161 research outputs found
Figure 3 in Notes on the embryological development of the Brevipalpus yothersi (Acari: Tenuipalpidae)
No full textFigure 3 Internal analysis of the B. yothersi eggs: small perforations with a possible association withPublished as part of Sinico, Thaís Elise, Nunes, Maria Andréia, Kitajima, Elliot Watanabe, Cunha, Bruna Aparecida & Novelli, Valdenice Moreira, 2022, Notes on the embryological development of the Brevipalpus yothersi (Acari: Tenuipalpidae), pp. 113-119 in Acarologia 62 (1) on page 118, DOI: 10.24349/0gr3-3a6b, http://zenodo.org/record/716013
Figure 1 in Notes on the embryological development of the Brevipalpus yothersi (Acari: Tenuipalpidae)
No full textFigure 1 Development timeline of the Brevipalpus yothersi: (a) – B. yothersi female; (b) – Uncleaved egg: nucleus in the center of the egg; (c)Published as part of Sinico, Thaís Elise, Nunes, Maria Andréia, Kitajima, Elliot Watanabe, Cunha, Bruna Aparecida & Novelli, Valdenice Moreira, 2022, Notes on the embryological development of the Brevipalpus yothersi (Acari: Tenuipalpidae), pp. 113-119 in Acarologia 62 (1) on page 115, DOI: 10.24349/0gr3-3a6b, http://zenodo.org/record/716013
Imunocitoquímica e hibridização in situ na microscopia eletrônica : metodologia complementar na caracterização de vírus e viróides
No full textDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 1994.A virologia foi, provavelmente, um dos campos que mais se beneficiou com a introdução do microscópio eletrônico como ferramenta de pesquisa. A microscopia eletrônica desempenha um importante papel na caracterização dos vírus, fornecendo dados sobre a morfologia das partículas e citopatologia. Estes dados podem contribuir para complementar a caracterização viral e consolidar a taxonomia dos mesmos, além de ser um importante auxiliar na diagnose da doença. Estes benefícios da microscopia eletrônica se estendem naturalmente à virologia vegetal. Tecidos de plantas infectados por vírus, quando observados ao microscópio eletrônico, podem apresentar efeitos citopáticos típicos que geralmente incluem o aparecimento dos corpúsculos de inclusão. Estas inclusões podem ser formadas por partículas virais ou estruturas induzidas pela infecção viral, presentes no citoplasma ou núcleo das células infectadas. No citoplasma, estas inclusões podem estar representadas por partículas virais, proteínas não estruturais ou alterações celulares, ou mesmo uma mescla de todos eles. No núcleo, as inclusões podem estar relacionadas com o nucléolo, presentes no nucleoplasma ou espaço perinuclear. Contudo, diversas são as limitações das técnicas convencionais e histologia ultraestrutural para se identificar de forma inequívoca os virions, a natureza de certas inclusões ou mesmo a localização de ácidos nucleicos envolvidos no processo da infecção viral. Diante destes aspectos, técnicas auxiliares como a imunocitoquímica e a hibridização in situ muitas vezes podem ser capazes de solucionar estes problemas. A imunocitoquímica tem por finalidade localizar proteínas através da identificação de sítios onde se dá a reação antígeno-anticorpo e sua visualização através de um marcador - o ouro coloidal. Já a hibridização in situ, consiste no fenômeno do pareamento de bases entre dois ácidos nucleicos complementares, um dos quais se acha marcado e funciona como sonda molecular. Este trabalho teve por objetivo estabelecer um protocolo básico para imunocitoquímica e hibridização in situ de vírus e viróides de plantas, respectivamente em nossas condições. Os resultados de ensaios imunocitoquímicos com vírus pertencentes aos grupos tospovirus, potyvirus, rhabdovirus, ilarvirus, tobravirus, tymovirus e potexvirus permitiram a detecção dos antígenos de proteínas estruturais e não estruturais destes vírus demonstrando a consistência do método. A detecção de ácidos nucleicos pela hibridização in situ permitiu a localização de RNAs do "avocado sunblotch viroid ’-ASBVd nos cloroplastos indicando a probabilidade de ser este o sítio de replicação deste viróide .Virology was one of the area of biological sciences most benefited by the introduction of the electron microscopy as a research tool. Electron microscopy has an important role in virus characteri zation, providing informations on particle morphology and cytopatology. These data can help to complement viral characterization, orient their taxonomy, and on the praticai aspects contributing to the disease diagnosis. In this context, plant virology was also strongly formed by electron microscopy during progress. Virus infected plant tissues observed in electron microscopy may present typical cytopathic effects among which the common is the appearance of inclusion bodies. These inclusions can be formed by viral particles or structures produced by the viral infection, and be present in the infected cells cytoplasm or nucleus. These inclusions present in the citoplasm can be viral particles, non structural proteins or cellular modifications or even a mixture of them. In the nucleus, these inclusions can be related to the nucleolus, present in the nucleoplasm or in the perinuclear space. However, the conventional ultrastructural procedures have several limitations to identify virions and the nature of inclusions and to identify and localize virus related nucleic acids. Considering these 1 imitat ions, complementary techniques as immunocytochemistry and in situ hibridization has been developed to solve part of these problems. The aim of immunocytochemistry is the localization of viral proteins detected by specific antibodies, and the sites of antigenantibody reaction are visualized by coloidal gold particles used as markers. The in situ hybridization consists in the detection of a given nucleic acid by its pairing with a complementary strand (molecular probe), labeiled such way that it can be traced indirectly with a colloidal gold traced marker. The aim of the present studie was to establish a basic protocol to apply immunocytochemistry and in situ higbridization of plants virus and viroids, respectively under our conditions. Immunoctytochemical assays were caried out with representatives of tospovirus, potyvirus, rhabdovirus, ilarvirus, tobravirus, tymovirus and potexvirus groups and permitted thus detection of either structural and non structural viral proteins demonstrating the sensibility of the method employed. On the the other hand, in situ hybridization enabled the localization of the avocado sunblotch viroid-ASBVd RNAs in the cloroplast indicating that this organele may be the replication site of this viroid.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Departamento de Fitopatologia (IB FIT)Programa de Pós-Graduação em Fitopatologi
Estudo comparativo da citopatologia de infecções simples e mistas por alguns vírus do feijoeiro (phaseolus vulgarist L.)
No full textDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 1983.As doenças virais são uma das causas da queda no rendimento de feijão no Brasil. Na região Centro Oeste, quatro vírus são de ocorrência comum: VMCF, VMDeF, VMSF e VMSC-F. Tendo em vista o fato de terem começado a se produzirem natural, mente infecções mistas com esses vírus, realizou-se um estudo ' comparativo da Citopatologia induzida por eles. Secções senú finas e ultrafinas de folhas de feijoeiro da cv. Rosinha G-2 , infectadas individualmente com esses vírus e com pares dos mesmos foram analisadas sob microscopia de luz e eletrônica. O VMAF, um potyvírus comum em outras regiões do Brasil, também' foi incluido no estudo de infecções simples. Os efeitos citopáticos produzidos por todos os cinco vírus em infecções sim pies foram similares aos relatados previamente na literatura, com algumas poucas diferenças. Nos tecidos infectados com VMCF a pareceram inclusões lamelares (cataventos e túbulos) no cito plasma, proliferações do retículo endoplasmático e partículas alongadas, presumivelmente virais, esparsas no citoplasma ou em arranjos unisseriados, os que às vezes projetavam-se dentro do vacúolo envolvidos pelo tonoplasto. O VMAF induziu a aparição de inclusões lamelares (cataventos e agregados laminados), além de outras inclusões citoplasmáticas e nucleares. Presumíveis partículas do vírus apareciam aderidas ãs inclusões lamelares e também em feixes. No citoplasma das células de tecidos infectados com VMDeF, apareceram grandes cristais angula res formados por presumíveis partículas do vírus, além de outros cristais menos densos, de natureza proteica, ambos rodeados de uma zona vesiculada. Alguns cloroplastos mostravam inclusões laminadas, enquanto outros apresentavam profundas invaginações. No caso do VMSF, massas de partículas foram vis tas no citoplasma, vacúolo e núcleo das células, 2 semanas apôs a infecção. Nos elementos dos vasos também foram encontrados agregados de partículas. Após 6 semanas da infecção, arranjos cristalinos de partículas foram encontrados no citoplasma de células parenquimáticas e dos tecidos vasculares. 79 Os cloroplastos e mitocôndrias exibiam comumente profundas invaginações. Os tecidos infectados com o VMSC-F apresentavam ' inclusões citoplasmáticas vesiculares e fibrilares. Formando parte das inclusões vesiculadas encontravam-se frequentemente presumíveis partículas virais, glóbulos osmiofílicos e mitocôndrias, em tecidos analisados 2 semanas após a infecção. Na 8- semana de infecção, os glóbulos osmiofílicos se tomaram escassos, mas havia numerosos lipídicos. Partículas presumivelmente virais foram observadas no citoplasma e vacüolo de células de diferentes tecidos, inclusive do xilema, e também em túbulos e protuberâncias da parede celular. Nas infecções mistas, em geral cada vírus componente do par manteve o efeito citopático que induziu nas infecções simples, aparecendo em alguns casos estruturas ausentes ' nas infecções simples. O arranjo VMCF + VMDeF induziu as inclusões características de cada vírus, mas estas nunca foram encontradas na mesma célula. A combinação VMCF+VMSF, provocou a aparição de inclusões lamelares junto a partículas isométricas, similares àquelas do VMSF. Estas também ocorreram no citoplasma e núcleo. A epiderme apresentava numerosas células colapsadas contendo massas de partículas isométricas, em arranjos cristalinos, o mesmo acontecendo nos pelos pluricelulares. Projeções citoplasmáticas, de arranjos unisseriados de partículas alongadas no vacüolo, foram encontrados em abundancia nas células dos tecidos infectados com este arranjo. 0 arranjo VMCF + VMSC-T, induziu a aparição de inclusões complexas com elementos típicos dos dois vírus, além de agregados de partículas isométricas no citoplasma e vacüolo de células parenquimáticas e epidérmicas. Nos tecidos infectados com o arranjo VMDeF+VMSF foram observadas abundantes inclusões cito plasmáticas compostas por massas vesiculadas rodeando cristais angulares formados por presumíveis partículas de vírus, além de outros cristais menos eletron-densos. Tübulos contendo' partículas em arranjos unisseriados e protuberâncias da parede celular com plasmodesmata modificados, e também inclusões intranucleares cristalinas, foram efeitos citopáticos exclusivos 80 do arranjo, não tendo sido observados em infecções simples com estes vírus. A infecção mista com VMDeF eVMSC-F, induziu a aparição de cristais virais típicos do VMDeF e de inclusões vesiculadas próprias do VMSC-F, em uma proporção semelhante ã de infecções simples. 0 arranjo VMSF+VMSC-F, foi um dos que menos efeitos citopáticos causou sendo que os mais importantes foram inclusões citoplasmáticas com abundantes glóbulos osmiofílicos e massas de partículas nos vasos lenhosos. Os resultados obtidos mostram que a análise de secções de tecidos infectados com estes vírus em feijoeiro, seja em infecções simples ou mistas, permite diagnosticar com bastante segurança qual ou quais os vírus envolvidos, constituindo-se assim em um auxilio valioso para completar determinações realizadas' por outros meios. Também revela certa correlação entre os da nos ao nível celular com a sintomatologia externa da planta afetada.Dry bean (Phaneolus.; vulgarir, L. ) is a staple food in Brazil and many Latin America countries. Among the several factors that have been contributing to a progressively decreasing yields in bean during recent years are virus diseases, and at least four of them occur commonly in central Brazil, namely one potyvirus, bean common mosaic virus (BCMV), and three isometric viruses, bean "mosaico em desenho" virus(BMDV) , southern bean mosaic virus (SBMV) and a bean isolated of cowpea severe mosaic virus (CSMV-B). As a complement to the pathological effects of single or double infections by these viruses, an ultrastructural study was undertaken to compare bean leaf tissues single or double infected by these viruses.Bean yellow mosaic virus (BYMV), another potyvirus which occurs quite commonly in other regions of Brazil, although yet found in cen tral Brazil, was included in this study, only as single infec tion. Most of the cytopathic effects registred in the single infections by these five viruses were similar to those previously described in the literature. However some additional peculiarities could be observed. In BCMV- infected leaf cells, lamellar inclusions were frequently found in asso ciation with membranous proliferation of the endoplasmic ret_i culum and elongated, putative virions. The latter were, in several instances, seen between tonoplasts, in a single layer, projecting into the vacuole. BYMV also induced the appearance of lamellar inclusions in the cytoplasm usually as lamellar aggregates with presumptive, elongated virus particles attached onto their surface or forming loose bundles in the cytoplasm. In BMDV infected cells the most chcracteris tic feature was the presence of two types of cristalline inclusions in a highly vesiculated cytoplasmic area: one was larger and denser, made up of presumptive virus particles and the other was smaller, less dense and possibly proteinaceous in nature. 82 Large masses of isometric viral particles were found in the cytoplasm, vacuole or nucleus in the SBMV-infected cells. Ocasionally, xylem vessels were filled up with these particles. In later stages of infection, virus particles formed crystals in the cytoplasm. Loose, fibrous inclusions, typical for CSMV-infection were also seen in tissues invaded by CSMV-B. Virus particles as well as osmiophilic globules and mitochondria were found in a highly vesiculated region of the cytoplasm 2 weeks after infection. However, after 8 weeks, the dense osmiophilic globules became scarce while the number of less dense droplets, possibly lipidic in nature, increased significantly. Virions were found in the cytoplasm, vacuole, xylem vessels, and in tubules associated with cell wall outgrowth. In the case of SBMV and CSMV-B, the identification of the isometric particles as virions was obstained through a immunoelectron microscope technique applying colloidal gold labelled antibodies onto the sections. In the double infections, with different viruses each of the component virus induced the same type of cytopathic effect as in single infections, and in some cases new structures were formed as a consequence of the double infection. The BCMV-BMDV arrangement induced the characLeri.stic inclusions of each component virus, but so far, they were never seen in the same cell, suggesting some reciprocal exclusion. In tissues infected simultaneously by BCMV and SBMV, lamellar inclusions of BCMV appeared sometimes associated with the isometric SBMV virions. In later stages of the infection cytopathic effects were quite severe on the epidermal cells which collapsed, and within them crystalline arrays of the SBMV were discernible. Also this mixture increased significantly the slender cytoplasmic projections toward the vacuole containing a single row of presumptivel BCMV particles. Complex cytoplasmic inclusions formed by structures induced by both BCMV and CSMV-B were noticed in leaf cells infected with this arrangement. In the double infection by SBMV and 83 BMDV the most remarkable events were the presence of tubules containing viruslike particles associated withcoll wallas well as cell wall outgrowth with modified plasmodesmata, and the intranuclear masses possibly formed by the SBMV particles. Simultaneous infection by BMDV and CSMV-B induced the appearance of typical crystals associated with BMDV infection and fibrous masses present in CSMV-invaded cells, in the same cell. The arrangement SBMV and CSMV-B was the one that less cytopathic effects caused, agreeing with pathological data. The most remarkable changes in infected cells were the presence of abundant osmiophilic globules in the cytoplasm and large masses of viruslike particles in the xylem elements. This study permitted a critical evaluation of the cytology of the single infection by 5 different bean viruses under comparable experimental conditions, demonstrating the peculiarities caused by each one in the infected cell. In double infection tested, by the arrangement of 4 of these viruses in pairs, usually cytopathic effects of each the component could be identified in the invaded cells, with minor synergistic effects. This fact indicates that analysis of the ultrastructure of the infection might reveal double infections and identify the component viruses, therefore serving as an useful complement in diagnosis. As expected there is commonly a correlation between damages at the cell level with the severity of the external symptoms caused by single or double infections
Brevipalpus yothersi Baker 1949
No full textBrevipalpus yothersi egg morphology Details of external eggs morphology could be followed under SEM. Transverse streaks in the outer layer of the eggs called carenas (Rodrigues and Machado 1999) (Figure 2a) and a fold-like structure in the equatorial region of the egg (Figure 2b). An external globular structure were observed in studies by Rodrigues and Machado (1999). However, it was observed only in eggs with a more advanced development time but morphologically different from the one found in our study. Eggshells frequently broke during fixation in Carnoy’s solution, allowing for observation of the internal structure of eggs. Additionally, channels similar to small perforations were seen extending between the shell and intermediate lamella (Figure 3). These channels may be associated with the respiratory tract of the embryo. Such structures were also observed by Dittrich (1971) in studies with T. urticae, and they have been shown to give mites protection against desiccation and gas exchange.Published as part of Sinico, Thaís Elise, Nunes, Maria Andréia, Kitajima, Elliot Watanabe, Cunha, Bruna Aparecida & Novelli, Valdenice Moreira, 2022, Notes on the embryological development of the Brevipalpus yothersi (Acari: Tenuipalpidae), pp. 113-119 in Acarologia 62 (1) on page 116, DOI: 10.24349/0gr3-3a6b, http://zenodo.org/record/716013
Passion fruit green spot virus (PfGSV), isolated from Ligustrum: its relationships with the Brevipalpus vector mite
No full textO vírus da pinta verde do maracujá (passion fruit green spot virus- PfGSV), transmitido por ácaros do gênero Brevipalpus, e membro tentativo do gênero Cilevirus, teve sua primeira descrição em 1997 no estado de São Paulo, com potencial para causar perdas econômicas à cultura do maracujazeiro. Outro possível cilevirus, a leprose do ligustro, foi encontrado infectando Ligustrum spp., e possuía similaridade sintomatológica a um vírus descrito na Argentina em 1942, em Bella Vista, também presente em Ligustrum spp., e descrito como \"lepra explosiva de la ligustrina\". Porém, através da comparação de genomas o vírus encontrado no Brasil assemelhou- se com PfGSV, sendo possivelmente distinto do vírus encontrado na Argentina, sendo provável isolado de PfGSV, e assim designado como PfGSV-Lig. PfGSV-Lig foi encontrado infectando naturalmente várias espécies distintas de plantas, algumas das quais se infectaram experimentalmente, além de várias outras ensaiadas. A infecção foi comprovada através de ensaios de RT-PCR e exame de secções das lesões por microscopia eletrônica de transmissão. Ácaros tenuipalpídeos B. yothersi e B. papayensis haviam sido recentemente identificados como vetoras de PfGSV-Lig. Foram feitas tentativas de se obter colônias isolinhas destas espécies em folhas destacadas de algumas espécies de Ligustrum. Experimentos foram também realizados trabalhos para se determinar alguns parâmetros como período de acesso para aquisição e inoculação, e de latência do PfGSV-Lig, pelas espécies vetoras. Resultados preliminares de determinação do período de aquisição para inoculação indica ser ele menor que 24h. Estudos adicionais deverão definir estes parâmetros.The passion fruit green spot virus (passion fruit green spot virus - PfGSV), transmitted by Brevipalpus mites, and tentative member of the genus Cilevirus, had its first description in 1997 in the state of São Paulo, with the potential to affect statistics to the passion fruit culture. Another possible virus, Ligustrum leprosy, has been found infecting Ligustrum spp. and it had symptomatic similarity to a virus described in Argentina in 1942, in Bella Vista, also present in the Ligustrum spp. It is described as \"lepra explosiva de la ligustrina\". However, through the comparison of genomes or viruses found in Brazil, associated with PfGSV, being possibly distinct from the virus found in Argentina, being probably isolated from PfGSV, and also as (PfGSV-Lig). PfGSV-Lig has been found to infect several different species of plants, some of which are infected experimentally, in addition to several others tested. The infection was proven through RT-PCR tests and examination of sections of lesions by transmission electron microscopy. Brevipalpus (Acari: Tenuipalpidae) mites present in PfGSV-Lig infected Ligustrum spp. plants were assayed to identify the vector species. B. yothersi transmitted PfGSV, but not B. obovatus and B. californicus. Experiments were also carried out to determine some parameters such as access period for acquisition and inoculation, and latency of PfGSV-Lig, by the vector species. Preliminary results for determining the acquisition period for inoculation indicate that it is less than 24 hours. Additional studies should define these parameters
Comparative cytopathology and histopathology of leaf tissue in orchids infected with orchid fleck virus
No full textO vírus da mancha das orquídeas (orchid fleck virus-OFV), transmitido por ácaros da espécie Brevipalpus californicus é capaz de infectar naturalmente mais de 50 espécies de orquídeas e apresenta uma distribuição global o que aumenta sua importância. O OFV provoca lesões localizadas que estão associadas com a área de replicação viral e seus sintomas variam conforme o gênero da orquídea infectada apresentando desde manchas amarelas e cloróticas até anéis cloróticos ou necróticos. Dada a diversidade de sintomas o estudo da histopatologia em diferentes espécies de orquídeas infectadas pelo OFV torna-se crucial para contribuição de estudos sobre este patossistema. O presente trabalho buscou obter informações a respeito das modificações celulares ocasionadas pelo OFV em espécies de orquídeas pertencentes a cinco diferentes tribos. Para obtenção destes dados foram coletadas amostras de tecido sadio e lesionado que após serem fotografadas foram fixadas em solução Karnovsky, desidratadas em série etílica e infiltradas em resina hidroxi-etil-metacrilato (Leica Historesin). Uma parte das amostras foi armazenada em ultrafreezer a -80°C para extração de RNA. As amostras infiltradas em historesina foram seccionadas em micrótomo rotativo em espessura de 5-7 μm e coradas com Azul de Toluidina, para análise histológica usual e para os testes histoquímicos utilizou-se os reagentes Sudan Black e Cloreto de Zinco Iodado para análise de compostos lipídicos e presença de grãos de amido, respectivamente. Realizou-se também a técnica de criofratura para complementar a análise das alterações anatômicas das amostras. Todas as amostras coletadas foram submetidas a RT-PCR para a confirmação da presença do vírus, bem como tentativas de visualização da partícula viral a partir de análise dos tecidos sintomáticos em Microscópio Eletrônico de Transmissão (MET). As partículas virais obtidas como produto da RT-PCR foram purificadas e sequenciadas para confirmação do OFV nas amostras. Notou-se uma diferença de sintomas entre as espécies de orquídeas infectadas pelo OFV com predominância de anéis necróticos com halo clorótico seguido de lesões locais necróticas com halo clorótico e anéis necróticos. As alterações anatômicas observadas foram depressão do limbo foliar na região de lesão e células do parênquima apresentando hiperplasia, hipertrofia e plasmólise em regiões adjacentes à área lesionada. Além disso, notou-se acúmulo de compostos lipídicos na região de necrose e uma significativa diminuição dos grãos de amido nas células de amostras infectadas quando comparadas ao tecido sadio. Apesar da confirmação da presença do vírus nas amostras a partir da RT-PCR não foi possível visualizar partículas virais na análise no MET, apenas a presença de viroplasma no tecido de algumas espécies de orquídeas. Foi possível observar que, apesar da diferença entre os sintomas apresentados pelas espécies de orquídeas e sua anatomia do limbo foliar, o padrão anatômico e histoquímico das lesões foi o mesmo.The orchid fleck virus (OFV), transmitted by Brevipalpus californicus mites, is capable of naturally infecting over 50 orchid species and has a global distribution, which increases its significance. OFV causes localized lesions associated with areas of viral replication, and its symptoms vary depending on the orchid genus infected, ranging from yellow and chlorotic spots to chlorotic or necrotic rings. Given the diversity of symptoms, studying histopathology in different orchid species infected with OFV is crucial for advancing research on this pathosystem. This study aimed to gather information on the cellular modifications caused by OFV in orchid species belonging to five different tribes. To obtain these data, healthy and diseased tissue samples were collected. After photographing, the samples were fixed in Karnovsky solution, dehydrated in an ethanol series, and infiltrated with hydroxyethyl methacrylate resin (Leica Historesin). Some samples were stored in an ultrafreezer at -80°C for RNA extraction. The samples infiltrated with historesin were sectioned with a rotary microtome to a thickness of 5-7 μm and stained with Toluidine Blue for routine histological analysis. For histochemical tests, Sudan Black and Iodine Zinc Chloride reagents were used to analyze lipid compounds and starch grains, respectively. Cryofracture techniques were also performed to complement the analysis of anatomical changes in the samples. All collected samples were subjected to RT-PCR to confirm the presence of the virus, and attemps were made to visualize the viral particles through Transmission Electron Microscopy (TEM) of symptomatic tissues.The viral particles obtained as RT-PCR products were purified and sequenced to confirm the presence of OFV in the samples. Differences in symptoms among orchid species infected with OFV were observed, with a predominance of necrotic rings with a chlorotic halo, followed by local necrotic lesions with a chlorotic halo and necrotic rings. Anatomical changes observed included depression of the leaf blade in the lesion area and parenchyma cells exhibiting hyperplasia, hypertrophy, and plasmolysis in regions adjacent to the lesion. Additionally, there was an accumulation of lipid compounds in the necrotic area and a significant reduction in starch grains in infected samples compared to healthy tissue. Although the presence of the virus was confirmed by RT-PCR, viral particles were not visible in TEM analysis, only the presence of viroplasma in tissues of some orchid species. It was noted that, despite differences in symptoms and leaf blade anatomy among orchid species, the anatomical and histochemical patterns of the lesions were consistent
Caracterização de um isolado do vírus do mosaico amarelo do salsão (Apium graveolens L. var dulce)
No full textDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Vegetal, 1979.O vírus do mosaico amarelo do salsão (VMAS) é membro do grupo potyvirus, sendo facilmente transmitido por inoculação mecânica, pelo pulgão Myzus persicae. Sulz., de maneira não circulativa, e por enxertia. Seu círculo de hospedeiras foi bastante restrito, infectando plantas das famílias Umbelífera e Chenopodiaceae. Os sintomas mais características induzidos pelo VMAS foram clareamento de nervuras em plantas de salsão, coentro e salsa, poucos dias após a inoculação e manchas cloróticas em folhas inoculadas . 0 VMAS foi entivado em temperatura ambiente ( 24-26’C ) e 4-59C, a 5 e 19 dias, respectivamente, perdendo a inventividade quando diluído -4 - -3 a 10 ,mas não a 10 e quando submetido a temperaturas de 509C, mas não 45’C por 10 minutos. Ao microscópio eletrônico, através de preparações "leaf dip", foram visualizadas partículas alongadas flexíveis, com comprimento normal de 764 nm, tomando como padrão o PVS. 0 exame de secções ultrafinas, mostrou a presença de inclusões lamelares citoplasmáticas e inclusões intranucleares de aspecto fibroso. Estas são facilmente detectáveis em células epidemias, examinadas ao microscópio de luz.
0 VMAS pôde ser purificado, clarificando o suco com n-butanol a 8%, concentrando e purificando adicionalmente por 2 ciclos de centrifugações diferenciais e uma centrifugação em gradiente de densidade de sacarose. O antissoro produzido contra o VMAS apresentou um título mais elevado quando coletado 40 e 50 dias após a primeira injeção do antígeno. Testes de dupla difusão em agar gel com SDS a 0,5%,submetendo o antígeno ao tratamento com SDS a 1,5% foi eficiente na detecção do vírus em suco de plantas e preparações purificadas até a diluição de 1/4 do antissoro, recomendando-se para efeito diagnóstico, diluí-lo a apenas 1/2.
0 VMAS possui algumas semelhanças em suas propriedades biológicas, físicas e citopatológicas com o "western celery mosaic virus" descrito por Severin e Freitag (1938), nos Estados Unidos, além de relacionarem-se serologicamente e pertencerem ao grupo potyvirus, no entanto, diferem em alguns aspectos. Ambos induzem inclusões intranucleares, mas as do VMAS tem aspecto fibroso, enquanto as do CeMV seriam amorfas. 0 VMAS parece ser mais lábil que o CeMV, pois tem p.t.i. pouco mais baixo e suporta bem menos o armazenamento in vitro.
De 4 cultivares de salsão inoculadas mecanicamente e submetidas a condições de campo, todas tiveram seu desenvolvimento afetado pelo VMAS. As cultivares ’Florida 683 strain K’ e ’Tall Utah 52-70 strain H’, no entanto, apresentaram uma certa tolerância ao mesmo, a julgar pela menor perda em peso e quantidade de vírus recuperável.
Levantamentos efetuados em plantações de Umbelífera, indicam a ocorrência do VMAS em culturas de salsão e salsa no Distrito Federal.Celery yellow mosaic virus (CYMV), a member of potyvirus group, could be easily transmitted by mechanical inoculation, grafting and the aphid, Myzu.* Sulz . in a non circulative manner. It had a restricted host range , infecting only Umbelliferae and Chenopodiaceae plants.Symptoms commonly induced by CYMV in celery, coriander and parsley were chlorotic spots on the inoculated leaves and vein-clearing in young leaves. The infectivity of CYMV was lost: after 6 and 19 days in crude sap at room temperature (24-269C) and at 4-5’C, respectively; after diluting to 10““*, but not to 10“3; and after treating for 10 minutes at 50’C, but not at 45’C. Flexuous, elongated particles with a normal length of Ca. 760 nm were observed in leaf dips prepared from the CYMV-infected plants. Cytoplasmic lamellar inclusions and fibrous intranuclear inclusions were found in the CYMV-infected cells in ultra-thin sections. The intranuclear inclusions could be easily detected in epidermal strips with light microscope.
This virus was successfully purified by clarification of the crude sap with 8% n-butanol, two cycles of differential centrifugation and one rate zonal density gradient centrifugation. An antiserum produced against the purified CYMV was specific and could be used to detect the virus in crude sap or purified preparation by double diffusion test in agar gel containg 0.5% of sodium dodecyl sulfate.
The virus resembled western celery mosaic virus reported in North America in infectivity, transmission, morphology, physical properties in vitro , serological and cytopathological properties. However, some differences were found, mainly on the appearance of intranuclear inclusions and longevity in vitro.
Under field conditions, the growth of 4 celery cultivars, mechanically inoculated with CYMV, was greatly affected in comparison to the non inoculated plants. Among these 4 cultivars, 'Florida 683 strain K’ and 'Tall Utah 52-70 strain H’ showed certain degree of tolerance.
A survey made in the green belt of the Federal District showed that CYMV was commonly found in parsley and occasionally, in celery.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Departamento de Fitopatologia (IB FIT)Programa de Pós-Graduação em Fitopatologi
Range of natural and experimental hosts of Passion fruit green spot virus and interactions with the vetor Brevipalpus yothersi
No full textOs vírus transmitidos por Brevipalpus (VTB) vêm ganhando destaque nos últimos anos devido ao aumento de sua incidência e prejuízos ocasionados, em especial, o citrus leprosis virus C (CiLV-C), agente causal da leprose dos citros, virose de maior importância no Brasil atualmente. Outro VTB com grande potencial para ocasionar graves danos é o recém caracterizado, passion fruit green spot virus (PfGSV), responsável pela pinta verde do maracujazeiro. Ambos os VTBs mencionados pertencem ao gênero Cilevirus, família Kitaviridae, ordem Martellivirales e apresentam como principal característica o surgimento de lesões localizadas em seus hospedeiros, restritas ao ponto de alimentação do vetor, o ácaro Brevipalpus yothersi Baker (Acari: Tenuipalpidae). O primeiro relato de PfGSV ocorreu em 1997 no estado de São Paulo, quando ocasionou a destruição de pequenos pomares na região do munícipio de Vera Cruz, no entanto, até o momento pouco se sabe sobre este patossistema. O presente trabalho buscou obter maiores informações acerca da interação vírus-vetor para B. yothersi e PfGSV, além de estudar a gama de hospedeiros naturais e experimentais deste vírus, o que permitirá que medidas eficientes para o controle da doença possam ser tomadas, além de fornecer dados sobre sua possível origem, evolução e epidemiologia. Avaliou- se a possibilidade de transmissão mecânica de PfGSV, utilizando-se folhas sintomáticas de maracujá-amarelo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) e alfeneiro (Ligustrum sinense Lour.) como fontes de inóculo. Foram avaliadas diferentes espécies de plantas, inoculadas com ácaros virulíferos ou mecanicamente, quanto à suscetibilidade ao vírus, além da análise de plantas naturalmente infectadas, visando a determinação da gama de hospedeiros de PfGSV. Procurou-se identificar, após uma triagem com diferentes leguminosas, uma planta indicadora, de fácil produção e rápido crescimento, para estudos futuros com PfGSV. A eficiência de transmissão de PfGSV foi estudada em diferentes populações do ácaro-vetor, bem como a possibilidade de co-transmissão de PfGSV e CiLV-C. Além disso, os períodos de acesso para aquisição (PAA) e de acesso à inoculação (PAI) para B. yothersi/PfGSV foram estabelecidos após diferentes tempos de alimentação do ácaro na fonte de inóculo e na planta indicadora utilizada. A presença dos vírus foi confirmada em todos os experimentos por ensaios de RT-PCR, além da análise dos tecidos sintomáticos em microscópio eletrônico de transmissão. Pode-se verificar que a transmissão mecânica de PfGSV é possível desde que se utilize folhas de maracujá como inóculo. PfGSV apresenta uma vasta gama de hospedeiros naturais e experimentais, tendo sido possível a confirmação de 31 espécies infectadas. Dentre as leguminosas, Dolichos lablab L. mostrou-se eficiente para uso como planta indicadora para estudos com este vírus, apresentando lesões locais necróticas nas nervuras cinco dias após a inoculação com ácaros virulíferos. Houve diferenças significativas quanto a transmissão de PfGSV pelas 11 populações de B. yothersi analisadas. A possibilidade de co-transmissão entre CiLV-C e PfGSV não foi confirmada, no entanto, uma das colônias isolinhas utilizadas apresentou capacidade de adquirir ambos os vírus. O PAA e PAI de PfGSV foram determinados como 1 e 12 horas, respectivamente.The Brevipalpus-transmitted viruses (BTV) have been gaining prominence in recent years due increased in their incidence and losses caused, particularly, citrus leprosis virus C (CiLV-C), the causal agent of citrus leprosis, the most important viral disease in citrus in Brazil currently. Another BTV with great potential to cause severe damage is the recently characterized passion fruit green spot virus (PfGSV), responsible for the passion fruit green spot. Both mentioned BTV belong to the genus Cilevirus, family Kitaviridae, order Martellivirales and their main characteristic is the appearance of lesions induced in their hosts, restricted to the feeding point of the vector, the mite Brevipalpus yothersi Baker (Acari: Tenuipalpidae).The first report of PfGSV occurred in 1997 in the state of São Paulo, when it caused the destruction of small orchards in the region of the municipality of Vera Cruz, however, until now, little is known about this pathosystem. Thus, the present work sought to obtain more information about the virus-vector interaction for B. yothersi and PfGSV, and additionally to study its range of natural and experimental hosts, which will allow efficient strategies to control the disease, and provide data on its possible origin, evolution and epidemiology. The possibility of mechanical transmission of PfGSV was evaluated using symptomatic leaves of yellow passion fruit (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) and privet (Ligustrum sinense Lour.) as inoculum sources. Different plant species, inoculated with viruliferous mites or mechanically, were evaluated regarding their susceptibility to the virus, in addition to the analysis of naturally infected plants, to establish of the PfGSV host range. A screening of different legumes was made to find a suitable indicator plant, of easy production and fast growth, for future studies with PfGSV. The transmission efficiency of PfGSV was studied in different populations of the mite-vector, as well as the possibility of co-transmission of PfGSV and CiLV-C. In addition, acquisition access period (AAP) and inoculation access period (IAP) for B. yothersi/PfGSV were established after different times of mite feeding on the inoculum source and on the indicator plant used. The presence of viruses was confirmed in all experiments by RT-PCR assays, using specific primers for PfGSV and CiLV-C, in addition to the analysis of symptomatic tissues under a transmission electron microscope. It can be verified mechanical transmission of PfGSV was achieved, as long as passion fruit leaves are used as inoculum. PfGSV has a wide range of hosts, either natural or experimental, with confirmation of 31 infected species. Among the legumes, Dolichos lablab L. proved to be efficient for use as an indicator plant for studies with this virus, showing local necrotic lesions on the veins five days after inoculation with viruliferous mites. There were significant differences in the transmission of PfGSV by the 11 populations of B. yothersi analyzed. The possibility of co-transmission between CiLV-C and PfGSV was not confirmed, however, one of the isoline colonies used showed the ability to acquire both viruses. The PfGSV AAP and IAP were determined as 1 and 12 hours, respectively
Evaluation of the morphological and genetic diversity of different species of Brevipalpus species (Acari: Tenuipalpidae) and their competence as virus vectors
No full textBrevipalpus (Acari: Prostigmata: Tenuipalpidae) são comumente encontrados nas regiões tropical e subtropical em todo o mundo. O gênero inclui mais de 280 espécies com algumas economicamente relevantes por causar danos a diversas culturas, como pragas e também por transmitem vírus de plantas, sendo B. californicus Banks, B. obovatus Donnadieu e B. phoenicis (Geijskes) reconhecidas como vetoras. No entanto B. phoenicis passou por uma revisão recente, sendo reconhecido um complexo de espécies, perdendo-se assim a referência de quais espécies estão envolvidas na transmissão de vírus. Dentre os vírus transmitidos por Brevipalpus (VTBs) encontra-se a leprose dos citros (citrus leprosis virus, CiLV-C) que é considerada a principal doença viral da indústria citrícola. No estado de São Paulo, maior produtor mundial de suco de laranja, gastam-se cerca de US 80 million/year are spent with acaricides for control the mite vector. This work had the objective pf contributing th the systematics of the group and identify the species involved with VTBs. Knowing the vectors in one of the first stages for studies of epidemiology and management of these viruses. The specific objectives were: perform a survey of Brevipalpus mites infesting different plants, mainly plant with VTBs reported; the morphological study of the species collected during this study and those deposited in the reference collection at the Museum of Zoology of the Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (MZLQ) using the newly introduced morphological criteria to identify the species of Brevipalpus that are present in Brazil; carry out BTV transmission tests and evaluating the species present in symptomatic plants that act as vectors; evaluate different molecular markers and DNA extraction protocols for Brevipalpus to generate information on diversity of mites associated with plants with BTV; and an integrative taxonomic approach, comparing morphological and molecular data for the species studied. More than 15000 mites collected from 23 countries and 75 botanical families were analyzed by light and scanning microscopy. At least 37 species and/or morphospecies. Microplates and spermathecae vesicles were evaluated and considered a fundamental characteristic in the distinction of some species of the genus. The ultrastructure of the microplates was basically similar in all the studied cases, and that they are not composed of waxy material, rather by a complex of microtubule-like structure. B. yothersi Baker was the main mite associated with commercial orange orchards with presence of CiLV-C, found during this survey. Ligustrum leprosis virus (LigLV) has been observed to be transmitted by B. papayensis Baker and B. yothersi; clerodendrum chlorotic spot virus (ClCSV) by B. yothersi; citrus leprosis virus N (CiLV-N) by B. phoenicis; and citrus chlorotic spot virus (CiCSV) by a possible new species of Brevipalpus (in this work Brevipalpus sp. nova 3). In the molecular markers assays, five DNA extraction protocols were tested, one of them permitted to extract DNA from a single mite for studies with markers and detection of viral RNA concomitantly. Of the four new primers designed, two have potential for phylogenetic studies. Sequences of 166 specimens were obtained for at least one marker. Phylogenetic analysis from two fragments of mitochondrial DNA COI region and nuclear region (ITS2 and 28S) demonstrated congruence in the separation of the species studied by morphological and molecular criteria confirming the presence of new species or morphospecies in the genus described in this work
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