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Identificação molecular de Candida spp. em amostras de pacientes usuários de próteses dentárias por meio de PCR - Multiplex
Get PDFArtigo apresentado ao curso de graduação em Biomedicina da UniCesumar – Centro Universitário de Maringá como requisito parcial para a obtenção do título de bacharela em Biomedicina, sob a orientação da Prof. Dr. Marcela Funaki dos Reis.Oral candidiasis is an opportunistic infection common to patients using dental prostheses. For the correct treatment is necessary the precise diagnosis of the yeast causing the infection since different species of Candida may be related. Thus, the objective of this study was to simultaneously identify different Candida species in samples of dental prosthesis patients by
PCR - multiplex. The samples collected from dental prosthesis patients were inoculated in Saubourand medium and later the genomic DNA from the colonies was extracted by the organic extraction method with phenol-chloroform. The yeast DNA samples were amplified via two rounds of PCR. In the first one was used the primers ITS1 and ITS4 and in the second
characterized as Multiplex with touchdown for amplification of molecular markers speciesspecific. The method used in the study was able to identify in a distinctive way the species C. albicans and C. troplicalis that colonized the oral cavity of the analyzed patient. Although, the multiplex PCR tested was able to identify the sensitivity was considered lower than expected. Thus, it is suggested that further studies can be performed in order to increase the
efficiency of the test by promoting the standardization of the PCR reaction with increasing substances that raise the sensitivity and increase in the number of cycles in the thermal cycler.A candidíase bucal é uma infecção oportunista comum a pacientes usuários de prótese dental. E para o tratamento correto é necessário o diagnóstico preciso da levedura causadora da infecção uma vez que diferentes espécies de Candida podem estar relacionadas. Assim, o objetivo deste estudo foi identificar simultaneamente diferentes espécies de Candida em amostras de pacientes usuários de prótese dental por meio de PCR – multiplex. Para tanto as amostras coletadas de pacientes usuários de prótese dental foram inoculadas em meio Saubourand e, posteriormente o DNA genômico das colônias foi extraído pelo método de extração orgânica com fenol-clorofórmio. As amostras de DNA das leveduras foram amplificadas via dois rounds de PCR. No primeiro foi utilizado os primers ITS1 e ITS4 e no segundo caracterizado como Multiplex com touchdown para amplificação dos marcadores moleculares espécie-específicos. O método utilizado no estudo foi capaz de identificar de maneira distintiva as espécies C. albicans e C. troplicalis que colonizavam ao mesmo tempo a cavidade bucal do paciente analisado. Embora, a PCR multiplex testada tenha sido capaz de identificação, a sensibilidade foi considerada inferior ao esperado. Assim, é sugerido que estudos posteriores possam ser realizados a fim de aumentar a eficiência do teste, promovendo a padronização da reação de PCR com incremento de substâncias que elevam a sensibilidade e ampliação no número de ciclos no termociclador
Análise da sensibilidade para diagnóstico molecular de candidíase
Get PDFArtigo apresentado ao curso de graduação em Biomedicina da UniCesumar – Centro Universitário de Maringá como requisito parcial para a obtenção do título de bacharel(a) em Biomedicina, sob a orientação da Prof. Dra Marcela Funaki dos ReisCandidiasis is an opportunistic mycosis caused by yeasts of the genus Candida, the species Candida albicans being prevalent in the oral mucosa. However, other yeasts colonize the buccal mucosa and in this case the conventional diagnosis may not be conclusive for the true species causing candidiasis. Thus, the sensitivity threshold for molecular diagnosis of oral
candidiasis based on molecular marker analysis using polymerase chain reaction (PCR) was established in this study. For both clinical samples were obtained by scraping the mucosa with swab and inoculated in Sabouraud culture medium. After growth, the genomic DNA of the colonies of C. albicanswas extracted using the organic extraction method with phenol:
chloroform. The molecular markers that identify C. albicans were amplified in two rounds in Nested - PCR using the ITS and CALB primers and the results visualized in agarose gel electrophoresis. It has been established that the sensitivity threshold for the primers comprises nanogram concentrations up to 10 pg, the optimum concentrations for visualization on the agarose gel being concentrations between 1ng and 10 pg. In view of the sensitivity presented
by the CALB primers, it is suggested later studies that test the sensitivity of these primers in PCR of colony from clinical samples and without the step of DNA extraction.Candidíase é uma micose oportunista causada por leveduras do gênero Candida, sendo a espécie Candida albicans prevalente na mucosa bucal. No entanto, outras leveduras colonizam a mucosa bucal e, neste caso, o diagnóstico convencional pode não ser conclusivo para a verdadeira espécie causadora da candidíase. Assim, neste estudo foi estabelecido o limiar de sensibilidade para diagnóstico molecular de candidíase bucal, baseado em análise por marcador molecular utilizando a reação em cadeia da polimerase – PCR. Para tanto, amostras clínicas foram obtidas por raspagem da mucosa com swab e inoculadas em meio de
cultura Sabouraud. Após crescimento, o DNA genômico das colônias de C. albicans foi extraído através do método de extração orgânica com fenol clorofórmio. Os marcadores moleculares que identificam C. albicans foram amplificados em dois rounds em Nested - PCR utilizando os primers ITS e CALB e os resultados visualizados em eletroforese em gel de agarose. Foi estabelecido que o limiar de sensibilidade para os primers compreende as concentrações em nanogramas de até 10 pg, sendo as concentrações ideais para a visualização no gel de agarose as concentrações entre 1ng a 10 pg. Diante da sensibilidade apresentada pelos primes CALB, são sugeridos estudos posteriores que testem a sensibilidade destes primers em PCR de colônias a partir de amostras clínicas e sem a etapa de extração de DNA
Aspectos genéticos da doença de Hirschsprung: uma revisão integrativa dos genes confirmados e candidatos a patogenia
Get PDFHirschsprung disease, also known as congenital aganglionic megacolon, is a rare disorder characterized by genetic heterogeneity and association with different genes and polymorphisms, which make it difficult to determine the genetic etiology of the disease. So, the objective of this study was to make an integrative review of the literature on the genetic aspects of Hirschsprung disease relating to the confirmed genes and candidates for its pathogenesis. For this purpose, this work was produced divided into the following phases: problem base, data collecting, evaluation of data for inclusion/exclusion, systematic analysis of data for categorization, presentation and interpretation of results and discussion. Thus, the
information was carefully analyzed and systematically organized, giving rise to two classes: mutations recognized as pathogenic and mutations reported, but with only suggested pathogenicity. Articles were collected that identified the RET, MAPK10, ZFHX1B, SOX2, CaSR, DSCAM, EDNRB, EDN3, SLC6A20, NRG1, SEMA3 genes and their polymorphisms with potential for disease association, and HSCR candidate genes. However, for methodological reasons, the present study will necessarily require future research that categorizes the data to avoid publication data, ensuring a safe analysis of the information suggested in the literature.A doença de Hirschsprung, também conhecida como megacólon aganglionar congênito, é uma desordem rara caracterizada pela heterogeneidade genética e associação com diferentes genes e polimorfismos, que dificultam a determinação da etiologia genética da doença. Com isso, o objetivo deste estudo foi realizar uma revisão integrativa da literatura sobre os aspectos genéticos da doença de Hirschsprung relacionando aos genes confirmados e candidatos a sua patogenia. Para tanto, este trabalho foi produzido dividindo-se nas fases de: formulação do problema, coleta de dados, avaliação dos dados para inclusão/exclusão, análise sistemática dos dados para categorização, apresentação e interpretação dos resultados e discussão. Dessa forma, as informações foram minunciosamente analisadas e organizadas sistematicamente, dando origem a duas classes: Mutações reconhecidas como patogênicas e Mutações relatadas, mas com patogenicidade apenas sugerida. Foram reunidos artigos que identificaram os genes RET, MAPK10, ZFHX1B, SOX2, CaSR, DSCAM, EDNRB, EDN3, SLC6A20, NRG1, SEMA3 e seus respectivos polimorfismos com potencial de associação a doença, e genes candidatos a HSCR. No entanto, por questões metodológicas o presente estudo sugere que serão necessárias pesquisas futuras que categorizem os dados para evitar os viés de publicação, garantindo a análise segura das informações sugeridas na literatura
Disseminação de bactérias multirresistentes em jalecos no ambiente hospitalar: revisão bibliográfica
Get PDFThe use of Personal Protective Equipment (PPE) is a requirement of Brazilian labor
legislation and should be used by all health professionals who provide direct assistance
to the patient. Of the PPEs, the most used by health professionals is the white coat,
which unfortunately ends up being a reservoir of microorganisms. The study proved to
be important to evidence the fact that the coat is a means of transportation of many
microorganisms in the hospital area, mainly of multi-resistant bacteria. The objective of
this work was to analyze the contamination of white coats by health professionals and
the occurrence of contamination by multi-resistant bacteria through a review of
integrative literature. As inclusion criteria we had the selection of articles published in
the last ten years until now available in online databases such as Google Scholar and
similar. We found 280 articles pertinent to the subject using the key words described,
however 270 were excluded because they do not fit the inclusion criteria, being
included 10 articles in the results. Through the analysis of the selected studies, it can be
concluded that there is a high incidence of contamination of the jackets of professionals
who work in hospital environment. The genus of bacteria with greater predominance in
the studies was the Staphylococcus. It was found that professionals do not follow the
recommendations of Biosafety regarding the places and time of use of the white coat, in
addition to washing and transport in order to reduce cross contamination.O uso de Equipamentos de Proteção Individual (EPIs) é uma exigência da legislação
trabalhista brasileira, devendo ser utilizado por todos os profissionais de saúde que
prestam assistência direta ao paciente. Dos EPIs, o mais utilizado pelos profissionais
da saúde é o jaleco, que, infelizmente, torna-se um reservatório de microrganismos.
O estudo mostrou-se importante para evidenciar o fato de o jaleco ser meio de
transporte de muitos microrganismos na área hospitalar, principalmente de bactérias
multirresistentes. O objetivo deste trabalho foi o de analisar a contaminação de
jalecos por profissionais da saúde e a ocorrência de contaminação por bactérias
multirresistentes por meio de uma revisão de literatura integrativa. Como critério de
inclusão, teve-se a seleção de artigos publicados nos últimos dez anos até o
presente momento disponíveis em base de dados online tais como Google Scholar e
semelhantes. Foram encontrados 280 artigos pertinentes ao tema, usando as
palavras chaves descritas, porém 270 foram excluídos por não se encaixarem nos
critérios de inclusão, sendo incluídos 10 artigos nos resultados. Com a análise dos
estudos selecionados, pôde-se concluir que há uma grande incidência de
contaminação dos jalecos dos profissionais que atuam em ambiente hospitalar. O
gênero de bactérias com maior predominância nos estudos foi o Staphylococcus. Foi
constatado que profissionais não seguem as recomendações de biossegurança que
dizem a respeito dos locais e do tempo de uso do jaleco, além da lavagem e do
transporte de forma a reduzir contaminações cruzadas
Determinação da atividade antioxidante de extratos de Pleurotus ostreatoroseus Singer e seus efeitos sobre o desenvolvimento de Aspergillus (=Emericella) nidulans
Get PDFOrientadora: Prof.ª Dr.ª Carmem Lucia de Mello Sartori Cardoso da RochaTese (doutorado em Biologia Comparada) - Universidade Estadual de Maringá, 2014Os cogumelos são uma boa fonte nutricional, sendo considerados alimentos funcionais e produtos nutracêuticos. Assim, foi determinada a composição e atividade antioxidante de extratos orgânicos de Pleurotus ostreatoroseus e seus efeitos sobre o desenvolvimento de Aspergillus nidulans. Os extratos foram elaborados por extração sequencial em etanol, acetato de etila e hexano, seguida de evaporação dos solventes e liofilização. Foi determinada a concentração de compostos bioativos e a atividade antioxidante pela eficiência no sequestro do radical DPPHo. O efeito sobre o desenvolvimento de Aspergillus nidulans foi realizado por meio das análises da germinação de conídios, do diâmetro da colônia, e da biomassa micelial, da conidiogênese e do ciclo sexual. O perfil da concentração de compostos bioativos seguiram a seguinte ordem em compostos fenólicos 15,92-24,05 (mg/GAE)> ácido ascórbico (0,24-0,25mg/g)>licopeno (49-71-92,96?g/mg))>?-caroteno (51,60-73,55?g/mg). Foi considerada elevada a atividade antioxidante dos extratos na concentração de 5mg/ml (86,13-91,77%), sendo necessários 49,01 e 54,12 mg/ml dos extratos etanólico e acetato para eficientemente inibir 50% dos radicais livres do DPPHo. Também foi possível observar que existe uma forte correlação positiva entre a concentração dos compostos bioativos presentes nos extratos e atividade antioxidante, indicando que os compostos bioativos de Pleurotus ostreatoroseus atuam com efeito aditivo e sinérgico. Quanto ao efeito sobre o desenvolvimento de Aspergillus nidulans foi verificado que os extratos orgânicos aceleram a geminação dos conídios por ativação do metabolismo e estímulo ao estabelecimento e manutenção do crescimento polarizado da hifa. Atuam na regulação dos ciclos reprodutivos, atrasando o desenvolvimento da conidiogênese a favor do ciclo sexual. Estes resultados suportam a hipótese de que os extratos orgânicos de Pleurotus ostreatoroseus atuam sobre o programa genético de Aspergillus nidulans por regulação da proliferação e ciclo celular. Todas as evidências indicam que o cogumelo brasileiro Pleuorotus ostreatoroseus apresenta propriedades medicinais e este estudo contribui para a popularização do seu consumo e cultivo, pois seu incremento na dieta pode beneficiar a saúdeSince mushrooms are functional foods and nutraceutical products, they are an excellent nutritional source. The composition and antioxidant activity of the organic extracts of Pleurotus ostreatoroseus and its effect on the development of Aspergillus nidulans are determined. Organic extracts were prepared by sequential extraction in ethanol, ethyl acetate and hexane, followed by evaporation of solvents and lyophilization. Concentration of bioactive compounds and anti-oxidant activities were determined by efficiency in sequester of radical DPPH. Effect on the development of A. nidulans was performed by analyzing the germination of conidia, colony diameter and mycelial biomass, conidiogenesis and sexual cycle. The concentration profile of bioactive compounds followed order in phenolic compounds 15.92-24.05 (mg/GAE)> ascorbic acid (0.24-0.25mg/g)>lycopene (49-71-92.96?g/mg))>?-carotene (51,60-73.55?g/mg). Anti-oxidant activity of the extracts was high in concentration 5mg/ml (86.13-91.77%) and required 49.01 and 54.12 mg/ml of ethanol and acetate extracts to inhibit efficaciously 50% of free radicals of DPPH. There was also a strong positive co-relationship between the concentration of bioactive compounds in the extracts and anti-oxidant activity. The above showed that the bioactive compounds of P. ostreatoroseus functioned with an additive and synergic effect. It was reported that, with regard to the development of A. nidulans, organic extracts accelerated the conidia germination by activating the metabolism and by stimulating the establishment and maintenance of hyphae's polarized growth. They have an active part in the regulation of reproductive cycles by delaying the development of conidiogenesis favoring the sexual cycle. Results foreground the hypothesis that organic extracts of A. nidulans act on the genetic program of A. nidulans by regulating proliferation and cell cycle. All evidence show that the Brazilian mushroom P. ostreatoroseus has medicinal qualities and contributes towards the popularization of its intake and culture. In fact, addition in the diet benefits health78 f. : il. (algumas col.)
Potencial aplicação de β- GLUCANOS de Pleurotus ostreatoroseus por meio de nanopartículas: uma revisão da literatura
Get PDFThe Pleurotus ostreatoroseus mushroom is a native species, popularly knowm as pink
shimeji. Marketed worldwide, they have great relevance in the current scenario, being able
to contribute in the sustainable development of functional foods and new medcines. The
chemical characterization and bioactivity of this species of basidiomycete showed that its
βglucan polysaccharides, presente effects on the imune system acting as immunomodulators
and antimutagenics. Thus, the current bibliographic review was carried out in order to discuss
the possible applications of this polysaccharide in disease treatments and preventions.
Therefore, a scan about biological effects of β-glucans as well the use of nanotechnology to
optimize applications in biological systems have been made, noting that glucans are relevant
in order to function as nanoparticles carriers, due to being used as reducing adents and
stabilizing metal ions. Nanoparticle formulations when encapsulated facilitate absorption in
the delivery tissues, due to their nanoscopic scale. Thus, the dofferent mechanisms of
βglucans of the basidiomycete and their possible application in the body were addressed in
this bibliographic review, showing that it is possible to encapsulate it. However, it is
important to certify the recommendations onsafety and/or risks associated with its in vivo
consumption while elucidating its nutraceutical characteristics.O cogumelo Pleurotus ostreatoroseus é uma espécie nativa, conhecido popularmente como
shimeji rosa. Apresenta relevância no cenário atual, podendo contribuir no desenvolvimento
sustentável de alimentos funcionais e de novos medicamentos. A caracterização química e a
bioatividade dessa espécie de basidiomiceto apontam que seus polissacarídeos, os βglucanos, apresentam efeitos no sistema imunológico, atuando como imunomoduladores e
antimutagênicos. À vista disso, o objetivo deste trabalho foi realizar uma revisão
bibliográfica descrevendo a composição medicinal da substância bioativa β-glucano, isolado
do cogumelo da espécie P. ostreatoroseus, discutindo possíveis aplicações a partir dos
avanços científicos, com utilização de nanopartículas na prevenção e tratamento de algumas
doenças. Para tanto, foi feita uma varredura acerca dos efeitos biológicos dos β-glucanos, e
do uso da nanotecnologia para otimizar as aplicações em sistemas biológicos. Com isso,
constatou-se que os glucanos são promissores na função de carreadores de outras
nanopartículas, pois são utilizados como agentes redutores e estabilizadores de íons
metálicos. As formulações de nanopartículas, quando encapsuladas, facilitam a absorção nos
tecidos de entrega, em razão de sua escala nanoscópica. Portanto, foram abordados nesta
revisão bibliográfica, os diferentes mecanismos de atuação dos β-glucanos do basidiomiceto
e sua possível aplicação no organismo, revelando a viabilidade de encapsulá-los. Com efeito
final, busca-se atestar as recomendações sobre a segurança e/ou riscos associados ao seu
consumo in vivo, ao passo que, sejam elucidadas suas características nutracêutica
APLICAÇÃO DE SILECIAMENTO GÊNICO COMO TRATAMENTO PARA O MAL DE ALZHEIMER: UMA REVISÃO BIBLIOGRÁFICA.
Get PDFO Mal de Alzheimer é uma doença caracterizada pela perda episódica de memória e o seu tratamento é possível apenas utilizando a terapia gênica. Para verificar os avanços no tratamento para esta doença este estudo teve como objetivo a realização de uma revisão bibliográfica sobre o uso da técnica de terapia gênica por silenciamento gênico via RNA de interferência sobre os genes que atuam na patogênese do Mal de Alzheimer. A doença tem origem genética e neste caso não há cura ficando os tratamentos convencionados limitados a manutenção da qualidade de vida. Foi verificado que o método capaz de verdadeiramente curar a doença pode ser a terapia gênica por sileciamento dos genes implicados no Mal de Alzheimer via RNA de interferente. O mecanismo empregado pelo RNA Interferente (RNAi) é de silenciamento pós-
transcricional, ou seja, o gene será transcrito normalmente, porém não conseguirá ser traduzido, pois antes o RNA mensageiro (RNAm) sofrerá clivagem pela enzima argonauta complexada, o que conduz a não expressão das proteínas responsáveis pela formação da placa amiloide. Neste sentido é possível que esta tecnologia possa ser aplicada para o tratamento de portadores do Mal de Alzheimer impedindo a manifestação precoce dos sintomas
UTILIZAÇÃO DE RECURSOS DE INFORMÁTICA PARA O DESENVOLVIMENTO DE ANIMAÇÕES EM BIOLOGIA CELULAR
Get PDFNo desenvolvimento da matéria Biologia Celular, disciplina básica do currículo do curso de Ciências
Biológicas, as estruturas celulares e os complexos mecanismos que ocorrem nas células devem ser
compreendidos pelos acadêmicos com os diferentes tipos de inteligências encontrados em uma sala de aula. Muitos alunos são capazes de assimilar estas informações nas aulas expositivas convencionais, outros, no entanto, necessitam de alternativas complementares para o entendimento adequado do conteúdo. A grande quantidade de informações exige muitas aulas expositivas, e aliadas ao conhecimento exigido do aluno, dificulta muitas vezes a aprendizagem. A apreensão de determinados conteúdos pode ser maximizada utilizando-se recursos alternativos, como as ferramentas de informática atuais. O objetivo deste projeto é explorar os atuais recursos de informática, como os programas que permitam a elaboração de animações, para o enriquecimento da aprendizagem de processos celulares. As animações que vem sendo desenvolvidas constituem-se em importantes ferramentas na prática pedagógica, pois permitem a compreensão de diversos processos que ocorrem a nível microscópico, de forma mais próxima do mecanismo real que ocorre a nível celular. Muitos destes processos, celulares ou moleculares, podem ser mais facilmente entendidos com a utilização dos movimentos possibilitados pelas animações. Para o desenvolvimento da etapa inicial deste projeto foram escolhidos alguns assuntos considerados básicos na disciplina de Biologia Celular, dentre eles:
Permeabilidade através das Membranas Celulares, Replicação do DNA, Transcrição e Tradução. Utilizou-se o programa MACROMÉDIA Flash MX (versão 6.0) para o desenvolvimento das animações, após uma revisão bibliográfica realizada sobre o assunto. Pretende-se desenvolver, nas etapas posteriores deste trabalho, animações específicas sobre temas mais recentes da área, como a tecnologia das células - tronco, clonagem, e outros assuntos, para a produção em CD - Room para ser utilizado por acadêmicos e professores da área de Ciências Biológicas
IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE FUNGOS AGARICALES EM FRAGMENTO DE MATA ATLÂNTICA NA ZONA URBANA DE MARINGÁ-PR
No full textOs fungos têm o importante papel de decompositores de matéria orgânica em diferentes substratos como solo, húmus e madeira. Também são importantes na alimentação, sendo uma fonte nutricional rica em aminoácidos, proteínas, fibras e minerais e ao mesmo tempo possui baixo teor de lipídeos e calorias. A Ordem Agaricales, também conhecida como cogumelos e chapéus de sapo, possui cerca de 300 gêneros e cerca de 5.000 espécies conhecidas em todo mundo por serem utilizados como antitumorais, antibiótico, antimicrobiano, hipotensivo e coadjuvantes ao tratamento de neoplasias malignas pelo seu alto valor nutricional. Como metodologia, a coleta seguiu o percurso de trilhas existentes dentro da mata e nos locais comuns de passeio. Como critério, os espécimes coletados para identificação, foram necessários apresentar um número superior a cinco basidiomas por agregação. Ainda no campo foram registradas fotos dos espécimes, e coletadas informações sobre o substrato de crescimento e outras informações pertinentes que podem ser perdidas durante o transporte. Os espécimes coletados foram condicionados em saco de papel ou frascos separados para evitar contaminação cruzada de esporos e evitar danos ao basidioma. Este estudo realizou a identificação molecular destes fungos que estão presentes em um fragmento de Floresta Atlântica, localizado na região urbana da cidade de Maringá-PR e, através da bioinformática, foram confirmadas as espécies já identificadas. Além da identificação e registro das novas espécies nas bases de dados online GenBank, MycoBank e IndexFungorum, foram realizados o alinhamento das sequencias e análise filogenética através dos programas BLAST e MEGA de classificação filogenética para auxiliar futuros estudos
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