1,721,098 research outputs found
Screening delle mutazioni del gene MYH7 in una popolazione pediatrica affetta da cardiomiopatia ipertrofica
No full textLa cardiomiopatia ipertrofica (CMI) è una malattia primitiva del muscolo cardiaco, trasmessa con carattere autosomico dominante, a penetranza ed espressività estremamente variabile, anche all'interno dello stesso “cluster” familiare. Centinaia di mutazioni in almeno 15 geni differenti sono state implicate nella patogenesi della CMI, la maggior parte delle quali sono a carico delle proteine del sarcomero. Ad oggi, poco è conosciuto circa prevalenza, genotipo e caratteristiche cliniche della CMI ad estrinsecazione precoce (“early onset disease”). Il nostro studio è finalizzato alla ricerca di mutazioni del gene MYH7 (gene della beta-miosina) in una coorte di pazienti CMI pediatrici della regione Campania. La diagnosi di CMI è stata posta in 40 pazienti (età A), non descritte precedentemente in letteratura, sono localizzate in regioni altamente conservate del gene e non sono state ritrovate in una popolazione di controllo costituita da almeno 100 soggetti sani. La mutazione p.M539L è stata trovata in 4 probandi indipendenti: il paziente N.5 presenta una CMI con severa ostruzione, sottoposta ad intervento di miectomia; il N.6 presenta una forma di CMI non ostruttiva relativamente lieve. D'altra parte, lo studio del fenotipo nei familiari dimostra la presenza di una forma severa di CMI (fratello con CMI ostruttiva s/p AICD; nonna paterna con CMI ostruttiva s/p miectomia e sostituzione valvolare mitralica). Il paziente N.7 presenta una CMI non ostruttiva, associata a forame ovale pervio; il N.8 è risultato eterozigote composito per due mutazioni non note (p.M539L, p.R1045H), e presenta una CMI con ostruzione latente associata a pre-eccitazione ventricolare. Il paziente N.9 (p.D1652Y) ha una forma di CMI non ostruttiva, ad evoluzione restrittiva. Il padre è stato sottoposto a trapianto cardiaco per evoluzione dilatativa di una CMI non ostruttiva. La diagnosi di CMI non ostruttiva nel paziente N.10 (c.5808+20G>A) è stata posta in epoca fetale, e confermata poi alla nascita. La ricerca di mutazioni nel gene MYH7 nei pazienti con diagnosi precoce di CMI ha dato esito positivo nel 25% dei casi. I nostri dati confermano che la mutazione p.R719W si associa a forme severe di CMI, anche in età pediatrica. D'altra parte, la mutazione p.M539L sembra essere associata a quadri variabili di CMI. E' in corso lo screening di mutazioni nei geni MYBPC3 e TNNT2, per ottenere un quadro più esaustivo dell'epidemiologia molecolare della CMI nella nostra popolazion
Lo screening dei geni dei canali ionici cardiaci in famiglie LQTS del sud-italia rivela la presenza di otto mutazioni, tre non note in letteratura
No full textLa sindrome del QT lungo (Long QT Syndrome: LQTS) è una patologia ereditaria che si manifesta con allungamento del tratto QT all'elettrocardiogramma, aritmie ventricolari e rischio di morte improvvisa. Mutazioni nei geni codificanti per i canali cardiaci del Na+ e del K+ sono frequentemente associati alla LQTS. Il nostro studio è finalizzato alla caratterizzazione molecolare di una coorte di pazienti LQTS indipendenti del Sud Italia. La diagnosi di LQTS è stata posta in 13 pazienti indipendenti, dopo accurata valutazione dei sintomi, dell'ECG e dell'anamnesi familiare. E' stata eseguita la ricerca di mutazioni nei geni dei canali cardiaci del Na+ (SCN5A) e del K+ (KCNQ1, KCNH2, KCNE1, KCNE2) mediante PCR, dHPLC (cromatografia liquida denaturante ad alta prestazione) e sequenziamento del DNA estratto dai linfociti di sangue periferico. Il cDNA di SCN5A (hH1) normale o mutagenizzato (c.4414_4416delAAC e c.C3989A) è stato trasfettato in cellule HEK 293. La localizzazione delle due varianti proteiche così espresse è stata effettuata mediante immuno-istochimica. Nei 13 pazienti LQTS indipendenti abbiamo individuato 8 mutazioni (62%): 5 sono note in letteratura: c.G5350A nel gene SCN5A, c.C1682T in KCNH2 e c.G1573A, c.G1748A e c.G1032A nel gene KCNQ1. Tre mutazioni sono descritte per la prima volta: c.4414_4416delAAC e c.C3989A nel gene SCN5A e c.1450_1467del in KCNH2. Esse sono localizzate in regioni altamente conservate dei rispettivi geni, non sono state ritrovate in una popolazione di controllo di almeno 100 soggetti sani e cosegregano con la malattia nelle famiglie affette, eccetto che in una bambina che non mostra segni e sintomi della malattia, nonostante sia portatrice della mutazione c.4414_4416delAAC nel gene SCN5A. I familiari degli 8 probandi nei quali lo screening genico ha dimostrato la presenza di una mutazione sono stati successivamente analizzati, al fine di individuare i portatori asintomatici e valutare la possibilità di ricorrere ad una terapia con beta-bloccanti.I due mutanti del canale del sodio (SCN5A c.4414_4416delAAC e c.C3989A) sono stati espressi in cellule HEK 293. L'immunoistochimica ha dimostrato che le due varianti proteiche si localizzano, come atteso, sulla superficie cellulare. È in corso la caratterizzazione funzionale delle tre mutazioni non note mediante tecnica di voltage-clamp.Il 62% dei nostri pazienti è portatore di una mutazione: circa la metà delle mutazioni è nuova. Lo screening dei geni dei canali ionici cardiaci può facilitare la diagnosi nei pazienti affetti da LQTS soprattutto permettendo l'identificazione precoce dei portatori delle mutazioni con penetranza ridotta, riducendo così il rischio di morte improvvisa
Identificazione precoce di marcatori genetici predittivi di patologie cardiache potenzialmente letali in atleti agonisti
No full textPrevalence of sarcomeric gene mutations in paediatric patients with hypertrophic cardiomyopathy in Campania
No full textCardiac ion channel genes analysis in LQTS families of southern Italy revealed eight mutations, including three novel ones
No full textCongenital long-QT syndrome (LQTS) is a cardiac channelopathy caused by mutations in genes that encode cardiac ion channel subunits. We determined the spectrum of cardiac channel mutations in a cohort of unrelated Southern Italy patients affected by LQTS. METHODS. We screened for LQTS-causing mutations in the KCNQ1, KCNH2, SCN5A, KCNE1 and KCNE2 genes 13 unrelated patients using the polymerase chain reaction, denaturing high-performance liquid chromatography and DNA sequencing. We than expressed two unknown variant Na-channel cDNA mutants, c.4414_4416delAAC and c.C3989A, in HEK 293 cells. The fluorescein-conjugated antibody was used to locate the mutant Na-channels.
RESULTS. We found 8 disease-causing mutations in the 13 unrelated LQTS families (62%): c.G5350A in SCN5A, c.C1682T in KCNH2, and c.G1573A, c.G1748A and c.G1032A in KCNQ1, which are known mutations; c.4414_4416delAAC and c.C3989A in SCN5A, and c.1450_1467del in KCNH2, which are novel mutations. All mutations co-segregated with the disease in the affected families, except in a child who had no disease signs or symptoms, despite carrying of the c.G5350A mutation in SCN5A gene. Mutation c.G1032A in KCNQ1 gene is a known splice-site mutation that we found in a child of a large family of 39 individuals: 15 of whom carried mutation and presented different clinical symptoms, from border-line QTc values without symptoms to clear long QT with syncope and ventricular arrhythmias, whereas 24 relatives carried the wild type gene, and were asymptomatic. Immunocytochemistry showed that both c.4414_4416delAAC and c.C3989A SCN5A variants are located to the cell surface, as expected for a normally trafficking channel. Functional characterization of these variants and of the other new mutation is underway using the voltage-clamp technique.
CONCLUSIONS. About 62% of our patients had a mutation: about half of the mutations are novel. Screening of cardiac ion channel genes may: i) facilitate causative analysis at gene level in LQTS patients, and ii) identify carriers of gene mutations with reduced penetrance, thereby reducing the risk of sudden death
The multi-faceted aspects of the complex cardiac Nav1.5 protein in membrane function and pathophysiology
No full textThe aim of this mini-review is to draw together the main concepts and findings that have emerged from recent studies of the cardiac channel protein Nav1.5. This complex protein is encoded by the SCN5A gene that, in its mutated form, is implicated in various diseases, particularly channelopathies, specifically at cardiac tissue level. Here we describe the structural, and functional aspects of Nav1.5 including post-translational modifications in normal conditions, and the main human channelopathies in which this protein may be the cause or trigger. Lastly, we also briefly discuss interacting proteins that are relevant for these channel functions in normal and disease conditions
Microbial diversity in natural whey cultures used for the production of caciocavallo silano PDO cheese
No full textThe microbial diversity of sixty-three Natural Whey Cultures (NWCs) for the manufacture of Caciocavallo Silano cheese PDO was studied. The NWCs were collected from different dairies covering the whole territory of PDO production including five different regions of southern Italy. The microbial species diversity was determined by direct DNA extraction from NWCs and Polymerase Chain Reaction (PCR) amplification of variable regions of the 16S rRNA gene followed bit denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC). DGGE and DHPLC fingerprinting yielded the same results in terms of number of bands/peaks and specific migration/retention time of the amplicons. The DHPLC technique was used in this study for the first time to assess a food-related mixed microbial community by a culture-independent approach and proved to be at least as effective as DGGE in profiling species diversity in NWCs. Cluster analysis of DGGE and DHPLC data revealed that the species-related groups of similarity were not dependent on the geographical origin of the NWCs. The presence of three groups of 10-14 NWCs at 100% of species similarity indicated that some species associations are very commonly occurring in the NWCs for Caciocavallo Silano cheese PDO. A RAPD-PCR analysis of the NWCs was also performed for the members of the above groups and it showed that, though characterized by the same species diversity, most of the identical NWCs included different biotypes. The sequences of DGGE bands and DHPLC peaks revealed the occurrence of mainly thermophilic lactic acid bacteria such as Lactobacillus delbrueckii, L. helveticus and Streptococcus thermophilus even though the mesophilic Lactococcus lactis also occurred in some NWCs. In conclusion, the results of this study indicate that the microbial diversity of NWCs used for the Caciocavallo Silano PDO cheese is not high, it is not dependent on the geographical origin and the same microbial species occur within the territory examined. The microbiota of fermented PDO products and its possible link with territory should be studied case by case in order to have useful evidences for the assessment of product quality and authenticity
- …
