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Single-cell in vivo imaging of adult neural stem cells in the zebrafish telencephalon.
No full textAdult neural stem cells (aNSCs) in zebrafish produce mature neurons throughout their entire life span in both the intact and regenerating brain. An understanding of the behavior of aNSCs in their intact niche and during regeneration in vivo should facilitate the identification of the molecular mechanisms controlling regeneration-specific cellular events. A greater understanding of the process in regeneration-competent species may enable regeneration to be achieved in regeneration-incompetent species, including humans. Here we describe a protocol for labeling and repetitive imaging of aNSCs in vivo. We label single aNSCs, allowing nonambiguous re-identification of single cells in repetitive imaging sessions using electroporation of a red-reporter plasmid in Tg(gfap:GFP)mi2001 transgenic fish expressing GFP in aNSCs. We image using two-photon microscopy through the thinned skull of anesthetized and immobilized fish. Our protocol allows imaging every 2 d for a period of up to 1 month. This methodology allowed the visualization of aNSC behavior in vivo in their natural niche, in contrast to previously available technologies, which rely on the imaging of either dissociated cells or tissue slices. We used this protocol to follow the mode of aNSC division, fate changes and cell death in both the intact and injured zebrafish telencephalon. This experimental setup can be widely used, with minimal prior experience, to assess key factors for processes that modulate aNSC behavior. A typical experiment with data analysis takes up to 1.5 months
LE ANALISI PALIOGENETICHE IN VESUVIO 79 A.D. VITA E MORTE A ERCOLANO
No full textLa ricerca scientifica ed i Musei naturalistici, Maria Rosaria Ghiara
Corpi del passato: il bisogno di un’archeologia antropologica, Francesco Fedele
La ricerca biogeoarcheologica in Campania, Giuseppe Mastrolorenzo e Pier Paolo Petrone
Eventi vulcanici e conseguenze sull’ambiente, Giuseppe Mastrolorenzo
Le vittime dell’eruzione, Pier Paolo Petrone
Indagini paleoistologiche,Fabio Maria Guarino
Determinazione delle temperature di deposizione dei depositi piroclastici ed Ercolano, Alberto Incoronato
L’antica Ercolano, Mario Pagano
La popolazione di Ercolano, Pier Paolo Petrone, Alfredo Coppa, Luciano Fattore
Alimentazione e malattie ad Ercolano, Pier Paolo Petrone, Luciano Fattore, Vincenzo Monetti
Le analisi paleogenetiche di Giuseppe Geraci, Rosanna del Gaudio, Rossella di Giamo
La ricostruzione dei volti di due antichi Ercolanensi Luciana Chiummo
I siti archeologici vesuviani sepolti dalle eruzioni del Somme-Vesuvio, Antonio de Simone
Risorse naturali e colture in area vesuviana nel 79 d.C., Anna Maria Corallo
Vita e attività umane nelle due ville di Oplontis all’epoca dell’eruzione vesuviana del 79 d.C., Lorenzo Fergola
La ricerca interdisciplinare e il rischio vulcanico, Giuseppe Mastrolorenzo Pier Paolo Petron
Genome methylation of the marine annelid worm Chaetopterus variopedatus. Methylation of a CpG in an expressed H1 histone gene
No full textLa sospensione delle attività cellulari in ovocita: una motivazione da uno studio di tumori
No full textLe cellule gametiche prodotte da un ovario sono in una fase di riposo che, nel caso della specie umana, può durare 50 e più anni. Quando una di queste cellule è indotta alla maturazione è essenziale che il suo patrimonio genetico sia il più possibile inalterato perché, a differenza di quanto accade per le cellule gametiche maschili, non vi sono meccanismi di selezione né alternative di scelta al momento della fecondazione. Studi di fecondazione artificiale hanno rivelato la sostanziale incapacità del materiale genetico di cellule somatiche a produrre una struttura capace di arrivare alla nascita. Sono tipici i ben noti risultati della pecora Dolly, generata dopo quasi 400 tentativi infruttuosi, confermati da quelli meno conosciuti sui bovini, dove un risultato positivo aveva richiesto circa 1000 tentativi. Recentemente, un nostro studio che ha analizzato la varietà genetica di cellule di tumori del colon, e la ha confrontata con la varietà genetica dei tessuti istologicamente sani circostanti, ha dimostrato la numerosa presenza di sostituzioni di singoli nucleotidi nelle cellule di entrambi i tessuti. I risultati di analisi sul DNA di due individui sani, di età molto diverse, hanno confermato la presenza di mutazioni di singoli nucleotidi nelle cellule somatiche con frequenza molto superiore a quella giustificabile in base alle divisioni cellulari. La loro distribuzione nei geni analizzati suggerisce una dipendenza delle mutazioni dalla frequenza di trascrizione. In sintesi, i dati mostrano che le cellule somatiche accumulano mutazioni nei geni attivi in assenza di divisioni cellulari. Si discuterà come il meccanismo di embriogenesi femminile sembra che si sia evoluto proprio per minimizzare questo tipo di mutazioni e garantire la integrità del DNA in cellule che devono attendere anche decenni prima di esplicare una funzione non vicariabile ed indispensabile alla sopravvivenza della specie
Evidence of genetic instability in tumors and normal nearby tissues
No full textWe have analyzed the sequence heterogeneity of the transcripts of the human HPRT and G6PD single copy genes that are not considered tumor markers. Analyses have been performed on different colon cancers and on the nearby histologically normal tissues of two male patients. Several copies of each cDNA, which were produced by cloning the RT-PCR-amplified fragments of the specific mRNA, have been sequenced. Similar analyses have been performed on blood samples of two ostensibly healthy males as reference controls. The sequence heterogeneity of the HPRT and G6PD genes was also determined on DNA from tumor tissues. The employed analytical approach revealed the presence of low-frequency mutations not detectable by other procedures. The results show that genetic heterogeneity is detectable in HPRT and G6PD transcripts in both tumors and nearby healthy tissues of the two studied colon tumors. Similar frequencies of mutations are observed in patient genomic DNA, indicating that mutations have a somatic origin. HPRT transcripts show genetic heterogeneity also in healthy individuals, in agreement with previous results on human T-cells, while G6PD transcript heterogeneity is a characteristic of the patient tissues. Interestingly, data on TP53 show little, if any, heterogeneity in the same tissues. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: These findings show that genetic heterogeneity is a peculiarity not only of cancer cells but also of the normal tissue where a tumor arises
Fluorescence-Activated Cell Sorting-Based Isolation and Characterization of Neural Stem Cells from the Adult Zebrafish Telencephalon
No full textAdult mammalian brain, including humans, has rather limited addition of new neurons and poor regenerative capacity. In contrast, neural stem cells (NSC) with glial identity and neurogenesis are highly abundant throughout the adult zebrafish brain. Importantly, the activation of NSC and production of new neurons in response to injuries lead to the brain regeneration in zebrafish brain. Therefore, understanding of the molecular pathways regulating NSC behavior in response to injury is crucial in order to set the basis for experimental modification of these pathways in glial cells after injury in the mammalian brain and to elicit neuronal regeneration. Here, we describe the procedure that we successfully used to prospectively isolate NSCs from adult zebrafish telencephalon, extract RNA, and prepare cDNA libraries for next generation sequencing (NGS) and full transcriptome analysis as the first step toward understanding regulatory mechanisms leading to restorative neurogenesis in zebrafish. Moreover, we describe an alternative approach to analyze antigenic properties of NSC in the adult zebrafish brain using intracellular fluorescence activated cell sorting (FACS). We employ this method to analyze the number of proliferating NSCs positive for proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in the prospectively isolated population of stem cells
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