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Glycerol-3-Phosphate Dehydrogenase Isozymes: A computational approach to their metabolic roles in the flight muscles of triatoma infestans
Get PDFGlycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH) isoenzymes play different roles in Triatoma infestans flight metabolism and only differ in the C-terminal end. We studied with computational models their dynamics and interactions. Homology-modeling dynamics showed models close to minimal energy with amino acid distribution similar to crystallized structures. Radius of gyration decrease because the models presented well fitted folded structures with solvation free energy of non-polar groups increased with temperature. Heat maps suggested the need to form dimeric structures to preserve activity or that temperature could be an activity modulator. Modeled dimeric structures were similar to crystallized references and didn´t involve the C-terminals in their conformation. Docking studies of the C-terminals showed interaction between GPDH-1 and actin co-localized with glycolytic enzymes. GPDH-2 peptide could bind to model membranes and be substrate for lysine-acetyltransferases. Consequently, C-terminals could determine the sub-cellular localization and the metabolic functions in lipid biosynthesis or ATP generation.Fil: Cossy Isasu S. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; ArgentinaFil: Stroppa, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; Argentin
Clock gene timeless in the chagas disease vector Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae)
Get PDFTo contribute to a better understanding of the molecular basis of the circadian biological rhythms in Chagas disease vectors, in this work we identified functional domains in the sequences of the clock protein TIMELESS (TIM) in Rhodnius prolixus and analyzed the expression of the timeless (tim) gene at the mRNA level in Triatoma infestans. The tim gene expression in nervous tissue of adult T. infestans revealed clear oscillations in the abundance of the transcript in both sexes in the group maintained under photoperiod with a daily canonical rhythm, showing a significant increase in expression at sunset. As expected, in the group maintained in constant light, no daily increase was detected in the tim transcript level.Fil: Stroppa, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; ArgentinaFil: Garcia, Beatriz Alicia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentin
RNA interference of NADPH–cytochrome P450 increased deltamethrin susceptibility in a resistant strain of the Chagas disease vector Triatoma infestans
No full textThe enzyme NADPH-cytochrome P450 reductase (CPR) plays a central role in cytochromes P450 activity. Gene expression analysis of cytochromes P450 and CPR in deltamethrin-resistant and susceptible populations revealed that P450s genes are involved in the development of insecticide resistance in Triatoma infestans. To clarify the role of cytochromes P450 in insecticide resistance, it was proposed to investigate the effect of CPR gene silencing by RNA interference (RNAi) in a pyrethroid resistant population of T. infestans. Silencing of the CPR gene showed a significant increase in susceptibility to deltamethrin in the population analysed. This result support the hypothesis that the metabolic process of detoxification mediated by cytochromes P450 contributes to the decreased deltamethrin susceptibility observed in the resistant strain of T. infestans.Fil: Varela, Gonzalo Matías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Garcia, Beatriz Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Stroppa, Maria Mercedes. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentin
Estudio del gen NADPH citocromo P450 reductasa en Triatoma infestans: Su relación con la resistencia a insecticidas
No full textLos programas de control de la enfermedad de Chagas promueven la eliminación de las poblaciones del vector Triatoma infestans mediante la fumigación con insecticidas piretroides. Sin embargo, se han observado fallas en el control debido a la existencia de resistencia a los insecticidas. Incrementos en la expresión de genes de citocromos P450 son considerados responsables de aumentar el metabolismo de insecticidas y parece ser un fenómeno común en el desarrollo de resistencia. Las reacciones de mono-oxigenación de citocromos P450 requieren de electrones provistos por la NADPH citocromo P450 reductasa (CPR). Análisis de la expresión de genes P450 y del gen CPR en poblaciones resistentes y susceptibles a deltametrina, revelaron que genes P450 estarían involucrados en el desarrollo de resistencia a insecticidas piretroides en T. infestans. Con el objetivo de inferir si los citocromos P450 están involucrados en la resistencia a insecticidas, se propuso investigar el efecto del silenciamiento del gen CPR, utilizando ARN de interferencia (ARNi) en una población resistente a insecticidas piretroides de T. infestans. Los resultados evidenciaron una disminución significativa en la expresión del gen CPR de aproximadamente diez veces en el grupo de insectos que fueron inyectados con el ARNi del gen CPR con respecto a los niveles de expresión hallados en los grupos control. El silenciamiento del gen CPR en la población resistente a insecticidas piretroides mostró un incremento significativo en la susceptibilidad a deltametrina. Estos resultados refuerzan la hipótesis de que el proceso de desintoxicación metabólica mediado por citocromos P450 constituyen un factor fundamental en la resistencia a insecticidas piretroides observada en T. infestans.Fil: Varela, Gonzalo Matías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Stroppa, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Garcia, Beatriz Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaXI Congreso de la Sociedad Argentina de ProtozoologíaMendozaArgentinaSociedad Argentina de Protozoologí
Participación de los genes citocromos p450 y del gen nadph-citocromo p450 reductasa en la resistencia a insecticidas piretroides en el vector de la enfermedad de Chagas Triatoma infestans
No full textLos programas de control de la enfermedad de Chagas promueven la eliminación de las poblaciones del vector Triatoma infestans mediante la fumigación con insecticidas piretroides. Sin embargo, se han observado fallas en el control debido a la existencia de resistencia a los insecticidas. Incrementos en la expresión de genes de citocromos P450 son considerados responsables de aumentar el metabolismo de insecticidas y parece ser un fenómeno común en el desarrollo de resistencia. Las reacciones de mono-oxigenación de citocromos P450 requieren de electrones provistos por la NADPH citocromo P450 reductasa (CPR). Análisis de la expresión de genes P450 y del gen CPR en poblaciones resistentes y susceptibles a deltametrina, revelaron que genes P450 estarían involucrados en el desarrollo de resistencia a insecticidas piretroides en T. infestans. Con el objetivo de inferir si los citocromos P450 están involucrados en la resistencia a insecticidas, se propuso investigar el efecto del silenciamiento del gen CPR, utilizando ARN de interferencia (ARNi) en una población resistente a insecticidas piretroides de T. infestans. Los resultados evidenciaron una disminución significativa en la expresión del gen CPR de aproximadamente diez veces en el grupo de insectos que fueron inyectados con el ARNi del gen CPR con respecto a los niveles de expresión hallados en los grupos control. El silenciamiento del gen CPR en la población resistente a insecticidas piretroides mostró un incremento significativo en la susceptibilidad a deltametrina. Estos resultados refuerzan la hipótesis de que el proceso de desintoxicación metabólica mediado por citocromos P450 constituyen un factor fundamental en la resistencia a insecticidas piretroides observada en T. infestans.Fil: Varela, Gonzalo Matías. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Garcia, Beatriz Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Stroppa, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentin
Daily Variations in the Glycerol-3-Phosphate Dehydrogenase isoforms expression in Triatoma infestans flight muscles
Get PDFTriatoma infestans, the main vector of Chagas disease, is a blood-sucking insect. Flight dispersal of adults is the most important mechanism for reinfestation of houses after insecticide spraying. Flight muscles have two glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH) isoforms: GPDH-1 is involved in flight metabolism and GPDH-2 provides lipid precursors. In this study, we explored the profile of GPDH expression in females and males adult flight muscles under light/dark cycle, constant light, and constant dark conditions. Under constant dark conditions, GPDH-1 flight muscles of T. infestans showed a rhythmic pattern of transcription synchronous with a rhythmic profile of activity suggesting regulation by the endogenous circadian clock. Otherwise, the GPDH-2 expression analysis showed no regulation by the endogenous clock, but showed that an external factor, such as the dark/light period, was necessary for synchronization of GPDH-2 transcription and activity.Fil: Stroppa, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; ArgentinaFil: Carriazo, Carlota. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; ArgentinaFil: Gerez, Nelia Martha. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; ArgentinaFil: Garcia, Beatriz Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Cordoba. Instituto de Investigaciones En Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas; Argentin
Clock Gene Period in the Chagas Disease Vector Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae)
Get PDFTo contribute to a better understanding of the molecular bases of the circadian biological rhythms in Chagas disease vectors, in this work we identified functional domains in the sequences of the clock protein PERIOD (PER) in Rhodnius prolixus and Triatoma infestans and analyzed the expression of the PER gene at mRNA level in T. infestans. The PER protein sequences comparison among these species and those from other insects revealed that the most similar regions are the PAS domains and the most variable is the COOH-terminal. On the other hand, the per gene expression in nervous tissue of adult T. infestans varies with a daily canonical rhythm in groups of individuals maintained under photoperiod (light/dark, LD) and constant dark (DD), showing a significant peak of expression at sunset. The pattern of expression detected in LD persists under the DD condition. As expected, in the group maintained in constant light (LL), no daily increase was detected in per transcript level. Besides, the presence of per transcript in different tissues of adult individuals and in nervous tissue of nymphs evidenced activity of peripheral clocks in adults and activity of the central clock in nymphs of T. infestans.Fil: Stroppa, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Gimenez, Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Garcia, Beatriz Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentin
Participación de los genes citocromos P450 y del gen NADPH-citocromo P450 reductasa en la resistencia a insecticidas piretroides en el vector de la enfermedad de Chagas Triatoma infestans
No full textLos programas de control de la enfermedad de Chagas promueven la eliminación de las poblaciones del insecto vector Triatoma infestans mediante la fumigación con insecticidas piretroides. Sin embargo, se han observado fallas en el control debido a la existencia de resistencia a los insecticidas. Incrementos en la expresión de genes citocromos P450 son considerados responsables de aumentar el metabolismo de insecticidas y parece ser en un fenómeno común en el desarrollo de resistencia. Las reacciones de mono-oxigenación catalizadas por los citocromos P450 requieren de electrones provistos por la NADPH citocromo P450 reductasa (CPR). Dada la diversidad de funciones que tienen los citocromos P450 y que existen múltiples genes P450 en el genoma de insectos, la presencia en general de una única copia del gen CPR, resultó de interés como objeto de estudio para esclarecer el rol que tendrían los genes P450 en la resistencia a insecticidas piretroides en T. infestans. Para tal fin, se analizaron comparativamente los niveles de expresión del gen CPR de individuos de T. infestans pertenecientes a poblaciones susceptibles y resistentes a insecticidas piretroides. Además, se investigó el efecto del silenciamiento del gen CPR en una población resistente a insecticidas piretroides mediante la técnica de ARN de interferencia (ARNi). Las determinaciones de los niveles de expresión transcripcional del gen CPR se realizaron mediante la técnica de Retrotranscripción y PCR en Tiempo Real (RT-qPCR) a partir de ARN total extraído de cuerpo graso de ninfas V de T. infestans. El análisis de la expresión del gen CPR en individuos provenientes de las poblaciones susceptibles y resistentes reveló sobre-expresión del gen CPR en algunas poblaciones resistentes. Por otra parte, el silenciamiento del gen CPR en una población de T. infestans resistente a insecticidas piretroides que presenta sobre-expresión del gen CPR, mostró una disminución significativa en la expresión del gen de aproximadamente diez veces en el grupo de insectos que fueron inyectados con el ARNi respecto a los grupos control y evidenció en ese grupo un incremento significativo en la susceptibilidad a deltametrina. Estos resultados refuerzan la hipótesis de que el proceso de desintoxicación metabólica mediado por citocromos P450 constituye un factor fundamental en la resistencia a insecticidas piretroides observada en T. infestans.Fil: Varela, Gonzalo Matías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Stroppa, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Garcia, Beatriz Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaXXV Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de CórdobaRío CuartoArgentinaSociedad de Biología de Córdob
Daily variations in the expression of genes related to insecticide resistance in the chagas disease vector triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae)
No full textPyrethroid resistance has been detected in Triatoma infestans, which in part has been attributed to increased oxidative metabolism of the insecticide by cytochrome P450s. NADPH cytochrome P450 reductase (CPR) catalyzes electron transfer from NADPH to all known cytochrome P450s. In this study, the expression of the CPR gene at transcriptional level was determined in different tissues and two life stages. The expression patterns showed differences in the tissues and stages studied, suggesting differential metabolic requirements. On the other hand, in order to investigate the presence of rhythms in the expression of genes related with insecticide resistance, we explored the daily expression profile of the CPR gene and a P450 gene (CYP4EM7) in fat body from adults of T. infestans under different dark/light regimes. The results suggest that CPR gene expression is under endogenous clock regulation and show a rhythmic profile in the expression of the CYP4EM7 gene.Fil: Varela, Gonzalo Matías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; ArgentinaFil: Stroppa, Maria Mercedes. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Garcia, Beatriz Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; Argentin
Efecto de patrones dietarios protumorales en la expresión de microARNs relacionados con el cáncer de mama
No full textLos microARNs o miRs, Oncogénicos (OncomiRs) y Oncosupresores (miROncoSups), participan en la regulación de expresión génica en los distintos tipos de cáncer. Dado que los hábitos dietarios tendrían un rol en la ocurrencia de cáncer, surge el interés de estudiar el efecto de patrones dietarios protumorales sobre la expresión de miRs relacionados con el cáncer de mama. Se investigó la influencia de los componentes dietarios fructosa (F), ácido palmítico (AP) y mezcla (F+AP) en la expresión de miRs en cultivos de células de cáncer de mama MCF7 y de Fibroblastos Asociados a Carcinoma F88 (CAF-F88) y se analizó la expresión de miRs en un modelo murino de cáncer de mama en el contexto de dietas rica en fructosa (PBA), rica en grasas (PCS) y con una mezcla de ambas (PBA+PCS). La determinación de miRs se realizó por PCR cuantitativa. Se observó sobrexpresión de OncomiRs y disminución en la expresión de miROncosups. En células MCF7 la expresión de miRs fue afectada principalmente por el tratamiento con F+AP. En células CAF-F88 se observó sobrexpresión de OncomiRs con el tratamiento con AP y disminución de miROncosups con el tratamiento con F+AP. En suero del modelo experimental murino, se observó un incremento significativo del OncomiR miR21 y una disminución del miR-Let7a Oncosupresor en el grupo tratado con la dieta PBA+PCS. Las modificaciones en la expresión de miRs en relación a componentes nutricionales y dietas observadas demuestran la participación de los miRs como uno de los mecanismos moleculares regulatorios subyacentes que promoverían el desarrollo de procesos tumorales.Fil: Perez de Rosas, Alicia Raquel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Garcia, Beatriz Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Stroppa, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular; Argentin
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