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    Optimización de la fuente de nitrógeno, fósforo, calcio y hierro para incrementar la producción de ramnolípidos por Pseudomonas spp.

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    Publicación a texto completo no autorizada por el autorOptimiza la composición del medio de cultivo para aumentar la producción de ramnolípidos, se realizan una serie de experimentos con la finalidad de poder precisar las fuentes ideales de fósforo, nitrógeno y la evaluación del hierro como elemento inductor de la producción, para luego especificar las concentraciones ideales de fósforo, nitrógeno y calcio. En este trabajo se logra determinar la influencia de los componentes analizados, así se encuentra que la relación de pesos de carbono y nitrógeno es de 14,29 (11,73 g C/0,82 g N) de una mezcla de fuentes nitrogenadas (Urea y triptona), para fósforo es de 11,5 (11,73 g C/1,02 g P) usando tres fuentes de fósforo (K2HPO4, KH2PO4 y H3PO4). Se concluye que la concentración ideal para calcio es 50 mg por litro y que es necesario la suplementación con hierro (FeSO4.7H2O) con lo cual se logra incrementar la producción en 289,19%.Tesi

    Evaluación de las propiedades para biorremediación de las bacterias psicrotolerantes aisladas en la base peruana “Machu Picchu”- Antártida

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    Existen numerosos reportes de ambientes contaminados por petróleo a nivel mundial, y la Antártida no es la excepción. El método microbiológico más eficaz en la biorremediación de sitios contaminados con hidrocarburos es el uso de bacterias productoras de biosurfactantes. Precisamente, mediante la técnica del agar CTAB/MB nos permite encontrar a cepas que producen biosurfactante tipo ramnolípido (RL). El objetivo de este estudio fue evaluar la producción de RL de las cepas aisladas de la base peruana “Machu Picchu” en la Antártida. Además de demostrar si tienen actividad degradativa y emulsificante. El total de cepas analizadas fueron 10, las cuales se identificaron como: Pseudomonas aeruginosa , Pseudomonas putida , Aeromonas sp. (39Bfb), Stenotrophomonas rhizophila (116B) y Paenibacillus lautus . Estas bacterias demuestran la diversidad microbiana presente en los suelos antárticos. De las pruebas realizadas en el agar CTAB/ MB utilizando HCl para su revelado, no se obtuvo formación de halos en ninguna de las placas que contenían los inóculos de las 6 cepas que pertenecían al género Pseudomonas, concluyendo que éstas no son productoras de ramnolípidos. Esta investigación también demostró que las 10 cepas son de naturaleza psicrotolerante, tienen capacidad biodegradativa frente a crudo de petróleo y presentan actividad emulsificante. Pudiendo considerarse a estas bacterias como herramienta biotecnológica útil en los procesos de biorremediación microbiana para ambientes fríos como la Antártida

    Producción a nivel piloto de un biosurfactante ramnolípidico con la cepa Pseudomonas aeruginosa 6K-11

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    Publicación a texto completo no autorizada por el autorOptimiza la producción de ramnolípidos a escala piloto con Pseudomonas aeruginosa 6K-11 en cultivos sumergidos por lotes. Con la finalidad de establecer los parámetros óptimos para la aireación, agitación y concentración de nitrógeno en la producción de ramnolipídos a escala piloto, se evaluaron dos niveles para cada factor: 0.25 vvm y 0.5 vvm (aireación), 50 RPM y 70 RPM (agitación) y 2.45 g/L y 4.89 g/L (concentración de NaNO3). Con estos tres factores y dos niveles para cada uno se evaluó la producción de ramnolípidos a escala piloto con el diseño experimental de Taguchi L4 [2]3 o arreglo L4.Tesi

    Biodegradación de alquilbenceno sulfonato lineal por un consorcio microbiano aislado del río Rímac y su estuario

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    Publicación a texto completo no autorizada por el autorVerifica la presencia de consorcios microbianos en el río Rímac, así como su aislamiento y caracterización, y cuantifica su capacidad degradativa sobre los detergentes del tipo alquilbenceno sulfonato lineal (LAS).Tesi

    Biodegradación bacteriana por bioestimulación en suelos contaminados con petróleo crudo

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    El problema de la contaminación ambiental con petróleo es de vital importancia, ya que causa efectos perjudiciales en los ecosistemas terrestres y acuáticos. La biodegradación de hidrocarburos en suelos, es una alternativa para el tratamiento de la contaminación con petróleo. En el presente estudio se ha evaluado la capacidad degradadora de bacterias, frente a los hidrocarburos componentes del petróleo de manera cuantitativa y cualitativa, mediante el uso de la bioestimulación con nitrógeno, fósforo y potasio y la bioaumentación. Se compararon 5 terrarios conformados de la siguiente manera: el primero por bacterias bioaumentadas reintroducidas con fertilizantes inorgánicos (B+F), el segundo por bacterias bioamentadas reintroducidas sin fertilizante (B-F), el tercero por bacterias nativas con fertilizantes inorgánicos (N+F), el cuarto por bacterias nativas sin fertilizantes inorgánicos (N-F) y el quinto el control abiótico (CA).--- The environmental contamination problem whit oil spills mainly crude is important for the bad effects in earth and water ecosistems. In the present study the capacity of bacterial for the hydrocarbons degradation cuantitative and cualitatively with use of inorganica fertilizers with nitrogen, phosfore and potassium (biostimulation) and the enhanced of bacterial cultures (bioaumentation). We compared 5 containers: the first with enhanced bacterial culture and the inorganic fertilizers (B+F), the second with a enhanced bacterial cultures witout inorganic fertilizers (B-F), the third with bacterial cultures isolated of Cañete soil with inorganic fertilizers (N+F), the fourth with bacterial cultures isolated of Cañete soil without inorganic fertilizers (N-F) and the fifth, abiotic control (CA).Tesi

    Biodegradación de crudo de petróleo en terrarios

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    En Perú se registran derrames de petróleo desde 1978, los cuales contaminan el medio ambiente. Ante este problema surge la biorremediación como alternativa de solución, la cual es el tratamiento biológico de suelos, agua y aire, mediante la biodegradación. En el trabajo se evaluó la biodegradación de crudo de la refinería “La Pampilla” en suelos de cultivo de una zona aledaña a la huaca San Marcos contenidos en terrarios, con la finalidad de determinar la importancia de consorcios bacterianos y factores ambientales en la degradación de hidrocarburos. En una primera etapa, se aislaron bacterias oleofílicas a partir de muestras de suelo de Trompeteros, Iquitos, según el método planteado por Merino, 1998, para seleccionar un consorcio bacteriano de elevada capacidad degradativa (C.D) en laboratorio, la C.D se determinó mediante la prueba de actividad emulsificante (A.E) planteada por Goldman y col. en 1982 y por la prueba de actividad degradativa (A.D) según Mills y col. en 1978. La biodegradación de petróleo se evaluó con la tecnología Landfarming, utilizada por Belloso y col. en 1998. El petróleo presentaba 95.77 % de hidrocarburos saturados acíclicos y el suelo de cultivo era fértil franco arenoso con 0.0015 % de Carbono, 2.6% de Nitrógeno, 0.005% de Fósforo y 0.49% de Potasio. Se acondicionaron tres terrarios cada uno con 30 kg de suelo de cultivo contaminado con petróleo. El control abiótico donde se determinó la degradación por factores ambientales, el segundo donde se evaluó la degradación por bacterias nativas y el último donde se inoculó el consorcio bacteriano exógeno seleccionado en laboratorio. Cada treinta días se determinó: hidrocarburos totales, humedad, pH, número de microorganismos aerobios mesófilos, número de microorganismos oleofílicos, temperatura y tiempo. Los terrarios fueron expuestos a la intemperie durante noventa días. Se aislaron cientoventinueve cepas bacterianas, de las cuales, 99.22% presentaron A.E que fluctuó entre 0.75 y 3.66 UAE/mL (unidades de actividad emulsificante) Las cepas bacterianas de mayor A.E fueron: Pseudomonas aeruginosa 4k-1, Bacillus sp. 6Bh-1 y Serratia rubidae 6B9, las que presentaban una A.E de 3.66 UAE/mL, 1.676 UAE/mL y 2.72 UAE/mL respectivamente y una actividad de tres (3+) equivalente a una A.D. buena. En cuanto a la biodegradación, a los noventa días se obtuvo, 92.5 % de degradación en el terrario del consorcio bacteriano exógeno, respecto a 60 % del terrario del consorcio nativo y a 55 % del terrario denominado control abiótico. Según la Regresión múltiple de Stepwise, en la degradación de hidrocarburos, influyeron los microorganismos con un coeficiente estándar del 0.883 y una confiabilidad próxima al 100%. Se concluyó que en suelos de Trompeteros, Iquitos, existen bacterias oleofílicas, con las cuales se puede formar un consorcio bacteriano capaz de degradar significativamente el crudo de petróleo a nivel de terrarios con una confiabilidad próxima al 100 %. Palabras clave: biorremediación, crudo, huaca, biodegradación, consorcio, saturados acíclicos, oleofílicos, emulsificante, tecnología landfarming, terrarios, control abiótico, exógeno, aerobios mesófilos, regresión múltiple de Stepwise, coeficiente estándar, confiabilidad.In Peru, oil spills that pollute the environment were registered since 1978, so the bioremediation was proposed as biological treatment of soil, air and water based on biodegradation. At this work it was tested the crude oil biodegradation of the “La Pampilla” refinery in field soils that were near San Marcos’ huaca to determine the activity of microorganisms and environmental factors in hydrocarbon degradation. First, the oleofilic bacteria were isolated from Trompeteros, Iquitos soils with Merino’s method, 1998, to select a high degradative capacity bacterial consortium at lab and determine the degradative capacity by the assay of emulsificant activity of Goldman et al., 1982 and the degradative activity of Mills et al. 1978. The crude biodegradation was tested with the landfarming technology used by Belloso et al., 1998. The oil had a 95.77% of saturated acyclic hydrocarbons, at the same time the soil used was classified as fertile with a concentration of 0.0015% of Carbon, 2.6% of Nitrogen, 0.005% of Phosphorus and 0.49% of Potassium. It was used three containers each one with 30 kg of field soil polluted with oil: The abiotic control where it was determined the environmental factors biodegradation, the second where it was tested the native bacteria degradation and the last where the exogenous consortium chosed at lab was inoculated. Each thirty days it was quantified: total hydrocarbons, moisture, pH, number of aerobia mesofilic microorganisms, number of oleofilic microorganisms, temperature and time. The soils in the containers were exposed at the environment during ninety days. In the isolation it was found 129 strains, 99.2% had a emulsificant activity since 0.75 until 3.66 UAE/mL, emulsificant activity units. The strains with highest emulsificant activity were: Pseudomonas aeruginosa 4k-1, Bacillus sp. 6Bh-1 and Serratia rubidae 6B9, wich had 3.66 UAE/mL, 1.676 UAE/mL and 2.72 UAE/mL respectively and a degradative activity of three (3+) equal to good activity. About the biodegradation, after ninety days we obtained 92.5% of biodegradation using the exogenous consortium compared with a 60 % of biodegradation produced by the native consortium and 55 % of degradation in the abiotic control. Besides it was applied the Stepwise Regression Model for the Variables Selection and found that only the microorganisms were important in the biodegradation process, with a standardized coefficient of 0.883 and about 100% of reliability. It was found that there are oleofilic bacteria at Trompeteros, Iquitos’soil , and that it’s posible to get a bacterial consortium wich is able to oil biodegradation with a reliability of 100 %. Key words: bioremediation, crude oil, huaca, biodegradation, consortium, saturated acyclic, oleofilic, emulsificant, landfarming technology, containers, abiotic control, exogenous, aerobia mesofilic, Stepwise Regression Model, Standardized coefficient, reliability.Tesi

    Caracterización molecular de genes asociados a la producción de ramnolípidos en microorganismos aislados de ambientes contaminados por petróleo en el Perú

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    Publicación a texto completo no autorizada por el autorCaracteriza los genes asociados a la producción de ramnolípidos en 61 cepas bacterianas provenientes de la colección del Laboratorio de Microbiología y Biotecnología Microbiana de la Univerdiad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM). Estas cepas han sido aisladas de diferentes ambientes contaminados con crudo de petróleo y fueron clasificados como superproductores de ramnolípidos (n=21), productores de ramnolípidos (n=20) y no productoras de ramnolípidos (n=20). La identificación molecular de los microorganismos usando el gen 16s rRNA estuvo precedida por la identificación bioquímica de las 61 cepas seleccionadas utilizando el sistema API 20 NE. Los cebadores para la detección de los genes rhl fueron diseñados por el Laboratorio de Biología Molecular de la Universidad Autónoma de México (UNAM). Se utilizó PCR y el software FinchTV para el secuenciamiento de la región génica rhlABR y el programa MUSCLE para el análisis bioinformático. Cuatro especies fueron seleccionadas: P.aeruginosa T2K2, P. aeruginosa III T1P2, P. aeruginosa 6K-11, P. aeruginosa ATCC 9027; y fueron comparadas molecularmente con P. aeruginosa PAO1. Se encontró que el 71,4 % y el 90,0% de las cepas superproductoras de ramnolípidos y de las cepas productoras de ramnolípidos, fueron identificadas como Pseudomonas aeruginosa, especies como Burkholderia cepacia, Pseudomonas fluorescens, Aeromonas hydrophila y Chryseobacterium indologenes, fueron también identificadas. Del mismo modo, 55,0% de microorganismos no productores también fueron caracterizadas como P.aeruginosa. x Las regiones génicas rhlAB, rhlC y rhlR presentadas en las cepas superproductoras y productoras de ramnolípidos y las secuencias de todas las cepas mostraron el mismo patrón entre ellas y el estandar P. aeruginosa PAO1. Los resultados muestran que los genes estudiados en las cepas seleccionadas son sinónimos con sus homólogos en la cepa estándar P. aeruginosa PAO1, de modo que las diferencias genotípicas que expliquen la sobreproducción de ramnolípido deberan hallarse en otros marcadores moleculares no cubiertos en este estudio.Tesi

    Detección e identificación molecular de Leishmania (Viannia) guyanensis en garrapatas de la especie Rhipicehaulus (Boophilus) microplus colectadas de Pecari tajacu, Madre de Dios

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    Examina una muestra de garrapatas obtenidas de porcinos silvestres, Tapirus terrestris (“tapir o sachavaca”) y tres Pecari tajacu (“sajino”) de los distritos de Tahuamanú y Las Piedras, respectivamente. Se obtuvieron 81 garrapatas: 14 Amblyomma naponense, 18 Amblyomma scalpturatum, 3 Amblyomma oblongoguttatum, 4 Amblyomma latepunctatu, 1 Amblyomma ovale, y 41 Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Luego de la identificación macroscópica y microscópica de los especímenes, se procedió a extraer el DNA y se identificó por PCR el kDNA de Leishmania (Viannia) en tres Rhipicephalus (Boophilus) microplus colectadas de Pecari tajacu y en una de ellas por PCR-HRM se pudo identificar a Leishmania (V.) guyanensis, agente causal de la leishmaniasis cutánea. Por lo tanto estos hallazgos amplían la información y distribución de Leishmania (V) guyanensis encontrado en Rhipicephalus (Boophilus) microplus en zonas silvestres y que podrían vincularse a nuevas formas de transmisión del agente causal de la enfermedad, argumentando la importancia del estudio de las garrapatas y su relación como agente transmisor de Leishmania sp.Tesi

    Evaluación de la eficacia de un consorcio bacteriano aislado en la base peruana “Machu Picchu”- Antártida en la bioremediación de suelos contaminados con hidrocarburos de petróleo, a nivel de terrarios

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    La contaminación por hidrocarburos de petróleo en ecosistemas terrestres y acuáticos representa un problema ambiental en todo el mundo, incluyendo el continente Antártico, estos hidrocarburos son utilizados como combustible y traen consigo la contaminación de suelos de las estaciones científicas y zonas aledañas. Existen consorcios bacterianos conformados por bacterias psicrófilas y psicrotolerantes con capacidad bioremediadora, logrando degradar hidrocarburos a bajas temperaturas. En este trabajo se evaluó la eficacia de un consorcio bacteriano aislado de la Base Peruana “Machu Picchu” – Antártida en la bioremediación de suelos, en laboratorio. El consorcio bacteriano psicrotolerante estuvo integrado por: Pseudomonas putida (63Bb, 9Ab, 60Bf y 39 Bfa), Pseudomonas sp. 9Aa, Pseudomonas aeruginosa 63Ba, Aeromonas sp. 39Bf, Stenotrophomonas rhizophila 116B y Paenibacillus lautus (95Fa y 95Fb). Se acondicionaron 3 terrarios (23cm x 12cm x 8cm) con 1.3 Kg de suelo contaminado con petróleo (5% p/p); el primero fue inoculado con el consorcio psicrotolerante, el segundo con un consorcio bacteriano control positivo formado por 2 cepas de Pseudomonas aeruginosa (68P y 202P) y un Bacillus subtilis (202G) aisladas de la zona Norte del Perú y el tercero fue el control abiótico. El proceso duró 180 días a 4 - 5°C, evaluando la biodegradación de petróleo a través de la cuantificación de los hidrocarburos por métodos gravimétrico (3540 EPA-SOXHLET) y saturación de fluidos (API RP40 - RETORTA), conteo de microorganismos viables y medición de los parámetros físico - químicos de cada terrario en intervalos de 30 días. Los resultados mostraron que el crecimiento bacteriano aerobio fue exponencial hasta los 120 días, con un máximo valor de 2.18 x 105 UFC/g y las bacterias psicrotolerantes hidrocarbonoclásticas alcanzaron 4.3 x 104 NMP/g, lo cual coincide con el 57.88% de reducción registrada en 120 días. Finalmente, al cabo de 180 días, se observó reducción mínima de hidrocarburos en los terrarios control positivo y abiótico, 37.30 % y 11.96% respectivamente; alcanzándose en el terrario psicrotolerante una reducción significativa de 58.41% (p<=0.007). Se concluye que este consorcio psicrotolerante fue efectivo en la bioremediación de suelos contaminados con hidrocarburos de petróleo a nivel terrarios, controlando humedad y pH.Tesi

    Evaluación de la capacidad hidrocarbonoclástica de un consorcio formulado con bacterias aisladas de canchas de tratamiento de tierra contaminada con petróleo

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    A pesar de que en el Perú se realiza una intensiva actividad en el sector hidrocarburo, actualmente no existe un inventario de suelos contaminados por petróleo, por lo cual no se conoce la verdadera magnitud de la contaminación; aun cuando las demandas sociales para la aplicación de medidas de mitigación del impacto ambiental son cada vez mayores. La biorremediación se perfila como una alternativa viable a las técnicas físico-químicas de mayor costo e impacto ambiental para el manejo de suelos contaminados; sin embargo, es necesaria su adecuación para cada situación particular, por lo cual en este trabajo se realiza la evaluación de la capacidad degradativa y emulsificante de cepas bacterianas y la formulación de un consorcio para el tratamiento de tierra contaminada con petróleo en una zona específica. Se seleccionaron 30 cepas bacterianas aisladas de canchas de tratamiento de tierra contaminada con petróleo, de las cuales se obtuvieron 44 cepas para su evaluación. Nueve cepas presentaron actividad degradativa y 3 cepas mostraron alta actividad emulsificante, con perfiles degradativo variados en el crecimiento de borra, kerosene, diésel y parafina; se pre-seleccionaron 7 cepas con las mejores características para las ejecución de las pruebas de antagonismo. El consorcio bacteriano se formuló con 3 cepas: Pseudomonas aeruginosa C1BHIC5, Pseudomonas aeruginosa C3ACETC53a y Bacillus subtilis C3ACETC53b, finalmente se determinó que el porcentaje de reducción atribuible al consorcio microbiano formulado es del 25,25%. Estos resultados muestran que cepas aisladas con capacidad hidrocarbonoclástica pueden servir para la formulación de un consorcio aplicable a una situación particular.Tesi
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