1,721,082 research outputs found
Avaliação do perfil fenotípico-funcional de monócitos de pacientes portadores de leishmaniose cutânea localizada, tratados com o antimoniato de N-metil glucamina
Get PDFInfections caused by Leishmania braziliensis present diverse clinical manifestations
and, localized cutaneous leishmaniasis (LCL) is the most common. Although there are several
studies that evaluate specific aspects of the cellular immune response in human LCL, there
are few published studies evaluating the immunological events associated with the
Leishmania/ phagocytes interaction. In this study, the primary objective was to evaluate the
rate of internalization of L. braziliensis promastigotes and characterize the phenotypic and
functional aspects, by evaluating the cellular surface markers expression profile (TLR-2,
TLR-4, CD16, CD32, CD64, IL-10R, IFN-R, HLA-DR, CD80 e CD86), cytokine profile
(TNF-, IL-12, IL-10 e TGF-) and the levels of intracellular nitric oxide in peripheral blood
monocytes, in the absence and presence of L. braziliensis promastigotes. To achieve the
goals, healthy volunteers (CS, N = 10) and LCL patients attended at the Leishmaniasis
Reference Center of René Rachou Research Center at the time of the first evaluation before
treatment (T0 LC, N = 10) and 90 days after treatment (T90 LC, N = 10), were evaluated.
Hence, this wide and prospective study that involves analysis of phenotypic and functional
aspects of monocytes, target cell for Leishmania, is a unique approach that may contribute to
better understanding of the host-parasite relation in the context of LT. The achieved results
demonstrate that monocytes from patients evaluated before treatment, showed low production
of TNF-α and NO associated with a low expression of TLR2, CD32, HLA-DR and CD86, and
high production of IL-10, TGF-β and IL-10R. After treatment, monocytes showed a high
production of TNF-α, IL-12 and NO associated with an increased expression of IFN-γ, TLR4,
CD64 and CD86, and low production of IL-10, TGF-β and IL-10R. Thereby, in active
disease, the modulated immune response is important for the establishment of infection and
for the control of the inflammatory response that establishes with the evolution of the disease,
which is critical to indicate the degree of disease severity. After treatment and clinical cure,
became evident the role of the inflammatory response which, besides is indicative of the good
response to treatment, is essential to prevent reactivation of the lesions, thus stimulating the
ability of monocyte/macrophages to control the infection in case of a new contact with the
parasite.Infecções provocadas por Leishmania braziliensis apresentam manifestações clínicas diversas e a Leishmaniose Cutânea Localizada (LCL) é a mais comum. Apesar da existência de diversos trabalhos que avaliam aspectos específicos da resposta imune celular na LCL humana, ainda são escassos os estudos de avaliação dos eventos imunológicos associados à interação Leishmania/fagócitos. Nesse estudo, o principal objetivo foi avaliar a interação de formas promastigotas de L. braziliensis com monócitos do sangue periférico e caracterizar os aspectos fenotípicos-funcionais através da avaliação do perfil de expressão de marcadores de superfície celular (TLR-2, TLR-4, CD16, CD32, CD64, IL-10R, IFN-R, HLA-DR, CD80 e CD86), do perfil de citocinas (TNF-, IL-12, IL-10 e TGF-) e dos níveis de óxido nítrico intracelulares de monócitos do sangue periférico na ausência e na presença de formas promastigotas de L. braziliensis. Foram avaliados voluntários saudáveis (CS, N = 10) e pacientes portadores de LCL atendidos no Centro de Referência em Leishmanioses do Centro de Pesquisas René Rachou, no momento da primeira avaliação antes do tratamento (LC T0, N = 10) e 90 dias após tratamento (LC T90, N = 10). Dessa forma, esse estudo amplo, prospectivo, que envolve análises de aspectos fenotípicos-funcionais de monócitos, célula alvo para a Leishmania, trata-se de abordagem inédita e que poderá contribuir para melhor compreensão da relação parasito-hospedeiro no contexto da LT. Os resultados alcançados demonstraram, em monócitos de pacientes avaliados antes do tratamento, baixa produção de TNF-α e NO associada a uma baixa expressão de TLR2, CD32, HLA-DR e CD86, e alta produção de IL-10, TGF-β e IL-10R. Após o tratamento, monócitos demonstraram alta produção de TNF-a, IL-12 e NO associada a alta expressão de IFN-γR, TLR4, CD64 e CD86, e baixa produção de IL-10, TGF-β e IL-10R. Dessa forma, na doença ativa a resposta imune modulada é importante para o estabelecimento da infecção e para a modulação da resposta inflamatória que se estabelece com a evolução da doença, o que é determinante para indicar o grau de gravidade da doença. Após o tratamento e a cura clínica ficou evidente o papel da resposta pró-inflamatória que, além de ser indicativo da boa resposta ao tratamento, é essencial para evitar a reativação das lesões, estimulando também a capacidade dos monócitos/macrófagos de controlar a infecção no caso de um novo contato com o parasitoCNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoFAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas GeraisCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorOutra Agênci
Avaliação do efeito de receptores purinérgicos em neutrófilos cultivados in vitro com formas promastigotas de Leishmania amazonensis ou Leishmania braziliensis
Get PDFThe presence of ATP in the extracellular environment, may be interpreted as a
"danger signal" by neutrophils, and their effects are dependent on factors such as the
action of enzymes ectonucleosídeo 5'-triphosphate diphosphohydrolase - E-NTPDase
(CD39) and 5 'nucleotidase (CD73), in addition of ATP purinergic receptors. The
present study evaluated the involvement of purinergic receptors in neutrophils immune
response stimulated in vitro, with Leishmania amazonensis or Leishmania braziliensis.
Initial viability analysis of neutrophils infected with L. amazonensis or L. braziliensis
showed that the percentage of viable cells was not changed. Higher percentage of L.
braziliensis interaction with neutrophils was observed when compared to L.
amazonensis. Although the analysis of the frequency of neutrophils expressing CD39
and CD73 was similar, regardless of the stimulus, only L. amazonensis- stimulated
culture showed increased CD73 expression. Thus, there would be an increase in
adenosine, which could contribute to a less pro-inflammatory microenvironment during
infection by L. amazonensis in neutrophils, when comparing with infection L.
braziliensis. These findings were reinforced by higher intracytoplasmic levels of ROS
and NO in neutrophils in the presence of L. braziliensis, when compared to L.
amazonensis. To evaluate the possible involvement of the purinergic receptors in the
immune response, four compounds were used: MRS 1754 (antagonist of A2B receptor),
αβ-methylene (CD73 blocking activity), suramin (antagonist of P2X and P2Y) and
NECA (agonist of A1 and A2 receptors). This approach showed that neutrophils
stimulated with L. amazonensis in the presence of MRS 1754 and NECA induce
increased NO synthesis, suramin induces increased synthesis of ROS and NO, while the
αβ methylene reduced levels of ROS. Neutrophils stimulated with L. braziliensis and
treated with MRS 1754 and suramin exhibited increased ROS synthesis, treatment with
NECA induced increase in NO production, while the αβ-methylene reduced ROS levels.
After the realization of this study, it was evident that L. braziliensis is capable to induce
neutrophil in a more pro-inflammatory profile, inducing high levels of ROS and NO,
while the L. amazonensis showed higher CD73 enzyme activity, resulting in an
interaction with neutrophils more favorable to the parasite.A presença do ATP, no meio extracelular, pode ser interpretada como um “sinal de perigo” por neutrófilos, sendo seus efeitos, dependentes de fatores, como da ação de enzimas ectonucleosídeo 5’-trifosfato difosfohidrolase - E-NTPDase (CD39) e 5’ nucleotidase (CD73), além dos receptores purinérgicos de ATP. O presente estudo avaliou a participação dos receptores purinérgicos na resposta imune de neutrófilos estimulados in vitro, com Leishmania amazonensis ou Leishmania braziliensis. As análises iniciais de viabilidade de neutrófilos infectados por L. amazonensis ou L. braziliensis demonstraram que o percentual de células viáveis não foi alterado. Foi observado maior percentual de interação de L. braziliensis com neutrófilos quando comparados a L. amazonensis. Embora a análise da frequência de neutrófilos expressando CD39 e CD73 tenha sido semelhante, independente do estímulo, apenas a cultura estimulada com L. amazonensis apresentou aumento da expressão de CD73. De forma semelhante, esse resultado refletiu na análise da atividade enzimática de CD73 em degradar AMP, apresentando-se aumentada quando os neutrófilos foram estimulados com L. amazonensis. Assim, haveria um aumento de adenosina, que poderia contribuir para um microambiente menos pró-inflamatório durante a infecção por L. amazonensis em neutrófilos, ao se comparar pela infecção por L. braziliensis. Estes resultados foram reforçados pelos maiores níveis intracitoplasmáticos de ROS e NO em neutrófilos, na presença de L. braziliensis, quando comparado à L. amazonensis. No intuito de se avaliar a possível participação dos receptores purinérgicos na resposta imune, foram utilizados quatro compostos: MRS 1754 (antagonista dos receptores A2B), αβ-metileno (bloqueador da atividade de CD73), suramina (antagonista dos receptores P2X e P2Y) e NECA (agonista dos receptores A1 e A2). Esta abordagem revelou que os neutrófilos estimulados com L. amazonensis na presença dos tratamentos MRS 1754 e NECA induzem aumento na síntese de NO, a suramina induz aumento da síntese de ROS e NO, enquanto o αβ-metileno reduz os níveis de ROS. Neutrófilos estimulados com L. braziliensis e tratados com MRS 1754 e suramina apresentaram aumento da síntese de ROS, o tratamento com NECA induziu aumento de NO, enquanto o tratamento com αβ-metileno reduziu os níveis de ROS. Após a realização deste estudo, ficou evidente que a L. braziliensis é capaz de induzir em neutrófilos um perfil mais pró-inflamatório, com a presença de altos níveis de ROS e NO, enquanto a L. amazonensis apresenta maior atividade da enzima CD73, resultando em uma interação com neutrófilos mais favorável ao parasito.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio
Caracterização da ação da saliva do carrapato Amblyomma cajennense (Acari; Ixodidae) sobre a via clássica do sistema complemento
Get PDFTicks are a major concern in human and veterinary medicine because they cause blood loss and transmit several pathogens to their hosts. The activity performed by molecules produced by the salivary gland and gut of these arthropods are crucial for them to obtain blood and reach reproductive success. Among various activities performed by saliva, the inhibition of the complement system is important by delaying an immune response against salivary proteins and protecting the intestinal epithelium from the complement system, present within the ingested blood. The overall objective of this study was to characterize the anticomplement activity of Amblyomma cajennense saliva on the classical pathway of the human complement system. We evaluated whether the saliva and EGS from partially engorged and engorged ticks after different days of feeding are capable of inhibiting the action of the complement system. For this, hemolysis assays were performed with sheep red blood cells and human serum to evaluate the action in the classical pathway. We also measured the female A. cajennenses intestinal pH and the efficiency of the human complement system atthis pH. The results showed that both the saliva and EGS are able to inhibit the classical pathway hemolysis of human complement system, but the tick saliva was more effective than the EGS. The EGS of partially engorged and engorged ticks inhibit hemolysis, with extracts from engorged ticks being more effective. The EGS from A. cajennense fed to mice, presented greater inhibition of the classical pathway when dissected towards the end of the feeding stage (last 48 hours during feeding) and the activity showed a significant positive correlation (r = 0.585, p <0.001) with total weight, unlike EGS obtained from ticks fed on horses, where the inhibition is equal in ticks of different weights. The pH found in the A. cajennenses gut was 8.04 and the adjustments of the haemolytical assays to alkaline conditions did not interfere with classical pathway activation and the role of complement inhibitors, with the most effective inhibition occurring at pH 7.0. The knowledge of when these inhibitors are expressed in tick saliva and how they act may be used in future experiments searching new methods of tick control.Os carrapatos são motivo de grande preocupação na medicina humana e veterinária, pois exercem ação espoliante e transmitem diversos patógenos para seus hospedeiros. As atividades exercidas por moléculas produzidas pela glândula salivar e o intestino destes artrópodes são primordiais para obtenção de sucesso alimentar e reprodutivo. Dentre as diversas atividades desempenhadas na saliva, destaca-se a inibição do sistema complemento que tem como possíveis papéis retardar ao máximo o aparecimento de uma resposta imune contra as proteínas salivares e proteger o epitélio intestinal do ataque das moléculas efetoras do sistema complemento presentes no sangue recém-ingerido. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a ação da saliva do carrapato Amblyomma cajennense sobre a via clássica do sistema complemento humano. Foi avaliado se saliva e o EGS de partenóginas e teleóginas de carrapatos de diferentes dias de alimentação são capazes de inibir a ação do sistema complemento. Para isto, foram utilizados ensaios de hemólise com hemácias de carneiros e soro humano para avaliar a ação na via clássica. Também foi mensurado o valor do pH intestinal de fêmeas de A. cajennense e a eficiência do sistema complemento e dos inibidores neste pH. Os resultados mostraram que a saliva e o EGS são capazes de inibir a hemólise pela via clássica do sistema complemento humano, porém a saliva se mostrou mais eficaz do que o EGS. O EGS de teleóginas e partenóginas inibem a hemólise, sendo o de partenóginas mais ativo. O EGS de A. cajennense, quando alimentados em camundongos, possuem maior inibição da via clássica na fase final de alimentação (últimas 48 horas de alimentação) e a atividade apresentou uma correlação positiva significativa (r=0,585, p<0,001) com o peso, diferente dos alimentados em equinos, onde a inibição é igual em carrapatos de diferentes pesos. O valor do pH encontrado no intestino de A. cajennense foi de 8,04 e a alcalinização das soluções do ensaio hemolítico para pH 8,0 não interfere na ativação da via clássica e na atuação dos inibidores do sistema complemento, sendo a inibição mais eficaz do que em pH 7,0. O conhecimento de quando estes inibidores são expressos na saliva e como eles agem, poderá ser utilizado em futuros experimentos na busca de novos métodos de controle para carrapatos
Development of the first immunobiological against hematophagous mite Ornithonyssus bursa (Berlese, 1888) (Acari: Gamasida: Macronyssidae)
No full textInfestation by blood-sucking mites in poultry farming and egg production systems generates great economic loss. These aspects are mainly related to decrease in animal weight gain and reduced egg production, thus resulting in higher production costs, including expenses related to acaricides control. Therefore, blood-sucking mites have become a challenge for poultry production systems around the world and, consequently, require the search for new tools for their elimination or control in an effective and sustainable way. In this sense, vaccines are a viable option because they do not select resistant mite strains, do not contaminate the environment, do not pose a danger to animal and human health, and do not require waiting time before slaughtering the animal, in addition to being a long-term solution. Given this scenario, the objective of this study was to develop the first immunobiological against the hematophagous mite Ornithonyssus bursa, widely distributed throughout the country. A colony of O. bursa was obtained and maintained in chickens under laboratory conditions to extract biological material for vaccine formulation. Then, a clinical trial in birds was carried out to prove the concept with the immunizer, using three experimental groups: control, adjuvant + placebo and vaccine; n=4/group. The different inocula were administered to all groups, through three intramuscular applications, at intervals of 14 days (T0, T14 and T28). After 21 days of application of the third dose (TF), the animals were subjected to the challenge with the infestation of 20 mites/poultry in a feeding chamber fixed to the animal. During the clinical trial, the birds were clinically monitored and did not show local or systemic changes, with the formulation being considered harmless and safe. During the challenge, the mites fed for approximately 12 hours. Afterwards, they were collected and placed in 96-well flat- bottom plates individually to observe mortality, oviposition, fecundity, and larvae hatching. Observations were carried out for six days (0h, 24h, 48h, 72h, 96h, 120h). After analyzing the data obtained, it was found that the immunobiological agent against the mite O. bursa was able to demonstrate that it was: (i) harmless and safe; (ii) capable of inducing immunogenicity resulting in antigen-specific IgY levels; (iii) that it presents great potential due to interference in the biological cycle of the mites, resulting in a vaccine efficacy of 99.99%, interrupting the biological cycle of the mite. These results are compatible with the continuity of the study for the biotechnological improvement of the vaccine formulation.A infestação por ácaros hematófagos em sistemas de criação de aves de corte e produção de ovos geram grandes prejuízos econômicos. Tais aspectos se relacionam principalmente à perda em ganho de peso dos animais e na produção de ovos, resultando em maiores custos de produção, incluindo aqueles relacionados aos acaricidas utilizados no controle. Assim, os ácaros hematófagos têm se tornado um desafio para os sistemas de produção de aves no mundo e, consequentemente impõe a procura de novas ferramentas para sua eliminação ou controle de forma eficaz e sustentável. Neste sentido, as vacinas são uma possibilidade pois, não selecionam linhagens de ácaros resistentes, não contaminam o meio ambiente, não trazem perigo para saúde animal e humana e não exigem tempo de carência para abate do animal, além de ser uma solução de tempo prolongado. Diante deste cenário, o objetivo deste estudo foi desenvolver o primeiro imunobiológico contra o ácaro hematófago Ornithonyssus bursa, amplamente distribuído no território nacional. Foi obtida e mantida uma colônia de O. bursa em galinhas em condições de laboratório para extração de material biológico para formulação vacinal. Em seguida, um ensaio clínico em aves foi realizado para a prova de conceito com o imunizante, empregando-se três grupos experimentais: controle, adjuvante + placebo e vacina; n=4/grupo. Os diferentes inóculos foram administrados em todos os grupos, por meio de três aplicações por via intramuscular, em intervalos de 14 dias (T0, T14 e T28). Após 21 dias da aplicação da terceira dose (TF) os animais foram submetidos ao desafio com a infestação de 20 ácaros/ave em câmara de alimentação fixada ao animal. Durante o ensaio clínico as aves foram monitoradas clinicamente e laboratorialmente e não apresentaram alterações locais ou sistêmicas, sendo a formulação considerada inócua e segura. Durante o desafio, os ácaros se alimentaram por aproximadamente 12 horas. Após, foram coletados e colocados em placas de fundo chato de 96 poços de forma individual para observar a mortalidade, oviposição, fecundidade e a eclosão de larvas. As observações foram realizadas por seis dias (0h, 24h, 48h, 72h, 96h,120h). Após as análises dos dados obtidos, foi verificada que o imunobiológico contra o ácaro O. bursa foi capaz de demonstrar ser: (i) inócua e segura; (ii) que é capaz de induzir imunogenicidade resultando em níveis de IgY antígeno-específico; (iii) que apresenta grande potencial devido à interferência no ciclo biológico dos ácaros, resultando em eficácia vacinal de 99,99%, interrompendo o ciclo biológico do ácaro. Estes resultados são compatíveis com a continuidade do estudo para o aprimoramento biotecnológico da formulação vacinal.2026-05-2
Caracterização da ação da saliva do carrapato Amblyomma cajennense (Acari; Ixodidae) sobre a via clássica do sistema complemento
No full textTicks are a major concern in human and veterinary medicine because they cause blood loss and transmit several pathogens to their hosts. The activity performed by molecules produced by the salivary gland and gut of these arthropods are crucial for them to obtain blood and reach reproductive success. Among various activities performed by saliva, the inhibition of the complement system is important by delaying an immune response against salivary proteins and protecting the intestinal epithelium from the complement system, present within the ingested blood. The overall objective of this study was to characterize the anticomplement activity of Amblyomma cajennense saliva on the classical pathway of the human complement system. We evaluated whether the saliva and EGS from partially engorged and engorged ticks after different days of feeding are capable of inhibiting the action of the complement system. For this, hemolysis assays were performed with sheep red blood cells and human serum to evaluate the action in the classical pathway. We also measured the female A. cajennenses intestinal pH and the efficiency of the human complement system atthis pH. The results showed that both the saliva and EGS are able to inhibit the classical pathway hemolysis of human complement system, but the tick saliva was more effective than the EGS. The EGS of partially engorged and engorged ticks inhibit hemolysis, with extracts from engorged ticks being more effective. The EGS from A. cajennense fed to mice, presented greater inhibition of the classical pathway when dissected towards the end of the feeding stage (last 48 hours during feeding) and the activity showed a significant positive correlation (r = 0.585, p <0.001) with total weight, unlike EGS obtained from ticks fed on horses, where the inhibition is equal in ticks of different weights. The pH found in the A. cajennenses gut was 8.04 and the adjustments of the haemolytical assays to alkaline conditions did not interfere with classical pathway activation and the role of complement inhibitors, with the most effective inhibition occurring at pH 7.0. The knowledge of when these inhibitors are expressed in tick saliva and how they act may be used in future experiments searching new methods of tick control.Os carrapatos são motivo de grande preocupação na medicina humana e veterinária, pois exercem ação espoliante e transmitem diversos patógenos para seus hospedeiros. As atividades exercidas por moléculas produzidas pela glândula salivar e o intestino destes artrópodes são primordiais para obtenção de sucesso alimentar e reprodutivo. Dentre as diversas atividades desempenhadas na saliva, destaca-se a inibição do sistema complemento que tem como possíveis papéis retardar ao máximo o aparecimento de uma resposta imune contra as proteínas salivares e proteger o epitélio intestinal do ataque das moléculas efetoras do sistema complemento presentes no sangue recém-ingerido. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a ação da saliva do carrapato Amblyomma cajennense sobre a via clássica do sistema complemento humano. Foi avaliado se saliva e o EGS de partenóginas e teleóginas de carrapatos de diferentes dias de alimentação são capazes de inibir a ação do sistema complemento. Para isto, foram utilizados ensaios de hemólise com hemácias de carneiros e soro humano para avaliar a ação na via clássica. Também foi mensurado o valor do pH intestinal de fêmeas de A. cajennense e a eficiência do sistema complemento e dos inibidores neste pH. Os resultados mostraram que a saliva e o EGS são capazes de inibir a hemólise pela via clássica do sistema complemento humano, porém a saliva se mostrou mais eficaz do que o EGS. O EGS de teleóginas e partenóginas inibem a hemólise, sendo o de partenóginas mais ativo. O EGS de A. cajennense, quando alimentados em camundongos, possuem maior inibição da via clássica na fase final de alimentação (últimas 48 horas de alimentação) e a atividade apresentou uma correlação positiva significativa (r=0,585, p<0,001) com o peso, diferente dos alimentados em equinos, onde a inibição é igual em carrapatos de diferentes pesos. O valor do pH encontrado no intestino de A. cajennense foi de 8,04 e a alcalinização das soluções do ensaio hemolítico para pH 8,0 não interfere na ativação da via clássica e na atuação dos inibidores do sistema complemento, sendo a inibição mais eficaz do que em pH 7,0. O conhecimento de quando estes inibidores são expressos na saliva e como eles agem, poderá ser utilizado em futuros experimentos na busca de novos métodos de controle para carrapatos
Caracterização fenotípica de linfócitos T de memória na infecção por Plasmodium vivax
Get PDFThere are indications that immunity induced during primary infection by Plasmodium vivax, a species widely distributed in the world and most prevalent in Brazil, leads to activation of T cells. However, the understanding of the immune mechanisms involved in immunoregulation and immunopathology of vivax still remains incomplete. Memory cells are long lived and recruited during clonal expansion and differentiation of lymphocytes in response to antigenic stimulation. In this study, we evaluate the phenotypic profile of memory T lymphocytes from P. vivax naturally infected patients from Brazilian Amazon. Sixty five patients living in endemic areas with variable number of previous episodes of malaria by P. vivax were assessed. As negative controls, 22 individuals from a non-endemic area were also evaluated.Our results demonstrated that individuals with vivax malaria showed a significant increase of circulating memory CD4+(CD45RO+) lymphocytes. Memory cells from infected patients showed a pattern of central memory, as demonstrated by differential expression of CCR7 and CD62L. Our results showed that infection with P. vivax significantly induces expression of cytokines IFN- and IL-10 by CD4 and increasing concentrations of cellular subpopulations CD4 CD45RA+ and CD4 CD45RO+ and that infection by P. vivax induces proliferation of central memory cells. These results point to the need to generate basic information about the immunological mechanisms in vivax malaria that may inform the dev elopment of future intervention measures.Há indicativos que a imunidade induzida durante a primeira infecção por Plasmodium vivax, espécie amplamente distribuída no mundo e prevalente no Brasil, leva a ativação de células T. Entretanto, a compreensão dos mecanismos imunes envolvidos na imunorregulação e imunopatologia na malária por esta espécie permanecem incompletas. As células de memória são células de vida longa que surgem na resposta imune antígeno específica durante a expansão clonal e diferenciação dos linfócitos em resposta a uma estimulação antigênica. Neste estudo avaliamos o perfil fenotípico de memória de linfócitos T de pacientes infectados naturalmente por P. vivax na Amazônia brasileira. Foram avaliados 65 pacientes residentes na área endêmica que apresentavam número variável de episódios prévios de malária por P. vivax. Como controles negativos, foram incluídos 22 indivíduos nunca expostos à malária oriundos de área não endêmica para a doença. Nossos resultados revelaram que indivíduos com malária vivax apresentaram aumento significativo das células T CD4+ de memória (CD45RO+). Células de memória de pacientes infectados apresentaram um padrão de memória central, demonstrado pela expressão significativa de CCR7 e CD62L pelas células T CD4+CD45RO+. Nossos resultados mostraram que infecção por P. vivax induz a expressão significativa das citocinas IFN- e IL-10 por linfócitos T CD4+ bem como o aumento das concentrações das subpopulações celulares CD4+CD45RA+ e CD4+CD45RO+ e que a infecção por P. vivax induz a proliferação de células de memória centrais. Estes resultados apontam para a necessidade gerar informações básicas acerca dos mecanismos imunológicos na malária vivax que poderão subsidiar o desenvolvimento de futuras medidas de intervenção
Caracterização fenotípica de linfócitos T de memória na infecção por Plasmodium vivax
No full textThere are indications that immunity induced during primary infection by Plasmodium vivax, a species widely distributed in the world and most prevalent in Brazil, leads to activation of T cells. However, the understanding of the immune mechanisms involved in immunoregulation and immunopathology of vivax still remains incomplete. Memory cells are long lived and recruited during clonal expansion and differentiation of lymphocytes in response to antigenic stimulation. In this study, we evaluate the phenotypic profile of memory T lymphocytes from P. vivax naturally infected patients from Brazilian Amazon. Sixty five patients living in endemic areas with variable number of previous episodes of malaria by P. vivax were assessed. As negative controls, 22 individuals from a non-endemic area were also evaluated.Our results demonstrated that individuals with vivax malaria showed a significant increase of circulating memory CD4+(CD45RO+) lymphocytes. Memory cells from infected patients showed a pattern of central memory, as demonstrated by differential expression of CCR7 and CD62L. Our results showed that infection with P. vivax significantly induces expression of cytokines IFN- and IL-10 by CD4 and increasing concentrations of cellular subpopulations CD4 CD45RA+ and CD4 CD45RO+ and that infection by P. vivax induces proliferation of central memory cells. These results point to the need to generate basic information about the immunological mechanisms in vivax malaria that may inform the dev elopment of future intervention measures.Há indicativos que a imunidade induzida durante a primeira infecção por Plasmodium vivax, espécie amplamente distribuída no mundo e prevalente no Brasil, leva a ativação de células T. Entretanto, a compreensão dos mecanismos imunes envolvidos na imunorregulação e imunopatologia na malária por esta espécie permanecem incompletas. As células de memória são células de vida longa que surgem na resposta imune antígeno específica durante a expansão clonal e diferenciação dos linfócitos em resposta a uma estimulação antigênica. Neste estudo avaliamos o perfil fenotípico de memória de linfócitos T de pacientes infectados naturalmente por P. vivax na Amazônia brasileira. Foram avaliados 65 pacientes residentes na área endêmica que apresentavam número variável de episódios prévios de malária por P. vivax. Como controles negativos, foram incluídos 22 indivíduos nunca expostos à malária oriundos de área não endêmica para a doença. Nossos resultados revelaram que indivíduos com malária vivax apresentaram aumento significativo das células T CD4+ de memória (CD45RO+). Células de memória de pacientes infectados apresentaram um padrão de memória central, demonstrado pela expressão significativa de CCR7 e CD62L pelas células T CD4+CD45RO+. Nossos resultados mostraram que infecção por P. vivax induz a expressão significativa das citocinas IFN- e IL-10 por linfócitos T CD4+ bem como o aumento das concentrações das subpopulações celulares CD4+CD45RA+ e CD4+CD45RO+ e que a infecção por P. vivax induz a proliferação de células de memória centrais. Estes resultados apontam para a necessidade gerar informações básicas acerca dos mecanismos imunológicos na malária vivax que poderão subsidiar o desenvolvimento de futuras medidas de intervenção
Caracterização da população canina com dermatite atópica e correlação entre a gravidade da doença e nível sérico de interleucina-31 antes e após aplicação de lokivetmab
Get PDFCanine atopic dermatitis is a chronic, pruritic and inflammatory skin disease, associated
with allergen-specific IgE antibodies primarily against environmental allergens. Pruritus
is the main clinical sign and directly affects the quality of life of dogs and their owners.
Pathogenesis is not yet fully elucidated, but it is known to be quite complex, involving
genetic and environmental factors, food allergens, skin barrier defects and immune
dysfunction. Currently, the important role of interleukin-31 (IL-31) in the induction of
pruritus has been described, and the most targeted therapy to control this clinical sign is
lokivetmab, which aims to selectively block this cytokine, preventing it from binding to
its receptors and trigger the pruritic cascade. As it is one of the most frequently diagnosed
dermatopathies in dogs worldwide, literature data on the epidemiological and therapeutic
aspects of the disease are easily found. However, at the national level and according to
geographic region, data on prevalence and characteristics in the species are still scarce.
Thus, the present study was divided into two parts. The first part aimed to determine the
prevalence of canine atopic dermatitis in the dermatology service of the Veterinary
Hospital of UFMG through a retrospective study in the period from 2015 to 2020.
Therefore, 761 medical records of dogs were analyzed, in which 34,51% (291) of the
cases represented allergies and of these, 73,56% (214) of the cases were from dogs with
atopic dermatitis, being the most prevalent allergy. Breed is the most variable
characteristic of the disease in epidemiological terms, and in this study Shih Tzu, Lhasa
Apso and French Bulldog were the most prevalent pure breeds. In the second part, the
objective was to prospectively select tem dogs with atopic dermatitis from the
dermatology service of the Veterinary Hospital of UFMG to assess the severity of the
disease, through the scores of the canine atopic dermatitis extent and severity index
(CADESI-04) and visual analog scale of pruritus (pVAS), correlating with serum levels
of IL-31, before and after therapy with the monoclonal antibody (mAb) lokivetmab.
Studies about serum levels of IL-31, its correlation with the severity of the disease and its
circulating levels after application of the immunotherapeutic are still scarce. There was a
significant reduction in pVAS and serum IL-31 after two administrations of the mAb,
with a significant correlation between these two variables. However, there was no
difference in CADESI-04 scores, neither correlation between sevetiry of the disease and
serum levels of this cytokine in atopic dogs of different ages and weights. A significant
correlation was also observed between dose of lokivetmab and pVAS, showing that the
higher the dose used, the lower the pVAS. There was no correlation between the pruritus
reduction and baseline IL-31 level, so, therefore, it was not possible to infer whether dogs
with higher serum levels would be the best candidates for this therapy. The results are
relevant and promising, as they reinforce the role of this cytokine in the involvement of
pruritus in dogs with atopic dermatitis and open doors for new studies with larger
populations of dogs to investigate whether IL-31 could be a biomarker of therapeutic
response to lokivetmab.
Keywords: monoclonal antibody, atopy, dogs, interleukin-31, lokivetmab.A dermatite atópica canina é uma doença cutânea pruriginosa, inflamatória e crônica, associada a anticorpos IgE alérgeno-específicos, principalmente contra alérgenos ambientais. O prurido é o principal sinal clínico e afeta diretamente a qualidade de vida dos cães e de seus tutores. Sua patogênese ainda não é totalmente elucidada, mas sabe-se que é bastante complexa, envolvendo fatores genéticos, ambientais, alimentares, defeitos de barreira cutânea e disfunção imunológica. Atualmente tem sido descrito o importante papel da interleucina-31 (IL-31) na indução do prurido, e a terapia mais direcionada para controle deste sinal clínico é o lokivetmab, que objetiva bloquear seletivamente essa citocina, impedindo-a de se ligar ao seu receptor e desencadear a cascata pruriginosa. Por ser uma das dermatopatias mais frequentemente diagnosticadas em cães a nível mundial, dados de literatura sobre os aspectos epidemiológicos e terapêuticos da doença são encontrados facilmente. Entretanto, no âmbito nacional e de acordo com região geográfica, os dados de prevalência e das características na espécie ainda são escassos. Desta forma, o presente estudo foi dividido em duas partes. Na primeira parte, objetivou-se determinar a prevalência da dermatite atópica canina no serviço de dermatologia do Hospital Veterinário da UFMG através de um estudo retrospectivo do período de 2015 a 2020. Para tanto, foram analisados 761 prontuários de cães, em que 34,51% (291) dos casos representaram alergopatias e destas, 73,56% (214) dos casos foram de cães com dermatite atópica, sendo a alergopatia mais prevalente. A raça é a característica mais variável da doença em termos epidemiológicos, sendo que neste estudo as raças Shih Tzu, Lhasa Apso e Buldogue Francês foram as raças puras mais prevalentes. Na segunda parte, objetivou-se selecionar prospectivamente dez cães com dermatite atópica provenientes do serviço de dermatologia do Hospital Veterinário da UFMG para avaliar a gravidade da doença, através das pontuações do índice de extensão e gravidade da dermatite atópica canina (CADESI-04) e escala analógica visual de prurido (pVAS), correlacionando com os níveis séricos de IL-31, antes e após terapia com o anticorpo monoclonal (mAb) lokivetmab. Ainda são escassos os estudos sobre os níveis séricos de IL-31, sua correlação com a gravidade da doença e seus níveis circulantes após aplicação deste imunoterapêutico. Houve redução significativa da pVAS e da IL-31 sérica após duas administrações do mAb, existindo correlação positiva significativa entre as duas variáveis. No entanto, não houve diferença nas pontuações CADESI-04, nem correlação entre a gravidade da doença e níveis séricos desta citocina em cães atópicos de diferentes idades e pesos. Observou-se correlação negativa significativa entre dose de lokivetmab e a pVAS, mostrando que quanto maior a dose utilizada, menor a pVAS. Não houve correlação entre a redução do prurido com o nível sérico basal da IL-31, e, portanto, não foi possível inferir se os cães com níveis séricos mais altos seriam os melhores candidatos à terapia. Os resultados são relevantes e promissores, pois reforçam o papel dessa citocina no envolvimento do prurido em cães com dermatite atópica e permitem abrir portas para novos estudos com populações maiores de cães, para investigar se a IL-31 poderá ser um biomarcador de resposta terapêutica ao lokivetmab.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio
Atividade lítica pelo sistema complemento em promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum frente a componentes salivares de Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Diptera: Psychodidae)
No full textSince the first reports about visceral leishmaniasis in Brazil, the sand fly Lutzomyia longipalpis has been incriminated as the main vector of Leishmania infantum, the causative agent of visceral leishmaniasis in the Americas. The saliva of the vector modulates the host immune response at different levels, including inhibition of the complement activation, making it a critically important component in the process of disease transmission. This study aimed to show the importance of salivary inhibitors of the complement of L. longipalpis for the survival of L. infantum promastigotes when exposed to both, human and dog serum. The amount of saliva released by females in the byte site during blood feeding was also estimated. Considering that opsonization with C3b seems important for Leishmania phagocytosis in a manner that avoid macrophages activation, we investigated the deposition of C3b on the parasite surface in the presence or absence of saliva by indirect immunofluorescence. Stationary phase promastigotes were partially sensitive to the normal human serum (5% of serum killed almost 50% of the promastigotes). We observed a significant reduction of cell death when promastigotes were exposed to the normal human serum in the presence of saliva. This effect was dependent of saliva concentration. Despite showing partial sensitivity to human complement, promastigotes presented great resistance to lysis by complement of infected dogs and uninfected ones. For all hosts, C3b deposition was efficient in the presence and absence of saliva, showing that, while diminishing the lytic action by normal human serum, saliva does not prevent the promastigote opsonization by complement. Since saliva favors the survival of L. infantum promastigotes when exposed to the human serum, it could be critical in the process of transmitting the parasite to the man. Altogether, our results could explain why dogs are more susceptible to be infected by L. infantum than humansDesde os primeiros relatos de leishmaniose visceral no Brasil, o flebotomíneo Lutzomyia longipalpis tem sido incriminado como o principal vetor de Leishmania infantum, agente causador da leishmaniose visceral nas Américas. A saliva do vetor modula a resposta imune do hospedeiro em diferentes níveis, incluindo a inibição da ativação do complemento, tornando-se um componente de grande importância no processo de transmissão desta parasitose. O presente trabalho teve como objetivo mostrar a importância dos inibidores do complemento salivares de L. longipalpis para a sobrevivência de promastigotas de L. infantum quando expostas ao soro humano ou de cães. A quantidade de saliva liberada pelas fêmeas durante o repasto sanguíneo também foi estimada. Considerando que a opsonização com C3b parece ser importante para a fagocitose de Leishmania de uma maneira que evite a ativação de macrófagos, investigamos a deposição de C3b na superfície do parasita na presença ou ausência de saliva por imunofluorescência indireta. Promastigotas em fase estacionária foram parcialmente sensíveis ao soro humano normal (5% de soro matou quase 50% das promastigotas). Observamos uma redução significativa na morte celular quando as promastigotas foram expostas ao soro humano normal na presença de saliva. Este efeito foi dependente da concentração de saliva. Embora apresentem relativa sensibilidade ao complemento humano, as promastigotas apresentaram grande resistência à lise pelo complemento de cães infectados e não infectados. Para todos os hospedeiros, a deposição de C3b foi eficiente na presença e ausência de saliva, mostrando que, embora diminuindo a ação lítica pelo soro humano normal, a saliva não impede a opsonização das promastigotas pelo complemento. Como a saliva favorece a sobrevivência das promastigotas de L. infantum quando expostas ao soro humano, ela poderia ser fundamental no processo de transmissão do parasita ao homem. De modo geral, nossos resultados poderiam explicar por que os cães são mais suscetíveis a serem infectados por L. infantum que os humano
Estudo dos efeitos do tratamento com antimônio associado à pentoxifilina na modulação da resposta imunológica in situ de pacientes com leishmaniose mucosa
Get PDFHuman infection with Leishmania braziliensis can lead to cutaneous leishmaniasis (CL) or mucosal leishmaniasis (ML). ML is associated with exacerbation of inflammatory immune response, causing extensive damage tissue. Treatment of leishmaniasis is still based on the use of pentavalent antimony (SbV). However, the failure of this treatment is common and resistant parasites have been detected. Due to the problems resulting from SbV treatment a wide variety of alternative therapies has been evaluated for leishmaniasis treatment. The aim this study was to investigate the effect of antimony associated or not to pentoxifylline (Ptx) in the modulation of the in situ immune response of ML patients. We evaluated the frequency of T CD4+, CD8+ cells and CD68+ macrophages, as well as the expression of cytokines IFN-, TNF- and IL-10+ and cytotoxic molecules granzyme A+ and the correlation between these immunological parameters in lesions from ML patients before and after SbV and SbV associated with Ptx treatment, by confocal microscopy. We did not observe differences in the numbers of the different cell populations or cytokines and granzyme A, comparing lesions from patients before and after treatment with SbV. Lesions from ML patients after Ptx associated with SbV treatment had lower frequency of macrophages, as compared to lesions before treatment. There was no change in expression of IFN-, IL-10 and granzyme A in lesions from patients after SbV + Ptx treatment. However, Ptx associated with SbV treatment leads to a reduction in the number of CD68+TNF-+ cells. There were no differences in the frequencies of cell populations and cytokines comparing between lesions from patients submitted to the different treatments. The Ptx associated with SbV treatment induced loss of positive correlation between the inflammatory infiltrate and the number of TNF-+ cells, as well as the number of CD8+ T cells and granzyme A+ cells. Ptx associated with SbV treatment may result in a modulation of the immune response more efficient and consequently an accelerated healingA infecção humana por Leishmania braziliensis pode levar ao desenvolvimento de manifestações clínicas cutânea e mucosa, sendo que a forma clínica mucosa está associada à exacerbação da resposta imune inflamatória, causando extensa destruição do tecido. O tratamento da leishmaniose é, ainda hoje, baseado na utilização dos antimoniais pentavalentes (SbV). No entanto, a falha deste tratamento é comum e parasitos resistentes já foram detectados. Em virtude dos problemas decorrentes do tratamento com SbV, uma grande diversidade de terapias alternativas, de uso tópico ou sistêmico, vem sendo avaliada para o tratamento da leishmaniose. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do tratamento com antimônio associado ou não à Pentoxifilina (Ptx) na modulação da resposta imunológica in situ de pacientes com leishmaniose mucosa (LM). Foram avaliadas as frequências de linfócitos T CD4+, T CD8+ e macrófagos CD68+, assim como a expressão das citocinas IFN-, TNF- e IL-10+ e da molécula citotóxica granzima A+, e a correlação entre estes parâmetros imunológicos, em lesões de pacientes com LM pré e pós-tratamentos com SbV ou SbV associado à Ptx. Para isto, foram realizadas reações de imunofluorescência e aquisição de imagens por microscopia confocal em cortes de lesões congeladas obtidas de pacientes com LM antes e após os diferentes tratamentos. Pacientes com LM pré e pós-tratamentos com SbV apresentaram número de células T CD4+, T CD8+ e CD68+ semelhantes. Não foi observada diferença significativa na expressão das diferentes citocinas e granzima A, comparando-se as lesões obtidas pré e pós-tratamento com SbV. Lesões de pacientes com LM pós-tratamento com SbV associado à Ptx apresentaram menor frequência de macrófagos CD68+ quando comparado com lesões de pacientes com LM pré-tratamento, sem alteração nas freqüências de células T CD4+ e T CD8+. Não houve alteração na expressão de IFN-, IL-10 e granzima A pós-tratamento com SbV associado à Ptx. No entanto, observou-se que o tratamento SbV + Ptx leva a uma redução do número de células CD68+TNF-+. Não foram observadas diferenças nas frequências de populações celulares e citocinas comparando-se os tratamentos. O tratamento com SbV associado à Ptx induziu perda da correlação positiva tanto entre o infiltrado inflamatório e o número de células TNF-+, como entre o número de células T CD8+ e granzima A+. O tratamento de Ptx como adjuvante ao SbV pode resultar em uma modulação da resposta imunológica mais eficiente, o que pode explicar a cura mais rápida observada nesse tratamento, beneficiando a população infectad
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