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Caracterización de dos formulaciones vacunales como sistemas de liberación en mucosas de la quimera BLSOmp31 : evaluación de la inmunogenicidad y de la protección conferida contra Brucella ovis en el ovino
No full textBrucella ovis (B. ovis) es el agente causal de la epididimitis contagiosa del carnero
(ECC), principal causa de problemas reproductivos en establecimientos de cría ovina. Si
bien la cepa atenuada Brucella melitensis Rev.1 se emplea como herramienta preventiva,
presenta numerosas desventajas, por lo cual es necesario el desarrollo de vacunas
subcelulares que soslayen estos inconvenientes. Además, dado que B. ovis inicia el proceso
infeccioso en la superficie mucosa, una respuesta inmunitaria local protectora constituye un
desafío interesante en el desarrollo de vacunas. La quimera BLSOmp31 formulada en
adyuvante oleoso y administrada vía parenteral como proteína indujo niveles de anticuerpos
e interferón gamma elevados y confirió protección significativa contra el desafío con B.
ovis (75%). La vacunación en las mucosas genera una respuesta inmunitaria específica de
tipo secretoria y de memoria en el sitio de aplicación del inmunógeno, en otras mucosas y a
nivel sistémico. Para lograr una eficaz y sólida respuesta inmunitaria en las mucosas, es
crítica la vía de administración de la vacuna subcelular y a su vez el empleo de sistemas de
liberación o entrega del inmunógeno que sean adecuados, y/o el uso de potentes
adyuvantes. En el presente proyecto de Tesis se diseñaron y caracterizaron formulaciones
vacunales basadas en el empleo de la quimera BLSOmp31 para su posterior administración
en las mucosas nasal y/o conjuntival del macho ovino. Se evaluó la respuesta humoral y
celular (in vivo e in vitro) y la protección conferida contra la cepa virulenta de referencia B.
ovis PA76250 mediante el análisis bacteriológico de órganos del tracto reproductor y del
sistema fagocítico mononuclear. Se emplearon como sistemas de liberación microesferas de
quitosano producidas mediante secado por “spray” y geles termosensibles de Poloxamer
P407 para la administración por la vía intranasal y por la vía intranasal y conjuntival
respectivamente. Los resultados obtenidos demuestran que las estrategias empleadas
indujeron una respuesta humoral y celular que protegió parcialmente contra B. ovis,
teniendo en cuenta la proporción de órganos infectados y el número de UFC aislado de los
órganos muestreados. Cabe destacar que estos sistemas de inmunización redujeron el
porcentaje de infección y el número de bacterias por órgano en un nivel similar al grupo
control BLSOmp31-AFI.Fil: Díaz, Alejandra Graciela. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: Estein, Silvia Marcela. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: Goldbaum, Fernando Alberto. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Brucella ovis is the etiologic agent of ovine brucellosis, which causes significant
reproductive disorders in flocks worldwide. Immunization with B. melitensis Rev 1 gives
protection against B. ovis but it has important disadvantages. Consequently, there is a need
for new brucellosis vaccines to be developed for overcoming these drawbacks. In addition,
B. ovis initiates its infectious process at mucosal surfaces thus, achieving a local immune
response is an interesting point to consider in the development of vaccines. The polimeryc
antigen BLSOmp31 formulated with Incomplete Freund Adjuvant (IFA) parenterally
administered induced high levels of specific IgG antibodies gamma interferon and was
significantly protective against B. ovis experimental infection. Mucosal immunization
compared to parenteral route is able to induce a secretory specific immune response in the
site of immunization and in distant mucosal sites. Also, it is capable of inducing a systemic
immune response and memory T cells. In order to obtain a solid and efficient immune
response at mucosal surfaces is critical the immunization route and also the use of an
adequate delivery system and/or potent adjuvants. In the present Thesis it was proposed to
develop and characterize vaccine formulations based all of them in the use of chimeric
BLSOmp31 for administration at nasal and conjunctival mucosae. These vaccine
formulations were administered to lambs in order to study the humoral and cellular immune
response and the conferred protection against a virulent strain of B. ovis. In addition, it may
contribute to understanding the mechanisms involved in the immune response in sheep. As
delivery system were used chitosan microspheres obtained by the spray dried technique and
thermosensitive gel of poloxamer. Formulation based on chitosan microspheres was
intranasally administered and those of poloxamer gel were administered at nasal and
conjunctival mucosa. The results of this Thesis show that the strategy of immunization used
in the study were able to induce a humoral and cellular immune response which was
partially protective against experimental challenge against B. ovis, if the proportion of
infected organs and the CFU/organ are considered. It is remarkable that both immunization
systems reduced the percentage of infection and the number of bacteria per organ at similar
levels to the control vaccine BLSOmp31 formulated with IFA
The art of blocking ADP-ribosyltransferases (ARTs): nanobodies as experimental and therapeutic tools to block mammalian and toxin ARTs
Full text linkIn 1901, the first Nobel Prize in Physiology or Medicine was awarded to Emil von Behring for his ground-breaking discovery of serum therapy: serum from horses vaccinated with toxin-containing culture medium of Corynebacterium diphtheriae contained life-saving 'antitoxins'. The molecular nature of the ADP-ribosylating toxin and the neutralizing antibodies were unraveled only 50 years later. Today, von Behring's antibody therapy is being refined with a new generation of recombinant antibodies and antibody fragments. Nanobodies, which are single-domain antibodies derived from the peculiar heavy-chain antibodies of llamas and other camelids, are emerging as a promising new class of highly specific enzyme inhibitors. In this review, we illustrate the potential of nanobodies as tools to block extracellular and intracellular ADP-ribosyltransferases (ARTs), using the toxin-related membrane-bound mammalian ecto-enzyme ARTC2 and the actin-ADP-ribosylating Salmonella virulence plasmid factor B toxin of Salmonella enterica as examples.Fil: Menzel, Stephan. University Medical Center Hamburg-Eppendorf; AlemaniaFil: Rissiek, Björn. University Medical Center Hamburg-Eppendorf; AlemaniaFil: Haag, Friedrich. University Medical Center Hamburg-Eppendorf; AlemaniaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Koch Nolte, Friedrich. University Medical Center Hamburg-Eppendorf; Alemani
A polymeric bacterial protein activates dendritic cells via TLR4
Full text linkThe enzyme lumazine synthase from Brucella spp. (BLS) is a highly immunogenic protein that folds as a stable dimer of pentamers. It is possible to insert foreign peptides and proteins at the 10 N terminus of BLS without disrupting its general folding, and these chimeras are very efficient to elicit systemic and oral immunity without adjuvants. In this study, we show that BLS stimulates bone marrow dendritic cells from mice in vitro to up-regulate the levels of costimulatory molecules (CD40, CD80, and CD86) and major histocompatibility class II Ag. Furthermore, the mRNA levels of several chemokines are increased, and proinflammatory cytokine secretion is induced upon exposure to BLS. In vivo, BLS increases the number of dendritic cells and their expression of CD62L in the draining lymph node. All of the observed effects are dependent on TLR4, and clearly independent of LPS contamination. The described characteristics of BLS make this protein an excellent candidate for vaccine development.Fil: Berguer, Paula Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Mundiñano, Juliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Piazzon, Margarita Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentin
Estudios estructurales, funcionales y evolutivos de una proteína de B. abortus relacionada con la vía biosintética de la riboflavina
No full textLa riboflavina es un cofactor esencial de todos los organismos. El penúltimo paso de su vía biosintética involucra la condensación de 3,4- dihidroxiy-2-butanona 4-fosfato con 5-amino-6-ribitilamino-2,4(1H,3H)-pirimidinediona, catalizada por la enzima 6,7-dimethil-8-ribitillumazina sintetasa (LS). Las LS se encuentran compuestas por monómeros que se unen formando pentámeros, los cuales a su vez según el tipo de organismo del cual provienen, pueden asociarse en estructuras icosahédricas o permanecer como pentámeros aislados. Las bacterias patógenas del género Brucella spp, poseen dos genes con similitud de secuencia para dicha enzima: ribH1 y ribH2, ubicados en diferentes cromosomas. La proteína P18 (ó RibH2) de B. abortus codificada por el gen ribH2, es un antígeno dominante durante la infección por Brucella, capaz de generar una fuerte respuesta celular y humoral. En la presente tesis, se determinó que P18 presenta un arreglo cuaternario novedoso, descrito como un dímero de pentámeros con una baja afinidad por el sustrato 1 (LS tipo II). La novedosa estructura de P18 se relacionó estrechamente con su falta de actividad, permitiendo postular que la proteína divergió hacia una función diferente y aún desconocida. Por otro lado, se mostró que la enzima RibH1 de B. abortus (LS tipo I), codificada por el gen ribH1, cumpliría el rol enzimático clásico. Los resultados presentados en éste trabajo promovieron un análisis evolutivo de las LS y sentaron las bases para la búsqueda de funciones biológicas derivadas.Riboflavin is an essential cofactor for all organisms. The penultimate step in riboflavin biosynthesis involves the condensation of 3,4- dihydroxy-2-butanone 4-phosphate with 5-amino-6-ribitylamino-2,4(1H,3H)-pyrimidinedione, catalyzed by 6,7-dimethyl-8-ribityllumazine synthase (LS). LS is composed of monomers that assemble into pentamers which, in turn, can associate into icosahedrical particles or remain as pentamers, depending on the organism analyzed. Pathogenic Brucella species present two genes involved in riboflavin synthesis, ribH1 and ribH2, located on different chromosomes. The ribH2 gene codifies for the P18 (or RibH2) enzyme and previous studies demonstrated that it is a dominant antigen during Brucella spp. infection, capable of eliciting a strong cellular and humoral response in-vivo. The present thesis determined that the P18 protein presents a novel quaternary arrangement, consisting of a dimer of pentamers as well as low catalytic LS activity (LS type-II). The lack of LS activity was related to the protein´s structure, which diverged to give rise to a different and unknown function. Also, we show that the RibH1 enzyme (LS type-I), codified by the ribH1 gene, fulfills the classical LS role in B. abortus. The results presented in this work promoted an evolutionary study of LS, which set the grounds for understanding divergent biological functions of this protein.Fil: Zylberman, Vanesa. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Desarrollo de un nuevo Carrier antigénico por ingeniería de proteínas para su uso en vacunas acelulares
No full textFil: Laplagne, Diego A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Estudio cristalográfico y catalítico de la enzima Lumazina sintetasa en Brucella y otros miembros del orden Rhizobiales
No full textLa enzima 6,7-dimetil-8-ribitillumazina sintetasa (lumazina sintetasa, LS) cataliza el penúltimo paso en la biosíntesis de riboflavina (vitamina B2) en plantas, hongos y bacterias. Esta proteína se caracteriza por presentar una estructura cuaternaria notoriamente divergente en función de la especie estudiada, pudiendo existir en forma de pentámeros libres, decámeros (dímeros de pentámeros) o dodecámeros de pentámeros con simetría icosaédrica. El patógeno Brucella spp., una α-proteobacteria perteneciente al orden Rhizobiales, expresa dos LSs denominadas RibH1 (pentamérica) y RibH2 (decamérica), las cuales presentan una actividad catalítica muy baja en comparación con el resto de las LSs conocidas a la fecha. La enzima RibH2, en estudio desde la década pasada, despertó un gran interés por sus propiedades inmunogénicas y por su utilidad como marcador serológico en la enfermedad brucelosis. Por otro lado, RibH1 está comenzando a ser investigada ya que fue descubierta recientemente luego de la secuenciación y anotación del genoma de diversas especies de Brucella. Uno de los aportes originales más importantes de esta Tesis consistió en la resolución y el análisis de la estructura cristalográfica de ambas isoenzimas unidas a un compuesto análogo a uno de los sustratos de la reacción catalizada por las mismas. Los resultados obtenidos permitieron plantear un modelo para intentar explicar las actividades catalíticas bajas de RibH1 y RibH2 desde un punto de vista netamente estructural. Por otra parte, se llevó a cabo también un estudio de la variabilidad de la estructura cristalográfica de RibH2 en función del pH y el modelado de diversos ligandos en su sitio activo. Las grandes diferencias observadas entre RibH2 y el resto de las LSs documentadas llevó a la hipótesis de que esta proteína podría estar cumpliendo una función adicional y aún desconocida en Brucella. Para intentar dilucidar esta cuestión, los resultados obtenidos para este patógeno se complementaron con el análisis estructural y catalítico de las isoenzimas homólogas RibH1 y RibH2 codificadas por el simbionte de leguminosas Mesorhizobium loti, otro miembro del orden Rhizobiales relacionado filogenéticamente con Brucella.The enzyme 6,7-dimethyl-8-ribityllumazine synthase (lumazine synthase, LS) catalyzes the penultimate step in the biosynthesis of riboflavin (vitamin B2) in plants, fungi and bacteria. The quaternary structure of this protein varies between species, existing as free pentamers, decamers (dimers of pentamers) or dodecamers of pentamers bearing icosahedral symmetry. The pathogen Brucella spp., an α-proteobacterium that belongs to the order Rhizobiales, expresses two LSs named RibH1 (pentameric) and RibH2 (decameric). Both show very low catalytic activity in comparison with other known LSs. The enzyme RibH2, which has already been studied for over 10 years, has attracted great interest due to its immunogenic properties and its value as serological marker in the disease brucellosis. On the other hand, research on RibH1 has just begun because its presence has been recently discovered due to the sequencing and annotation of genomes from some Brucella members. One of the key findings in this Thesis was the resolution and analysis of the crystallographic structures of both isoenzymes bound to a substrate analogue. These results allowed us to propose a model that may explain, from a structural point of view, the low catalytic activities observed in RibH1 and RibH2. Next, we performed studies on the variability of the crystallographic structure of RibH2 in terms of pH, and also modeled the binding of some related ligands in its active site. We found major differences between RibH2 and the rest of the LSs documented. This led us to the hypothesis that this protein may harbor an additional, yet-unknown function in Brucella. To shed light on this topic, we complemented these results with structural and catalytic studies on the homolog RibH1 and RibH2 isoenzymes codified by the legume symbiont Mesorhizobium loti, which is another member of the order Rhizobiales and is phylogenetically related to Brucella.Fil: Klinke, Sebastián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Brucella spp. Lumazine synthase as a novel immunomodulator to produce egg yolk antibodies
Full text linkLumazine synthase from Brucella spp. (BLS) is a highly immunogenic decameric protein. It has been previously described as a carrier of peptides or proteins to increase their immunogenicity in different animal species, but its activity has never been evaluated in chickens. In this work, the use of BLS to improve the antibody response against bovine rotavirus (BRV) VP8d protein in laying hens was assessed. VP8d is the inner domain of the VP8 spike protein which preserves the sialic acid binding activity and the neutralizing epitopes present in the viral protein. Hens were immunized three times with 2 μg of VP8d alone or fused to BLS. Hens inoculated with BLSVP8d developed higher antibody titers (evaluated by ELISA and viral neutralization test) than hens immunized either with VP8d alone or the mixture of VP8d and BLS. Furthermore, IgY antibodies against BLSVP8d were able to fully protect mice against challenge with virulent BRV in a dose-depent-manner. Overall, these results demonstrate that BLS is a potent immonumodulator that enhances the antibody response in hens, thus increasing the concentration of specific IgY in the egg yolk, one of the main issues to be adressed in order to improve the use of the IgY technology.Instituto de VirologíaFil: Bellido, Demian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Chacana, Pablo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Mozgovoj, Marina Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Gonzalez, Diego. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Dus Santos, Maria Jose. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentin
Estudios estructurales, funcionales y evolutivos de una proteína de B. abortus relacionada con la vía biosintética de la riboflavina
Full text linkLa riboflavina es un cofactor esencial de todos los organismos. El penúltimo paso de su vía biosintética involucra la condensación de 3,4- dihidroxiy-2-butanona 4-fosfato con 5-amino-6-ribitilamino-2,4(1H,3H)-pirimidinediona, catalizada por la enzima 6,7-dimethil-8-ribitillumazina sintetasa (LS). Las LS se encuentran compuestas por monómeros que se unen formando pentámeros, los cuales a su vez según el tipo de organismo del cual provienen, pueden asociarse en estructuras icosahédricas o permanecer como pentámeros aislados. Las bacterias patógenas del género Brucella spp, poseen dos genes con similitud de secuencia para dicha enzima: ribH1 y ribH2, ubicados en diferentes cromosomas. La proteína P18 (ó RibH2) de B. abortus codificada por el gen ribH2, es un antígeno dominante durante la infección por Brucella, capaz de generar una fuerte respuesta celular y humoral. En la presente tesis, se determinó que P18 presenta un arreglo cuaternario novedoso, descrito como un dímero de pentámeros con una baja afinidad por el sustrato 1 (LS tipo II). La novedosa estructura de P18 se relacionó estrechamente con su falta de actividad, permitiendo postular que la proteína divergió hacia una función diferente y aún desconocida. Por otro lado, se mostró que la enzima RibH1 de B. abortus (LS tipo I), codificada por el gen ribH1, cumpliría el rol enzimático clásico. Los resultados presentados en éste trabajo promovieron un análisis evolutivo de las LS y sentaron las bases para la búsqueda de funciones biológicas derivadas.Riboflavin is an essential cofactor for all organisms. The penultimate step in riboflavin biosynthesis involves the condensation of 3,4- dihydroxy-2-butanone 4-phosphate with 5-amino-6-ribitylamino-2,4(1H,3H)-pyrimidinedione, catalyzed by 6,7-dimethyl-8-ribityllumazine synthase (LS). LS is composed of monomers that assemble into pentamers which, in turn, can associate into icosahedrical particles or remain as pentamers, depending on the organism analyzed. Pathogenic Brucella species present two genes involved in riboflavin synthesis, ribH1 and ribH2, located on different chromosomes. The ribH2 gene codifies for the P18 (or RibH2) enzyme and previous studies demonstrated that it is a dominant antigen during Brucella spp. infection, capable of eliciting a strong cellular and humoral response in-vivo. The present thesis determined that the P18 protein presents a novel quaternary arrangement, consisting of a dimer of pentamers as well as low catalytic LS activity (LS type-II). The lack of LS activity was related to the protein´s structure, which diverged to give rise to a different and unknown function. Also, we show that the RibH1 enzyme (LS type-I), codified by the ribH1 gene, fulfills the classical LS role in B. abortus. The results presented in this work promoted an evolutionary study of LS, which set the grounds for understanding divergent biological functions of this protein.Fil: Zylberman, Vanesa. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
S-SAD phasing of monoclinic histidine kinase from Brucella abortus combining data from multiple crystals and orientations: an example of data-collection strategy and a posteriori analysis of different data combinations
Full text linkThe histidine kinase (HK) domain belonging to the light-oxygen-voltage histidine kinase (LOV-HK) from Brucella abortus is a member of the HWE family, for which no structural information is available, and has low sequence identity (20%) to the closest HK present in the PDB. The `off-edge' S-SAD method in macromolecular X-ray crystallography was used to solve the structure of the HK domain from LOV-HK at low resolution from crystals in a low-symmetry space group (P21) and with four copies in the asymmetric unit (∼108 kDa). Data were collected both from multiple crystals (diffraction limit varying from 2.90 to 3.25 Å) and from multiple orientations of the same crystal, using the κ-geometry goniostat on SOLEIL beamline PROXIMA 1, to obtain `true redundancy'. Data from three different crystals were combined for structure determination. An optimized HK construct bearing a shorter cloning artifact yielded crystals that diffracted X-rays to 2.51 Å resolution and that were used for final refinement of the model. Moreover, a thorough a posteriori analysis using several different combinations of data sets allowed us to investigate the impact of the data-collection strategy on the success of the structure determination.Fil: Klinke, Sebastian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquimicas de Buenos Aires; Argentina. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Foos, Nicolas. Soleil Synchrotron; FranciaFil: Rinaldi, Jimena Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquimicas de Buenos Aires; Argentina. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Paris, Gastón. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquimicas de Buenos Aires; Argentina. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquimicas de Buenos Aires; Argentina. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Legrand, Pierre. Soleil Synchrotron; FranciaFil: Guimarães, Beatriz G. Soleil Synchrotron; FranciaFil: Thompson, Andrew. Soleil Synchrotron; Franci
Polymeric Display of Proteins through High Affinity Leucine Zipper Peptide Adaptors
Full text linkThe polymeric display of proteins is a method that could be used to increase the immunogenicity of antigens and to enhance the interaction strength of binding domains for their target ligands through an avidity effect. However, the coupling of proteins to oligomeric scaffolds is challenging. The chemical conjugation and recombinant fusion techniques have limitations that prevent their general use. In this work we describe a simple and effective method for coupling proteins to the decameric structure of Brucella abortus Lumazine Synthase based on the use of a pair of high affinity heterodimeric coiled coil peptides complementary fused to the scaffold and the target protein. Results obtained with a series of proteins demonstrate the capability of this approach to generate polyvalent particles. Furthermore, we show that the method is able to increase the immunogenicity of antigens and produce polyfunctional particles with promising biomedical and nanotechnological applications.Fil: Craig, Patricio Oliver. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Alzogaray, Vanina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Fundación Instituto Leloir; Argentin
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