1,721,033 research outputs found
Generation ofHerpes Virus Saimiri-Transformed T-Cell Lines from Macaques Is Restricted by Reactivation ofSimian Spuma Viruses
No full textAbstractHerpes virus saimiri(HVS) transforms human T-cellsin vitroto stable growth. These T-cell lines retain their immunological characteristics of the parent cells and do not release infectious virus. Recently, lymphocytes of Old World monkeys were efficiently transformed by HVS. In parallel to these studies we initiated transformation experiments by infecting peripheral blood cell cultures of 45 monkeys, 35 rhesus and 10 cynomolgus macaques. In only three cases, we obtained transformed T-cell lines. The transformed T-cells were largely double-positive for CD4 and CD8. They responded with increased proliferation to mitogenic or IL-2 stimulation and transcribed mRNA for IL-2, IL-4, and IL-10. However, most initiated T-cell cultures from macaques developed giant cells. The cytopathic agent was identified assimian foamy virus(SFV) as confirmed by PCR, immunofluorescence, and coculture experiments. Treatment of the T-cell cultures with AZT- and SFV-specific sera did only shortly prolong the life-span of the cultures. Therefore, the reactivation of SFV caused remarkable difficulties in the establishment of macaque T-cell lines by HVS. This seems to be a general problem since most animals from several breeding colonies are SFV-positive
Interaction of Human Cytomegalovirus Tegument Proteins ppUL35 and ppUL35A with Sorting Nexin 5 Regulates Glycoprotein B (gpUL55) Localization
No full textABSTRACT
Human cytomegalovirus (HCMV) is a widespread human pathogen that causes asymptomatic infection in healthy individuals but poses a serious threat to immunocompromised patients. During the late phase of HCMV infection, the viral capsid is transported to the cytoplasmic viral assembly center (cVAC), where it is enclosed by the tegument protein layer and the viral envelope. The cVAC consists of circularly arranged vesicles from the
trans
-Golgi and endosomal networks. The HCMV gene UL35 encodes ppUL35 and its shorter form, ppUL35A. We have previously shown that the UL35 gene is involved in HCMV assembly, but it is unknown how UL35 proteins regulate viral assembly. Here we show that sorting nexin 5 (SNX5), a component of the retromer and part of the retrograde transport pathway, interacts with UL35 proteins. Expression of wild-type proteins but not mutants defective in SNX5 binding resulted in the cellular redistribution of the cation-independent mannose-6-phosphate receptor (CI-M6PR), indicating that UL35 proteins bind and negatively regulate SNX5 to modulate cellular transport pathways. Furthermore, binding of UL35 proteins to SNX5 was required for efficient viral replication and for transport of the most abundant HCMV glycoprotein B (gB; gpUL55) to the cVAC. These results indicate that ppUL35 and ppUL35A control the localization of the essential gB through the regulation of a retrograde transport pathway. Thus, this work is the first to define a molecular interaction between a tegument protein and a vesicular transport factor to regulate glycoprotein localization.
IMPORTANCE
Human cytomegalovirus is ubiquitously present in the healthy population, but reactivation or reinfection can cause serious, life-threatening infections in immunocompromised patients. For completion of its lytic cycle, human cytomegalovirus induces formation of an assembly center where mature virus particles are formed from multiple viral proteins. Viral glycoproteins use separate vesicular pathways for transport to the assembly center, which are incompletely understood. Our research identified a viral structural protein which affects the localization of one of the major glycoproteins. We could link this change in glycoprotein localization to an interaction of the structural protein with a cellular protein involved in regulation of vesicle transport. This increases our understanding of how the virus intersects into cellular regulatory pathways to enhance its own replication.
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Detection of hepatitis B virus genotype and resistance associated mutations using pyrosequencing
Full text linkDie Hepatitis B ist mit weltweit 320-400 Millionen chronisch-aktiv infizierten Menschen die häufigste Viruserkrankung. Die chronische HBV-Infektion kann zur Leberzirrhose und zum hepatozellulären Karzinom führen. Durch eine Therapie chronisch infizierter Patienten mit IFN-α sowie den Nukleosidanaloga Lamivudin, Adefovir-Dipivoxil oder Entecavir soll die Virusreplikation blockiert und damit die Häufigkeit der Spätfolgen reduziert werden. Die Kenntnis des HBV-Genotyps sowie bekannter Resistenz-Mutationen des Virusgenoms spielt eine große Rolle für eine erfolgreiche antivirale Therapie. Ziel dieser Arbeit war es, eine neue Routinediagnostik-Methode für die gleichzeitige Genotypisierung und Resistenzbestimmung von HBV zu etablie-ren. Dabei sollte die Technik der Pyrosequenzierung zum Einsatz kommen. Diese ermöglicht die Sequenzierung von kurzen Abschnitten von bis zu 100 Basenpaaren in Echtzeit und ist eine preisgünstige Alternative zur Sanger-Sequenzierung.
Bei insgesamt 53 Patientenproben wurde ein Abschnitt der HBV-DNA-Polymerase durch Pyrosequenzierung und Sanger-Sequenzierung analysiert. Daraufhin wurden die Patientenproben genotypisiert und auf die bekannten Mutationen der Polymerase für Lamivudin- (rtM204V/I) und für Adefovir-Resistenz (rtA181V/T, rtN236T) sowie den kompensatorischen Mutationen für die Virus-Fitness (rtV173L, rtL180M) hin untersucht. Die Ergebnisse beider Methoden waren identisch. Parallel wurde eine Datenbank aus ca. 500 publizierten HBV-Sequenzen, vorrangig der Genotypen A und D, aufgebaut und mit dem NCBI-Algorithmus klassifiziert. Diese Datenbank diente der Auswertung der Sequenzen aus den Patientenproben.
Die Pyrosequenzierung war also für die Bestimmung des Genotyps und der Resistenz-Mutationen genauso sensitiv wie die Sanger-Sequenzierung. Die Methode wurde schließlich im QCMD-Ringversuch validiert und steht der Routinediagnostik zur Verfügung.Hepatitis B is with worldwide 320-400 million chronically and actively infected people the most common viral disease. The chronic HBV infection can lead to liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The therapy of chronically infected patients with IFN-α and the nucleoside analogues Lamivudine, Adefovir dipivoxil or Entecavir aims at blocking viral replication and reducing the rate of late complications. The knowledge of the HBV genotype and of defined resistance mutations in the viral genome plays a major role for the successful antiviral therapy. This project aimed at establishing a new method for routine diagnostics for the genotyping and determination of HBV resistance in parallel. The technique of pyrosequencing should be applied. This technique allows the sequencing of short segments of up to 100 base pairs in real time and is a low priced alternative to Sanger sequencing.
In a total of 53 patient samples a region of the HBV DNA polymerase was analyzed by pyrosequencing and Sanger sequencing. Subsequently, the patient samples were genotyped and investigated for the defined major mutations of the polymerase for resistance to lamivudine (rtM204V/I) and adefovir (rtA181V/T, rtN236T) and compen-satory mutations for viral fitness (rtV173L, rtL180M). The results of both methods were identical. In parallel, a database of approximately 500 published HBV sequen-ces of mainly genotypes A and D was established and classified with the NCBI algorithm. This database was used to evaluate the sequences from the patient samples.
Thus, pyrosequencing was as sensitive as Sanger sequencing for the determination of the genotype and of the resistance mutations. Finally, the method was validated in the QCMD external quality assessment test and is now available in the routine diagnostic
Barrier dysfunction of the nasal mucosa in granulomatosis with polyangiitis (Wegener)
Full text linkDie Granulomatose mit Polyangiitis (GPA) ist eine multifaktorielle Autoimmunerkrankung.
Literaturhinweise deuten auf eine gestörte sinunasale Barriere. Die Untersuchung der Einflussfaktoren einer solchen Störung war das Ziel dieser Arbeit.
In der nasalen Mukosa wurden 10 differentiell exprimierte Transkripte identifiziert sowie S. aureus intraepithelial nachgewiesen. Im Überstand nasaler Epithelzellen waren die Konzentrationen von G-CSF erhöht und von IL-8 erniedrigt. Nasale Epithelzellen sekretieren nach S. aureus-Stimulation weniger IL-8 und hBD3.
Ergo zeigt sich eine vielschichtige nasale Barrierestörung bei der GPA: Reduzierte IL-8-, hBD3- und Lysozym-Konzentrationen sowie geringere Expression von Mustererkennungs-Rezeptoren ermöglichen eine Veränderung der mikrobiellen Flora der nasalen Mukosa und begünstigen eine Besiedlung mit S. aureus. Die Resultate eröffnen ein besseres Verständnis der komplexen Pathomechanismen der GPA sowie Perspektiven für neue Therapie-Optionen.The granulomatosis with polyangiitis (GPA) is a multifactorial autoimmune disease.
Evidence from literature suggests an impaired sinonasal barrier. The study of the factors that influence such interference was the goal of this work.
In the nasal mucosa, 10 differentially expressed transcripts were identified and S. aureus was demonstrated intraepithelial. In the supernatant of nasal epithelial cells the concentration of G-CSF was increased while IL-8 was decreased. Nasal epithelial cells secrete after S. aureus stimulation less IL-8 and hBD3.
A complex nasal barrier dysfunction in GPA is shown: reduced IL-8, hBD3 and lysozyme concentrations and lower expression of pattern recognition receptors allow a change in the microbial flora of the nasal mucosa and promote colonization with S. aureus. These results allow a better understanding of the complex pathophysiology of the GPA and opens up perspectives for novel therapeutic options
Antimikrobielle Aktivität des Kinozidins Interleukin 26
No full textDas Kinozidin Interleukin 26 (IL-26) ist ein stark kationisches proinflammatorisches Zytokin mit direkt antimikrobiellen Eigenschaften. IL-26 wird von verschiedenen Zelltypen wie T-Zellen und Makrophagen produziert und kann andere Zellen zur Produktion proinflammatorischer Zytokine stimulieren. Der proinflammatorischen Aktivität entsprechend konnten Assoziationen von IL-26 mit verschiedenen chronisch-entzündlichen Erkrankungen hergestellt werden, bei denen in entzündeten Geweben und auch im Plasma erhöhte IL-26 Konzentrationen nachweisbar sind. Außerdem ist IL-26 auch in der Lage, die Virusreplikation insbesondere bei Cytomegalovirus und Hepatitis-C-Virus zu hemmen. In dieser Arbeit konnte erstmalig die Bakterizidie von IL-26 gegen Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus und Acinetobacter baumannii durch standardisierte, reproduzierte Experimente nachgewiesen und quantifiziert werden. Diese IL-26-Sensibilität war auch bei Vancomycin-resistenten Enterococcus-Spezies, einem Methicillin-resistenten Staphylococcus-aureus-Stamm sowie multiresistenten Patientenisolaten von Acinetobacter baumannii vorhanden. Des Weiteren konnte eine signifikante, aber schwache Fungizidie gegenüber Candida albicans festgestellt werden. Eine Wirkung auf Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae und Pseudomonas aeruginosa konnte ausgeschlossen werden. Insgesamt handelt es sich bei IL-26 also um ein proinflammatorisches Kinozidin mit bakteriziden, antiviralen und antimykotischen Eigenschaften, das neben seiner Wirkung gegen Acinetobacter baumannii und Candida albicans nahezu selektiv Gram-positive Erreger abtötet
Infektionsepidemiologische Analyse der meldepflichtigen Infektionskrankheiten des Jahres 2020 in Schleswig-Holstein unter der Coronavirus-Pandemie
Full text linkAus epidemiologischer Sicht war das Jahr 2020 durch das mit schwerem Atemwegssyndrom assoziierten Coronavirus Typ 2 geprägt. Dessen Ausbreitung wurde in Deutschland ab März 2020 durch die Einführung eindämmender Maßnahmen versucht einzuschränken. Diese prospektiv aufgebaute und retrospektiv ausgewertete Arbeit befasst sich mit den Auswirkungen dieser Maßnahmen auf meldepflichtige Infektionskrankheiten in Schleswig-Holstein im Jahr 2020, den Geschlechtsunterschieden bei Infektionen mit COVID-19 und weiteren häufigenmeldepflichtigen Infektionskrankheiten in Bezug auf das Alter und den Schweregrad des Krankheitsverlaufs sowie den Sterbefallzahlen in Schleswig-Holstein und Deutschland im Jahr 2020. Die Analyse basierte auf Datens.tzen der von den Gesundheits.mtern Schleswig-Holsteins bis zum 31.3.2021 übermittelten Fälle meldepflichtiger Infektionskrankheiten des Jahres 2020 sowie den von dem Statistischen Bundesamt veröffentlichten Rohdaten der Sterbefallzahlender Jahre 2016-2020
Lokales Resistenzprofil bakterieller Erreger unkomplizierter Harnwegsinfektionen
Full text linkDie Studie zur Überprüfung des lokalen Resistenzprofiles bakterieller Erreger (LORE) lieferte diese Ergebnisse für Kiel für die Jahre 2014-2015. Insgesamt nahmen 31 Praxen an der Studie teil, drei gynäkologische und 28 hausärztliche. Von den 895 zur Analyse eingeschlossenen Proben wies nur die Hälfte eine relevante Erregerzahl auf und 30% zeigten keinen Erreger. Am häufigsten wurde Escherichia coli (72%) nachgewiesen. Unter Berücksichtigung der Empfehlungen zur Beurteilung der Resistenzen ergab sich für Kiel, dass neben Fosfomycin und Nitrofurantoin auch Cefpodoxim und Cotrimoxazol ein günstiges Resistenzprofil aufweisen. Die Auswertung der Verordnungsdaten der Kassenärztlichen Vereinigung Schleswig-Holsteinzeigte keine Reduzierung der insgesamt verschriebenen Antibiotikamenge oder der verschriebenen Breitbandantibiotika. Erfreulicherweise zeigte sich aber eine deutliche relative Zunahme des verschriebenen Cefpodoxim. Der Anteil stieg um den Faktor 15, während Fosfomycin- und Nitrofurantoin-Verschreibungen nur um die Faktoren 1,6 und 1,2 zunahmen. Zum Vergleich wurden die Daten aus dem übrigen Schleswig-Holstein herangezogen. Der Trend für Cefpodoxim ließ sich dort nicht finden und Ciprofloxacin wurde dort weiterhin häufiger als Fosfomycin verschrieben. Aus den Resistenzdaten für Kiel ergibt sich, dass Cefpodoxim und Cotrimoxazol gleichwertige Alternativen zu den in der Leitlinie vorgeschlagenen Antibiotika sind. Bei günstigerem Nebenwirkungsprofil und geringerer Resistenzbildung und günstigeren Arzneimittelkosten eignet sich Cefpodoxim als Mittel der ersten Wahl in Kiel. Eine einfache Kurzdarstellung der Resistenzlage kann Einfluss auf das Verschreibungsverhalten haben. Die regelmäßige Überprüfung der lokalen Resistenzlage sollte etabliert werden
Axonal tracing of fluorescently labeled varicella-zoster virus proteins after infection of rat dorsal root ganglia neurons
Full text linkVaricella-zoster virus (VZV) is a wide-spread neurotropic α-herpesvirus causing chickenpox (varicella) during primary infection and shingles (zoster) upon reactivation. During primary infection, VZV particles travel along neuronal microtubules via retrograde axonal transport from the distal axon endings to the somata of trigeminal and dorsal root ganglia DRG sensory neurons where latency is established. In contrast, upon reactivation, VZ virions migrate to the periphery by anterograde axonal transport to promote the typical symptoms of shingles. In culture, VZV replicates in a highly cell-associated manner and has a narrow host range that limits experimental animal models and restricted our approaches for studying the axonal transport of the virus particles. In this study, we used a cloned bacterial artificial chromosome (BAC) of the European wild-type isolate of VZV HJO to generate two double VZV mutants via en-passant mutagenesis in which the protein of interest and the capsid protein p23 were fused either to the enhanced green fluorescent protein or to the monomeric red fluorescent protein. The generated BACs were then transfected into permissive melanoma cells in which the cell-associated viruses were reconstituted and high-titer cell-free virus preparations were generated. Productive anterograde and retrograde infections of DRG neurons were established by the exposure to high titers of cell-free VZV of 10e4-10e5 plaque forming units/ml. Subsequently, we described the colocalization of the VZV immediate early tegument protein IE4 and the transmembrane envelope protein p65 together with p23 within axons of embryonic Wistar rat DRG neurons after anterograde and retrograde infection with VZV. The anterograde axonal transport of VZV follows most likely a “married” model. Hence, our findings provide a platform for further investigations into the axonal transport mechanisms of VZV and into the role of the relevant viral proteins as possible medicinal intervention targets in preventing or treating VZV infection and its complications
Immortalisierung von zytotoxischen T-Lymphozyten mit Herpesvirus saimiri und Direktnachweis der Transformation in T-Lymphozyten von Patienten mit chronisch myeloischer Leukämie
Full text linkIn der vorliegenden Arbeit wurden T-Lymphozyten von Patienten mit chronischer myeloischer Leukämie (CML) mit dem Herpes Virus saimiri Stamm C488 infiziert und unter verschiedenen Kulturbedingungen in ihrem Wachstumsverhalten kontrolliert. Die so generierten T-Lymphozyten wurden bezüglich ihrer phänotypischen Eigenschaften untersucht. Parallel dazu wurde eine Sonde entwickelt werden, die zum direkten Nachweis der erfolgten Virustransformation auf Zellebene in Form von Fluoreszenz in situ Hybridisierung
Toxoplasmose-Enzephalitis bei HIV-infizierten Patienten im Zeitalter hochaktiver Antiretroviraler Therapien : Verlauf, klinische Charakteristika und Toxoplasma-gondii-spezifische ImmunantwortTOXOPLASMA-GONDII-SPEZIFISCHE IMMUNANTWORT
Full text linkTrotz sinkender Inzidenz, bleibt die Toxoplasmose-Enzephalitis (TE) die häufigste opportunistische Infektion HIV-infizierten Patienten Das Wissen um Verlauf und prognostischen Faktoren dieser Erkrankung unter HAART ist limitiert. Es wurde der Verlauf von 140 HIV-infizierten, an einer TE erkrankten Patienten, in dem Zeitraum 1990 bis 2004 analysiert. Es konnte gezeigt werden, dass sich die Prognose durch HAART deutlich verbessert hat und heutzutage öfter antiretroviral unbehandelte Patienten an einer TE erkranken. In einem zweiten Abschnitt der Arbeit wurde die Toxoplasma gondii-spezifische zelluläre Immunantwort untersucht. In durchgeführten ELISPOT-Untersuchungen zeigten sich Unterschiede der Immunantwort bei Patienten, die an einer akuten TE-Episode erkrankten und bei Patienten, die nach Absetzen einer Prophylaxe rezidivfrei blieben. Die Bestimmung der Toxoplasma gondii-spezifischen Immunantwort könnte hilfreich sein, um das individuelle Risiko einer TE besser vorhersagen zu können
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