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Interacción de la alfa2-macroglobulina inhibidora de proteínasas con el receptor endocítico LRP-1 : implicancias regulatorias sobre el componente celular inflamatorio
No full textTesis (Dr. en Ciencias Químicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2004.Fil: Bonacci, Gustavo Roberto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Bonacci, Gustavo Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.La a2-Macroglobulina (c 2-M) humana es un inhibidor de proteinasas de amplio espectro que cumple una función preponderante en el proceso inflamatorio al inhibir la actividad proteolítica de proteinasas involucradas en la remodelación de la matriz extracelular, tales como el activador tisular del plasminógeno, plasmina y las metaloproteinasas de matriz extracelular M1MIP-2 y MItvlP-9. La a2-M inhibe proteinasas mediante un mecanismo de "atrapamiento molecular", seguido por un proceso de endocitosis y degradación lisosomal mediado por el receptor LRP-1 que está expresado en células del sistema inmunocompetente, incluido macrófagos. Aunque LRP-1 es definido como un receptor endocítico, ha sido propuesto que participa en diversos eventos de transducción de señales involucrados con la proliferación y migración celular. Por ende, el principal objetivo de este trabajo de tesis fue demostrar que la a2-M activada por proteinasas (a2_M*), adquiere la propiedad bioquímica de regular el componente celular inflamatorio mediado por la interacción con el receptor LRP- 1. A su vez, como es conocida la capacidad de LRP- 1 para asociarse con diversas proteinas adaptadoras intracelulares y receptores de la membrana plasmática celular, también se propuso investigar las vías intracelulares de señalamiento generadas a partir de la interacción con a2M*. Para el cumplimiento de estos objetivos, y dada la complejidad y diversidad del componente celular inflamatorio, en este trabajo se utilizó un modelo experimental basado en líneas celulares derivadas de macrófagos que expresan en forma constitutiva LRP- 1 sobre la superficie de la membrana plasmática celular. En una primera etapa se evaluó el efecto de a2M* sobre la proliferación de la línea celular J774 derivada de macrófagos a través de ensayos de incorporación de timidina-H3. Los resultados evidenciaron que a2-M incrementó la incorporación de timidina, lo cual fue inhibido por el antagonista del receptor LRP-1, RAP. Del mismo modo cuando se utilizó una línea celular carente de LRP-1, la a2M* fue incapaz de modificar la incorporación de timidina. Por lo tanto, se concluyó que el efecto proliferativo de a2_M* sobre la línea celular J774 es mediada por LRP- 1. En una segunda etapa experimental se estudió, en estas mismas células, sí el efecto proliferativo de a2M* involucraba la movilización de calcio intracelular ([Ca2 ]). Para ello, se emplearon técnicas de espectrofluorometria en células cargadas con el fluorósforo para calcio FURA-2/AM. Los resultados obtenidos demostraron que: i) a2M* incrementó los niveles de [Ca2'li en la línea celular J774 de manera dependiente de la concentración de ligando; u) el incremento fue tanto a expensas de la liberación de calcio contenido en depósitos del retículo endoplásmico, así como del influjo de calcio extracelular a través de la apertura de canales jónicos; y iii) lactoferrina., un ligando de LRP-1, incrementó los niveles de [Ca2'li con una cinética similar a la observada para a2M*. Además, el efecto de la ct2M* sobre la movilización de [Ca 211,fue completamente inhibida en la línea celular J774 tratada con LPS, un regulador negativo de la expresión de LRP-1. Considerando en conjunto los resultados, se concluyó que a2M* al interaccionar con LRP- 1 promueve la movilización [Ca 24], el cual es un segundo mensajero vinculado con los eventos de proliferación celular. Finalmente, en la tercera etapa se investigó si el efecto proliferativo de a2_M* en la línea celular J774 involucraba a la vía de las MAPK, evaluando para ello la fosforilación de ERK-1 y ERK-2 por técnicas de Western biot. Los resultados indicaron que la interacción de a2M* con LRP- 1 efectivamente desencadenó la fosforilación de ERK-1 y ERK-2. Considerando los resultados en conjunto se concluye que la forma activada de a2-M induce proliferación de la línea celular derivada de macrófagos J774 al interaccionar con el receptor LRP- 1, lo cual a su vez genera señalamiento intracelular caracterizado por la movilización de calcio y la activación de las MAPKs ERK-1 y ERK-2. En el mismo sentido, también podría ser concluido que a2M*, además de inhibir proteinasas de la inflamación, actúa como un regulador de la activación de macrófagos durante el proceso inflamatorio.Fil: Bonacci, Gustavo Roberto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Bonacci, Gustavo Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina
Nitro-fatty acid formation and metabolism
No full textNitro-fatty acids (NO 2 -FA) are pleiotropic modulators of redox signaling pathways. Their effects on inflammatory signaling have been studied in great detail in cell, animal and clinical models primarily using exogenously administered nitro-oleic acid. While we know a considerable amount regarding NO 2 -FA signaling, endogenous formation and metabolism is relatively unexplored. This review will cover what is currently known regarding the proposed mechanisms of NO 2 -FA formation, dietary modulation of endogenous NO 2 -FA levels, pathways of NO 2 -FA metabolism and the detection of NO 2 -FA and corresponding metabolites.Fil: Buchan, Gregory J.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Bonacci, Gustavo Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Fazzari, Marco. University of Pittsburgh; Estados Unidos. Fondazione Ri.Med; ItaliaFil: Salvatore, Sonia Rosana. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Gelhaus Wendell, Stacy. University of Pittsburgh; Estados Unido
Nitrated fatty acids: synthesis and measurement
No full textNitrated fatty acids are the product of nitrogen dioxide reaction with unsaturated fatty acids. The discovery of peroxynitrite and peroxidase-induced nitration of biomolecules led to the initial reports of endogenous nitrated fatty acids. These species increase during ischemia/reperfusion, but concentrations are often at or near the limits of detection. Here, we describe multiple methods for nitrated fatty acid synthesis and sample extraction from complex biological matrices and a rigorous method of qualitative and quantitative detection of nitrated fatty acids by liquid chromatography–mass spectrometry. In addition, optimized instrument conditions and caveats regarding data interpretation are discussed.Fil: Woodcock, Steven R.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Bonacci, Gustavo Roberto. University of Pittsburgh; Estados Unidos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gelhaus, Stacy L.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Schopfer, Francisco J.. University of Pittsburgh; Estados Unido
Activated α2-macroglobulin induces cell proliferation and mitogen-activated protein kinase activation by LRP-1 in the J774 macrophage-derived cell line
No full textThe low-density lipoprotein receptor-related protein-1 (LRP-1) is an endocytic receptor of activated forms of the proteinase inhibitor alpha(2)-macroglobulin (alpha(2)M*). It has been proposed that alpha(2)M* and LRP-1 modulate diverse cellular processes, including cell adhesion, proliferation, and migration, which are involved in inflammation and tumor progression. However, relatively little is known about the role of alpha(2)M*/LRP-1 interaction on these processes. In this work, we demonstrate that alpha(2)M* binding to LRP-1 induces cell proliferation and MAPK activation in the J774 macrophage-derived cell line, which were blocked by RAP, an antagonist of LRP-1-binding ligands, and by PD980059, a specific inhibitor for the Mek1-ERK1/2 pathway. In addition, we demonstrate that LPS, a bacterial product that it is known to down-regulate the LRP-1 expression on macrophage, abrogated the signaling activity triggered by alpha(2)M* on LPS-treated J774 cells. These results suggest that alpha(2)M*/LRP-1 interaction constitutes a key role in the macrophage functioning during inflammation and cancer.Fil: Bonacci, Gustavo Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Caceres, Leandro Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Sanchez, Maria Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Chiabrando, Gustavo Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin
Assessment and characterization of tomato lipophilic electrophiles and their potential contribution to nutraceutical properties via SKN-1/Nrf2 signaling activation
No full textPhytochemical electrophiles are drawing significant attention due to their properties to modulate signaling pathways related to cellular homeostasis. The aim of this study was to develop new tools to examine the electrophilic activity in food and predict their beneficial effects on health. We developed a spectrophotometric assay based on the nitrobenzenethiol (NBT) reactivity, as a thiol-reactive nucleophile, to screen electrophiles in tomato fruits. The method is robust, simple, inexpensive, and could be applied to other types of food. We quantified the electrophile activity in a tomato collection and associated this activity with the pigment composition. Thus, we identified lycopene, β- and γ-carotenes, 16 by-products of carotenoid oxidation and 18 unknown compounds as NBT-reactive by HPLC-MS/MS. The potential benefits of NBT-reactive compounds on health were evaluated in the in vivo model of C. elegans where they activated the SKN-1/Nrf2 pathway, evidencing the ability of electrophilic compounds to induce a biological response.EEA La ConsultaFil: Carranza, Andrea del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.Fil: Carranza, Andrea del Valle. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Bonacci, Gustavo Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Bonacci, Gustavo Roberto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Moran, Yanina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Moran, Yanina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Asprelli, Pablo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria La Consulta; ArgentinaFil: Carrari, Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Carrari, Fernando. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina.Fil: Asis, Ramón. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Asis, Ramón. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin
Protective effect of nitro-oleic acids in neovascularization, gliosis and neurodegeneration in a mouse model of oxygen-induced retinopathy
No full text2023 (2024 update): 5.0Fil: Vaglienti, María Victoria. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Vaglienti, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina.Fil: Subirada, Paula Virginia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Subirada, Paula Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina.Fil: Paz, María Constanza. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Paz, María Constanza. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina.Fil: Bonacci, Gustavo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Bonacci, Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina.Fil: Sanchez, Maria Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Sanchez, Maria Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina.Purpose : Inflammation, oxidative and nitrosative stress are involved in neovascular retinopathies (NR). Nitro-fatty acids are important electrophilic signaling mediators with anti-inflammatory, antioxidant and cytoprotective properties. Therefore, our aim was to evaluate the effect of nitro-oleic acid (NO2-OA) in the OIR mouse model.
Methods : Briefly, C57BL/6 mice (n=35) were exposed to 75% O2 from postnatal day (P)7 to P12, after which they were brought to room air (RA) for additional 5 (P17) or 14 days (P26). Age-match mice maintained in RA (n=25) were used as controls. OIR mice were intraocular injected with 5μM of NO2-OA (n=22) or vehicle (n=13) at P12 and intraperitoneal at P14, P17, P20, P23 with 15mg/Kg of NO2-OA or vehicle. At P17 or P26 mice were sacrificed. Some eyes were fixed for whole mount staining of retina and microscopic analysis and other retinas were used for WB or RT-PCR assays. Retinal functionality was assessed at P17 or P26 by scotopic ERG in dark-adapted mice. Some eyes were fixed to obtain cryosections for TUNEL assay. GraphPad Prism8 was used for statistical analysis.
Results : NO2-OA induced vascular regrowth (p<0.05) and reduced neovascularization (p<0.001) at P17 OIR. RT-PCR revealed a significant increase in VEGF levels in OIR mice respect to RA mice (p<0.0001), but not difference was found between NO2-OA treatment and vehicle (p=0.9978). Regarding PEDF, neither significant changes were observed in OIR respect to RA mice (p=0.1394) nor between NO2-OA and vehicle (p=0.1849). In addition, WB of neural retinas showed that NO2-OA prevented glial stress (p<0.0001) induced in OIR at P17 (p=0.3160). NO2-OA did not modify the decrease (p=0.0177) in GS at P17 (p=0.0003). The ERG analysis showed a significant decrease in b-wave amplitude in OIR compared to RA mice. Also, a- and b- wave latencies were significantly increased in OIR respect to RA. Besides, WB analysis of retinas from RA and OIR mice revealed decreased levels of caspase-3 protein at P26 OIR. Finally, quantitative analysis showed that TUNEL-positive cells were significantly higher in P26 OIR compared to RA (p<0.05). All of these pathological events were prevented by NO2-OA (p=0.1362) (p=0.0004) (p<0.05).
Conclusions : In conclusion, our study underscores the role of NO2-OA as potential treatment in the pathogenesis of NR in order to attenuate vascular and non-vascular alterations.
This abstract was presented at the 2024 ARVO Annual Meeting, held in Seattle, WA, May 5-9, 2024.info:eu-repo/semantics/publishedVersionFil: Vaglienti, María Victoria. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Vaglienti, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina.Fil: Subirada, Paula Virginia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Subirada, Paula Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina.Fil: Paz, María Constanza. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Paz, María Constanza. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina.Fil: Bonacci, Gustavo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Bonacci, Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina.Fil: Sanchez, Maria Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, Argentina.Fil: Sanchez, Maria Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología, Argentina
Biomimetic Nitration of Conjugated Linoleic Acid: Formation and Characterization of Naturally Occurring Conjugated Nitrodienes
No full textNitro-conjugated linoleic acids (NO2-cLA), endogenous nitrodiene lipids which act as inflammatory signaling mediators, were isolated and single isomers purified from the biomimetic acidic nitration products of conjugated linoleic acid (CLA). Structures were elucidated by means of detailed NMR and HPLC–MS/MS spectroscopic analysis and the relative double bond configurations assigned. Additional synthetic methods produced useful quantities and similar isomeric distributions of these unusual and reactive compounds for biological studies and isotopic standards, and the potential conversion of nitro-linoleic to nitro-conjugated linoleic acids was explored via a facile base-catalyzed isomerization. This represents one of the few descriptions of naturally occurring conjugated nitro dienes (in particular, 1-nitro 1,3-diene), an unusual and highly reactive motif with few biological examples extant.Fil: Woodcock, Steven. Univeristy Of Pittsburgh. School Of Medicine. Department Of Pharmacology And Chemical Biology; Estados UnidosFil: Salvatore, Sonia Rosana. Univeristy Of Pittsburgh. School Of Medicine. Department Of Pharmacology And Chemical Biology; Estados UnidosFil: Bonacci, Gustavo Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Schopfer, Francisco. Univeristy Of Pittsburgh. School Of Medicine. Department Of Pharmacology And Chemical Biology; Estados UnidosFil: Freemant, Bruce A.. Univeristy Of Pittsburgh. School Of Medicine. Department Of Pharmacology And Chemical Biology; Estados Unido
Modulation of Nitro-fatty acid signaling: prostaglandin reductase-1 is a Nitroalkene reductase
No full textBackground: Nitroalkenes are electrophilic anti-inflammatory mediators that signal via Michael addition and are metabolized in vivo. Results: Prostaglandin reductase-1 is identified as a nitroalkene reductase. Conclusion: Prostaglandin reductase-1 reduces fatty acid nitroalkenes to nitroalkanes, inactivating electrophilic reactivity. Significance: A mammalian enzyme is identified that metabolizes fatty acid nitroalkenes in vivo to silence their signaling reactions.Fil: Vitturi, Dario A.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Chen, Chen Shan. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Woodcock, Steven R.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Salvatore, Sonia R.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Bonacci, Gustavo Roberto. University of Pittsburgh; Estados Unidos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Koenitzer, Jeffrey R.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Stewart, Nicolas A.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Wakabayashi, Nobunao. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Kensler, Thomas W.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Freeman, Bruce A.. University of Pittsburgh; Estados UnidosFil: Schopfer, Francisco J.. University of Pittsburgh; Estados Unido
Diversidad genética y patogenicidad a nivel de raíz en plántulas de soja de tres cultivares de cepas de Fusarium graminearum aisladas de rastrojos de maíz
No full textCrops residues are an important source of maintenance of Fusarium graminearum
inoculum in the soybean agroecosystem. Given that these populations can interact
in the substrate through mechanisms of mycelial recognition and that they can come
into direct contact with the implanted seed and cause disease, the following objectives
were set: (1) to evaluate the genetic diversity through of the mycelial compatibility of F.
graminearum strains isolated from maize crop residues; (2) to analyze the pathogenicity
of F. graminearum strains isolated from crop residues towards soybean seedlings from
different cultivars treated and untreated with fungicide. Mycelial compatibility studies
showed a unique pattern of mycelial compatibility for each strain, indicating a great
heterogeneity in the population evaluated. Pathogenicity tests in all strains tested were
capable of causing symptoms of root rot with varying degrees of severity and reductions
in the height of seedlings. In the factorial statistical analysis, the greatest effect
was marked by the soybean cultivar effect. A clear decline in the severity index was also
observed with the fungicide application, so this would be a useful prevention tool to
reduce the intensity in soybean seedling diseases.Los rastrojos de cultivos antecesores son una fuente importante de mantenimiento
del inóculo de Fusarium graminearum en el agroecosistema de la soja. Teniendo en
cuenta que estas poblaciones pueden interactuar en el sustrato a través de mecanismos
de reconocimiento micelial y que las mismas pueden entrar en contacto directo con
la semilla implantada y causar enfermedad, se plantearon los siguientes objetivos:
(1) Evaluar la diversidad genética a través de la compatibilidad micelial en cepas de
F. graminearum aisladas de rastrojos de maíz; (2) Analizar la patogenicidad de cepas
de F. graminearum aisladas de rastrojos respecto de la podredumbre de raíz en plántulas
de distintos cultivares de soja tratadas y no tratadas con fungicida curasemillas.
Los estudios de compatibilidad micelial mostraron un único patrón de compatibilidad
micelial para cada cepa, indicando una gran heterogeneidad en la población evaluada.
En los ensayos de patogenicidad todas las cepas evaluadas fueron capaces de provocar
síntomas de podredumbre de la raíz con distintos grados de severidad y reducciones
en la altura de plántulas. El análisis estadístico factorial demostró que el mayor efecto
observado en las variables independientes estuvo marcado por el efecto del cultivar de
soja evaluado. También se observó una clara disminución en el índice de severidad con
la aplicación de un fungicida curasemilla, por lo que esta sería una herramienta útil de
prevención para disminuir la intensidad en las enfermedades de plántulas de soja.Fil: Bonacci, Martín.
Universidad Nacional de Río CuartoFil: Barros, Germán.
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnica
Peanut seed cultivars with contrasting resistance to Aspergillus parasiticus colonization display differential temporal response of protease inhibitors
No full textSignificant efforts are being made to minimize aflatoxin contamination in peanut seeds and one possible strategy is to understand and exploit the mechanisms of plant defense against fungal infection. In this study we have identified and characterized, at biochemical and molecular levels, plant protease inhibitors (PPIs) produced in peanut seeds of the resistant PI 337394 and the susceptible Forman cultivar during Aspergillus parasiticus colonization. With chromatographic methods and 2D-electrophoresis-mass spectrometry we have isolated and identified four variants of Bowman-Birk trypsin inhibitor (BBTI) and a novel Kunitz-type protease inhibitor (KPI) produced in response to A. parasiticus colonization. KPI was detected only in the resistant cultivar, while BBTI was produced in the resistant cultivar in a higher concentration than susceptible cultivar and with different isoforms. The kinetic expression of KPI and BBTI genes along with trypsin inhibitory activity was analyzed in both cultivars during infection. In the susceptible cultivar an early PPI activity response was associated with BBTI occurrence. Meanwhile, in the resistant cultivar a later response with a larger increase in PPI activity was associated with BBTI and KPI occurrence. The biological significance of PPI in seed defense against fungal infection was analyzed and linked to inhibitory properties on enzymes released by the fungus during infection, and to the antifungal effect of KPI.Fil: Müller, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Bonacci, Gustavo Roberto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Batthyany, Carlos. Institut Pasteur de Montevideo; UruguayFil: Amé, María Valeria. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Carrari, Fernando Oscar. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; ArgentinaFil: Gieco, Jorge. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Córdoba. Estación Experimental Agropecuaria Manfredi; ArgentinaFil: Asis, Ramón. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin
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