219 research outputs found
Multiplex ABO-genotyping by minisequencing.
No full textThe minisequencing multiplex reaction to genotype ABO blood group system is described and discussed. This method was found to be a reproducible strategy to type 6 common alleles (A1, A2, B, 01, 01V, and 02) of the ABO blood group system, the high specificity and sensitivity make it suitable also in forensic science. It is more rapid than RFLP and SSCP analysis, resulting in unambiguous interpretation of ABO genotypes and newly discovered mutations are readily investigated by the addition of new extension primers in the minisequencing multiplex reaction
Characterization of the amsI gene product as a low molecular weight acid phosphatase controlling exopolysaccharide synthesis of Erwinia amylovora
No full textAbstractThe ams region, responsible for amylovoran synthesis of the fireblight pathogen Erwinia amylovora, contains the gene amsI encoding a 144 amino acid protein with homology to mammalian low molecular weight acid phosphatases [Bugert and Geider (1995) Mol. Microbiol. 15, 917–933]. A DNA fragment with amsI was cloned under the control of the lac promoter on a high copy number plasmid. The gene product of amsI is about 17 kDa in a protein expression system and had the enzymatic activity of an acid phosphatase. This is the first report about a low molecular weight acid phosphatase activity in prokaryotes. As part of the large ams transcript, expression of amsI was affected by the activator proteins RcsA and RcsB. Overexpression of amsI in E. amylovora caused a strong increase of acid phosphatase activity, but additionally a strong reduction in EPS synthesis, phenotypically similar to a mutation in the gene. The gene product may participate in changes of phosphorylation required for the biosynthesis of EPS such as recycling the lipid carrier diphosphate to the monophosphate form
The Presence of Functionally Relevant Toll-Like Receptor Polymorphisms Does Not Significantly Correlate with Development or Outcome of Sepsis
No full textAims: Members of the toll-like receptor (TLR) family have been shown to play important roles in inflammatory responses. Single-nucleotide polymorphisms (SNPs) altering receptor activity may either have detectable effects or might be without results due to compensatory mechanisms. We determined the genotype frequencies of functionally relevant SNPs in TLR2, 4 and 5 in critically ill patients (n = 150) from a multidisciplinary surgical intensive care unit (ICU). The inflammatory response (procalcitonin, C-reactive protein, white blood count) and clinical classification (Acute Physiology and Chronic Health Evaluation Score II, Simplified Acute Physiology Score II, Sepsis-related Organ Failure Assessment) were monitored daily. Results: The genetic polymorphisms correlate with neither development nor outcome of sepsis. No correlations were found between C-reactive protein or WBC and the investigated SNPs. In patients in the ICU with abdominal surgery and multiple trauma, the TLR2-R753Q SNP was associated with infection at ICU admission (p < 0.01); and for carriers of the TLR4-D299G SNP, a trend was observed (p = 0.0776). Patients with multiple trauma carrying the TLR4-D299G SNP displayed significantly higher levels of procalcitonin (p = 0.0212). Conclusions: None of the investigated SNPs clearly predicted outcome of sepsis-related multiorgan failure. TLR2-R753Q SNP may be a useful marker to identify patients with high risk to develop infections at ICU admission but should be validated in larger studies. Future SNP-arrays investigating predisposition for infection should include this SNP alone or in combination with other functionally relevant SNPs
Allelic Discrimination by TaqMan-PCR for Genotyping of Human Neutrophil Antigens
No full textNeutrophil antigens are implicated in a variety of clinical conditions, including neonatal immune neutropenia, transfusion-related acute lung injury, refractoriness to granulocyte transfusions, febrile transfusion reactions, and autoimmune neutropenia. In this report, we describe simultaneous genotyping of human neutrophil antigens (HNA)-1, -3, -4, and -5 using PCR with allele-specific TaqMan probes and end-point fluorescence detection, which is a robust, rapid, and reproducible method, allowing for high-throughput genotyping.</p
Database-augmented Mass Spectrometry Analysis of Exosomes Identifies Claudin 3 as a Putative Prostate Cancer Biomarker
No full textIn prostate cancer and other malignancies sensitive and robust biomarkers are lacking or have relevant limitations. Prostate specific antigen (PSA), the only biomarker widely used in prostate cancer, is suffering from low specificity. Exosomes offer new perspectives in the discovery of blood-based biomarkers. Here we present a proof-of principle study for a proteomics-based identification pipeline, implementing existing data sources, to exemplarily identify exosome-based biomarker candidates in prostate cancer. Exosomes from malignant PC3 and benign PNT1A cells and from FBS-containing medium were isolated using sequential ultracentrifugation. Exosome and control samples were analyzed on an LTQ-Orbitrap XL mass spectrometer. Proteomic data is available via Proteom-eXchange with identifier PXD003651. We developed a scoring scheme to rank 64 proteins exclusively found in PC3 exosomes, integrating data from four public databases and published mass spectrometry data sets. Among the top candidates, we focused on the tight junction protein claudin 3. Retests under serum-free conditions using immunoblotting and immunogold labeling confirmed the presence of claudin 3 on PC3 exosomes. Claudin 3 levels were determined in the blood plasma of patients with localized (n = 58; 42 with Gleason score 6-7, 16 with Gleason score >= 8) and metastatic prostate cancer (n = 11) compared with patients with benign prostatic hyperplasia (n = 15) and healthy individuals (n = 15) using ELISA, without prior laborious exosome isolation. ANOVA showed different CLDN3 plasma levels in these groups (p = 0.004). CLDN3 levels were higher in patients with Gleason >= 8 tumors compared with patients with benign prostatic hyperplasia (p = 0.012) and Gleason 6-7 tumors (p = 0.029). In patients with localized tumors CLDN3 levels predicted a Gleason score >= 8 (AUC = 0.705; p = 0.016) and did not correlate with serum PSA. By using the described workflow claudin 3 was identified and validated as a potential blood-based biomarker in prostate cancer. Furthermore this workflow could serve as a template to be used in other cancer entities
Recommendation for validation and quality assurance of non‐invasive prenatal testing for foetal blood groups and implications for IVD risk classification according to EU regulations
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Neue Aspekte zur Ätiologie und Diagnostik medikamentös induzierter Immunhämolysen
No full textDie medikamentös-induzierte immunhämolytische Anämie (DIIHA) ist eine seltene, aber
schwerwiegende Nebenwirkung einer Arzneimitteltherapie. Sie betrifft sowohl Erwachsene
als auch Kinder, und geht bei Letzteren mit einer Letalität von bis zu 50% einher. Rechtzeitig
erkannt, hat die DIIHA eine sehr gute Prognose, da die Hämolyse nach Weglassen des auslösenden
Agens in der Regel selbstlimitierend ist. Es gibt jedoch eine Reihe von Faktoren, die
zu Problemen in der Diagnosestellung führen. So ist das Krankheitsbild vielen Medizinern
wenig oder nicht bekannt. Ferner sind die klinischen Symptome sehr variabel und die
Diagnostik erfordert Erfahrung und wird nur in wenigen immunhämatologischen Speziallaboren
vorgehalten.
Seit der Erstbeschreibung einer DIIHA 1953 wurden bis dato mehr als 130 Substanzen als
Auslöser beschrieben, die Mehrzahl davon nur in einzelnen Fallberichten oder Fallserien. Die
vorgelegte Arbeit belegt anhand von Erstbeschreibungen die Bedeutung von Röntgenkontrastmitteln
(Iomeprol und Iohexol) als Auslöser akuter und schwerer Immunhämolysen.
Erstmals wurde ferner nachgewiesen, dass Etoricoxib, ein Cyclooxogenase-2-Hemmer, eine
akute immunhämolytische Anämie (IHA) verursachen kann.
Die Häufigkeit bestimmter Medikamente als Auslöser einer DIHA hat sich in den letzten
Jahrzehnten grundlegend geändert. Während in den USA in den 1970er Jahren fast ausschließlich
hochdosiert verabreichtes Penicillin und alpha-Methyldopa als Auslöser einer
DIIHA diagnostiziert wurden, haben in den letzten Jahrzehnten vor allem Cephalosporine der
zweiten und dritten Generation beide Substanzen vollkommen abgelöst. Entsprechende
Daten zum Spektrum der mit einer DIIHA assoziierten Medikamente für Deutschland fehlten
bislang und wurden erstmals im Rahmen der vorliegenden Arbeit dargelegt. Ferner wurde in
der Berliner Fall-Kontroll-Surveillance-Studie (FAKOS) erstmals systematisch das Risiko von
Medikamenten für die Entwicklung einer IHA untersucht. In dem untersuchten Kollektiv der
Berliner FAKOS bzw. der im Immunhämatologischen Referenzlabor des Instituts für
Transfusionsmedizin der Charité – Universitätsmedizin Berlin zwischen 1996 und 2015 untersuchten
Proben von Patienten mit IHA wurden übereinstimmend Diclofenac, Piperacillin,
Ceftriaxon und Oxaliplatin als häufigste Ursache für eine DIIHA identifiziert. Die Arbeit belegt
damit die Bedeutung dieser Medikamente als potentielle Auslöser einer IHA.
Die Pathogenese der DIIHA ist komplex und bisher nicht geklärt. Ob das Risiko einzelner
Substanzen, eine DIIHA auszulösen, unterschiedlich ist, oder ob es individuelle prädisponierende
Faktoren gibt, die zur Immunisierung und nachfolgender Bildung von medikamenteninduzierten
Antikörper führen, ist unklar. In einer Fallserie von Patienten mit Piperacillininduzierter
Immunhämolyse wurde erstmals eine mögliche Assoziation zwischen dieser und
Patienten mit Mukoviszidose hergestellt. In der anschließenden ersten prospektiven
Beobachtungsstudie an einer Kohorte von Patienten mit Mukoviszidose wurde diese
Beobachtung bestätigt. Es konnte dadurch erstmals gezeigt werden, dass die Prävalenz
Piperacillin-abhängiger Antikörper bei Patienten mit Mukoviszidose um das ca. 1000-fache
gegenüber der Allgemeinbevölkerung erhöht ist. Ferner wurde bestätigt, dass neben den
akuten und schweren Verläufen einer PIIHA, auch subklinische Hämolysen auftreten, die
vermutlich in der Praxis häufig nicht erkannt werden.
Die vorliegende Arbeit lieferte wichtige Erkenntnisse für die Sicherheit von Patienten mit
wiederholter Exposition gegenüber bestimmten Medikamenten, die besonders häufig eine
DIIHA verursachen. Dies trifft in besonderem Maße auf Patienten mit Mukoviszidose und
repetitiver Piperacillingabe zu. Diese sollten auf klinische und laborchemische Zeichen einer
Hämolyse überwacht werden. Im Falle eines positiven direkten Coombstest sollten die
Patienten auf das Vorhandensein von Piperacillin-abhängigen Antikörpern untersucht
werden.
Eine wesentliche Rolle im Rahmen der weiteren Erforschung der immunologischen Pathomechanismen,
die zu einer DIIHA führen, könnten der Nachweis und die Charakterisierung
von medikamentenspezifischen Lymphozyten spielen. Ferner könnte die systematische
Untersuchung prädisponierender Faktoren zur Risikoabschätzung des Auftretens einer DIIHA
von Bedeutung sein
Recent advances in molluscum contagiosum virus research
No full textMolluscum contagiosum virus (MCV) and variola virus (VAR) are the only two poxviruses that are specific for man. MCV causes skin tumors in humans and primarily in children and immunocompromised individuals. MCV is unable to replicate in tissue culture cells or animals. Recently, the DNA sequence of the 190 kbp MCV genome was reported by Senkevich et al. MCV was predicted to encode 163 proteins of which 103 were clearly related to those of smallpox virus. In contrast, it was found that MCV lacks 83 genes of VAR, including those involved in the suppression of the host response to infection, nucleotide biosynthesis, and cell proliferation. However, MCV possesses 59 genes predicted to code for novel proteins including MHC-class I, chemokine and glutathione peroxidase homologs not found in other poxviruses. The MCV genomic data allow the investigation of novel host defense mechanisms and provide new possibilities for the development of therapeutics for treatment and prevention of the MCV infection
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