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Anthropometric and physiological changes in elite female water polo players during a training year
No full textThe aim of the current study was to monitor physiological and anthropometric characteristics of elite female water polo players within the periodized training year. Fourteen subjects participated in the current study. However, only six subjects (Mean ± SD: Age 22.8 ± 3.7 years, Height 171.0 ± 10.8 cm, Body Mass 66.3 ± 4.7 kg) completed all sessions and thus were used for subsequent analyses. Subjects undertook testing in the general preparation, specific preparation and competition phases, with the final session being during the peaking component of the competition phase. Laboratory-based physiological measurements comprised peak oxygen uptake, anaerobic power, leg power, strength and flexibility, while anthropometric measurements included body fat percentage. Sport-specific tests involved the Multistage Swimming Shuttle Test (MSST) and the 30-second crossbar jumps. A repeated measures ANOVA revealed significant differences between testing sessions for body mass (F3,15 = 4.025, P = 0.028), body fat (F3,15 = 9.194, P = 0.001), MSST (F3,15 = 5.050, P = 0.017) and crossbar jumps (F2,10= 16.034, P = 0.001). No statistically significant differences were found for any other variables. The results of the study suggest that changes in anthropometric characteristics and performance parameters of elite female water polo players over a periodized training year occur with no changes in laboratory-based physiological measurements
On the regulation of centriole duplication in human cells : exploring the interactions of polo-like kinase 4 with the centrosomal proteins Cep192 and STIL
No full textCentrioles duplicate once in each cell cycle to give rise to two centrosomes that form the spindle poles during mitosis. Aberrant centriole duplication can result in the formation of supernumerary centrosomes, leading to incorrect spindle assembly and chromosome segregation errors, thereby possibly contributing to carcinogenesis (Ganem et al., 2009; Nigg, 2002; Zyss and Gergely, 2008). Thus, to ensure genome stability, centriole duplication has to be precisely regulated. Polo-like kinase 4 (PLK4) is a key regulator of centriole duplication (Bettencourt-Dias et al., 2005; Habedanck et al., 2005). PLK4 is characterized by an N-terminal Ser/Thr kinase domain and three C-terminal Polo-boxes (PB1-PB3) (Slevin et al., 2012). The PB1-PB2 domain is required for PLK4's centrosomal localization and binding to Cep152 (Cizmecioglu et al., 2010; Hatch et al., 2010; Slevin et al., 2012). In contrast to PB1-PB2, no binding partners have been described for PB3.
Here, we identify Cep192 and STIL as novel interaction partners of PLK4-PB1-PB2 and PLK4-PB3, respectively. In the first part of this study, we reveal that Cep192 directly binds PB1-PB2 via a short region within its N-terminus, which contains conserved patches of acidic residues. We show that also in the case of Cep152 a short N-terminal acidic region is critical for the binding to PB1-PB2. These acidic regions of Cep192 and Cep152 enable electrostatic interactions with positively charged residues of the PB1-PB2 domain in order to promote PLK4 centriolar recruitment (Sonnen et al., 2013). In the second part of this study, we identify STIL as the first known binding partner of PLK4-PB3. We show that the coiled-coil motif of STIL (STIL-CC) is necessary and sufficient for this interaction and thus important for centriole duplication. Based on a collaboration for crystallographic and NMR analyses, we furthermore demonstrate that PB3 adopts a canonical PB fold, and that the PLK4-PB3/STIL-CC binding mimics coiled-coil formation. Analysis of structure-guided STIL mutants suggests a dual binding mode of STIL-CC to PB3 and L1 of PLK4 (linker between the catalytic domain and the PB domains). Taken together, we propose a speculative model for the initial steps of procentriole assembly according to which PLK4 is recruited to centrioles by electrostatic interactions between PB1-PB2 and Cep192/Cep152, and thereafter is stabilized and activated via STIL-CC binding to PB3 and L1
Evaluación de la función visual, de la capa de fibras nerviosas de la retina y de la colorimetría de la cabeza del nervio óptico como biomarcadores en pacientes con Alzheimer y fibromialgia
No full textEvaluación de la función visual (agudeza visual, campimetria automatizada, test de color), de los espesores de la capa de fibras nerviosas de la retina medidos mediante 2 dispositivos de OCT (Tomografía de coherencia óptica) y de la colorimetría de la cabeza del nervio óptico (medición mediante una fotografía de la saturación de hemoglobina a través del análisis de color de la misma) como posible uso de los mismos como biomarcadores para el diagnóstico de la Enfermedad de Alzheimer y de la fibromialgia. Demostrándose la utilidad.Artículos empleados para la redacción de la tesis doctoral1. Bambo MP, Garcia-Martin E, Gutierrez-Ruiz F, Pinilla J, Perez-Olivan S, LarrosaJM, Polo V, Pablo L. Analysis of optic disk color changes in Alzheimer's disease: apotential new biomarker. Clin Neurol Neurosurg. 2015 May;132:68-73. doi: 10.1016/j.clineuro.2015.02.016. Epub 2015 Mar 9. PubMed PMID: 25797847.2. Bambo MP, Garcia-Martin E, Gutierrez-Ruiz F, Magallon R, Roca M, Garcia-Campayo J, Perez-Olivan S, Polo V, Larrosa JM, Pablo LE. Study of perfusion changesin the optic disc of patients with fibromyalgia syndrome using new colorimetricanalysis software. J Fr Ophtalmol. 2015 Sep;38(7):580-7. doi: 10.1016/j.jfo.2015.01.010.Epub 2015 May 11. PubMed PMID: 25976129.3. Garcia-Martin E, Garcia-Campayo J, Puebla-Guedea M, Ascaso FJ, Roca M,Gutierrez-Ruiz F, Vilades E, Polo V, Larrosa JM, Pablo LE, Satue M. Fibromyalgia iscorrelated with retinal nerve fiber layer thinning. PLoS One. 2016 Sep;11(9):e0161574.doi: 10.1371/journal.pone.0161574. eCollection 2016. PubMed PMID: 27584145;PubMed Central PMCID: PMC5008644.4. Bambo MP, Garcia-Martin E, Larrosa JM, Polo V, Gutiérrez-Ruiz F, Villages E,Gil-Arribas L, Pablo LE. Retinal and optic disc alterations in Alzheimer’s disease: theeye as a potential central nervous system window. J Alzheimers Dis Parkinsonism2016;6:223. doi: 10.4172/2161-0460.1000223<br /
Toxicity modelling of Plk1-targeted therapies in genetically engineered mice and cultured primary mammalian cells
No full textHigh attrition rates of novel anti-cancer drugs highlight the need for improved models to predict toxicity. Although polo-like kinase 1 (Plk1) inhibitors are attractive candidates for drug development, the role of Plk1 in primary cells remains widely unexplored. Therefore, we evaluated the utility of an RNA interference-based model to assess responses to an inducible knockdown (iKD) of Plk1 in adult mice. Here we show that Plk1 silencing can be achieved in several organs, although adverse events are rare. We compared responses in Plk1-iKD mice with those in primary cells kept under controlled culture conditions. In contrast to the addiction of many cancer cell lines to the non-oncogene Plk1, the primary cells' proliferation, spindle assembly and apoptosis exhibit only a low dependency on Plk1. Responses to Plk1-depletion, both in cultured primary cells and in our iKD-mouse model, correspond well and thus provide the basis for using validated iKD mice in predicting responses to therapeutic interventions
Mitotic centromere-associated kinesin (MCAK) : a potential cancer drug target
No full textThe inability to faithfully segregate chromosomes in mitosis results in chromosome instability, a hallmark of solid tumors. Disruption of microtubule dynamics contributes highly to mitotic chromosome instability. The kinesin-13 family is critical in the regulation of microtubule dynamics and the best characterized member of the family, the mitotic centromere-associated kinesin (MCAK), has recently been attracting enormous attention. MCAK regulates microtubule dynamics as a potent depolymerizer of microtubules by removing tubulin subunits from the polymer end. This depolymerizing activity plays pivotal roles in spindle formation, in correcting erroneous attachments of microtubule-kinetochore and in chromosome movement. Thus, the accurate regulation of MCAK is important for ensuring the faithful segregation of chromosomes in mitosis and for safeguarding chromosome stability. In this review we summarize recent data concerning the regulation of MCAK by mitotic kinases, Aurora A/B, Polo-like kinase 1 and cyclin-dependent kinase 1. We propose a molecular model of the regulation of MCAK by these mitotic kinases and relevant phosphatases throughout mitosis. An ever-increasing quantity of data indicates that MCAK is aberrantly regulated in cancer cells. This deregulation is linked to increased malignance, invasiveness, metastasis and drug resistance, most probably due to increased chromosomal instability and remodeling of the microtubule cytoskeleton in cancer cells. Most interestingly, recent observations suggest that MCAK could be a novel molecular target for cancer therapy, as a new cancer antigen or as a mitotic regulator. This collection of new data indicates that MCAK could be a new star in the cancer research sky due to its critical roles in the control of genome stability and the cytoskeleton. Further investigations are required to dissect the fine details of the regulation of MCAK throughout mitosis and its involvements in oncogenesis
Entwicklung und Etablierung von induzierbaren RNAi-Systemen zur Regulierung der Expression von Polo-like Kinase 1 (Plk1) in vitro und in vivo
No full textRNA-Interferenz (RNAi) erlangte eine herausragende Bedeutung zum Studium der Genfunktion, nachdem auch in Säugersystemen gezeigt wurde, daß durch Applikation von 21 nt langen siRNAs (small interfering RNAs) eine Sequenz-spezifische Degradierung der mRNA-Transkripte kognitiver Gene erreicht werden konnte. Im Gegensatz zur antisense-Technologie erwies sich die Wirkung von siRNA im Hinblick auf die Hemmung der Genexpression um ein Vielfaches potenter und hoch spezifisch. Für eine längerfristige Unterdrückung von Genen kristallisierte sich die Methode der Plasmid-Vektor-vermittelten intrazellulären Expression von shRNA (short hairpin RNA) heraus, welche transient oder stabil angewendet werden kann. Diese exprimierte shRNA wird intrazellulär enzymatisch zu wirksamer siRNA prozessiert, welche den eigentlichen Enzym-vermittelten RNAi-Mechanismus der Degradierung von mRNA-Transkripten kognitiver Gene auslöst. Die Anwendung von RNA-Polymerase III-abhängigen Promotoren für die stabile konstitutive Expression von shRNA stellte ein großes Problem für behandelte Zellen dar, wenn es sich bei dem zu unterdrückenden Zielgen um ein Gen mit essentiellen Funktionen für die Zelle handelte. Im Falle der Polo-like Kinase 1 (Plk1), einer in vielen Spezies hoch konservierten Serin/Threonin-Kinase mit essentiellen mitotischen Funktionen, bedeutete eine dauerhafte und stringente Unterdrückung einen veränderten Phänotyp beteiligter Zellen, welcher sich durch Defekte bei mitotischen Ereignissen bemerkbar machte. Plk1 ist in zahlreiche mitotische Prozesse, wie den Eintritt der Zellen in die Mitose, die Segregation der Chromosomen und die Aktivierung des APC/C (anaphase promoting complex / cyclosome), eingebunden. Darüber hinaus ist bekannt, daß Plk1 in nahezu allen Tumorarten überexprimiert vorliegt und die Prognose von Tumorwachstum und Metastasierungspotential über den Plk1-Gehalt definiert werden kann. Des weiteren bewirkte eine RNAi-vermittelte Unterdrückung der Plk1-Expression bei Tumorzellen eine Hemmung der Zellproliferation mit Auslösung der Apoptose. Hingegen konnte bei gesunden primären Zellen weder eine signifikante Hemmung der Proliferation noch die Auslösung der Apoptose beobachtet werden, was die große Bedeutung von Plk1 als Ansatzpunkt für eine Krebstherapie hervorhebt. Um die Funktion von Plk1 im Hinblick auf molekularbiologische Zusammenhänge besser studieren zu können, war es notwendig, den intrazellulären Plk1-Gehalt zu variieren. Im Rahmen dieser Promotionsarbeit wurden dazu induzierbare RNAi-Elemente entwickelt, mit deren Hilfe die intrazelluläre Plk1-Expression konditionell inhibiert werden konnte. Unter Verwendung des prokaryotischen Tet-Systems wurden auf Basis des RNA-Polymerase abhängigen H1-Promotors durch Insertion von einer oder zwei Operatorsequenzen (TetO) für den Tetrazyklin-Repressor (TetR) an verschiedene Orte innerhalb der Sequenz des H1-Promotors drei induzierbare Promotor-Derivate geschaffen. Die drei entwickelten H1-Promotor-Derivate wurden zur Expression von shRNA gegen Plk1 eingesetzt und in bezug auf die Auslösung der RNAi-Antwort getestet und untereinander verglichen. Zu diesem Zwecke wurde der endogene Plk1-Gehalt von HeLa-Tumorzellen auf Transkript- und auf Proteinebene bestimmt. Die Zellen wurden zuvor mit Plasmid-Vektoren für konstitutive TetR-Expression und jeweils einer der verschiedenen shRNA-Expressions-Kassetten ko-transfiziert. Als Kontrollen dienten dabei Wildtyp-H1-Promotoren, welche zur konstitutiven Expression von shRNA gegen Plk1 und einer unwirksamen Kontroll-shRNA eingesetzt wurden. Mit Hilfe des synthetischen Tetrazyklin-Analogons Doxyzyklin, welches einen potenten Aktivator für TetR darstellt, konnten die hergestellten Promotor-Derivate induziert werden, was durch einen reduzierten intrazellulären Plk1-Gehalt sichtbar wurde. Dabei fiel auf, daß alle drei Promotor-Typen unterschiedliche Eigenschaften im nichtinduzierten Zustand wie auch im induzierten Zustand unter Anwesenheit von Doxyzyklin aufwiesen. Für die Basalaktivität in Abwesenheit von Doxyzyklin (leakiness) war die relative Lage der TetO-Sequenz(en) innerhalb des Promotors verantwortlich. So veränderte die Insertion einer TetO-Sequenz in 3’-Richtung der TATA-Box die Eigenschaften des Wildtyp-H1-Promotors weniger als die Insertion einer TetO-Sequenz in 5’-Richtung der TATA-Box. Zum Studium von Plk1 als Zielgen in der Krebstherapie wurde das Proliferationsverhalten von HeLa-Tumorzellen als Antwort auf die Doxyzyklin-vermittelte Induktion der shRNAExpression unter Kontrolle eines der induzierbaren Promotoren ermittelt. Dabei konnte die Proliferation von Tumorzellen durch einen reduzierten Plk1-Gehalt, welcher durch die Doxyzyklin-induzierte Auslösung der RNAi-Antwort vermittelt wurde, erfolgreich inhibiert werden. Zur Überprüfung der Eignung entwickelter Systeme, Tumorwachstum in vivo inhibieren zu können, wurden die entwickelten RNAi-Kassetten in das Genom von TetRexprimierenden HeLa-Zellen integriert und so stabile Klone geschaffen. Stabile HeLa-Klone zur induzierbaren Expression von Plk1-spezifischer shRNA, wie auch zur induzierbaren Expression von einer Kontroll-shRNA, wurden in die gegenüberliegenden Flanken von immunsupprimierten Nacktmäusen inokuliert, um anhand von Xenograft-Modellen einen direkten Vergleich des Tumorwachstums unter gleichen äußeren Bedingungen zu ermöglichen. Einem Teil der Mäuse wurde Doxyzyklin ins Trinkwasser gegeben, während Kontrollmäuse kein Doxyzyklin verabreicht bekamen. Das Tumorwachstum von Xenograft-Tumoren, welche aus Klonen zur Expression von shRNA gegen Plk1 hervorgingen, konnte in Doxyzyklin-behandelten Mäusen um 53% auf 47% an Tag 51 nach Inokulierung der Zellen inhibiert werden. Tumoren nicht-induzierter Mäuse, sowie Tumoren aus induzierten Mäusen, welche Kontroll-shRNA exprimierten, wuchsen dagegen unverändert in gleichem Maße. Anhand der in dieser Arbeit entwickelten induzierbaren H1-Promotor-Derivate zur konditionellen Auslösung von RNAi wurden wertvolle genetische Werkzeuge geschaffen, welche für das Studium der Genfunktion eingesetzt werden können. Im Falle der Unterdrückung von Plk1 können mit ihrer Hilfe sowohl grundlegende molekularbiologische Zusammenhänge studiert als auch die Bewertung von Plk1 als Zielgen in der Krebstherapie bewertet werden. Im Gegensatz zu kürzlich entwickelten Kinase-Inhibitoren, welche auf Proteinebene gegen Plk1 gerichtet sind und aufgrund ihrer bislang nicht nachgewiesenen Spezifität verwandte Kinasen in ihrer Wirkungsweise beeinflussen könnten, ist eine RNAibasierte Strategie hoch spezifisch und verspricht eine große Relevanz für zukünftige therapeutische Ansätze. Vorraussetzung für erfolgversprechende RNAi-basierte Strategien ist eine hohe Konservierung der Sequenz beteiligter Zielgene. Im Falle von Plk1 konnte eine hohe Konservierung durch Sequenzanalyse der Plk1-Gene von 15 Mamma-Karzinomen, 11 Ovarial-Karzinomen und mehrerer Tumorzellinien bestätigt werden
Rire et sacré : la vision humoristique de la vérité dans l'"Heptaméron" de Marguerite de Navarre
No full textRésumé / Abstract
Ce travail se propose comme sujet l´étude du rire, de la joie, de l´ironie et de l´humour dans le recueil de nouvelles de Marguerite de Navarre (1492-1549). Le premier but est de mieux saisir l´environnement philosophico-rhétorique, ecclésiastique, historique et littéraire de ces phénomènes. L´analyse du rire et de la joie dans le texte ainsi que des occurrences d´ironie et d´humour permettra aussi de s´interroger sur le message de Marguerite de Navarre à travers son Heptaméron. En tant que spécimens de l´homo ludens, les devisants, néanmoins menacés par la mélancolie, se livrent au jeu de la découverte de l´être humain tout en se sachant dans la main de Dieu. Quel profit tirent-ils de l´alternance des activités spirituelles et profanes qu´ils poursuivent pendant leurs huit jours au monastère ? Apprendraient-ils à pouvoir sourire et rire d´eux-mêmes, bref à se relativiser et ainsi à devenir de vrais courtisans évangéliques ? Considérant le point de départ de la reine de Navarre comme augustinien, c´est-à-dire que l´être humain est vu comme réalité insondable dont Dieu seul connaît les profondeurs, l´auteur proposerait à travers son recueil une vision de l´être qui n´en fait pas un drame.
Judith Perrenoud-Wörner (née en 1976) a fait ses études aux universités de Bâle, Glasgow et Pérouse. Elle a poursuivi en doctorat à Bâle et Paris IV avec le professeur Olivier Millet qui a accepté ce travail comme thèse de doctorat en février 2006. L´auteur est enseignante de français et d´anglais dans deux lycées bâlois. Elle est mariée et mère d´une fille
Quality Assurance of Solar Radiation Measurements
No full textSolar radiation measurements are necessary for every solar energy project to evaluate solar resource assessment studies. Quality assurance of solar radiation measurements is essential in all the stages of solar resource analysis. Model development and assessment, improvement of models and characterisation of the uncertainty, among others features, depend strongly on the accuracy and quality efforts in designing and operating the solar radiation ground station. This chapter summarises several aspects involved in ensuring the quality of solar radiation measurements, addressing the requirements for instrument selection and the quality methods applied to solar radiation data. This chapter has been written intended to be useful for project or group leaders involved in solar resource assessment and not a rigorous scientist text since the chapter presents a summary of many manuals for quality control
Nuclear receptor LRH-1/NR5A2 is required and targetable for liver endoplasmic reticulum stress resolution
No full textChronic endoplasmic reticulum (ER) stress results in toxicity that contributes to multiple human disorders. We report a stress resolution pathway initiated by the nuclear receptor LRH-1 that is independent of known unfolded protein response (UPR) pathways. Like mice lacking primary UPR components, hepatic Lrh-1-null mice cannot resolve ER stress, despite a functional UPR. In response to ER stress, LRH-1 induces expression of the kinase Plk3, which phosphorylates and activates the transcription factor ATF2. Plk3-null mice also cannot resolve ER stress, and restoring Plk3 expression in Lrh-1-null cells rescues ER stress resolution. Reduced or heightened ATF2 activity also sensitizes or desensitizes cells to ER stress, respectively. LRH-1 agonist treatment increases ER stress resistance and decreases cell death. We conclude that LRH-1 initiates a novel pathway of ER stress resolution that is independent of the UPR, yet equivalently required. Targeting LRH-1 may be beneficial in human disorders associated with chronic ER stress
Inhibiting Polo-like kinase 1 causes growth reduction and apoptosis in pediatric acute lymphoblastic leukemia cells
No full textThis study investigated Polo-like kinase 1, a mitotic regulator often over-expressed in solid tumors and adult hematopoietic malignancies, as a potential new target in the treatment of pediatric acute lymphoblastic leukemia. Polo-like kinase 1 protein and Thr210 phosphorylation levels were higher in pediatric acute lymphoblastic leukemia (n=172) than in normal bone marrow mononuclear cells (n=10) (P<0.0001). High Polo-like kinase 1 protein phosphorylation, but not expression, was associated with a lower probability of event-free survival (P=0.042) and was a borderline significant prognostic factor (P=0.065) in a multivariate analysis including age and initial white blood cell count. Polo-like kinase 1 was necessary for leukemic cell survival, since short hairpin-mediated Polo-like kinase 1 knockdown in acute lymphoblastic leukemia cell lines inhibited cell proliferation by G2/M cell cycle arrest and induced apoptosis through caspase-3 and poly (ADP-ribose) polymerase cleavage. Primary patient cells with a high Polo-like kinase 1 protein expression were sensitive to the Polo-like kinase 1-specific inhibitor NMS-P937 in vitro, whereas cells with a low expression and normal bone marrow cells were resistant. This sensitivity was likely not caused by Polo-like kinase 1 mutations, since only one new mutation (Ser335Arg) was found by 454-sequencing of 38 pediatric acute lymphoblastic leukemia cases. This mutation did not affect Polo-like kinase 1 expression or NMSP937 sensitivity. Together, these results indicate a pivotal role for Polo-like kinase 1 in pediatric acute lymphoblastic leukemia and show potential for Polo-like kinase 1-inhibiting drugs as an addition to current treatment strategies for cases expressing high Polo-like kinase 1 levels
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