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Die Evolution der relativen Quantifizierung
No full textDie Reverse Transkription (RT) mit nachfolgender Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis einer spezifischen mRNA ist zu einem Routinewerkzeug in jedem molekularbiologischen Labor geworden. Eine Weiterentwicklung der RT-PCR ist die quantitative RT-PCR (qRT-PCR), die eine exakte Quantifizierung ermöglicht. Bei der qRT-PCR findet die Detektion bereits während der PCR-Amplifikation statt. Basierend auf fluoreszenzmarkierten Sonden oder sich anlagernden Fluorophoren kann die Vervielfältigung der Zielsequenz in Echtzeit verfolgt werden. In jedem Reaktionszyklus nimmt die Menge an fluoreszierenden PCR-Produkten und damit auch die Intensität der induzierten Fluoreszenzemission zu. Da die Zunahme der Fluoreszenz und die Menge an neusynthetisierten PCR-Produkten über einen weiten Bereich proportional zueinander sind, kann aus den gewonnenen Fluoreszenzdaten die eingesetzte Ausgangsmenge der cDNA, respektive RNA, bestimmt werden. Die vergleichende Expressionsanalytik ist in vielen molekularbiologischen Disziplinen, der universitären und industriellen Forschung, der Routinediagnostik sowie in der „Funktionellen Genomforschung“ von großem Nutzen
Effects of plate position, plate type and sealing systems on real-time PCR results
No full textReal-time PCR has become an important tool for quantitative nucleic acids analysis. By now, a wide rang of real-time PCR
instruments, PCR plastic consumables and sealing systems are available. In this study both transparent and white plates
were taken to test possible position and plate effects on quantitative PCR results on different real-time platforms: ep realplex (Eppendorf, Hamburg, Germany) and the iQ5 (Bio-Rad, Palo Alto, USA). Heat and adhesive sealing was used to compare sealing systems. Heterogeneity in Ct values was calculated to show possible effects of plate type and sealing system. Heterogeneity in amplification efficiency should show possible positional effects of 96-well plates.
White plates showed higher amplification efficiency because of higher fluorescence reflection. This had no significant effect on
the PCR efficiency but on the sensitivity of the quantification assay. Constant positional effects concerning wells, columns or
rows could not be detected
Einfluss der RNA-Integrität auf die quantitative real-time RT-PCR
No full textDie mRNA-Quantifizierung via real-time RT-PCR (qRT-PCR) findet heute Anwendung in einer Vielzahl molekularbiologisch orientierter Labore. Die Methode birgt allerdings – gerade
im Bereich der Prä-Analytik – zahlreiche Fehlerquellen. Vor allem die Messung der RNAQualität führt bis dato noch ein Schattendasein. Das führt häufig zu ungenauen Ergebnissen
oder zu erheblichen Variationen in den Expressionsergebnissen. Die Optimierung und Standardisierung der prä- und post-PCR stellen somit eine besondere Herausforderungen bei einer validen mRNA-Quantifizierung dar. Einmal mehr zeigt sich die Gesetzmäßigkeit, dass die Präzision der mRNA-Genexpressionsanalyse durch die Quantität und Qualität des Ausgangsmaterials, der total-RNA, signifikant beeinflusst wird. Die größte Verbesserung verspricht die Optimierung der Probenaufbereitung und die Bestimmung der RNA-Integrität, sowie die verbesserte Verrechnung der erhaltenen real-time RT-PCR-Daten
Bouwlogistieke innovaties weerbarstig te implementeren
No full textToelevering van bouwmaterialen aan bouwprojecten is complex en verregaande gesegregeerd. De bouwsector staat voor een kans te innoveren op het vlak van de bouwlogistiek. In het verleden is ervaring opgedaan met ‘best-practices’ die voldoende kansen bieden de noodzakelijk innovatie door te voeren. Via proeftuinen wordt in het TKI-project ‘4C in Bouwlogistiek’ gewerkt aan het implementeren van de ‘best-practices’: bouwlogistiek hubs, bouwtickets, vandaag voor morgen, opstelstrips en mobiele voorraadcontainers. Ervaring leert dat cultuurverschillen tussen bouwkundigen en logistici, en gebrek aan meten en vastleggen van gegevens de implementatie bemoeilijken. Echte innovatie gaat mogelijk komen van bedrijven die logistiek geheel anders gaan doen. Voorbeelden van concepten die voor innovatie in bouwlogistiek kunnen zorgen zijn te vinden bij: IKEA, Toyota, Zara, Uber. Ook 3Dprinting gaat de bouwlogistiek sterk beïnvloeden.Engineering, Systems and ServicesTechnology, Policy and Managemen
Human airway epithelial extracellular vesicle miRNA signature is altered upon asthma development
No full textBackground: miRNAs are master regulators of signaling pathways critically involved in asthma and are transferred between cells in extracellular vesicles (EV). We aimed to investigate whether the miRNA content of EV secreted by primary normal human bronchial epithelial cells (NHBE) is altered upon asthma development. Methods: NHBE cells were cultured at air-liquid interface and treated with interleukin (IL)-13 to induce an asthma-like phenotype. EV isolations by precipitation from basal culture medium or apical surface wash were characterized by nanoparticle tracking analysis, transmission electron microscopy, and Western blot, and EV-associated miRNAs were identified by a RT-qPCR-based profiling. Significant candidates were confirmed in EVs isolated by size-exclusion chromatography from nasal lavages of children with mild-to-moderate (n = 8) or severe asthma (n = 9), and healthy controls (n = 9). Results: NHBE cells secrete EVs to the apical and basal side. 47 miRNAs were expressed in EVs and 16 thereof were significantly altered in basal EV upon IL-13 treatment. Expression of miRNAs could be confirmed in EVs from human nasal lavages. Of note, levels of miR-92b, miR-210, and miR-34a significantly correlated with lung function parameters in children (FEV1FVC%pred and FEF25-75%pred), thus lower sEV-miRNA levels in nasal lavages associated with airway obstruction. Subsequent ingenuity pathway analysis predicted the miRNAs to regulate Th2 polarization and dendritic cell maturation. Conclusion: Our data indicate that secretion of miRNAs in EVs from the airway epithelium, in particular miR-34a, miR-92b, and miR-210, might be involved in the early development of a Th2 response in the airways and asthma
Modelling Gaia: towards an Actor-Network modelling framework in archaeology
No full textGreen Open Access added to TU Delft Institutional Repository ‘You share, we take care!’ – Taverne project https://www.openaccess.nl/en/you-share-we-take-care Otherwise as indicated in the copyright section: the publisher is the copyright holder of this work and the author uses the Dutch legislation to make this work public.Water Resource
Análisis del isótopo de oxígeno del Entierro 2.A, Pirámide de la Luna, Teotihuacan. 29. Arqueología
No full textSpence, M.W. y Denise To, “Los restos humanos de la primera
temporada de excavaciones en la Pirámide
de la Luna”, México, Informe al INAH, 2000,
mecanoescrito.White, C.D., et al., “Oxygen isotopes and the identification of
geographical origins: the Valley of Oaxaca versus
the Valley of México”, Journal of Archaeological
Science, núm. 25, 1998, pp. 643-655.White, C.D., M.W. Spence, Fred J. Longstaffe,
E. Rattray y K.R. Law
“Un análisis del isótopo oxígeno en los entierros
del Barrio de los Comerciantes”, ponencia
para La Segunda Mesa Redonda de Teotihuacan,
septiembre 2002.Ubelaker, D., Human skeletal remains: excavation, analysis and
interpretation, Chicago, Aldine Publishing, 1978
Special Order no. 177 (2 August 1864)
No full textLeave of absence (2 days) granted to M.W. Boyd to bringing absentees into camphttps://egrove.olemiss.edu/ciwar_milrec/1002/thumbnail.jp
Conceptualizing and implementing an agent-based model of an irrigation system
No full textGreen Open Access added to TU Delft Institutional Repository ‘You share, we take care!’ – Taverne project https://www.openaccess.nl/en/you-share-we-take-care Otherwise as indicated in the copyright section: the publisher is the copyright holder of this work and the author uses the Dutch legislation to make this work public.Water Resource
DARE-TU Project: Co-creation of Affordable and Clean Pumped Irrigation for Smallholders
No full textAccepted Author ManuscriptWater ResourcesDesign for Sustainabilit
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