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MBP-1 reprime l’espressione di N-MYC e svolge il ruolo di oncosoppressore in cellule di Neuroblastoma umano LAN5
No full textIl Neuroblastoma, derivato da cellule neurali simpatiche primitive, è il tumore solido extracranico più comune dell'infanzia. L'amplificazione del gene N-MYC insieme a delezioni nel cromosoma 1p36, sono i marcatori molecolari più frequenti nel Neuroblastoma e sono associati a cattiva prognosi.
MBP-1, prodotto alternativo della traduzione dell'mRNA del gene ENO1, è un repressore trascrizionale e agisce direttamente sul promotore dei geni c-MYC, ERBB2 e COX2 (1-3). In cellule di Neuroblastoma è stato osservato che l'espressione ectopica di ENO1/MBP-1 causa induzione di apoptosi e morte cellulare (4).
Sebbene esistano similarità di struttura e funzionali tra i geni N-MYC e c-MYC non è noto se MBP-1 sia in grado di reprimere la trascrizione anche del gene N-MYC. Per investigare questa possibilità, una serie di plasmidi reporter (luciferasi), contenenti varie porzioni del promotore di N-MYC, è stata usata in esperimenti di trasfezione in cellule di Neuroblastoma con N-MYC amplificato (LAN-5) insieme a un vettore di espressione per MBP-1. Questi studi hanno permesso di identificare una regione del promotore responsabile della regolazione negativa di N-MYC da parte di MBP-1. L'attività diretta di legame è stata confermata da studi condotti con saggi EMSA e con esperimenti di immunoprecipitazione della cromatina (ChIP).
L'impiego di un sistema di induzione SiRNA-mediato dell'espressione endogena di MBP-1 nelle cellule LAN-5 ha permesso di studiare l'effetto di MBP-1 in cellule di Neuroblastoma. L'induzione dell'espressione di MBP-1 risulta, come atteso, nella riduzione dell'espressione di N-MYC ed in un significativo aumento nell'espressione delle proteine Bax, p21 e γ-enolasi (un marcatore di differenziamento neuronale). Saggi di migrazione e citotossicità cellulare hanno permesso, inoltre, di stabilire che MBP-1 induce apoptosi e riduce la migrazione delle cellule LAN-5.
In conclusione, i dati raccolti indicano che MBP-1 agisce da repressore trascrizionale del gene N-MYC, e che la sua espressione in cellule di Neuroblastoma umano induce differenziamento ed apoptosi e inibizione della migrazione cellulare.
Bibliografia
1. Feo S, Arcuri D, Piddini E, Passantino R, Giallongo A. ENO1 gene products binds to the c-myc gene promoter and acts as a transcriptional repressor: relationship with MBP-1. FEBS Lett. 2000, 473:47
2. Contino F., Mazzarella C., Ferro A, et al. Negative Transcriptional control of ERBB2 gene by MBP-1 and HDAC1: diagnostic implication in breast cancer. BMC Cancer 2013,13: 8
3. Hsu KW, Hsieh RH, Wu CW, Chi CW et al. MBP-1 suppresses growth and metastasis in gastric cancer cells through COX-2. Mol Biol. 2009, 20: 5127.
4. Eiskar K, Krona C, Caren H, et al. Introduction of in vitro transcribed ENO1 mRNA into neuroblastoma cells induce cell death. BMC Cancer 2005,5:161
Relazione tra l’espressione del repressore trascrizionale MBP-1 e di miRNAs nel carcinoma mammario
No full textMBP-1 (Myc-promoter-binding-protein-1) è una proteina di 37 kDa, prodotta dalla traduzione alternativa del mRNA del gene ENO1, codificante per l’enzima glicolitico α-enolasi. MBP-1 svolge il ruolo di repressore trascrizionale agendo direttamente sul promotore di c-MYC, ERBB2 e COX2, tutti geni coinvolti in diverse fasi della progressione tumorale (1-3). Nei carcinomi duttali infiltranti della mammella (IDC), l’espressione di MBP-1 è inversamente correlata alla comparsa di metastasi linfonodali e di recidive (4). In diverse linee cellulari tumorali l’overespressione di MBP-1 risulta nella riduzione della proliferazione cellulare e dell’invasività e in un aumento nella morte cellulare per apoptosi. Recentemente è stato osservato che, in cellule di carcinoma prostatico, MBP-1 attiva la trascrizione del miR-29b che, a sua volta, regola negativamente l’espressione di proteine anti-apoptotiche e pro-metastatiche, coinvolte nella progressione tumorale (5).
Per approfondire le relazioni funzionali tra MBP-1, miR-29b ed eventuali altri miRNAs, l’espressione della proteina MBP-1 e di miRNAs è stata analizzata in una linea cellulare di carcinoma mammario ed in tumori primari mammari (IDC) tramite qRT-PCR, western blot ed analisi microarray. Differenze nei livelli relativi d’espressione di MBP-1 e miR-29b sono state rilevate sia nelle cellule che nei tumori. L’analisi tramite microarray ha permesso di identificare altri 52 miRNAs differenzialmente espressi in un modello cellulare che permette l’overespressione di MBP-1. Dall’analisi bioinformatica dei dati ottenuti emerge che i geni target di alcuni dei miRNA identificati sono espressi differenzialmente in tumori positivi e negativi per MBP-1, e che questi geni agiscono a livello di rilevanti network regolativi, che riguardano l’adesione e la regolazione della migrazione cellulare.
I dati ottenuti permettono di ipotizzare che MBP-1 intervenga nella regolazione della proliferazione e della progressione tumorale agendo direttamente sull’espressione dei geni coinvolti in questi processi o indirettamente mediante la regolazione dell’espressione di microRNA.
Bibliografia:
1. Ray R, Miller DM: Cloning and characterization of a human c-myc promoter-binding protein. Mol Cell Biol 1991, 11(4):2154-2161
2. Contino F, Mazzarella C, Ferro A, Lo Presti M, Roz E, Lupo C, Perconti G, Giallongo A, Feo S: Negative transcriptional control of ERBB2 gene by MBP-1 and HDAC1: diagnostic implications in breast cancer. BMC cancer 2013, 13:81.
3. Hsu KW, Hsieh RH, Wu CW, Chi CW, Lee YH, Kuo ML, Wu KJ, Yeh TS: MBP-1 suppresses growth and metastasis of gastric cancer cells through COX-2. Mol Biol Cell 2009, 20(24):5127-5137
4. Lo Presti M, Ferro A, Contino F, Mazzarella C, Sbacchi S, Roz E, Lupo C, Perconti G, Giallongo A, Migliorini P et al: Myc promoter-binding protein-1 (MBP-1) is a novel potential prognostic marker in invasive ductal breast carcinoma. PLoS One 2010, 5(9):e12961
5. Steele R, Mott JL, Ray RB: MBP-1 upregulates miR-29b that represses Mcl-1, collagens, and matrix-metalloproteinase-2 in prostate cancer cells. Genes & cancer 2010, 1(4):381-38
Strategie di memoria e di metamemoria: processi motivazionali e autoefficacia nell’ambito dell’educazione nella terza età.
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L'Università alla Terza Età: i processi di autoregolazione in un campione di studenti adulti e di anziani
No full textMBP-1 represses N-MYC expression and acts as a tumor suppressor in human Neuroblastoma LAN-5 cells
No full textNeuroblastoma is the most common extra-cranial solid tumor of childhood, originated from cells of the neural crest. Amplification of N-MYC gene and 1p-deletion are found in more than 30% of patients with advanced stages and they are associated with poor prognosis.
An alternative translated product of the ENO1 gene, known as MBP-1 (c-myc promoter binding protein-1), acts as a negative regulator of the c-MYC oncogene, ERBB2 and COX-2 genes, furthermore, ENO1/MBP-1 overexpression in Neuroblastoma cells significantly reduces cell growth and induces apoptosis.
Even though there are similarities between the c-MYC and N-MYC oncogenes, there are no evidences that MBP-1 is able to interact with N-MYC promoter to regulate negatively its expression.
Reporter plasmids (luciferase), containing various portions of N-MYC promoter, were used in N-MYC-amplified Neuroblastoma cells (LAN-5) transfection experiments with an effector plasmid expressing Flag-MBP-1 protein. These studies have identified a promoter region involved in the negative regulation of N-MYC by MBP-1, and its binding activity, within the N-MYC promoter was confirmed, both in vitro and in vivo, by EMSA and chromatin-immunoprecipitation (ChIP) assays.
SiRNA-mediated induction of endogenous MBP-1 expression in LAN-5 cells determines a decrease of N-MYC and a significant increase of p21, BAX and γ-enolasi expression (a marker of neuronal differentiation). Furthermore, migration and cytotoxicity assays indicate that MBP-1 induces apoptosis and reduces the migration of LAN-5 cells.
In conclusion, the data presented indicate that MBP-1 acts as a transcriptional repressor of N-MYC gene and its expression induces senescence, apoptosis and differentiation in LAN-5 Neuroblastoma cells
Dimensionalità della "Intimate Friendship Scale" (IFS, Sharabany, 1994) adattata per anziani
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