-1 e seus ligantes foram determinados por imunohistoquímica em tecidos esplênicos. A carga parasitária de cães infectados foi avaliada por PCR em tempo real. As citocinas nos sobrenadantes de cultura foram determinados por ELISA de captura e o NO por Griess. A Linfoproliferação das células do linfonodo e expressão de PD-1 e seus ligantes após infecção in vitro por L. infantum foram avaliadas por citometria de fluxo. Observou-se que a infecção por L. infantum, aumenta a expressão de PD1 e seus ligantes. Uma correlação positiva foi observada entre a expressão de PD-1 e PD-L1 em linfócitos B e o aumento da carga parasitária. O bloqueio destes receptores restaura a proliferação de linfócitos, aumenta a produção de NO e diminui a IL-4 e IL-10. L. infantum modula a expressão de PD-1 e seus ligantes na LVC, suprimi a linfoproliferação, alterando a produção de citocinas, podendo facilitar a persistência dos parasitas nos macrófagos, e podem ser direcionados para o desenvolvimento de drogas que estimulem a resposta imune na LVC.PD-1 when bound to PD-L1 or PD-L2, triggers signals disabling T cells, and they may be involved in the suppression of cellular immune responses in CVL. We investigated the expression of PD-1 and its ligands in spleen in CVL, and its correlation with parasite burden in this tissue, to confirm its regulatory role in leishmaniasis. These receptors were evaluated after in vitro infection by L. infantum. In infected dogs, we evaluated the blocking of these receptors in the production of cytokines in the effects of supernatant of cultured cells, and antigen specific lymphoproliferation. We selected 23 healthy dogs and 54 with VL. PD-1 and its ligands were determined by immunohistochemistry in splenic tissues. Parasitic load of infected dogs was evaluated by RT-PCR. Cytokines in culture supernatants were determined by capture ELISA and NO by Griess. Lymphoproliferation lymph nodes and expression of PD-1 and its ligand after in vitro infection by L. infantum was evaluated by flow cytometry. We observed that L. infantum infection increases expression of PD-1 and its ligands. A positive correlation was observed between the expression of PD-1 and PD-L1 B lymphocytes and an increase in parasite load. Blockade these receptors restores lymphocyte proliferation, increases the production of NO and decreases IL-4 and IL-10. In conclusion, L. infantum modulates expression of PD-1 and its ligands in CVL, suppressing lymphoproliferative response and altering cytokine production, which in turn can facilitate parasitic persistence in the macrophages. PD-1 and its ligands can be targeted for the development of drugs stimulating the immune response in CVL.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP
Estudo de associação de polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) com características de temperamento em bovinos da raça Nelore
No full textA variabilidade individual no temperamento dos bovinos é um importante fator que afeta a rentabilidade das empresas pecuárias, em função dos efeitos negativos na produção, no bem-estar animal e na segurança do trabalhador. Assim, esta característica vem despertando interesse crescente de produtores e pesquisadores, com o objetivo de entender quais os fatores genéticos e ambientais que influenciam a expressão do temperamento e os efeitos sobre o desempenho dos bovinos. Desta forma, esta tese foi desenvolvida com o objetivo de estudar a associação genômica entre polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) com diferentes indicadores do temperamento de bovinos da raça Nelore. Os objetivos específicos foram: 1) Estudar a associação genômica entre SNP e diferentes indicadores de temperamento; 2) Avaliar a existência de regiões do genoma associadas, simultaneamente, com distintos indicadores de temperamento; 3) Identificar genes e as respectivas funções biológicas que influenciam o temperamento e; 4) Estimar parâmetros genéticos para os diferentes testes de temperamento incluindo a informação genômica. O temperamento dos bovinos foi avaliado entre 2010 e 2015, durante o manejo de pesagem aos 18 meses de idade, utilizando os seguintes indicadores: 1) escore de movimentação (MOV); 2) escore de tensão (TENS); 3) escore de agitação no tronco de contenção (CS); 4) velocidade de fuga (VF) e; 5) escore de temperamento (ET). Os animais foram genotipados utilizando painel de alta densidade com 777.962 SNPs (Illumina BovineHD Beadchip). Todas as análises para estimar os componentes de variância e parâmetros genéticos, bem como os estudos de associação genômica ampla (GWAS) foram realizadas utilizando método de passo único (single-step GBLUP - ssGBLUP) combinando, simultaneamente, informações de pedigree, fenótipos e genótipos, utilizando inferência Bayesiana via amostragem de Gibbs. Foi utilizado modelo animal linear para VF e modelo de limiar para os demais indicadores de temperamento (MOV, TENS, CS e ET). No primeiro estudo foram utilizados 1.384 genótipos, 16.660 animais com fenótipo para VF e 455.374 SNPs. Foram identificadas nove regiões genômicas e seis genes candidatos associados a velocidade de fuga. Entre eles, os genes PARK2, GUCY1A2, CPE e DOCK1 estão relacionados com o sistema dopaminérgico; a formação da memória; a biossíntese de hormônio peptídico e neurotransmissores e, o desenvolvimento do cérebro, respectivamente. Para o segundo estudo foram utilizados, aproximadamente, 22.000 fenótipos para MOV, TENS, CS, VF e 45.000 para ET, 3.568 genótipos e 411.677 SNPs. As estimativas de herdabilidade variaram de 0,12 0,03 a 0,33 0,03. As estimativas a posteriori das correlações genéticas e fenotípicas entre os cinco indicadores de temperamento variaram de 0,57 0,06 a 0,99 0,00 e de 0,23 0,01 a 0,93 0,01, respectivamente. Os resultados das análises de ssGBLUP foram apresentados com base na porcentagem de variância explicada por janelas de 10 SNPs adjacentes. As 20 janelas que explicaram a maior variância genética aditiva para cada indicador foram consideradas como associadas ao temperamento. Um total de 100 janelas, 2.033 genes conhecidos, nove QTL descritos previamente e regiões genômicas semelhantes entre TENS x CS, MOV x FS, CS x ET e FS x ET foram identificadas. Concluímos que todas os indicadores de temperamento utilizadas no presente estudo podem ser consideradas em programas de melhoramento. Com o estudo de associação genômica ampla mapeamos genes que podem influenciar o temperamento dos bovinos, demonstrando que essa é uma característica complexa e amplamente influenciados por muitas regiões/genes de pequeno efeito. As análises de enriquecimento funcional proporcionaram novas perspectivas e vias que correspondem diretamente com aspectos de comportamento emocional.The individual variability on cattle temperament is an important factor affecting the profitability of beef cattle enterprises, due to its adverse effects in production, animal welfare and labor safety. Thus, this characteristic has increasing interest of producers and researchers, who aim to understand the genetic and environmental factors affecting the expression of temperament and its effect on cattle performance. Thus, the objective of this thesis was to study the genomic association between single nucleotide polymorphisms (SNP) and temperament indicators of Nellore cattle. The specific objectives were: 1) Study the genomic association between SNP and different indicators of temperament; 2) Assess the existence of genomic regions associated, simultaneously, with distinct temperament indicators; 3) Identify genes and their biological functions that influences temperament and; 4) Estimate genetic parameters for different temperament indicators using genomic information. The temperament was evaluated between 2010 and 2015, during the weighing handling at 18 months of age, using the following indicators: 1) movement score (MOV); 2) tension score (TENS); 3) crush score (CS); 4) flight speed (FS) and; 5) temperament score (TS). The animals were genotyped using a panel with 777,962 SNP (Illumina BovineHD Beadchip). All analyses to estimate variance components and genetic parameters, as well as the genome-wide association study (GWAS), were performed using a single-step procedure (single-step GBLUP - ssGBLUP) which combined, simultaneously, pedigree information, phenotyped and genotyped animals in one step, using Bayesian inference via Gibbs sampling. Was used linear animal model for FS and threshold model for other temperament indicators (MOV, TENS, CS and TS). In the first study were used 1,384 genotypes, 16,660 phenotyped animals for FS and 455,374 SNP. There were identified nine genomic regions and six candidate genes associated with flight speed. Among them PARK2, GUCY1A2, CPE and DOCK1 genes which are related to dopaminergic system; memory formation; biosynthesis of peptide hormone and neurotransmitter; and brain development, respectively. For the second study were used, approximately, 22,000 phenotypes to MOV, TENS, CS, VF and 45,000 for TS, 3,568 genotypes and 411,677 SNPs. Heritability estimates for temperament indicators ranged from 0.12 0.03 to 0.33 0.03. The posterior means of genetic and phenotypic correlations between all five temperament indicators ranged from 0.57 0.06 to 0.99 0.00 and from 0.23 0.01 to 0.93 0.01, respectively. The results of ssGBLUP analysis were presented in based on the proportion of variance explained by 10 consecutive non-overlapping SNPs. The 20 SNP windows that explained the highest additive genetic variance for each indicator were considered as associated with temperament. Were identified A total of 100 SNP windows, 2.033 known genes, nine previously reported QTL and similar genomic regions between TENS x CS, MOV x FS, CS x TS and FS x TS. In conclusion, all temperament indicators addressed in the present study can be considered in breeding programs. With the genome-wide association study mapped genes that can influence cattle temperament, demonstrating that this is a complex trait and largely influenced by many regions/genes of small effect. Functional enrichment analyses delivered new insights and pathways that directly match with aspects of emotional behavior.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP
Estudo em larga escala da expressão gênica de carcinomas mamários em cadelas
No full textOs tumores mamários são os principais tumores que acometem as cadelas, sendo também os tumores mais frequentes em mulheres e, entre ambas as espécies, são observadas semelhanças relacionadas ao comportamento biológico e molecular dessa neoplasia. Assim, as cadelas podem ser um excelente modelo comparativo para o entendimento do processo carcinogênico desta neoplasia. A metástase é uma consequência comum e a principal causa de mortalidade em decorrência dessa enfermidade, em ambas as espécies. O perfil de expressão gênica global permite o melhor entendimento do processo de carcinogênese e de metástases, por permitir a identificação de inúmeros genes que possam estar envolvidos com esses processos. Assim, o objetivo desse estudo foi a realização do estudo em larga escala, através da técnica de microarray, em amostras de tecidos mamários caninos, considerando amostras de glândulas mamárias normais, tumores mamários benignos e tumores mamários malignos (carcinomas simples e mistos), além da avaliação de carcinomas mamários metastáticos e não metastáticos, para identificação de genes diferencialmente expressos entre esses grupos e relacionados com a tumorigênese e o desenvolvimento de metástases dos tumores mamários caninos. Observou-se, aproximadamente 1000 genes diferencialmente expressos entre as amostras tumorais e as glândulas mamárias normais e 465 genes diferencialmente expressos entre os tumores mamários benignos e malignos, sendo observados genes relacionados com o ciclo celular, desenvolvimento da glândula mamária e supressores tumorais. Em relação aos carcinomas mamários metastáticos e não metastáticos, verificou-se 633 genes diferencialmente expressos. Os genes supressores tumorais, como pertencentes a via de sinalização do ATM e do BRCA1, sugeriram importante papel tanto na progressão tumoral quanto no desenvolvimento de metástases. Outras vias observadas foram as relacionadas com angiogênese e de organização da matriz extracelular. Portanto, a análise do perfil gênico em larga escala permitiu a identificação de inúmeros genes e vias envolvidas tanto no processo de progressão tumoral como envolvidas com o desenvolvimento de metástases, permitindo a realização de estudos futuros em busca de marcadores prognósticos específicos.Mammary tumors are the main tumors that affect female dogs, as well as in women and in both species, it is observed similarity related to the biological and molecular behavior of this neoplasia. So, female dogs are considered an excellent model for the understanding of carcinogenesis process from mammary tumors. Metastasis occurs frequently and it is the main responsible for the mortality by this neoplasia in both species. Global gene expression profile allows the better understanding of carcinogenesis and metastasis process by the identification of several genes that may be involved with these processes. Therefore, the aim of study was to perform a large-scale study by microarray technique using samples from canine mammary tissues, as normal mammary gland, benign tumors and malignant tumors (simple and mixed carcinomas), beyond metastatic and non-metastatic mammary carcinomas for the identification of differentially expression genes among these groups and related to canine mammary tumors tumorigenesis and metastasis. It was observed next to 1000 differentially expression genes between tumors and normal mammary glands samples and 465 differentially expression genes between benign and malignant mammary tumors mostly related to cell cycle, mammary gland development and tumor suppressors. Related to metastatic and non-metastatic mammary carcinomas was identified 633 differentially expression genes. ATM and BRCA1, associated with tumor suppressor gene pathway, showed to play an important role in both tumor progression and metastasis development. Other networks observed were related to angiogenesis and extracellular matrix organization. Thus, large-scale gene profile analysis allowed the identification of numerous genes and networks involved with both tumor progression and metastasis, allowing new studies in search of specific prognostic markers.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP