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CALORIMETRIA DIFFERENZIALE A SCANSIONE DI MISCELE FOSFOLIPIDICHE DA MEMBRANE DI GLOBULI ROSSI
No full textNegli ultimi anni particolare attenzione è stata posta alle relazioni tra funzione delle membrane, le loro proprietà chimico-fisiche e la composizione in acidi grassi, prevalentemente della frazione fosfolipidica considerato il fatto che fosfolipidi, trovati nelle membrane biologiche, derivano le loro proprietà idrofobiche dagli acidi grassi costituenti.
Le correlazioni più frequentemente analizzate sono quelle tra componenti di membrana e i loro acidi grassi modificati, in vivo, da alterazioni della composizione lipidica della dieta o, in vitro, mediante opportune modifiche del mezzo di coltura.
Somministrando diete diverse a bovine da latte abbiamo creato una “banca” di campioni di membrane di globuli rossi a diversa composizione lipidica (1, 2).
Scopi di questo studio sono stati: 1) l’analisi della composizione delle miscele di fosfolipidi estratti dalle membrane, 2) la valutazione delle correlazioni tra composizione e proprietà termotropiche delle miscele.
I lipidi totali sono stati estratti dagli eritrociti bovini con miscele di cloroformio/metanolo in diversi rapporti e le miscele lipidiche sono state frazionate mediante cromatografia su colonna.
Le singole specie fosfolipidiche sono state separate in HPTLC e quantificate mediante densitometria a scansione.
La composizione in acidi grassi dei fosfolipidi di membrana è stata valutata mediante gas-liquido cromatografia e dispersioni acquose tamponate sono state esaminate mediante calorimetria differenziale a scansione.
Per ogni campione è stato calcolato il contenuto di acidi grassi saturi (S), insaturi (U) e l’indice di insaturazione (UI).
I principali acidi grassi presenti (mediamente ≥ 10% in peso) sono risultati: C16:0, C18:0, C18:1, C18:2 e C24:0.
Le miscele di fosfolipi mostrano una o due transizioni di fase a temperature comprese tra 17.7 e 40.0 °C. La prima temperatura di transizione è compresa tra 17.7 e 26.0 °C.
UI e U/S non risultano essere correlati al contenuto percentuale delle diverse specie molecolari di fosfolipidi (PC, PE, SM, PS+PI) e di PC+SM, costituenti principali del foglietto esterno del doppio strato lipidico.
Esiste, invece, una correlazione lineare tra la prima temperatura di transizione ed UI (P < 0.05) e U/S (P < 0.01). La prima temperatura di transizione diminuisce all’aumentare di UI o del rapporto U/S.
References
1. G. Monticelli, S. Rapelli, G. Montorfano, P. Magistretti and B. Berra- “Red blood cell membrane composition following diet manipulation in the cow” Riv. Ital. Sostanze Grasse 67: 507-515 (1990)
2. G. Monticelli, M. Masserini,G. Lercker, T. Beringhelli, P. Marciani, E. Calappi and B. Berra – “Red blood cell membrane composition following diet manipulation in the cow. II: phospholipid fatty acid distribution and physico-chemical characteristics of membrane and its constituents” Riv. Ital. Sostanze Grasse 69: 189-199 (1992
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The determination of COPs was performed using gaschromatography after hydrolysis of the lipid extract, extraction of the unsaponifiable and purification with SPE. The identification of COPs was confirmed by means of GC-MS analysis.
The samples of pandoro contained small amounts of COPs at the starting time (between 2 and 3 ppm of the product). Their concentration did not increase during the shelf life of the product, neither in the sample which was analysed one month after its expiration date. However, different pathways were observed for each determined compound: the 7 alpha -hydroxycholesterol content showed a constant increase, whereas 7-ketocholesterol was characterized by a variable trend of concentration. Both the isomers of epoxycholesterol decreased. Starting from the third month of conservation the 5 alpha -cholesten-3,5,6-beta -triol rapidly increased. Based on this result, a possible conversion of epoxycholesterol to cholestantriol during conservation can be confirmed
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